GOST az ochratoxin meghatározására a. Ochratoxinok. Párhuzamos meghatározások eredményeinek elfogadhatóságának ellenőrzése

ÁLLAMKÖZÖTI SZABVÁNYOSÍTÁSI, METROLÓGIAI ÉS TANÚSÍTÁSI TANÁCS

ÁLLAMKÖZÖTI SZABVÁNYOSÍTÁSI, METROLÓGIAI ÉS TANÚSÍTÁSI TANÁCS


ÁLLAMKÖZI

ALAPÉRTELMEZETT

BOR ÉS BORANYAGOK

Az ochratoxin A tartalom meghatározása nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával

Hivatalos kiadás

Standartinform


Előszó

Az államközi szabványosítási munkák céljait, alapelveit és alapvető eljárásait a GOST 1.0-92 „Államközi szabványosítási rendszer. Alapvető rendelkezések” és a GOST 1.2-2009 „Államközi szabványosítási rendszer. Államközi szabványok, szabályok és ajánlások az államközi szabványosításhoz. A fejlesztés, elfogadás, alkalmazás, frissítés és törlés szabályai "

A szabványról

1 A "Lumex-Marketing" Korlátolt Felelősségű Társaság (LLC "Lumex Marketing") FEJLESZTÉSE

2 A Szövetségi Ügynökség BEVEZETE műszaki előírásés metrológia (Rosstaidart)

3 ELFOGADTA az Államközi Szabványügyi, Mérésügyi és Tanúsítási Tanács (2015. június 18-i 47. sz. jegyzőkönyv)

4 A Szövetségi Műszaki Szabályozási és Mérésügyi Ügynökség 2015. július 21-i, 948-st számú rendeletével a GOST 33287-2015 államközi szabványt nemzeti szabványként léptették hatályba. Orosz Föderáció 2017. január 1-től

5 ELŐSZÖR BEMUTATVA

A szabvány változásaira vonatkozó információkat a „Nemzeti Szabványok” éves információs indexében, a változtatások és módosítások szövegét pedig a „Nemzeti szabványok” havi információs indexben teszik közzé. A szabvány felülvizsgálata (lecserélése) vagy törlése esetén a nemzeti szabványok havi információs indexében megfelelő értesítést teszünk közzé. A vonatkozó információk, értesítések és szövegek a nyilvános információs rendszerben is megjelennek - a Szövetségi Műszaki Szabályozási és Mérésügyi Ügynökség hivatalos honlapján az interneten

© Standartinform. 2016

Az Orosz Föderációban ezt a szabványt a Szövetségi Műszaki Szabályozási és Metrológiai Ügynökség engedélye nélkül nem lehet teljesen vagy részben reprodukálni, sokszorosítani és hivatalos kiadványként terjeszteni.

ÁLLAMKÖZI SZABVÁNY

BOR ÉS BORANYAGOK

Az ochratoxikus A-tartalom meghatározása nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával

Bor és boranyagok.

Az ochratoxin A tartalom meghatározása nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával

Bemutató dátuma - 2017-01-01

1 felhasználási terület

Ez a nemzetközi szabvány borra és boranyagokra vonatkozik, és módszert ír elő az ochratoxin A tömegkoncentrációjának meghatározására nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC).

Az ochratoxin A tömegkoncentráció mérési tartománya 0,001 és 0,1 mg/dm 3 között van.

E szabvány 8. cikke a következő szabványokra vonatkozó normatív hivatkozásokat alkalmaz:

GOST 12.1.004-91 Munkavédelmi szabványrendszer. Tűzbiztonság. Általános követelmények

GOST 12.1.007-76 Munkavédelmi szabványrendszer. Osztályozás és általános biztonsági követelmények

GOST 12.1.010-76 Munkavédelmi szabványrendszer. Robbanásbiztos. Általános követelmények

GOST 12.1.019-79 Munkavédelmi szabványrendszer. Elektromos biztonság. A védelemtípusok általános követelményei és nómenklatúrája

GOST 61-75 Ecetsav. Műszaki adatok

GOST 1770-74 (ISO 1042-63. ISO 4788-60) Laboratóriumi üvegedények mérése. Hengerek, főzőpoharak, lombikok, kémcsövek. Általános Specifikációk

GOST ISO 3696-2013 Víz laboratóriumi elemzéshez. Műszaki követelmények és ellenőrzési módszerek

GOST 4233-77 Reagensek. Nátrium-klorid. Műszaki adatok GOST 4204-77 Reagensek. Kénsav. Műszaki adatok

GOST ISO 5725*6-2003° A mérési módszerek és eredmények pontossága (helyessége és precizitása). 6. rész. Pontossági értékek alkalmazása a gyakorlatban GOST 6709-72 Desztillált víz. Műszaki adatok GOST 9293-74 (ISO 2435-73) Gáznemű és folyékony nitrogén. Műszaki adatok GOST 16317-87 Háztartási elektromos hűtőberendezések. Általános előírások GOST ISO/IEC 17025-2009 A vizsgáló és kalibráló laboratóriumok kompetenciájának általános követelményei

GOST 25336-82 Üvegáruk és laboratóriumi berendezések. Típusok. Alapparaméterek és méretek GOST 29227-91 (ISO 835*1-61) Laboratóriumi üvegáru. Pipettes végzett. 1. rész. Általános követelmények

GOST 31730-2012 Bortermékek. Átvételi szabályok és mintavételi módszerek GOST OIML R 76-1-2011 Állami rendszer a mérések egységességének biztosítására. Nem automatikus mérlegek. 1. rész Metrológiai és műszaki követelmények. Tesztek

Megjegyzés - Ennek a szabványnak a használatakor tanácsos ellenőrizni a referenciaszabványok érvényességét a nyilvános információs rendszerben - a Szövetségi Műszaki Szabályozási és Mérésügyi Ügynökség hivatalos honlapján az interneten vagy az éves információk szerint.

"" Az Orosz Föderációban létezik GOST R ISO 5725-6-2002 "A mérési módszerek és eredmények pontossága (helyessége és precizitása). 6. rész. Precíziós értékek használata a gyakorlatban.

a „Nemzeti Szabványok” index, amely a tárgyév január 1-jétől jelent meg, valamint a „Nemzeti Szabványok)” havi tájékoztató tárgyévre vonatkozó számai szerint. Ha a referenciaszabványt lecserélik (módosítják), akkor ennek a szabványnak a használatakor a helyettesítő (módosított) szabványt kell követnie. Ha a hivatkozott szabványt csere nélkül törlik, akkor a hivatkozást nem érintõ mértékben az a rendelkezés alkalmazandó, amelyben a hivatkozás szerepel.

3 Mintavétel és minta előkészítése vizsgálatra

Mintavétel a GOST 31730 szerint.

Borok a magas tartalom a szén-dioxidot előre gáztalanítják. Ehhez 50 ml terméket helyezünk egy 100 ml-es csővel ellátott lombikba (lásd a 6.22. pontot), összerázzuk és vákuumszivattyúhoz csatlakoztatjuk (lásd a 6.6. pontot). Degazáljuk 10-15 percig, amíg a hab eltűnik, és nagy buborékok jelennek meg a folyadék felszínén.

4 Biztonsági követelmények

A mérések elvégzésekor a következő követelményeket kell betartani:

Elektromos biztonság a GOST 12.1.019 és a kromatográf műszaki dokumentációja szerint:

Eeryesafety a GOST 12.1.010 szerint;

Tűzbiztonság a GOST 12.1.004 szerint;

Biztonság a káros anyagokkal végzett munka során a GOST 12.1.007 szerint.

FIGYELMEZTETÉS - Az Ochratoxin A vese- és májkárosodást okoz, és

feltehetően rákkeltő. A minta-előkészítéssel és az ochratoxin A oldatok elkészítésével kapcsolatos minden munkát elszívóernyőben kell elvégezni, védőruházat, kesztyű és védőszemüveg használata mellett. Az ochratoxin A-val érintkezésbe került üvegedények fertőtlenítése 4%-os nátrium-hipoklorit oldattal történik.

5 A módszer lényege

A módszer az ochratoxin A mintából savanyított metilén-kloriddal történő extrahálásán, a kapott extraktum betöményítésén, a minták szűrésén és az ochratoxin A tömegkoncentrációjának HPLC-vel történő meghatározásán alapul, fordított oszlopon, fluorimetriás kimutatással.

6 Mérőműszerek, segédberendezések, referenciaanyagok, reagensek, üvegedények és anyagok

6.1 Folyadékkromatográf fluorimetriás vagy spsktrofluorimstrich detektorral, amely gerjeszti a fluoreszcenciát a spektrális tartományban (330 ± 20) nm, és regisztrálja a fluoreszcencia intenzitást a spektrális tartományban (465 ± 20) nm. Az alkalmazott detektornak legfeljebb 5 ng/cm 3 ochratoxin A kimutatási határt kell biztosítania.

6.2 Nem automatikus mérlegek a GOST OIML R 76-1 szerint, a megengedett abszolút hibahatárok legfeljebb ± 0,01 g.

6.3. Analitikai kromatográfiás oszlop, 5 µm szemcseméretű fordított fázisú szorbenssel töltve. legalább 5000 elméleti lemez hatékonysága az ochratoxin A csúcsához

6.4. A védőoszlop azonos belső átmérőjű, és ugyanolyan fordított fázisú szorbenssel van feltöltve, mint az analitikai oszlop.

6.5 Rotációs elpárologtató, vízfürdővel, 20 °C és 50 °C közötti hőmérséklet-szabályozóval.

6.6 Laboratóriumi vákuum, membrános vagy vízsugárszivattyú a GOST 25336 szerint, 2,5-10 kPa vákuumot biztosítva.

0 Példa egy kereskedelmi termékre, amely megfelel a meghatározott követelményeknek. - 2,1 mm belső átmérőjű és 120 mm hosszú kromatográfiás oszlop. fordított folyású Kromasil S-18 szorbenssel töltött. Alltfcna C18 és mások, amelyek részecskemérete 5 μm. 25 mm hosszú előcsészével felszerelt. Ez az információ a nemzetközi szabvány felhasználóinak kényelmét szolgálja, és nem jelenti a megadott termék jóváhagyását.

