Микоплазмы (сем Mycoplasmacea, класс Mollicutes) не способны синтезировать компоненты клеточной стенки. Вместо неё микоплазмы покрыты трехслойной эластич­ной мембраной, состоящей из липопротеиновых соединений, фосфолипидов с включением стеринов, которых нет у бактерий и риккетсий. Содержат большое количество белка и нуклеиновых кислот; количество углеводов варьирует.

Морфология и способы размножения. Большинство из них – факультативные анаэробы. Так как микоплазмы не имеют ригидной оболочки, они очень полиморфны. В мазках из культур обна­руживаются различные микроструктуры: грану­лы, в виде крошечных кокков и элементарных телец; крупные шары; кольца; палочки, нити и ветвящиеся мицелиальные формы; аморфные массы, меняющиеся в конфигурации. Размеры микоплазм варьируют от 125–250 нм у мелких гранулярных форм до 0,4 –150 мкм у нитевидных структур. Микоплазмы не образуют жгутиков, капсул и спор. По Граму окрашиваются отрица­тельно, лучше окрашиваются по Романовскому–Гимзе. Размножаются путем бинарного деления, некоторые способны к почкованию и сегментации.

Колонии мелкие с приподнятым центром («яичница глазунья»), врастают в среду. На поверхности колоний располагаются крупные, часто вакуолизированные клетки, в глубине – мелкие, оптически плотные организмы.

Методы микроскопии. В световом микроскопе можно обнаружить лишь самые большие формы и виды микоплазм, размеры которых превышают 0,2 мкм в длину и в поперечнике. В живом состоянии их изучают в темном поле и фазово–контрастном микроскопе, ультраструктурные эле­менты выявляют при электронной микроскопии.

5. Морфология, ультраструктура хламидий.

Семейство включает 1 род, включает 3 патогенных вида (Chlamidia trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae). Хламидии – это мелкие, сфероидные организмы. Грамотрицательны, т.к. клеточные оболочки сходны по строению с оболочками гр«–» бактерий, но лишены пептидогликанов. Выявляются темнополной микроскопией неокрашенных препаратов.

Клетки способны к вегетативному делению, размножаются бинарным делением, способны образовывать L–формы и самопроизвольно возвращаться к исходным формам.

Жизненный цикл длится 2-3 суток, включает обр–е двух основных форм:

Элементарное тельце – внеклеточная форма. Полиморфна, метаболически малоактивна, способна подавлять фаго-лизосомное слияние. Непроницаема, гидрофобна, устойчива к осмотическим колебаниям внешней среды. Адсорбируется на гомологичных поверхностных структурах клеток, содержащих сиаловые кислоты.

Ретикулярное тельце – более крупная, репродукционная внутриклеточная форма, образуется из ЭТ. После образования РТ клетка начинает бинарно делиться, образуятельца включений в виде вакуолей в цтпл клетки-хозяина, обычно прилегает к ядру и видны в микроскоп.

После конденсации РТ образуется промежуточное тельце, которые трансформируются в ЭТ. При выходе ЭТ клетка гибнет.

