ÜLDMIKROBIOLOOGIA
I peatükk. Mikroskoop ja mikroskoopia tehnika
1. Valgus-optiline mikroskoopia
2. Tumevälja mikroskoopia
3. Faaskontrastmikroskoopia
4. Luminestsents- (fluorestsents) mikroskoopia
II peatükk. Üldised esitused kasvatamise, külvitehnika ja mikroorganismidega töötamiseks vajalike seadmete kohta
III peatükk. Mikroorganismide preparaatide valmistamise meetodid
IV peatükk. mikroobirakkude uurimine
1. Mikroorganismide rakkude vormid
2. Mikroorganismirakkude struktuur (tsütokeemilised uurimismeetodid)
3. Mikroorganismirakkude värvimine grammidega
4. Eoste värvumine bakterites
5. Kapsli värvimine
6. Lipude värvimine
7. Bakterite tuumaaine värvumine
8. Mikroorganismide rakusulgude värvimine
V peatükk. Mikroorganismide toitumine
1. Üksikute toitainete tähtsus
2. Kultuurisöötme valmistamine
3. Steriliseerimismeetodid
VI peatükk. Bakterite arvu arvestamine ja puhaskultuuri eraldamine
1. Mulla bakterite arvu arvestamine
2. Bakterite kvalitatiivse koostise määramine
3. Vees ja muudes vedelikes leiduvate mikroorganismide arvu arvestamine
4. Õhus leiduvate bakterite arvu arvestamine
5. Puhaste bakterikultuuride eraldamine
VII peatükk. Bakterite tüübi määramine
VIII peatükk. Lämmastikuvabaks muutmine mikroorganismide poolt orgaaniline aine
Käärimisprotsessid
1. Alkohoolne kääritamine
2. Piimhappe kääritamine
3. Võikäärimine
4. Pektiinainete kääritamine
5. Tselluloosi kääritamine
6. Kiudude oksüdatsioon
7. Rasvade oksüdatsioon
8. Süsivesinike oksüdatsioon
IX peatükk. Orgaaniliste ja mineraalsete lämmastikuühendite muundamine mikroorganismide poolt
1. Ammonifikatsioon
2. Nitrifikatsioon
3. Denitrifikatsioon (nitraatide hingamine)
4. Atmosfäärilämmastiku bioloogiline fikseerimine
X peatükk
1. Väävliühendite muundamine mikroorganismide toimel
2. Mikroorganismide osalemine raua muundamises
3. Fosforiühendite muundumine mikroorganismide poolt
PÕLLUMAJANDUSE MIKROBIOLOOGIA
XI peatükk. Pinnase üldine mikrobioloogiline analüüs
1. Uurimismeetodid
2. Mikroorganismide rühmad, söötmete koostis ja valmistamine
3. Keskmise mullaproovi võtmine ja proovi ettevalmistamine mikrobioloogiliseks analüüsiks
4. Pinnase suspensiooni valmistamine
5. Erinevate mikroorganismide rühmade arvestus
6. Mikroskoobi all otsese loendamisega mullas leiduvate mikroorganismide üldarvu määramine
XII peatükk. Mikroorganismide tsenooside uurimine
1. Klaasi saastumise meetod vastavalt N. G. Kholodnyle
2. Mikroobide tsenooside uurimine pinnases Perfilievi ja Gabe meetodil
3. Aristovskaja modifitseeritud Perfilievi kapillaarmeetod
4. Humiinainete lagundamisel osalevate autohtoonse rühma mikroorganismide tuvastamine vastavalt Winogradsky meetodile Tepperi modifitseerimisel
5. Huumusainete lagundamisel osalevate mikroorganismide tuvastamine Tepperi meetodi järgi
XIII peatükk. Mulla bioloogilise aktiivsuse määramine
1. Pinnase bioloogilise aktiivsuse määramine lõuendi lagunemise intensiivsuse järgi (Mishustini, Vostrovi ja Petrova meetod)
2. Mulla kogumikrobioloogilise aktiivsuse määramine ekskretsiooni teel süsinikdioksiid
3. Pinnase ammoniseeriva aktiivsuse määramine
4. Mikroorganismide ammoniseeriva aktiivsuse määramine
5. Mulla nitrifitseerimisaktiivsuse määramine
6. Pinnase denitrifikatsiooni aktiivsuse määramine
7. Mikroorganismide lämmastikku siduva aktiivsuse määramine
XIV peatükk. Bakterite uurimine taimede juurtevööndis ja juurtel
1. Bakterite arvestus risosfääris Krasilnikovi meetodil
2. Risosfääri ja juure mikrofloora arvestamine juurte järjestikuse pesemise meetodil vastavalt E. 3. Tepper
3. Mügarbakterite puhaskultuuride eraldamine, kvantitatiivne arvestus mullas, nende aktiivsuse ja virulentsuse määramine
XV peatükk. Bakteripreparaatide analüüs
XVI peatükk. Sööda mikrobioloogia
1. Teravilja epifüütne mikrofloora ja selle muutumine sööda säilitamisel
2. Siloanalüüs
3. Sööda pärmimine
XVII peatükk. Piima ja piimatoodete mikrofloora
1. Piima bakterioloogiline analüüs
2. Meetodid piimhappebakterite isoleerimiseks puhaskultuuri
3. Või mikroflooraga tutvumine
Kirjanduse indeks