6.7 Szárítószekrény, akár 200 C-os hőmérsékletet biztosít.

6.8 Háztartási hűtőszekrény a GOST 16317 szerint.

6.9 Laboratóriumi centrifuga legalább 5000 ford./perc sebességgel.

6.10 A szabványt elfogadó állam országos mérési rendszerében államközi vagy metrológiailag biztosított, az 50 μg/cm 3 tömegkoncentrációjú acetonitriles ochratoxin A oldat összetételének 1. számú állami szabványmintája, a hitelesített érték legfeljebb ± 2,5 μg / cm hibájával a toxin A toxin oldat összetétele 3-ig megengedett. amelyeket figyelembe kell venni a kiindulási oldat elkészítésekor a 7.3.1.

6.11 desztillált víz a GOST 6709 szerint vagy víz 1 tisztaságú laboratóriumi vizsgálathoz a GOST ISO 3696 szerint.

6.12 Ecetsav a GOST 61 szerint. glaciális.

6.13 Acetonitril folyadékkromatográfiához, optikai sűrűsége a desztillált vízhez viszonyítva 200 nm-en, legfeljebb 0,025, a víz tömeghányada legfeljebb 0,03%.

6.14 Metilén-klorid nagy teljesítményű folyadékkromatográfiához a szabályozó dokumentumokat a szabványt elfogadó állam területén működik.

6.15 Kénsav a GOST 4204 szerint, x. h vagy h.

8.16 Nátrium-klorid a GOST 4233 szerint. x. h.

6.17 Pipetták, 1-2-2-1 fokozatú. 1-2-2-2. 1-2*2*5, 1-2-2-10 vagy más típusok és kivitelek a GOST 29227 szerint.

6.18 Mérőhengerek 1-25-2,1-50-2,1-250-2 vagy egyéb kivitelek a GOST 1770 szerint.

6.19 Mérőlombik 2-25-2. 2-50-2,2-100-2. 2-500-2 a GOST 1770 szerint.

6.20 0-10-14/23 és 0-50-14/23 hegyes fenekű lombik a GOST 25336 szerint.

6.21 Lapos fenekű lombikok P-1-50-29/32, P-1-10O-29/32. P-1-20O-29/32. P-1-250-29/32 vagy Kn-1-50-29/32. Kn-1-100-29/32. Kn-1 -250-29/32 a GOST 25336 szerint.

6.22 2-100-19/26.2-250-29/32 csővel ellátott lombik a GOST 25336 szerint.

6.23 Osztótölcsérek, VD típusú, 1-es vagy 3-as verzió, 50 cm 3 űrtartalommal a GOST 25336 szerint.

6.24 B típusú laboratóriumi tölcsérek a GOST 25336 szerint.

6.25 A papírszűrők „bürokráciát” okoznak a szabványt elfogadó állam területén hatályos szabályozási dokumentumok szerint.

6.26 Üvegtartályok 25.50.250, 1000 cm 3 űrtartalommal, csiszolt üveg-, fluor-műanyag vagy polietilén dugóval a szabványt elfogadó állam területén hatályos szabályozási dokumentumok szerint.

6.27 Homokóra vagy időmérő a szabványt elfogadó állam területén hatályos előírások szerint.

Más, a fentieknél nem rosszabb metrológiai jellemzőkkel rendelkező mérőeszközök, valamint a fentieknél nem rosszabb műszaki jellemzőkkel rendelkező segédberendezések, reagensek és anyagok használhatók.

7 Felkészülés a tesztre

7.1 Üvegeszközök előkészítése

A mozgófázis készítésére és tárolására szolgáló edényeket csak a 6.15. pont szerint kénsavval kezelik, egyéb tisztítószerek használata nélkül, csapvízzel alaposan kimossák és desztillált vízzel öblítik.

A többi üvegedényt forró vízzel és mosószerrel kezeljük, desztillált vízzel alaposan leöblítjük és kemencében 105°C-on szárítjuk.

7.2 Segédoldatok készítése

7.2.1 Mozgófázis előkészítése

8 1000 cm 3 űrtartalmú, előre elkészített üvegedénybe, szorosan lezárt csiszolt üveg-, fluor-műanyag- vagy polietiléndugóval, 5 cm 3 jégecetet (lásd 6.12), 215 cm 3 acetonitrilt (lásd 6.13) és 280 cm 3 desztillált vizet helyezünk. A keveréket alaposan összekeverjük. A mozgófázis tárolása során a gumi vagy parafa dugók használata elfogadhatatlan.

A keverék eltarthatósága szobahőmérsékleten - legfeljebb 1 hónap.

Használat előtt a mobil fázist gáztalanítjuk és szűrjük a kromatográf gyártójának ajánlásai szerint.

"Az Orosz Föderációban egy jóváhagyott típus szabványmintája.

7.2.2. Metilén-klorid és ecetsav 200:1 térfogatarányú keverékének elkészítése

Tegyünk 200 ml metilén-kloridot (6.14.) és 1,0 ml jégecetet (6.12.) egy 250 ml-es lapos fenekű lombikba.

A keverék eltarthatósága szobahőmérsékleten csiszolt üveg-, fluor-műanyag- vagy polietiléndugóval ellátott üvegedényben nem haladja meg az 1 hónapot.

7.2.3. 20%-os tömeghányadú nátrium-klorid oldat készítése.

Tegyünk 20 g nátrium-kloridot (lásd a 6.16. pontot) egy 200 cm 3 űrtartalmú lapos fenekű lombikba, adjunk hozzá 80 cm 3 desztillált vizet, alaposan keverjük össze.

Az oldat eltarthatósága szobahőmérsékleten - legfeljebb 3 hónap.

7.3 Ochratoxin A oldatok készítése

7.3.1 Ochratoxin A törzsoldat elkészítése c névleges érték tömegkoncentráció 1 μg / cm 3

Pipettázzunk 1 cm 3 -t 50 µg/cm 3 tömegkoncentrációjú ochratoxin A acetonitriles oldatának standard mintájából (lásd a 6.10. pontot). tegyük egy 50 ml-es mérőlombikba, és hígítsuk jelig acetonitrillel (6.13.).

Az elkészített oldat eltarthatósága a hűtőszekrényben 2 ° C és 6 * C közötti hőmérsékleten - legfeljebb 6 hónap.

Az ochratoxin A tömegkoncentrációjának tényleges értékét a kiindulási oldatban (Cm, μg / cm 3) a képlet számítja ki




ahol Cco az ochratoxin A tömegkoncentrációjának hitelesített értéke a standard mintában az útlevél szerint, µg/cm 3 ;

Vco - a kiindulási oldat elkészítéséhez kiválasztott ochratoxin A. oldat összetételének standard mintájának térfogata, cm 3 (1 cm 3);

V^, - a kiindulási oldat elkészítéséhez használt mérőlombik térfogata, cm 3 (50 cm 3).

Megjegyzés: Ha az ochratoxin A más oldószerekben készült oldatának összetételének standard mintáját használjuk, egy alikvot részt (1 cm 3) száraz maradékká párolunk be vákuumban, 40 °C és 45 °C közötti vízfürdő hőmérsékleten, vagy nitrogénáramban. A száraz maradékot ezután 2 cm1-es acetonitos oldatban feloldjuk. 50 cm 3 űrtartalmú mérőlombikba töltjük, és acetonitrillel jelzettre hígítjuk.

7.3.2 50 ng/cm névleges tömegkoncentrációjú ochratoxin A mozgófázisú oldatának elkészítése

Egy 50 cm 3 űrtartalmú mérőlombikba helyezzünk 2,5 cm 3 ochratoxin A kiindulási oldatot a 7.3.1. szerint, és a térfogatot a 7.2.1. pont szerinti mozgófázissal jelig töltjük.

A kapott oldat eltarthatósága hűtőszekrényben 2-6 és C hőmérsékleten - legfeljebb 3 hónap.

Az ochratoxin A tömegkoncentrációjának tényleges értékét az oldatban (Co, ng / cm 3) a képlet számítja ki

С„ = r ~, ; v ~ -10QQ. (2)

ahol Cm az ochratoxin A tömegkoncentrációjának tényleges értéke a kiindulási oldatban (lásd a 7.3.1. pontot), µg/cm 3 ;

A kiindulási oldat térfogata a 7.3.1. ennek az oldatnak az elkészítéséhez kiválasztott. cm3 (2,5 cm3);

Vo a kiindulási oldat elkészítéséhez használt mérőlombik térfogata, cm 3 (50 cm 3);

1000 - a tömegegységek méreteinek koordinációs együtthatója.

7.3.3. Ochratoxin A kalibrációs oldatok készítése

Az ochratoxin A acetonitriles kiindulási oldatát a 7.3.1. pont szerint helyezzük egy 50 cm 3 űrtartalmú mérőlombikba. Az ochratoxin A oldat térfogatának meg kell felelnie az 1. táblázat követelményeinek.

Asztal 1

A lombik tartalmát a jelig hígítjuk a mozgófázissal a 7.2.1. pont szerint, az 1. táblázat szerint.

A kalibrációs oldatok eltarthatósága hűtőszekrényben 2 °C és 6 °C közötti hőmérsékleten nem haladja meg a hét napot.

MEGJEGYZÉS Ha szükséges, például ochragoxin A-t kell hozzáadni a mintához (lásd 8.2). hasonló módon más koncentrációjú ochratoxin A oldatokat is készíthetünk.

A kalibráló oldatokban az ochratoxin A tömegkoncentrációjának tényleges értékét a (2) képlet számítja ki. táblázat szerinti kiindulási oldat térfogatának értékei alapján.

Felhasználás előtt az oldatokat szobahőmérséklet eléréséig kell tartani.

7.4 A kromatográf előkészítése

A kromatográf mérésekhez való előkészítése a kezelési kézikönyv (utasítás) szerint történik.