Для микоплазм характерен чрезвычайно выраженный полиморфизм, обусловленный в первую очередь отсутствием твердой клеточной стенки, присущей бактериям, а также сложным циклом развития. Мельчайшие структурные элементы, способные к репродукции в искусственных питательных средах, принято называть минимальными репродуктивными единицами. На форму и размеры минимальных репродуктивных единиц, а также клеточных элементов разных стадий развития существенно влияют условия культивирования, физико-химические свойства питательных сред, особенности штамма и количество пассажей на средах, техника приготовления, фиксации и окраски препаратов и другие факторы.
В связи с тем, что микоплазмы не имеют клеточной стенки, их мембрана и цитоплазма легко повреждаются химическими реактивами, употребляемыми для фиксации и окраски препаратов. Особенно чувствительны к воздействиям факторов внешней среды клетки микоплазм па ранних стадиях развития.
В мазках из пораженных органов и из выращенных в среде культур микоплазмы представлены округлыми, овальными и кольцевидными образованиями. Иногда встречаются коккобациллярные и похожие на бактерии формы. Отдельные виды микоплазм (М. mycoides var. mycoides, М. mycoides var. capri, М. agalacliae) в органах и па питательных средах формируют нитевидные мицелиальные формы.
Электронно-микроскопическими исследованиями и путем фильтрования выращенных культур через мембранные фильтры с известным диаметром нор было показано, что в одной и той же культуре имеются различные по форме и величине образования, способные к репродукции (рис. 1). При исследовании различных видов микоплазм, выделенных из органов животных и человека, а также объектов внешней среды было установлено, что величина элементарных частиц колеблется от 125 до 600 им. В определителе Бердже размер клеток микоплазм исчисляется 125-200 нм. По данным Е. Freundt, величина минимальных репродуктивных единиц микоплазм колеблется между 250-300 нм. Другие авторы определили их размер в пределах 200-500-700 нм, а G. Wildfur, применив метод ультрафильтрации. - 100-150 нм. Следует отметить, что величина клеток микоплазм зависит не только от вида и штамма, но и от других факторов, влияющих на клетку.
Таким образом, размер минимальных репродуктивных единиц в культурах микоплазм варьирует в значительных пределах.

Занятие № 4 «__»__________2006 г.

Тема: Морфология актиномицет, микоплазм, риккетсий, хламидий и грибов

План занятия

1. Актиномицеты: методы микроскопического изучения, морфология чистой культуры и строение друз.

2. Морфология и ультраструктура риккетсий.

3. Хламидии: выявление хламидий по Романовскому-Гимзе.

4. Изучение морфологии и структуры микоплазм и L-форм в фазовом контрасте.

5. Классификация и морфологические особенности грибов: отличительные особенности Mucor, Aspergillus, Penicillium, Saccharomyces, Candida. Методы изучения морфологии грибов в нативном и окрашенном состоянии.

6. Методы выделения чистых культур бактерий: техника посева смеси культур на плотные питательные среды.

Методические указания к выполнению практических заданий

1. Актиномицеты – грамположительные ветвящиеся нити, напоминающие мицелий грибов или имеющие вид полиморфных палочек в результате фрагментации этих нитей. Актиномицеты – прокариоты и не являются гибами (эукариоты). Менее высокоорганизованные актиномицеты, к которым относятся возбудители актиномикоза, размножаются фрагментами гифов, более высокоорганизованные – спорами.

Метод Здродовского – облегченная модификация метода Циля-Нильсена, основан на выявлении кислотоустойчивости риккетсий.

Фиксированный на пламени препарат-мазок окрашивают разведенным карболовым фуксином (без нагревания), промывают водой, обесцвечивают слабым раствором органической (например, 0,5% лимонной, 0,15% уксусной) или минеральной кислоты (0,01% соляной), после промывания докрашивают метиленовым синим и промывают водой. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет и при внутриклеточном расположении хорошо видны на голубом фоне цитоплазмы, ядро клетки имеет синий цвет.

4. Микоплазмы – прокариотные полиморфные микроорганизмы, лишенные клеточной стенки. Они могут расти на специальных питательных средах. В культуре микоплазм можно одновременно обнаружить крупные шаровидные тела (до 10 мкм), мелкие зерна (0,1-0,2 мкм), палочковидные и нитевидные клетки и др. Микоплазмы размножаются бинарным делением, фрагментацией крупных тел и нитей с образованием мелких зерен, почкованием. Колонии микоплазм на питательной среде имеют компактный центр и полупрозрачные края («яичница глазунья»). Морфологически близки микоплазмам так называемые L - формы бактерий (стабильные и нестабильные), почти или полностью утратившие клеточную стенку. L-формы образуются под действием антибиотиков (например, пенициллина, цефалоспорина). В связи с хрупкостью микоплазм и L-форм их морфологию изучают в нативном состоянии методом фазово-контрастной микроскопии.