Juhised

praktilise töö elluviimiseks

elukutse jaoks:

19.01.17 Küpseta. Kondiiter

Arendaja:

Veretennikova O.M. õpetaja

Valuiki, 2016

Selgitav märkus

Need juhised distsipliini praktilise töö rakendamiseks "mikrobioloogia, kanalisatsiooni ja hügieeni alused toiduainete tootmisel » töötati välja liidumaa baasil haridusstandard(edaspidi - GEF) elukutse järgi:

19.01.17 Kokk. Kondiiter

Praktiliste tööde läbiviimise juhend on mõeldud esmakursuslastelePraktiliste ja laboratoorsete tööde teostamine on suunatud järgneva lahendamiseleülesanded:

suurendada teadlikkust ja teadmiste omandamise tugevust;

arendada oskust analüüsida, võrrelda uuritavaid objekte, viia läbi uurimistööd, koostada tabeleid, diagramme, klastreid, teha järeldusi;

õpilastes areneda loogiline mõtlemine, kognitiivsed võimed, iseseisvus;

õppida omandatud teadmisi ja oskusi elus kasutama.

Materjali uurimisel, kinnitamisel kasutatakse järgmisi tüüpe iseseisev töö:

Töö õpiku tekstiga.

Esitlustöö.

Töötage uuritava objektiga.

Töö lauaga.

Töö klastri, skeemi koostamisel.

Töötamine ettevalmistatud mikropreparaatidega. Mikropreparaatide valmistamine.

Juhiste struktuur:

1. teema
2. töö eesmärk
3. varustus tööks
4. töö edenemine
5. töö sooritamiseks vajalike õpilaste teadmiste kontroll ja täiendamine
6. töötingimused

Iga praktiline ja laboritöö tuleks vastavalt soovitustele koostada praktiliste tööde märkmikusse. (1. lisa)

Kontroll tehtud töö tulemuste üle toimub kirjaliku aruande ja õpilase töö käigus teostatava monitooringu tulemuste alusel vastavalthindamiskriteeriumid praktilise töö läbiviimiseks.

Praktiliste tööde loetelu

Praktiline töö nr 1

Mikroskoobi seade ja sellega töötamise reeglid.

Praktiline töö nr 2 Pärmseene ja hallituse morfoloogia mikroskoopiline uurimine

Praktiline töö nr 3 Bakterite, pärmseente, seente rakkude ehituse skeemid.

Praktiline töö nr 4-5

Praktiline töö nr 6Desinfitseerimislahuste valmistamise ja säilitamise skeemid

Praktiline ülesanne, mille eesmärk on kontrollidaõpilaste oskus distsipliini teoreetilisi teadmisi praktikas rakendada

Praktiline töö №1 MIKROSKOOBI SEADME JA SELLEGA TÖÖREEGLID.

Töö eesmärk: Õppida valgusbioloogilise mikroskoobi seadet ja omandada sellega töötamise reegleid.

Varustus, materjalid: Mikroskoop; valmis mikropreparaadid

Mikroskoop (kreeka keelest.mikros- väike jaskopio- Ma vaatan) on optiline seade, mis koosneb kolmest põhiosast: mehaaniline, optiline ja valgustus.

Valgusbioloogilise mikroskoobi diagramm on näidatud joonisel fig. 1.

Mehaaniline või statiiv koosneb jalast, alusest, toruhoidikust, objektilavast, monokulaarsest kinnitusest (toru), pöörlevast seadmest, jämedast teravustamiskäepidemest (makromeetriline kruvi), peenteravustamise käepidemest (mikromeetriline kruvi).