Állítsa be a működési hullámhosszokat a gerjesztéshez és a fluoreszcencia kimutatásához (lásd 6.1). A mozgófázis térfogatáramát és a minta adagolt térfogatát az oszlopméretek függvényében állítjuk be, a kromatográf és az oszlopgyártó utasításai alapján. Például a 6.3. pontban megadott kromatográfiás oszlophoz. a térsebesség 200 mm 3 / perc értéke és az adagolószelep hurok térfogata 10-20 mm ajánlott. Ha van oszloptermosztát, akkor a hőmérsékletet (25 ± 1) ° С-ra kell beállítani.

7.5 A kromatográf kalibrálása

A kalibrációs karakterisztika linearitási tartománya 5-100 ng/cm*. A kromatográf kalibrálásához mintaként az ochratoxin A 7.3.3. sz. kalibrációs oldatait kell használni.

Mindegyik kalibrációs oldatból két kromatogramot rögzítenek, és a kromatográfhoz használt szoftver segítségével a kromatográfot a kalibrációs jellemző paramétereinek és az ochratoxin A retenciós idejének beállításával kalibrálják.

Számítsa ki a korrelációs együtthatót és az ochratoxin A tömegkoncentrációjának számított értékeinek eltérését minden egyes kalibrációs pontban a tényleges értéktől a kalibrációs oldatok elkészítésének eljárása szerint (lásd 7.3.3).

Az érettségi akkor tekinthető elfogadhatónak, ha:

Korrelációs együttható legalább 0,998:

Az ochratoxin A tömegkoncentráció számított értékének relatív eltérése a tényleges értéktől legfeljebb ± 10%.

7.6 A kalibrációs karakterisztika stabilitásának ellenőrzése

A kalibrálási jellemzők stabilitásának ellenőrzése naponta történik a munka megkezdése előtt.

8 kontrolloldatként használjuk az ochratoxin A mozgófázisban lévő oldatát, amelyet a 7.3.3. pontban leírt módon készítünk el. Az ochratoxin A tömegkoncentrációját a kontrolloldatban a vizsgálati minták várható ochratoxin A-tartalma alapján választjuk ki: 20 ng/cm tömegkoncentrációjú ochratoxin A oldat használata javasolt.

Rögzítsen legalább két kontrolloldat-kromatogramot, és azonosítsa az ochratoxin A csúcsot a retenciós idő alapján 5%-os azonosító ablakszélességnél. szükség esetén a csúcsretenciós idő szoftveres korrekciójával, és a kalibrációs karakterisztikával minden bemenetre kiszámítjuk az ochratoxin A tömegkoncentrációját.

Az ochratoxin A retenciós idejének és tömegkoncentrációinak megismételhetőségét a képletekkel ellenőrizzük

l^Z^lisO.05, (3)

ahol h és Tr az ochratoxin A csúcs retenciós ideje az első és a második kromatogramon, min:

f a számtani átlag /, és t 2, min.

i, _ "" * 0L7"

Val vel.

ahol Cl és Cl2 - az ochratoxin A tömegkoncentrációja a kontrolloldatban az első és a második kromatogram szerint, ng/cm 3 ;

C - a Cxi és C« értékeinek számtani átlaga. ng/cm3.

A kalibrációs függőség akkor tekinthető stabilnak, ha teljesül a feltétel, ahol C az ochratoxin A tömegkoncentrációjának tényleges értéke a kontrolloldatban, ng / cm 3 -

Ha az (5) feltétel nem teljesül, az ellenőrzési eljárás megismétlődik. Az ismételt kontroll eredményeit véglegesnek tekintjük, és a kromatográf 7.5. pontja szerinti kalibrálását ismét elvégezzük.

7.7 Üres vezérlő

A vizsgálati minták vizsgálata előtt vakpróbát kell végezni.

15 cm-es metilén-klorid és ecetsav keverékét egy lombikba helyezzük bepárlás céljából.

7.2.2. és vákuumban szárazra pároljuk úgy, hogy a lombikot 40–45 °C-os vízfürdőbe helyezzük.

A száraz maradékot feloldjuk 0,5 ml* mozgófázisban a 7.2.1. pont szerint. álljon legalább 5 percig, és végezze el a kapott koncentrátum kromatográfiás elemzését a 8.3. pont szerint. Ha a kromatogram olyan csúcsokat tartalmaz, amelyek retenciós ideje közel van az ochratoxin A csúcsához, akkor a vakminta szennyeződésének okait megtalálják és kiküszöbölik.

MEGJEGYZÉS A gyenge vakpróba-ellenőrzési eredmények leggyakoribb oka a metilén-klorid elégtelen tisztasága, amely szennyeződhet olyan szennyeződésekkel, amelyek retenciós ideje közel van az ochratoxin Aéhez. Az ilyen metilén-kloridot ki kell cserélni, vagy alapos desztillációnak kell alávetni, összegyűjtve a 39 °C és 40 °C közötti forráspontú középső frakciót.

8 Tesztelés

8.1. Az ochratoxin A kivonása a mintából

Pipettázzunk 5 cm 3 mintát egy választótölcsérbe, adjunk hozzá 5 cm 3 nátrium-klorid oldatot a 7.2.3 szerint, adjunk hozzá 5 cm 3 metilén-klorid és ecetsav keveréket a 7.2.2 szerint, és rázzuk 1 percig. A fázisok szétválasztása után az alsó szerves réteget megsavanyított metilén-kloriddal előzetesen megnedvesített bürokráciaszűrőn keresztül bepárlólombikba szűrjük.

Megjegyzés - Ha stabil emulzió képződik, ajánlatos a keveréket 2 percig centrifugálni 5000 fordulat/perc sebességgel.

Ismételjük meg az ochratoxin A extrakcióját a felső rétegből 5 cm 3 ecetsav és metilén-klorid keverékével a 7.2.2. pont szerint. A kapott extraktumot ugyanabba a bepárlólombikba szűrjük.

A szűrőt 5-10 cm 3 térfogatú, savanyított metilén-kloriddal mossuk. Az extraktumot vákuumban szárazra pároljuk úgy, hogy a lombikot 40-45 °C hőmérsékletű vízfürdőbe helyezzük. A száraz maradékot feloldjuk a mozgófázis 0,5 cm-ében, így mintakoncentrátumot kapunk.

jegyzet -A színpadon a módszer elsajátítása során az extrahálószer tételének megváltoztatásakor, valamint ha kétség merül fel a kapott eredmények megbízhatóságával kapcsolatban, az A. függeléknek megfelelően keresse meg az ochratoxin A transzmissziós együtthatóját a kontrollmintában, és ellenőrizze a kapott érték elfogadhatóságát.

8.2 Szűrési minták

A 8.1. pont szerint nyert bormintakoncentrátum. tartsa legalább 5 percig. majd végezze el a kromatográfiás elemzését a 8.3.

Ha a kromatogramon nincs az ochratoxin A csúcsaként azonosított csúcs, azt a következtetést vonják le, hogy a mérési tartomány alsó határán (0,001 mg / dm 3) nincs ochratoxin A a mintában, és az ochratoxin A hozzáadásával készült mintát nem készítik elő.

Ha a minta kromatogramja csúcsot mutat. azonosítható szoftver ochratoxin A-csúcsként a kromatográfra (lásd a 8.3. pontot). vagyis bevezetjük az elemzett mintát

adalékanyag az ochratoxin A mozgófázisban lévő oldata formájában (lásd a 7.3.2. pontot). Az ochratoxin A-oldat javasolt adagolási térfogatát (V 4P . cm 3) a képlet alapján számítjuk ki

(6) ahol o egy együttható, amelynek értéke a 0,5 és 2,0 közötti tartományban van kiválasztva:

C* az ochratoxin A tömegkoncentrációja a mintakoncentrátumban (lásd a 8.3. pontot). ng/cm3;

Us a mintakoncentrátum térfogata, cm 3 (0,5 cm 3);

Beállítás – az ochratoxin A tömegkoncentrációja az adalékanyag hozzáadásához használt oldatban. ng/cm3.

A hozzáadott adalékanyag térfogata nem haladhatja meg a minta térfogatának 5%-át (U per cm 3). Ha ez a követelmény nincs összhangban a (6) képlettel számított értékekkel. majd az ochratoxin A adalék hozzáadásához eltérő tömegkoncentrációjú oldatot használunk.

Elemezze a tüskés mintát a 8.1. pont szerint.

8.3 Kromatográfiás mérések végzése

Rögzítsen legalább két kromatogramot a vizsgálati minta-koncentrátumból (lásd 8.1. pont) és az adalékanyagot tartalmazó mintából (lásd 8.2. pont), ugyanolyan körülmények között, mint a kromatográf kalibrálása. Az ochratoxin A azonosítása úgy történik, hogy a mintakivonatban lévő ochratoxin A retenciós idejét a kalibrációs jellemző stabilitásának figyelésével kapott retenciós idejével egyeztetjük, az azonosítási ablak szélességét 5%-ra állítva.

A kromatogramra egy példa látható a B.1. ábrán (B. függelék).

Megjegyzés - Ha meg kell erősíteni az ochratoxin A csúcs helyes azonosítását, ajánlatos az ochratoxin A mozgófázisban lévő oldatát hozzáadni a mintakoncentrátumhoz. Az azonosítás megbízhatósága az ochratoxin A várható csúcsának magasságának növekedéséből ítélhető meg. A hozzáadott ochratoxin A oldat mennyiségét az alapján határozzuk meg, hogy az ochratoxin A tömegkoncentrációja a mintában (50 - 150)%-kal növekedjen a kezdeti értékhez képest.

Ha a mintakoncentrátum kromatogramján van egy csúcs, amelyet az ochratoxin A csúcsaként azonosítanak. Minden egyes regisztrált kromatogramra számítsa ki az ochratoxin A tömegkoncentrációját a mintakoncentrátumban a 7.5. pontban meghatározott kalibrációs jellemzők segítségével. és ellenőrizze a kapott értékek elfogadhatóságát a (4) feltétellel. Ha a (4) feltétel teljesül, akkor a vizsgálati minta koncentrátumában az ochratoxin A tömegkoncentrációjának mérése eredményeként a kapott koncentrációk számtani átlagát (Cx. ng / cm 3) vesszük. Ha a (4) feltétel nem teljesül, akkor az instabilitás okait megtalálják és megszüntetik, majd megismétlik a mintakoncentrátum bejuttatását.