5. Грибы – бесхлорофильные, гетеротрофные, эукариотические организмы, близкие низшим растениям, выделенные в царство грибов – MYCOTA. Различают макроскопические (шляпные) грибы и микроскопические, среди последних встречаются сапрофитные и патогенные представители. Истинные грибы – Eumycota – подразделяют на семь классов, большинство патогенных грибов относится к классу Deuteromycetes. Тело гриба – грибница – состоит из тонких нитей гифов, образующих мицелий : субстратный (вегетативный) и воздушный (продуктивный). У низших грибов мицелий несептирован (одноклеточный), у высших разделен перегородками (многоклеточный). Встречаются грибы, не образующие мицелий (дрожжи – Saccharomyces), а также образующие псевдомицелий (дрожжеподобные – Candida). Строение клетки грибов типично для эукариотов: в цитоплазме находится истинное ядро с ядрышком, множество других органелл (рибосомы, митохондрии, лизосомы, мезосомы, эндоплазмотический ретикулум, пластинчатый комплекс, липосомы, фагосомы, а также вакуоли). Протопласт одет цитоплазматической мембраной и плотной клеточной стенкой, в состав которой входят хитин, целлюлоза, глюканы, глюконуровая кислота, различные углеводы, липиды, белки, аминокислоты, пигменты. Грибы размножаются спорами, образующимися как бесполым, так и половым путем или только бесполым (у дейтеромицет), а также почкованием и фрагментацией.

– самые мелкие прокариоты (125-150 нм) способные самостоятельно размножаться. Полагают, что микоплазмы являются наиболее близкими потомками исходных прокариотических клеток. Геном микоплазм минимален для клетки, он в пять раз меньше генома кишечной палочки и составляет 0,45 МД. Главная особенность микоплазм – отсутствие клеточной стенки. Они окружены капсулоподобным слоем, под которым находится лишь тонкая трехслойная мембрана толщиной 7,5- 10 нм, содержащая в значительном количестве холестерин. Вследствие этого, микоплазмы выделяют в особый отдел Tenericutes , класс Mollicutes («нежная кожа»), порядок Mycoplasmatales.

Рис. 20. Клетка спирохеты. А. Протоплазматический цилиндр (ПЦ), обвит аксостилем, состоящим в данном случае из двух осевых фибрилл (АФ), каждая из которых на одном конце прикреплена к протоплазматическому цилиндру (ПП – прикрепительная пора). Фибриллы, идущие от разных концов клетки, перекрываются. Аксостиль и протоплазматический цилиндр окружены наружной оболочкой (НО). КСт – клеточная стенка; ПМ – плазматическая мембрана; ЦП – цитоплазма (Голт С., 1978). Б и В. Электронные микрофотографии поперечного среза (Б, 110 000 х) и всей клетки (В, 7 000 х) спирохеты из ротовой полости с несколькими осевыми фибриллами (Листгартен Г., 1964).

Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы осмотически чувствительны и имеют разнообразную форму:

а) мелкие сферические или овоидные клетки размером 0,2 мкм (элементарные тельца) которые фильтруются через бактериальные фильтры;

б) более крупные шаровидные, размером до 1,5 мкм;

в) нитевидные, ветвящиеся клетки размером до 150 мкм.

Рис. 21. Микоплазмы, растущие в питательном растворе клетки возбудителя бронхопневмонии крыс; электронная микрофотография, 11 200 х (Клейнбергер-Нобель Е., 1955).

Микоплазмы не образуют спор, жгутиков, некоторые виды обладают скользящей подвижностью.

Размножаются путем бинарного деления шаровидных и нитевидных клеток, почкования и высвобождения множества элементарных телец, образующихся в нитях.