A mintakoncentrátum ochratoxin A hozzáadásával történő elemzésekor (lásd 8.2) két kromatogramot is rögzítenek, azonosítják az ochratoxin A csúcsát, és minden kromatogramra kiszámítják az ochratoxin A tömegkoncentrációját a koncentrátumban, ellenőrzik a kapott értékek elfogadhatóságát, és az ochratoxin A tömegkoncentrációját a koncentrátum D3m-ben. a kapott értékek számtani átlagaként számítják ki.

Ha a mintakoncentrátumban az ochratoxin A tömegkoncentrációja meghaladja a 100 ng/cm3 értéket, akkor a bormintát a 6.11. pont szerint vízzel hígítjuk, és a hígított mintát a 8.1. pont szerint újraelemzik. Az O hígítási tényezőt a képlet alapján számítjuk ki

ahol U p a hígított minta térfogata, cm 3;

Y 4 - a hígításra vett vizsgálati minta alikvotjának térfogata, cm 3 .

9 Vizsgálati eredmények feldolgozása

Az ochratoxin A tömegkoncentrációját egy bormintában (X, mg / dm) a következő képlettel számítjuk ki


V---ts--:--o-yu '

ahol Cst az adalékanyagként használt ochratoxin A oldat tömegkoncentrációja (lásd 8.2). ng/cm3:

Az ochratoxin A-oldat mintához adott térfogata (lásd 8.2.), cm 3:

Vpp a 8.1. pont szerint vizsgálatra vett minta térfogata. cm 3 (5 cm 3);

Cx az ochratoxin A tömegkoncentrációja a mintakoncentrátumban (lásd a 8.3. pontot), ng/cm3:

x-től. c = az ochratoxin A tömegkoncentrációja a tüskés mintakoncentrátumban (lásd a 8.3. pontot). ng/cm3:

O a borminta hígítási tényezője (lásd a 8.3. pontot). Ha a mintát nem hígították, akkor O g 1;

10" 3 - a tömeg- és térfogategységek méreteinek koordinációs együtthatója.

10 Metrológiai jellemzők

A módszer olyan mérési eredményeket biztosít, amelyek metrológiai jellemzői nem haladják meg a 2. táblázatban megadott értékeket.

2. táblázat

Mérési tartomány. mg/dm 1

Ismételhetőségi határ (a P * 0,95-nél ismételhetőségi körülmények között kapott két mérési eredmény megengedett eltérésének relatív értéke) g 0, „. %

Kritikus különbség (a megengedhető eltérés relatív értéke reprodukálhatósági körülmények között, P = 0,951 C0% V. kg / dm 1

Pontossági mutató (a relatív hiba határai* megbízhatósági szinten Р = 0,95).

0,001 és 0,005 között

Se. 0,005 » 0,1 »

* A relatív hibahatárok megállapított számértékei megfelelnek a relatív kiterjesztett bizonytalanság számértékeinek k = 2 lefedettségi tényezővel.

Eltérés két mérési eredmény között (X| és X 2 , mg/dm - *). megismételhetőségi körülmények között ugyanabban a laboratóriumban nyert, meg kell felelnie a feltételnek

ahol X X számtani közepe és X 2 . mg/dm:

L> o. - ismételhetőségi határ (2. táblázat), %.

Ha a (9) feltétel teljesül, a kapott mérési eredmények számtani átlagát (X, és X 2 . mg / dm 3) vesszük mérési eredménynek.

A két laboratóriumban (X 1gaC és Hahn, mg / dm 3) azonos mintákon kapott két mérési eredmény közötti eltérésnek meg kell felelnie az állapotnak

ahol Хпов Х 1лв0 és Х^ számtani átlaga. mg/DM 3: CO 095 - kritikus különbség (2. táblázat). %.


11 Mérési eredmények minőségellenőrzése

A mérési eredmények minőségi mutatóinak laboratóriumi ellenőrzése biztosítja a mérési eredmények stabilitásának ellenőrzését, figyelembe véve a GOST ISO 5725 * 6 követelményeit (6. szakasz).

12 Vizsgálati eredmények bemutatása

A vizsgálati eredményeket a GOST ISO / IEC 17025 követelményeinek megfelelően elkészített vizsgálati jegyzőkönyvben rögzítik, míg a vizsgálati jegyzőkönyvnek hivatkoznia kell erre a szabványra.

Az ochratoxin A tartalom mérésének eredményeit (amennyiben az analitikai eljárás laboratóriumilag igazolta a szabvány követelményeinek való megfelelést) a nyomtatvány tartalmazza.

X±L vagy X±U. (11)

ahol X a 10. szakasz szerint kapott mérési eredmény. mg / dm 3:

A - az ochratoxin A (P - 0,95), mg / dm 3 tartalom mérésének abszolút hibájának határai, amelyeket a képlettel számítanak ki

A = 0,0!bG: (12)

U a kiterjesztett bizonytalanság k-2 lefedettségi tényező mellett. mg / dm 3, amelyet a 8-as képlet alapján számítanak ki

U = 0,CM (/sz x. (13)

Az S (U„J) értékeit a 2. táblázat tartalmazza.

Az abszolút hiba (bizonytalanság) határainak számértékeit legfeljebb két jelentős számjegyből álló számként fejezzük ki, miközben a végső mérési eredmény számértékének legkisebb számjegyét tekintjük azonosnak. valamint az abszolút hiba (bizonytalanság) határai számértékének legkisebb számjegye.

Az ochratoxin A transzmissziós együtthatójának meghatározása

Az ochratoxin A transzmissziós együttható meghatározásához kontrollmintát használunk, amelynek elkészítéséhez 5 ml desztillált vizet helyezünk egy választótölcsérbe, hozzáadunk 5 ml nátrium-klorid-oldatot a 7.2.3. pont szerint, és 0,5 ml* 50 ng/cm tömegkoncentrációjú ochratoxin A oldatot adunk hozzá (lásd 7. mozgófázisban).

Végezze el az ochratoxin A extrakcióját a 6.1. készítse el a kontrollminta-koncentrátumot a 8.2. pont szerint, és végezze el a kromatográfiás elemzését a 8.3. és a. a 7.5. pont szerinti kalibrációs karakterisztikával. osztjuk ki az ochratoxin A tömegkoncentrációját a kontrollminta-koncentrátumban.

Ezután az ochratoxin A transzmissziós együtthatóját (p) számítjuk ki a képlettel



ahol V\ a kontroll minta koncentrátum térfogata, cm 9 (0,5 cm *):

Cx az ochratoxin A tömegkoncentrációjának mért értéke a kontrollminta-koncentrátumban, ng/cm*:

C. - az ochratoxin A tömegkoncentrációjának értéke az oldatban a 7.3.2. pont szerint. ng/cm*:

V. - ochratoxin A oldat térfogata a 7.3.2. pont szerint. kontrollminta elkészítéséhez kiválasztott cm* (0,5


Az ochratoxin A transzmissziós együtthatóját megismételhetőségi körülmények között legalább háromszor kell meghatározni. A kapott értékeknek meg kell felelniük a következő követelményeknek:

A kapott értékek mindegyike nem kisebb, mint 0,8:

A kapott értékek tartományának relatív értéke megfelel a feltételnek


I P||F Pchii I




ahol iv "t és tv". - az ochratoxin A átviteli együtthatójának kapott értékei közül a legnagyobb és a legkisebb;

Ha mindkét feltétel teljesül, akkor a 8.1. pont szerinti műveleteket kielégítőnek tekintjük. Ellenkező esetben megtalálják az ochratoxin A elvesztésének okait, és megismétlik a transzmissziós együttható meghatározását.

B. melléklet (tájékoztató jellegű)

Kromatogram példa

félédes


A B.1. ábra egy vörösborminta-koncentrátum kromatogramjára mutat példát (az ochratoxin A tömegkoncentrációja a mintában 0,0010 mg/dm 1).


koncentráció


B.1. ábra – Példa a kromatogramra

Az ochratoxin A csúcsa (az ábrán OTA-ként jelölve) a koncentrátumban lévő ochratoxin A 7,7 ng/cm* tömegértékének felel meg.


UDC 543.544.5.068.7:663.2:006.354 MKS 67.160.10

Kulcsszavak: bor, borászati ​​anyagok. vizsgálati módszerek, nagy teljesítményű folyadékkromatográfia, ochratoxin A. ochratoxin extrakció A. ochratoxin tömegkoncentráció meghatározása A. kivonat koncentrációja, minták szűrése, fluorimetriás kimutatás

Szerkesztő K.V. Dudko lektor P.M. Smirnov Számítástechnika története E.K. Kuzina

Közzétételre aláírva 2016. február 8-án. Formátum 60x84V*.

Uel. sütő l. 1.86. Példányszám 45 példány. Mögött*. 3872.

A szabvány kidolgozója által biztosított elektronikus változat alapján készült

Szórólap

Kitek és tesztrendszerek az enzim immunoassay-hez. Kereskedelmi forgalomban kaphatók az ISO 9000 szabványnak megfelelően, a szükséges reagensekkel együtt, és a gabonafélékben, takarmányokban, gabonatermékekben, sörben és vérszérumban található ochratoxin mennyiségi meghatározására szolgálnak. Irányelvek tesztrendszerek használatáról RIDASCREEN® FAST Ochratoxin AÉs RIDASCREEN® Ochratoxin A a Szövetségi Ügynökség Állat-egészségügyi Osztálya jóváhagyta mezőgazdaság Oroszország Mezőgazdasági Minisztériuma a szám alatt MUK 5-1-14/1001. A rendszerek a „Lista normatív dokumentáció, állami állategészségügyi laboratóriumokban használható állatok, halak, méhek betegségeinek diagnosztizálására, valamint az állati és növényi eredetű nyersanyagok biztonságának ellenőrzésére. "Vizsgálati rendszerek RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A megfelelnek GOST 34108-2017"Takarmány, takarmánykeverék, vegyes takarmány alapanyagok. Mikotoxin tartalom meghatározása direkt szilárd fázisú kompetitív enzimes immunvizsgálattal".

Az ochratoxin A meghatározása gabonában, takarmányban, gabonatermékekben, sörben és vérszérumban

Az ochratoxin egy mérgező anyag, amely létfontosságú tevékenység eredményeként képződik penészgombák kedves AspergillusÉs Penicillium. A kifejezett nefrotoxicitás mellett az ochratoxin hepatotoxicitással, teratogén, karcinogén és immunszuppresszív tulajdonságokkal is rendelkezik. A növényi és állati eredetű termékekkel az ochratoxin bejuthat az emberi szervezetbe. Nemcsak a gabonafélékben (a pozitív minták 13%-a) és az állati takarmányban, hanem a sertésvérben (a pozitív minták 60%-a) és a vesében (a pozitív minták 21%-a) is megtalálható.

A Vámunió műszaki szabályzata TR CU 021/2011 "Az élelmiszerbiztonságról" az ochratoxin A következő maximális szintjének szabályozása: gabonafélékben, gabonafélékben, lisztben - 0,005 mg / kg (5 μg / kg); bébiételekben, óvodásoknak és iskolásoknak szánt élelmiszerekben, terhes és szoptatós anyáknak szánt élelmiszerekben - nem megengedett (<0,0005 мг/кг).

Szövetségi törvénytervezet № 349084-5 A „Bortermékekre vonatkozó műszaki előírások” a bor ochratoxin A-tartalmára vonatkozóan legfeljebb 0,002 mg/l-t ír elő.

A szövetségi törvénytervezet "Az élelmiszerek biztonságára és előállításuk, tárolásuk, szállításuk, értékesítésük és ártalmatlanításuk folyamatairól" szóló szövetségi törvény előírja az élelmiszer-gabonák kötelező ellenőrzését az ochratoxin A tekintetében, amelynek tartalma nem haladhatja meg a 0,005 mg/kg-ot. A hatályos jogszabályok megtalálhatók a honlapon compact24.com.

Egészen a közelmúltig a kromatográfiás módszereket (nagy teljesítményű folyadékkromatográfia, vékonyréteg-kromatográfia) túlnyomórészt az ochratoxin szabályozására alkalmazták. Sokkal kényelmesebb módszer az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálathoz (ELISA, vagy ELISA), amely nagyon nagy érzékenységgel rendelkezik.

Leírás: RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A RIDASCREEN® Ochratoxin A 30/15
Formátum: Szalaglemez, 48 lyukas (6 csík 8 lyukból) Szalaglemez, 96 lyukas (12 csík 8 lyukból)
Szabványok: 0/5/10/20/40 µg/l 0/50/100/300/900/1800 ng/l
Minta előkészítés: Mintaőrlés, extrakció, szűrés extrakció, centrifugálás/szűrés (gabona, takarmány); extrakció, centrifugálás, szűrés, rázás, túlextrakció, centrifugálás, bepárlás (sör/szérum)
Eltöltött idő:
Érzékelési határ: 0,005 mg/kg 0,001250 mg/kg (gabona, takarmány)
0,000050 mg/kg (sör, vérszérum)

Kapcsolódó termékek:

Az Orosz Orvostudományi Akadémia Állami Táplálkozástudományi Kutatóintézete, Moszkva

Az ochratoxin A, a Penicillium (P. verrucosum) és az Aspergillius (A. ochraceus) nemzetséghez tartozó, széles körben elterjedt mikroszkopikus gombák másodlagos metabolitja, a kiemelt mikotoxinok – élelmiszer-szennyező anyagok – közé tartozik, és valós veszélyt jelent az emberi egészségre. Az ochratoxin A kifejezett nefrotoxikus, karcinogén, valamint teratogén, immunotoxikus, neurotoxikus, genotoxikus és citotoxikus hatással rendelkezik. A Nemzetközi Rákkutató Ügynökség (IARC) (2B csoport) az ochratoxin A-t az emberre nézve valószínűleg rákkeltőnek minősítette. Orális beadás esetén az LD50 különböző állatfajoknál 20-30 mg/ttkg (patkányoknál) 1 mg/ttkg (sertéseknél) között változik. Az ochratoxin A-t a balkáni endémiás nephropathia egyik etiológiai tényezőjének tekintik, amely súlyos vesebetegség néhány kelet-európai országban (különösen Bulgáriában, Romániában, Szerbiában, Horvátországban, Bosznia-Hercegovinában, Szlovéniában és Macedóniában). Az ochratoxin A leggyakrabban gabonatermékekben, kávéban és fűszerekben található. A közelmúltban bizonyíték van a szárított gyümölcsök, borok és gyümölcslevek jelentős ochratoxin A-val való szennyezettségére. Így az EU-országokban végzett vizsgálatok eredményeként azt találták, hogy a gabonatermékek tételeinek mintegy 70%-a 0,00001-0,041 mg/kg tartományban tartalmazott ochratoxin A-t, a vizsgált bortételek mintegy 60%-a pedig 0,00000,3 mg/0,000,16 mg/kg ochratoxin A-val szennyezett. Különösen figyelemre méltóak az ochratoxin A gyakori kimutatására vonatkozó adatok a vérben, valamint számos európai ország lakosságának az anyatejében, ami arra utal, hogy az emberi szervezet folyamatosan bevitelét jelzi ennek a mikotoxinnak. Az ochratoxin A élelmiszerekkel történő beviteléhez a gabonafélék (44%), a bor (10%) és a kávé (9%) adják a fő hozzájárulást. A FAO/WHO Élelmiszer-adalékanyagokkal foglalkozó Közös Szakértői Bizottsága (JECFA) által javasolt heti megengedett ochratoxin A bevitel 100 ng/kg/m. T. . Az ochratoxin A tartalma az EU országaiban az élelmiszer-alapanyagokban 0,005 mg/kg, az élelmiszerekben 0,003 mg/kg szinten van szabályozva. Nincsenek megbízható adatok az élelmiszerek ochratoxin A-val való szennyezettségéről az Orosz Föderációban.


A korábban a Szovjetunió Egészségügyi és Epidemiológiai Szolgálata igényeire kifejlesztett, az ochratoxin A élelmiszerekben történő meghatározására szolgáló módszernek, amely a kivonat tisztítására folyadék-folyadék eloszlást alkalmaz, számos hátránya van: a módszer viszonylag alacsony érzékenysége (kimutatási határ - 0,001-0,002 mg / kg), jelentős elemzési idő és nagy mennyiségű szerves oldószer felhasználása.

Napjainkig új, hatékonyabb módszereket dolgoztak ki az ochratoxin A élelmiszerekben történő meghatározására, amelyek a szilárd fázisú extrakción (SPE) alapulnak. Az SPE-t jó kivonattisztítás, magas visszanyerés és alacsony oldószerfogyasztás jellemzi. Az SPE-ben a normál fázisú adszorpciós kromatográfiát szilikagélen, a fordított fázisú eloszlású kromatográfiát oktadecilszilánnal kémiailag módosított szilikagélen, az immunaffinitás kromatográfiát, valamint az oszlopkromatográfiát egyéb szorbenseken (diatomit föld (celit), poliamid, lenyomattal nyert polimerek stb.) alkalmazzák.

Az ochratoxin A gyengén savas tulajdonságai (pKA = 4,4) (1. ábra) meghatározzák az extrakció szükségességét vagy nem disszociált formában szerves oldószerek savas víz-só oldataival, vagy só formájában - enyhén lúgos vizes oldatokkal, például nátrium-hidrogén-karbonát oldattal.

A fordított fázisú HPLC (RP HPLC) fluorimetriás kimutatással a legszélesebb körben használt módszer az ochratoxin A meghatározására élelmiszerekben.

A tanulmány célja az volt, hogy az SPE felhasználásán alapuló analitikai megközelítések optimalizálásával érzékeny módszert dolgozzanak ki az ochratoxin A kimutatására, azonosítására és mennyiségi meghatározására élelmiszerekben.

kísérleti rész

Berendezések és reagensek. A kromatográfiás rendszer egy Jasco 880-PU nagynyomású szivattyúból, egy Rheodyne-7125 injektorból 20 μl adagolóhurokkal, egy FL ​​Detector modell LC305 fluorimetriás detektorból (Linear Instruments) (exc = 250 nm), mperend chrome gyűjtőrendszerből és a lamisn = lamisnm-ből állt. Kromatográfiás oszlop (250 x 4,6 mm) állófázisú Kromasil C18-cal (MetaChem Technologies Inc.), 5 µm részecskemérettel.

Az extrakciót shaker s-3.08L (ELMI) rázógéppel végeztük, a mintákat CLS 31M centrifugával centrifugáltuk. A szilárd fázisú extrakciót Macherey-Nagel elosztóval, DIAPAK szilikagél kazettákkal (BioChemMac ST), OCHRAPREP immunaffinitás oszlopokkal (IAC) (R-BIOFARM RHONE LTD) végeztük. Az oldatok pH-ját MP 230 pH-mérővel (Mettler Toledo) mértük. A mintákat Laborota 4000 rotációs bepárlón (Heidolph) koncentráltuk. A standardok és a bepárolt kivonatok feloldásához UZV-12L (PKF SAPPHIRE) ultrahangos fürdőt használtunk. Az optimális gerjesztési és emissziós hullámok kiválasztásához Cary Eclipse (Varian) fluoreszcens spektrofotométert használtunk. Az ochratoxin A standard mintáját benzol-ecetsav (99:1) elegyben, C = 9,2 ng/µl koncentrációban használtuk standardként.


Szilárd fázisú extrakció:

Tisztítás kovaföldön végzett oszlopkromatográfiával (CC). Az ochratoxin A-t 25,0 g zúzott mintából 20 ml 2%-os ecetsav hozzáadása után 125 ml kloroformmal extraháltuk. Shakeren 30 percig keverjük. A papírszűrőn átengedett kloroformos kivonat 50 ml-ét nátrium-hidrogén-karbonáttal impregnált diatómaföld oszlopra visszük. Az oszlopot egymás után 70 ml hexánnal és 30 ml kloroformmal mostuk. Az ochratoxin A-t 150 ml benzol-ecetsav (86:12:2) eleggyel eluáltuk az oszlopról. Az eluátumot szárazra pároljuk, és ultrahangos fürdőben 3 ml mozgófázisban (acetonitril-vizes H3PO4 (pH=2,6) (62:38)) oldjuk.