Что касается энергии, то микоплазмы получают ее обычным для факультативных анаэробов способом, ферментируя углеводы или аминокислоты. Вследствие малого генома микоплазмы обладают ограниченными биосинтетическими способностями, и их приходится культивировать на питательных средах обогащенных липидами, белками, предшественниками нуклеиновых кислот. Растут медленно, колонии с плотным врастающим в среду центром, напоминающие «яичницу-глазунью» (темный центр и более светлая ажурная периферия). Размеры колоний мелкие, не превышающие 600 мкм.

Рис. 22. Колония М. salivarium. Типичный вид «яичницы-глазуньи» (плотный врастающий в среду центр и рыхлая периферия) (Burrows Textbook of Microbiology, 1985).

Большинство микоплазм являются безвредными комменсалами слизистых оболочек глаз, дыхательных, пищеварительных и мочеполовых путей человека.

В патологии человека наибольшую роль играют несколько представителей рода Mycoplasma: M. pneumoniae, M. hominis, M. anthritidis и единственный вид рода Ureaplasma – U. urealyticum (названный так из-за уреазной активности). Патогенные микоплазмы вызывают заболевания (микоплазмозы) дыхательных, мочеполовых путей и суставов с разнообразными клиническими проявлениями. При лечении этих заболеваний следует помнить, что микоплазмы не чувствительны к бета-лактамным антибиотикам и другим лекарственным препаратам, угнетающим синтез клеточной стенки (из-за ее отсутствия у возбудителя).

Методы исследования. В световом микроскопе обнаруживаются лишь самые крупные формы микоплазм. В живом состоянии их изучают в темнопольном и фазово-контрастном микроскопе, ультраструктурные компоненты выявляют при помощи электронной микроскопии.

Хламидии

Основными стадиями жизненного цикла хламидий являются:

Элементарные тельца – мелкие (0,2-0,5 мкм) электронноплотные шаровидные структуры, лишенные метаболитной активности, имеющие компактный нуклеоид и ригидную клеточную стенку, которые фильтруются через бактериальные фильтры. Они являются инфекционным началом хламидий и обеспечивают их выживание во внеклеточной среде и заражение новых клеток.

Ретикулярные тельца – более крупные (0,8-1,5 мкм), сферические образования, имеющие сетчатую структуру с тонкой клеточной стенкой и фибриллярным нуклеоидом. Они вырастают из элементарных телец внутри клеток, лишены инфекционности и, подвергаясь делению, обеспечивают репродукцию хламидий. Отсюда другое, исторически первое название ретикулярных телец – «инициальное тело». Ретикулярные тельца являются вегетативной формой хламидий.

Промежуточные тельца – промежуточная стадия между элементарными и ретикулярными тельцами.

Жизненный цикл хламидий начинается с того, что элементарные тельца фагоцитируются клеткой-хозяином, а затем в течение нескольких часов реорганизуются, увеличиваются в размерах и превращаются в ретикулярные формы, которые размножаются путем поперечного деления. Жизненный цикл заканчивается, когда возникающие промежуточные формы уплотняются, уменьшаются в размерах и превращаются в элементарные тельца. Размножаясь внутри цитоплазматических вакуолей, хламидии образуют микроколонии (включения), окруженные мембраной. В составе микроколоний обнаруживаются все три стадии развития хламидий. После разрыва стенки вакуоли (везикулы) и мембраны клетки-хозяина, вновь образовавшиеся хламидии высвобождаются, и элементарные тельца, инфицируя другие клетки, повторяют цикл развития. В оптимальных условиях роста в эукариотических клетках жизненный цикл хламидий составляет 17-40 часов.

Своеобразие хламидий проявляется и в строении их клеточной стенки. Она лишена пептидогликана и представляет собой двухслойную мембрану, ригидность которой определяют пептиды, перекрестно сшитые дисульфидными мостиками. В остальном хламидии напоминают грамотрицательные бактерии, так как содержат гликолипиды, сходные с липополисахаридами.