Tisztítás QC-vel szilikagélen. Az ochratoxin A-t 20,0 g zúzott mintából extraháltuk 100 ml toluollal, miután egymás után hozzáadtunk 30 ml 2 M sósavoldatot és 50 ml 0,4 M magnézium-klorid oldatot. 60 percig keverjük, 3500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 5 percig. A felső toluolos réteget papírszűrőn átszűrjük, a szűrletből 50 ml-t veszünk. 10 ml toluol kondicionálása után a szűrlet 50 ml-ét szilikagéllel töltöttük a patronra, kétszer mostuk 10 ml n-hexánnal és 10 ml toluol-aceton (85:15) keverékével, majd 5 ml toluollal. Az ochratoxin A-t 40 ml toluol-aceton-ecetsav (89:10:1) eleggyel eluáltuk. Az eluátumot szárazra pároljuk, és ultrahangos fürdőben 1 ml mozgófázisban (acetonitril-vizes H3PO4 (pH=2,6) (62:38)) oldjuk.

Immunaffinitásos tisztítás CH. Az ochratoxin A extrakciója 50,0 g-ból. A zúzott mintát 200 ml acetonitril-víz (60:40) eleggyel végezzük. 30 percig keverjük. A papírszűrőn átengedett kivonat 4 ml-ét összekeverjük 44 ml foszfáttal, és immunaffinitási oszlopra (IAC) visszük fel, majd 20 ml foszfátpufferrel mossuk. A maradék foszfátpuffert IAC levegővel való fújásával távolítottuk el. Az ochratoxin A-t 3 ml metanol-ecetsav (98:2) eleggyel eluáltuk. Az eluátumot szárazra pároljuk, és ultrahangos fürdőben 1 ml mozgófázisban (acetonitril-vizes H3PO4 (pH=2,6) (62:38)) oldjuk.

HPLC körülmények. Az ochratoxin A-t RP HPLC-vel azonosítottuk és mennyiségileg meghatároztuk izokratikus elúciós módban, fluoreszcens detektálással (exc=250 nm, lamis=458 nm). Mozgófázisként acetonitril és vizes H3PO4 (рН=2,6) (62:38) keverékét használtuk. Az eluálási sebesség 1 ml/perc volt. A vizsgálati oldatból 20 μl-t bevittünk a HPLC rendszerbe.

Eredmények és megvitatása.

A kivonat nátrium-hidrogén-karbonáttal impregnált kovafölddel történő QC-tisztítása során alapmódszerként az AOAC 975.38 módszert alkalmaztuk, amely az ochratoxin A azonosítására és mennyiségi meghatározására TLC-t foglal magában. Az alapmódszer alkalmazásának eredményeként a 0,01 mg/kg ochratoxin A-val mesterségesen szennyezett mátrixból az ochratoxin A extrakció mértéke a mi körülményeink között nem haladta meg a 40%-ot. Az extrakciós érték növelése érdekében számos változtatást eszközöltünk az extrakciós és tisztítási körülmények között: ecetsavat adtunk az extrakciós keverékhez; az oszlop mosásához használt kloroform térfogatát 30 ml-re csökkentjük; acetont adtunk az eluáló keverék összetételéhez; az eluáló keverék térfogatát 150 ml-re növeljük. A módszeroptimalizálás eredményeként az ochratoxin A búzából 60%-ra emelkedett (1. táblázat).

Az extrakció mértékét szignifikánsan növeltük a szilárd fázisú extrakció módszerének alkalmazása módosítatlan szilikagéllel készült patronokon (az ICC 000. sz. módszerhez közeli séma). Az alapmódszer beállítása (az oszlopmosáshoz használt toluol-aceton elegy toluoltartalma 85%-ra növelve, az elúciós keverékhez acetont adtunk, az elúciós keverék térfogatát 40 ml-re növeltük) lehetővé tette az extrakció mértékének 80%-ra történő emelését.

Immunaffinitás CH alkalmazásakor az ochratoxin A maximális kivonási foka volt megfigyelhető az élelmiszer-mátrixból (akár 100%), míg a kimutatási határ (0,0005 mg/kg) magasabb volt, mint a CH szilikagélen történő tisztításakor (0,00005 mg/kg).

Az ochratoxin A HPLC segítségével történő kimutatásához, azonosításához és mennyiségi meghatározásához kiválasztottuk a mozgófázis (MP) optimális összetételét, valamint finomítottuk a gerjesztés és a fluoreszcencia emisszió hullámhosszait, amelyek a maximális jelet és szelektivitást biztosították az ochratoxin A kimutatásában (2. táblázat). Az optimalizált mozgófázisra beállított gerjesztés (333 nm helyett 250 nm) és fluoreszcencia emissziós hullámhosszok lehetővé tették a jel-zaj arány növelését a módszer detektálási határának megfelelő csökkentésével. A PF összetételének változása lehetővé tette az ochratoxin A csúcsainak és az élelmiszer mátrixának komponenseinek elválasztását, miközben csökkentette az ochratoxin A csúcsának retenciós idejét (2. ábra).

Az ochratoxin A rutin elemzésében a szilikagél patronok használatán alapuló módosított módszerünk alkalmazásának lehetőségét az élelmiszer-alapanyagok főbb fajtáinak ezzel a mikotoxinnal való szennyezettségének gyakoriságának és szintjének szelektív vizsgálata igazolta. Ehhez az Orosz Föderáció különböző régióiból származó, 2004-es termésből származó élelmiszer-gabonákat tanulmányozták (3. táblázat). A 46 vizsgált gabonamintából kilenc 0,00005-0,005 mg/kg tartományban tartalmazott ochratoxin A-t, ami nem haladta meg az EU-országokban elfogadott előírásokat.

Így a meglévő analitikai megközelítések optimalizálásával az élelmiszertermékekben található ochratoxin A kimutatására, azonosítására és mennyiségi meghatározására szolgáló módszer két változatát javasolták: a szilikagélen végzett minőségellenőrzést vagy az immunaffinitásos minőségellenőrzést a kivonatok tisztítására és az optimalizált HPLC-körülményeket. A szilikagélen végzett minőségellenőrzésen alapuló módszer alacsony kimutatási határral és alacsony fogyóeszközök költséggel rendelkezik. Az immunaffinitás minőségellenőrzéssel történő tisztítás nagy kinyerést és tisztaságot biztosít a kivonatban, és magasabb kimutatási határt is tartalmaz (0,0005 mg/kg a 0,00005 mg/kg helyett a szilikagél minőségellenőrzési lehetőségnél). Az élelmiszer-alapanyagok ochratoxin A-tartalmának szelektív vizsgálata eredményeként kapott adatok azt mutatják, hogy az élelmiszerek ochratoxin A-val való szennyezettségének további vizsgálatára van szükség annak érdekében, hogy felmérjék az élelmiszerek e mikotoxinnal való szennyeződésének kockázatát az Orosz Föderáció lakosságának egészségére nézve.

Állami Táplálkozástudományi Kutatóintézet RAMS

109240, Moszkva, Usztyinszkij proezd, 2/14

I. V. Aksenov, K. I. Eller, V. A. Tutelyan

Az analitikai módszerek optimalizálása az ochratoxin A élelmiszerekben történő elemzéséhez.

Az ochratoxin A egy mikotoxin, amelyet széles körben elterjedt Aspergillus és Penicillium fajok termelnek. A mikotoxin a gabonafélék, a kávé, a bor, a szárított gyümölcsök és a fűszerek gyakori szennyezője. Az ochratoxin A nefrotoxikusnak, immunszuppresszívnek, embriotoxikusnak, teratogénnek és karcinogénnek bizonyult számos emlősfajban. A Codex Alimentarius és az EC az ochratoxin A maximális megengedett szintjét 5 mg/kg-ban állapította meg a nyers gabonaszemekben és 3 mg/kg-ban a gabonafélékből készült, fogyasztásra kész termékek esetében. Az élelmiszerekben található ochratoxin A elemzésére két egyszerű és megbízható módszert fejlesztettek ki, amelyek immunaffinitáson vagy szilikagél oszloptisztításon és fluoreszcencia-detektáló HPLC-n alapulnak. A kimutatási határ 0,5 mg/kg, illetve 0,05 mg/kg volt. A módszereket sikeresen alkalmazták az ochratoxin A elemzésére Oroszország különböző régióiban betakarított 46 nyers gabonamintában. Kilenc mintát találtak 0,05 és 5 mg/kg közötti ochratoxin A-val szennyezettnek.

Az élelmiszerekben található ochratoxin A kimutatására, azonosítására és mennyiségi meghatározására szolgáló analitikai módszerek optimalizálása.

Az ochratoxin A egy mikotoxin, amelyet az Aspergillius és Penicillium nemzetségekhez tartozó, széles körben elterjedt gombák termelnek. Gabonatermékek, kávé, bor, szárított gyümölcsök és fűszerek gyakori szennyezője. Az ochratoxin A nefrotoxikus, immunszuppresszív, embriotoxikus, teratogén és karcinogén hatásait számos emlősfaj esetében bizonyították. A Codex Alimentarius és az EU által megállapított ochratoxin A maximális megengedett szintje a szemekben 5 µg/kg, a fogyasztásra kész gabonatermékekben 3 µg/kg. Két optimalizált módszert javasoltak az ochratoxin A élelmiszerekben történő kimutatására, azonosítására és mennyiségi meghatározására: a szilikagélen végzett minőségellenőrzés vagy az immunaffinitás minőségellenőrzés alkalmazása az extraktumok tisztítására, valamint a HPLC fluoreszcens kimutatással. A kimutatási határ 0,05 és 0,5 µg/kg volt. A kidolgozott módszerekkel Oroszország különböző régióiban gyűjtött 46 gabonamintában elemezték az ochratoxin A tartalmát. Kilenc minta 0,05-5 µg/kg ochratoxin A-val volt szennyezett.