Порядок Chlamydiales включает одно семейство Chlamydiaceae с единственным родом Chlamydia . Для человека патогенны виды C. trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae . Хламидии вызывают у людей заболевания глаз, дыхательной и мочеполовой систем и объединяются под общим названием «хламидиозы».

Методы исследования . Для микроскопического обнаружения телец включений (микроколоний) хламидий в инфицированных клетках (тканях) применяют различные методы окрашивания: Романовского-Гимзе, Маккиавелло и другие. При окрашивании по Романовскому-Гимзе они приобретают голубой или фиолетовый цвет. Кроме того, хламидии хорошо видны и в неокрашенном состоянии при микроскопии влажных препаратов под стеклом с помощью фазовоконтрастной оптической системы. В последнее время наиболее часто используется прямая реакция иммунофлюоресценции, окраска акридин –оранжевым.

Риккетсии, хламидии, микоплазмы

Микоплазмы – самые мелкие прокариоты (125-150 нм) способные самостоятельно размножаться.

Риккетсии Хламидии Микоплазмы

Риккетсии

Рис. 23. Rickettsia prowazekii в культуре ткани: а – видны отчетливо внутренний слой (вкс) и наружный слой (нкс) клеточной стенки, представленной трехслойной мембраной, цитоплазматическая мембрана (цм) и ядерное вещество (н); б – видны микрокапсула (мк), клеточная стенка (кс) и перетяжка (п), делящая клетку как у большинства грамотрицательных бактерий. х 72 000, х 108 000 соответственно (Авакян А.А., Кач Л.Н., Павлова И.Б., 1972)

Методы исследования. Риккетсии хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе в сиреневый цвет, по Морозову (методом серебрения) в черный цвет. NB! Для дифференциации риккетсий применяется метод окраски, предложенный П.Ф. Здродовским :

1. Тонкие фиксированные мазки окрашиваются водным карболфуксином (из расчета 10 капель карболового фуксина Циля на 10 мл фосфатного буфера рН – 7,4) в течение 5 мин.
2. Мазок промывают водой и обрабатывают 0,5% раствором лимонной кислоты (1-3 сек).
3. Хорошо промывают водой и докрашивают 10 сек, 0,5% водным раствором метиленового синего.
4. Промывают водой и высушивают.

Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет и легко обнаруживаются на фоне голубой цитоплазмы и синего ядра клеток.

Под действием ряда факторов, неблагоприятно действующих на бактериальную клетку (антибиотики, ферменты, антитела и др.), происходит L-трансформация бактерий, приводящая к постоянной или временной утрате клеточной стенки. L-трансформация является не только формой изменчивости, но и приспособления бактерий к неблагоприятным условиям существования. В результате изменения антигенных свойств (утрата О- и К-антигенов), снижения вирулентности и других факторов L-формы приобретают способность длительно находиться (персистировать) в организме хозяина, поддерживая вяло текущий инфекционный процесс. Утрата клеточной стенки делает L-формы нечувствительными к антибиотикам, антителам и различным химиопрепаратам, точкой приложения которых является бактериальная клеточная стенка. Нестабильные L-формы способны реверсировать в классические (исходные) формы бактерий, имеющие клеточную стенку. Имеются также стабильные L-формы бактерий, отсутствие клеточной стенки и неспособность реверстровать которых в классические формы бактерий закреплены генетически. Они по ряду признаков очень напоминают микоплазмы и другие молликуты - бактерии, у которых клеточная стенка отсутствует как таксономический признак. Микроорганизмы, относящиеся к микоплазмам -самые мелкие прокариоты, не имеют клеточной стенки и как все бактериальные бесстеночные структуры имеют сферическую форму.