Feliratok a rajzokhoz.

1. ábra Az ochratoxin A kémiai szerkezete.

2. ábra: 0,01 mg/kg ochratoxin A-val szennyezett búzaminta kromatogramja, különböző tisztítási módszerekkel:

A) CH kovaföldön B) CH szilikagélen C) immunaffinitás CH.

1. táblázat: Különféle kivonattisztítási módszerek összehasonlító jellemzői.

2. táblázat: A HPLC paraméterek összehasonlító jellemzői (1 ng ochratoxin A per injekció).

A PF összetétele

Fluorimetriás detektálás hullámhosszai, nm

késleltetési idő Ó, min

Jel-zaj arány

acetonitril - víz - ecetsav (99:99:2)

acetonitril - víz - ecetsav (102:94:4)

Optimalizált módszer

acetonitril - vizes H3PO4 (pH=2,6) (124:76)

3. táblázat: A 2004-es betakarításból származó élelmiszer-gabonák ochratoxin A szennyezettségének mintavizsgálata.

Irodalom

Útmutató az élelmiszerek ochratoxin A-tartalmának kimutatásához, azonosításához és meghatározásához. - M., 1985. , Kravchenko (Orvosi és biológiai vonatkozások) - M., 1985. AOAC, Determination of Ochratoxin A in Wine and Beer 2001.01 // J. AOAC Int. - 2001. - 20. évf. 84. - P. 1818. AOAC, Ochratoxin A kukoricában és árpában 991,44 // J. AOAC Int. - 1996. - 1. évf. 79. - P. 1102-1105. AOAC, Ochratoxin A zöld kávéban 975.38 // J. AOAC Int. - 1975. - 1. évf. 58. - P. 258. Jelentkezési megjegyzés az ochratoxin A gabonafélékben történő analíziséhez nátrium-hidrogén-karbonátos extraktum alkalmazásával Ochraprep-pel együtt. – Glasgow, 2001. Baggiani C., Giraudi G., Vanni A. // Bioszeparation. - 2002. - 10. évf. – 389. o. – 000/2002/EK rendelet // Az Európai Közösségek Hivatalos Lapja. - 2002. - L 75. - P. 18-20. IARC monográfiák az embereket érintő rákkeltő kockázatok értékeléséről. Vol. 56. – Lion, 1993. Jodlbauer J., Maier N. M., Lindner W. // Journal of Chromatography A. - 2002. - Vol. 945. – P. 45–63. Jornet D., Busto O., Guasch J // Journal of Chromatography A. - 2000. - Vol. 882.–P. 29–35. Krogh P. // Endemikus nephropathia, Proceedings of the second International Symposium on Endemic nephropathy, 1972. november 9-12. - Szófia, 1972. - P. 266-277. Kuhn I., Valenta H., Rohr K. // Journal of Chromatography B. - 1995. - Vol. 668. – P. 333–337. Majerus P., Weber R., Wolff J. // Bundesgesundheitsblatt. - 1994. - B. 37, N. 11. - S. 454 - 458. Monaci L., Palmisano F. / / Anal. bioanális. Chem. - 2004. - 20. évf. 378. - P. 96-103. Monaci L., Tantillo G., Palmisano F. // Anal. bioanális. Chem. - 2004. - 20. évf. 378. - P. 1777-1782. Az Ochratoxin A mennyiségi kimutatása. – Glasgow, 2003. A 3.2.7. feladatban részt vevő szakértők jelentése „Az ochratoxin A táplálékkal történő bevitelének értékelése az EU-tagállamok lakossága által”. – Róma, 2002. Egyes élelmiszerekben előforduló mikotoxinok biztonsági értékelése. // WHO élelmiszer-adalékanyagok sorozata, 47. sz.; FAO Food and Nutrition Paper 74. - Genf, 2001. Schwartz G. G. // Cancer Causes Control. - 2002. - 13. évf. - 91-100. Scott P. M. // Adv. Exp. Med. Biol. - 2002. - 20. évf. 504. - P. 117-134. Skaug MA, Helland I, Solvoll K, Saugstad O. D. // Food Addit. contam. - 2001. - 20. évf. 18. - P. 321-327. Visconti A., Pascale M., Centonze G. // Journal of Chromatography A. - 1999. - Vol. 864.–P. 89–101. Zimmerli B., Dick R. // Journal of Chromatography B. - 1995. - Vol. 666. – 85. – 99. o.

Egy fedőréteg kerül alkalmazásra, és a középső részben - két fedőréteg, köztük egy minimális lépéssel, amelyek jelzik a szalag bejövő és kimenő ágainak határait. Az átfedések közötti lépést a szalag szembejövő ágán egy aritmetikai, a leszálló ágon pedig geometriai progresszió alapján határozzuk meg. Ebben az esetben az aritmetikai sorozat első tagját kell beállítani, és figyelembe kell venni, hogy a szalag szembejövő ágának bélései közötti utolsó rés a geometriai progresszió első tagja, a progressziók különbsége és nevezője pedig a szalag egyes ágainak bélései közötti teljes hézagból kerül meghatározásra.

A dobpofás fékben a fajlagos terhelések kiegyenlítését úgy érik el, hogy egy több szakaszból álló fékpofát a bejövő és kimenő részeire sugárirányban mozgatható betéteket helyeznek el, amelyeket kiegyenlítő köt össze, azaz a hagyományos súlyok elvét alkalmazzák. Ezt a műszaki megoldást egy találmány szerzői jogi tanúsítványa védi.

A felületi hőmérsékletek stabilizálása a fent említett fékberendezések súrlódási párjaiban a termoelektromos hatásnak köszönhetően a szalag bejövő és kimenő ágainak béléseiben termoelektromos hűtő és egy termoelektromos generátor üzemmódban működő termoelektromos hatásnak köszönhetően, valamint a fékszalag bemenő és kimenő hőszakaszaiban a fékek bemeneti és súrlódó terhelésétől függően. súrlódó egységeikről. Ugyanakkor biztosított

a hőenergia újraelosztása a fékek súrlódó egységeinek felületei között, ami annak kvázi-stabilizálódásához vezet. A hőcsövek működése a fenti üzemmódokban elméletileg alátámasztott.

A szalagpapucs fék működési módjának racionális szabályozását figyelembe kell venni, feltéve, hogy a súrlódó betétek felületi rétegeinek hőterhelése nem haladja meg az anyagaik megengedett hőmérsékletét. A fékezési módok szabályozásának megvalósításához féksúrlódási párok kombinált hűtése (hőcsővel termoelektromos) használható.

Ennek a műszaki megoldásnak az alkalmazásával sikerült az U2-5-5 csörlős szalag-sarufék hatékonyságának növekedését elérni.

Így a fékberendezések súrlódó egységei dinamikus és termikus terhelésének szabályozási módjai láthatók.

IRODALOM

1. Pat. Nyilatkozat. 63418А (Ukrajna). Módszer a szalag-pofás fék fékszalagjának bejövő és kimenő ágaira ható meghatározott terhelések szabályozására / A.I. Volcsenko, V.V. Dyachuk, N.A. Volchenko és mások - B.I. - 2004. - 1. sz. - Ukránul. lang.

2. A.s. 1682675 A1 Szovjetunió. Dob-talpfék / A.I. Volcsenko, V.V. Moszkalev, P.A. Skorokhod és mások - B. I. - 1991. -

3. Pat. 2221944 C1 Oroszország. Hűtőrendszerek szervoműködésű fékrendszerhez és megvalósítási módja / A.I. Volcsenko, A.A. Petrik, N.A. Volchenko és mások - B.I. - 2004. - 2. sz.

Műszaki Mechanikai Tanszék

Beérkezett: 04.11.22

AZ OCHRATOXIN A MEGHATÁROZÁSA SZŐLŐBORBAN

E.N. RIKUNOVA, T.I. GUGUCHKINA

Észak-Kaukázusi Kertészeti és Szőlészeti Övezeti Kutatóintézet

A mikotoxinok között kiemelt helyet foglalnak el az okker toxinok. A Penicillium, Aspergillus nemzetséghez tartozó mikroszkopikus gombák egyes fajai termelik, különösen az A. ochraceus, a P. viridicatum. Ezek a penészgombák mindenütt jelen vannak, többnyire meleg és párás körülmények között, és hosszan tartó esőzések során szőlőrothadást okoznak. Az ochratoxinok általános mérgező hatásúak, hatnak a vesére, a májra, csökkentik a termelékenységet, embriotoxikus, mutagén és rákkeltő hatásúak.

A Nemzetközi Rákkutató Ügynökség az ochratoxint potenciális rákkeltő anyagként és a 2B veszélyességi osztályba sorolta. Ha az élelmiszer ochratoxinokkal szennyezett, egy személy balkáni endémiás nephropathiában betegszik meg.

A Patu-lin korábban borászati ​​termékekben is megtalálható volt, a közelmúltban pedig az ochratoxin A tartalmáról láttak napvilágot. Szennyezi a gabonát, zöldséget, gyümölcsöt és ezekből készült termékeket, takarmányt, malátát, sört, gyümölcsleveket és bort.

Kidolgoztunk egy módszert a szőlőborban lévő ochratoxin vékonyréteg-kromatográfiás (TLC) meghatározására.

A vékonyréteg-kromatográfia a folyadékkromatográfia egy olyan szorbensrétegben, amely az egyik oldalon lapos, és egy lapos szilárd hordozóra van lerakva. A TLC főbb jellemzői az eluens (oldószer) kapilláriserők hatására a szorbens réteg feletti mozgásából adódnak, ami leegyszerűsíti és megkönnyíti a kromatográfiás folyamatot. Az univerzális szorbens - szilikagél és a nyitott réteg használata megkönnyíti a minta felvitelét, több minta egyidejű elemzésének lehetőségét és az elúciós folyamat egyszerű nyomon követését.

A vékonyréteg-kromatográfia a mikotoxinok tisztítását és koncentrálását foglalja magában. Ehhez kétdimenziós vagy lépcsős kromatográfiát használnak.

fiu. Az elúció első szakasza a tisztítás, a zavaró anyagok elválasztása, a második szakasz a mikotoxinok elválasztása.