Микоплазмы (семейство Mycoplasmacea, класс Mollicutes) не способны синтезировать компоненты клеточной стенки. Вместо неё микоплазмы покрыты трехслойной эластичной мембраной, состоящей из липопротеиновых соединений, фосфолипидов с включением стеринов, которых нет у бактерий и риккетсий. Содержат большое количество белка и нуклеиновых кислот; количество углеводов варьирует.

Большинство из них – факультативные анаэробы. Так как микоплазмы не имеют ригидной оболочки, они очень полиморфны. В мазках из культур обнаруживаются различные микроструктуры: гранулы, в виде крошечных кокков и элементарных телец; крупные шары; кольца; палочки, нити и ветвящиеся мицелиальные формы; аморфные массы, меняющиеся в конфигурации. Размеры микоплазм варьируют от 125–250 нм у мелких гранулярных форм до 0,4 –150 мкм у нитевидных структур. Микоплазмы не образуют жгутиков, капсул и спор. По Граму окрашиваются отрицательно, лучше окрашиваются по Романовскому–Гимзе. Размножаются путем бинарного деления, некоторые способны к почкованию и сегментации.Колонии мелкие с приподнятым центром («яичница глазунья»), врастают в среду. На поверхности колоний располагаются крупные, часто вакуолизированные клетки, в глубине – мелкие, оптически плотные организмы.Методы микроскопии. В световом микроскопе можно обнаружить лишь самые большие формы и виды микоплазм, размеры которых превышают 0,2 мкм в длину и в поперечнике. В живом состоянии их изучают в темном поле и фазово–контрастном микроскопе, ультраструктурные элементы выявляют при электронной микроскопии.

13. Споры и спорообразование у бактерий, методы выявления спор. Жгутики, методы выделения.

Споры – это особые формы существования некоторых бактерий при неблагоприятных условиях внешней среды. При попадании споры в благоприятные условия она прорастает в вегетативную форму.

Спорообразующие аэробные бактерии – бациллы, анаэробные – клостридии.

Расположение спор:

- центральное – размер споры не превышает поперечника клетки, возбудитель сибирской язвы; – субтерминальное – ближе к концу клетки и превышает ширину клетки, возбудитель ботулизма; - терминальное – на конце клетки, возбудитель столбняка.

Спорообразование - способ сохранения определенных видов бактерий в неблагоприятных условиях среды. Эндоспоры образуются в цитоплазме, представляют собой клетки с низкой метаболической активностью и высокой устойчивостью (резистентностью) к высушиванию, действию химических факторов, высокой температуры и других неблагоприятных факторов окружающей среды. Высокая резистентность связана с большим содержанием кальциевой соли дипиколиновой кислоты в оболочке спор. Основные фазы “жизненного цикла” спор -споруляция (включает подготовительную стадию, стадию предспоры, образования оболочки, созревания и покоя) и прорастание , заканчивающееся образованием вегетативной формы. Процесс спорообразования генетически обусловлен.

Стадии споруляции (процесс спорообразования):

1.) Конденсация и отделение септой нуклеоида. 2.) Обрастание цитоплазматической мембраной протопласта. 3.) Образование предспоры, окружённой второй оболочкой цитоплазматической мембраны. 4.) Формирование кортекса. 5.) Образование наружной и внутренней оболочек и экзоспориума.

При световой микроскопии часто используют метод выявления спор по Ожешко.Методика окраски по Ожешко:

1.) На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин. 2.) Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет , а вегетативные формы - синий .

Окраска по Цилю-Нильсену:

1.) На фиксированный мазок нанести карболовый фуксин Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течение 3-5 минут. 2.) Снять бумагу, промыть препарат водой. 3.) Нанести 5% раствор серной кислоты или 3% раствор смеси 96º этилового спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин. Для обесцвечивания. 4.) Промыть водой. 5.) Докрасить препарат водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин. 6.) Промыть водой. Высушить.