A borminta vékonyréteg-kromatográfiás elemzése magában foglalja a minta, a lemez, a kromatográfiás kamra és az eluensek, valamint a Diapak C16MT koncentrálópatron előkészítésének lépéseit; majd a tényleges kromatográfia, az eluens lepárlása a lemezről, azonosítás, mennyiségi meghatározás és dokumentáció.

A módszer előnye nemcsak az egyszerűség, a hozzáférhetőség, az adott előhívószerek alkalmazásának lehetősége, az anyag kívánthoz való tartozásának igazolása, a kivonatok alacsonyabb tisztítási követelményei, hanem a kis mennyiségű ochratoxin meghatározásának lehetősége is – a kimutatási határ 0,1 µg/cm3.

A mikotoxin ochratoxin A borban és boranyagokban történő meghatározásához 10 cm3 mintát engedünk át a Diapak C16MT töményítő patronon, a mintát 10-szer betöményítjük, végül 1 cm3 acetonitrillel tisztítjuk. Az így kapott 5 μl-es kivonatot és a standardot vékonyréteg-kromatográfiás lemezekre visszük fel, és a kromatográfiás elválasztást (elúciót) egy előkészített kromatográfiás kamrában, megfelelő eluensekkel végezzük. Az izopropanol és ammónia formájú oldószerrendszer bizonyult a legoptimálisabbnak a mikotoxin elválasztására. Meglehetősen illékony, és alacsony a visszatartási együtthatója.

Rf a szorbensen. A mikotoxin foltokat hosszú hullámhosszú (365 nm) ultraibolya fénnyel történő besugárzással alakítottuk ki. UV-sugárzásnak kitéve a mikotoxinfoltok kékes-zölden világítanak.

Az ochratoxin azonosítása és mennyiségi meghatározása pásztázó denzometriával történt Sorbfil denzitométeren, speciális programmal az elemzési eredmények feldolgozására és a kromatogram paraméterek kiszámítására.

A denzitométer használata kvantitatívvá teszi a vékonyréteg-kromatográfiás módszert, felbontása összehasonlítható a HPLC-vel, miközben megtartja a vékonyréteg-kromatográfiás minden előnyét.

A javasolt módszert bormintákon tesztelték bizonyos mennyiségű ochratoxin előzetes bejuttatásával. A módszer lehetővé teszi a borászati ​​termékek ochratoxin-tartalmának gyors és pontos szabályozását.

IRODALOM

1. Kretova L. Glunev L. I. Mikotoxinok. A termékek szennyeződése és analitikai ellenőrzése. - M.: Agrprogressz, 2000.

2. Az OIM Közgyűlés eljárása. - Párizs, 2000. - S. 57-59.

3. Útmutató a modern vékonyréteg-kromatográfiához / Szerk. O.G. Larionova // A vékonyréteg-kromatográfiás iskolai szeminárium anyagai alapján. - M., 1994.

Borászati ​​technológiai laboratórium

Beérkezett: 04.09.08

N.T. SIYUKHOVA

Maykop Állami Műszaki Egyetem

Jelenleg komoly figyelmet fordítanak a mezőgazdasági termények különböző természetű mérgező anyagokkal, köztük peszticidekkel való szennyeződésének kérdéseire. A kártevők és betegségek elleni vegyszerekkel leginkább kezelt növények közül kiemelkedik a szőlő. Az egyes tenyészidőszakokban ismételt védőkezelések miatt a szőlőültetvényeket régóta a környezetre veszélyes vegyi anyagok egyfajta felhalmozójának tekintik.

Ide tartoznak a szerves foszforvegyületek, amelyekre jellemző a megművelt területeken való felhalmozódás fokozott kockázata, és a gyakorlati alkalmazás szempontjából élen járnak. Ezek a gyógyszerek felhalmozódnak a növényi sejtekben. Ezekkel a legveszélyesebben és legintenzívebben a bogyók szennyeződnek, ami végső soron befolyásolja a szőlőből előállított termékek minőségét és környezetbiztonságát. Figyelembe véve a szerves foszforvegyületek és metabolitjaik magas toxicitását és stabilitását, a szőlőtermékek általuk való szennyezettség meghatározása tudományos és gyakorlati jelentőséggel bír.

Az AF "Fanagoria" (Temryuk kerület) szakosodott gazdaság termőhelyein (1999-2002) a vörös szőlőfajták toxikológiai ellenőrzését végezték. A betakarítás során mintákat vettek, a termékek klór- és foszfor-szerves rovarölő szer-maradék-tartalmának elemzését az SKZNIISiV akkreditált vizsgáló toxikológiai laboratóriumában végezték. A mintavételre szánt szőlőparcellák kiválasztásának elve azon alapult, hogy az azokból begyűjtött szőlőtermést az SKZNIISiV szőlőfeldolgozó laboratóriumának mikroborszaküzletében gyári feldolgozásra és száraz vörösborok készítésére használták fel.

A szőlőben található mérgező anyagok perzisztenciájának vizsgálatára irányuló kísérletek tervezése során két tényező lehetséges hatását vették figyelembe, amelyek együttesen határozzák meg a termesztett szőlőbe kerülő rovarirtó szerek potenciális veszélyének megnyilvánulását: a mérgező szermaradványok bejutását az ültetvények talajából és magából a növényből a jelenlegi szezonális kezelések eredményeként.


Az ochratoxinokat bizonyos típusú gombák termelik. AspergillusÉs Penicillium. A fő gyártók A.ochraceusÉs P. viridicatum. Ezek a gombák mindenhol megtalálhatók. Aspergillus emelt hőmérsékleten és páratartalom mellett ochratoxinokat termel, és Penicillium már 5°C-on. Az ochratoxinok erősen mérgező vegyületek, kifejezett teratogén hatással.

Az ochratoxinok A, B és C szerkezetileg rokon vegyületek csoportja, amelyek izokumarinok. L-fenilalanin peptid kötés. A gyökök természetétől függően különböző típusú ochratoxinok képződnek (2.3. táblázat).

Az ochratoxin A színtelen kristályos anyag, vízben gyengén oldódik, poláris szerves oldószerekben (metanol, kloroform), valamint nátrium-karbonát vizes oldatában mérsékelten oldódik. Vegytiszta formában instabil, fényre és levegőre nagyon érzékeny, de etanolos oldatban sokáig változatlan maradhat. UV fényben zöld fluoreszcenciával rendelkezik.

Az ochratoxin B egy kristályos anyag, az ochratoxin A analógja, amely nem tartalmaz klóratomot. Körülbelül 50-szer kevésbé mérgező, mint az ochratoxin A. UV fényben kék fluoreszcenciát mutat.

Az ochratoxin C egy amorf anyag, az ochratoxin A etil-észtere, amely toxicitásában közel áll hozzá, de nem találták természetes élelmiszer- és takarmányszennyezőként. Y-fényben halványzöld fluoreszcenciája van.

Az ochratoxinok a toxikus mikotoxinok közé tartoznak, nagy toxicitásúak a májra, a vesére, teratogén és immunszuppresszív tulajdonságokkal, valamint kifejezett hemolitikus hatással rendelkeznek. Az ochratoxinok közül az ochratoxin A a legmérgezőbb (LD 50 = 3,4 mg/kg, (naposcsibék, szájon át)). Mérgezőbb, mint az aflatoxinok. A csoport többi mikotoxinja egy nagyságrenddel kevésbé mérgező.

Az ochratoxinok biokémiai, molekuláris és sejtes hatásmechanizmusai nem teljesen ismertek. Ismeretes, hogy az ochratoxin A gátolja a fehérjeszintézist és a szénhidrát-anyagcserét, különösen a glikogenózist azáltal, hogy gátolja a fenilalanin, egy tRNS, egy specifikus enzim aktivitását, amely kulcsszerepet játszik a fehérjeszintézis kezdeti szakaszában.

Az ochratoxin A kukoricában, árpában, búzában, zabban és árpában található. Fontos és veszélyes, hogy az ochratoxin A az állattenyésztési termékekben (sonka, szalonna, kolbász) megtalálható a takarmánygabonák és az állati takarmányok magas szennyezettsége mellett. Az ochratoxin B ritka. Az ochratoxinok a kertészeti növények minden gyümölcsére is hatással vannak. Az alma különösen érintett: a termés akár 50%-a is szennyezett lehet mikotoxinokkal.

Meg kell jegyezni, hogy az ochratoxinok stabil vegyületek. Így például az ochratoxin A-val szennyezett búza hosszan tartó melegítése során csak 32%-kal csökkent a tartalma (250-300ºС hőmérsékleten). Így az élelmiszerekben való elterjedtség, az ochratoxinok toxicitása és perzisztenciája valós veszélyt jelent az emberi egészségre.

Elemzési módszerek

Az ochratoxin A az oxidált élelmiszerekben található. Könnyen oldódik számos szerves oldószerben, amelyet extrakcióhoz használnak. A leggyakrabban alkalmazott extrakció kloroformmal és vizes foszforsavoldattal, amelyet oszlopos tisztítás és vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel történő kvantitatív meghatározás követ.

Kidolgoztak egy HPLC módszert is. A HPLC analízis előtt a mintát az alábbiak szerint készítjük elő. A zúzott mintát 2 M sósav és 0,4 M magnézium-klorid oldat keverékével kezeljük. Homogenizálás után 60 percig toluollal extraháljuk. Az elegyet centrifugáljuk. A centrifugát szilikagél oszlopon engedjük át, és toluol és aceton elegyével mossuk (mozgó fázis). Az ochratoxin A-t toluol és ecetsav (9:1) elegyével eluáljuk, és 40 °C-on szárítjuk. A maradékot feloldjuk és szűrjük. Az analízist HPLC-vel végezzük.

Ezen túlmenően számos biológiai tesztet fejlesztettek ki garnélarákon és baktériumokon, de a kapott eredmények nem tették lehetővé ezen módszerek alkalmazását az ochratoxinok meghatározására.



Lehet, hogy érdekel