Жгутики. Подвижные бактерии могут быть скользящие (передвигаются по твердой поверхности в результате волнообразных сокращений) или плавающие , передвигающиеся за счет нитевидных спирально изогнутых белковых (флагеллиновых по химическому составу) образований - жгутиков .

По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий:

1.) Монотрихи - имеют один полярный жгутик.2.) Лофотрихи - имеют полярно расположенный пучок жгутиков.3.) Амфитрихи - имеют жгутики по диаметрально противоположным полюсам.4.) Перитрихи - имеют жгутики по всему периметру бактериальной клетки.

Способность к целенаправленному движению (хемотаксис, аэротаксис, фототаксис) у бактерий генетически детерминирована.

Функции жгутиков:

1.) Обеспечивают адгезию - начальную стадию инфекционного процесса.2.) Обеспечивают подвижность бактерий.3.) Определяют антигенную специфичность, это Н-антиген.

Выявление жгутиков:

1.)Фазовоконтрастная микроскопия нативных препаратов («раздавленной» и «висячей» капли). Микроскопически подвижность определяют у клеток суточной культуры. Для того чтобы отличить подвижность от пассивного броуновского движения, к капле исследуемой культуры добавляют каплю 5 %–ного водного раствора фенола, активное движение в этом случае прекращается.2.)Темнопольная микроскопия нативных препаратов.3.)Световая микроскопия окрашенных красителями или металлами препаратов. Так как жгутики очень легко повреждаются при приготовлении препарата, в повседневной практике эти методы используется редко.

Для окраски жгутиков используют клетки, выращенные на скошенном агаре. Бактериальной петлей отбирают клетки, находящиеся у конденсационной воды и осторожно переносят в стерильную дистиллированную воду такой же температуры, что и температура инкубирования бактерий на скошенном агаре, а бактерии с петли не стряхивают, а осторожно погружают в воду. Пробирку с бактериями оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Используют химически чистое (вымытое в хромовой смеси) стекло, на которое наносят 2–3 капли суспензии. Суспензию распределяют по поверхности стекла, осторожно его наклоняя. Высушивают препарат на воздухе.

Жгутики очень тонкие, поэтому их можно обнаружить только при специальной обработке. Вначале при помощи протравки достигается разбухание и увеличение их размера, а затем производится окраска препарата, благодаря чему они становятся видимыми при световой микроскопии.

Чаще используют метод серебрения по Морозову:

– препарат фиксируют раствором ледяной уксусной кислоты 1 минуту, промывают водой;– наносят раствор танина (дубящий, делающий жгутики более плотными) на 1 мин, промывают водой;– обрабатывают препарат при подогревании импрегнирующим раствором азотнокислого серебра 1–2 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют.

При микроскопии видны темно-коричневые клетки и более светлые жгутики.

4.)Электронная микроскопия препаратов, напылённых тяжелыми металлами. 5.)Косвенно - по характеру роста бактерий при посеве в полужидкий 0,3 %–ный агар. После инкубирования посевов в термостате в течение 1–2 сут отмечают характер роста бактерий: – у неподвижных бактерий (напр., S.Saprophyticus) наблюдается рост по ходу укола - «гвоздь», а среда прозрачна; – уподвижных бактерий (напр., Е.Cо1i)наблюдается рост в стороны от укола, по всему столбику агара - «ёлочка», и диффузное помутнение среды.

Определение подвижности микроорганизмов (на всякий случайJ):

1.)Метод «раздавленной» капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают её покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла. Микроскопируют препарат под объективом 40, без иммерсионного масла, конденсор опущен. Вначале под объективом 8 находим край капли, а затем устанавливаем объектив 40 и исследуем препарат.2.)Метод «висячей» капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центре которого наносят каплю бактериальной культуры. Затем покровное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Под объективом 8 находим край капли, а затем устанавливают объектив 40 и исследуют препарат без иммерсионного масла, при опущенном конденсоре.