Toru on mikroskoobi teleskoop. Toru ülemisse auku on vabalt sisestatud okulaar, toru alumises otsas on ümber oma telje pöörlev pöörlev seade (revolver), millesse keeratakse läätsed. Revolvrit pöörates saate mikroskoobiga töötades kiiresti objektiive vahetada, tuues kõik objektiivid toru alla. Objektiiv peab olema tsentreeritud, st. paigaldatud mikroskoobi optilisele teljele. Selleks pööratakse revolvrit ümber oma telje, kuni kostub klõps.

Objekti tabelit kasutatakse õpperavimi asetamiseks sellele. Ravim kinnitatakse lauale klambritega (klemmidega). Objekti lava keskel on auk valguskiirte läbilaskmiseks ja preparaadi valgustamiseks. Mõne mikroskoobi konstruktsiooni puhul saab lava liigutada kruvide abil, mis asuvad lava perifeeria ümber. See võimaldab uurida ravimit erinevatest vaateväljadest.

1 – okulaar

2 – monokulaarne pea

(toru)

3 - revolver

4 - objektiiv

5 - ainetabel

6 - kondensaator

7 - Kollektorläätse korpus

8 - pistikupesa lambiga

9 - liigend

10 – käepide kondensaatori kronsteini liigutamiseks

11 - peen teravustamise nupp (mikromeetri kruvi)

12 - jäme fookuse nupp (makromeetri kruvi)

13 - toruhoidik

14 - kruvi otsiku kinnitamiseks

Riis. 1Valgusbioloogilise mikroskoobi seadme skeem

Toru üles-alla liigutamiseks kasutatakse jämedaid ja peeneid teravustamisnuppe (makro- ja mikrokruvid), mis võimaldab seada selle preparaadist vajalikule kaugusele. Kruvide päripäeva keerates langeb toru, vastupäeva keerates tõstab seda. Makromeetrilist kruvi keerates seatakse objektiiv orienteeruvalt fookusesse, s.t. preparaadist sellisel kaugusel, kus see nähtavaks muutub. Makrokruvi pööre võimaldab toru 20 mm võrra liigutada. Täpse teravustamise jaoks kasutatakse mikromeetri kruvi. Selle täispööre liigutab toru 0,1 mm võrra. Mikrokruvi tuleb käsitseda väga ettevaatlikult: mikrokruvi on lubatud pöörata mitte rohkem kui 180 0 C ühel või teisel viisil.

Optiline osa on mikroskoobi kõige väärtuslikum osa. See koosneb läätsedest ja okulaarist.

Okulaar (alates lat.oculus- silm) koosneb kahest tasapinnalisest kumerast läätsest, mis on suletud ühisesse metallraami. Ülemine lääts on silmalääts (suurendav), alumine on koonduv. Objektiivide vaheline kaugus on pool nende fookuskauguste summast. Suure suurendusega okulaaridel on lühem fookus, seega on ka okulaari pikkus lühem. Objektiivide vahel on diafragma, mis piirab vaatevälja ja lükkab edasi valguse servakiire. Kodused mikroskoobid on varustatud kolme vahetatava okulaariga, mille suurendus on näidatud okulaari korpusel (x7; x10; x15).

Objektiivid on keeratud pöörleva seadme pesadesse ja koosnevad metallraamiga suletud läätsede süsteemist. Objektiivi eesmine (eesmine) objektiiv on väikseim ja ainuke, mis annab suurendust. Ülejäänud läätsed objektiivis parandavad ainult saadud kujutise ebatäiuslikkust (sfäärilise ja kromaatilise aberratsiooni nähtused) ja neid nimetatakse korrigeerivateks.

Pöörleva seadme pesadesse on kruvitud neli objektiivi, mille suurendus on märgitud objektiivi silindrile (x8; x20; x40; x90 või 100). Iga objektiivi iseloomustab selle fookuskaugus (klaasklaasi ja esiläätse vaheline kaugus): x8 objektiivi fookuskaugus on umbes 9 mm, x40 objektiivi fookuskaugus on 0,65 mm ja x90 objektiivi fookuskaugus on umbes 9 mm. fookuskaugus 0,15 mm.

valgustusosa Mikroskoop koosneb kahe läätsega kondensaatorist, iirisdiafragmast ja madalpinge hõõglambiga padrunist, mida toidetakse 120 ... 220 V pingevõrgust astmelise trafo kaudu.

Kondensaator on valmistise paremaks valgustamiseks. Ta kogub valguskiired kiireks ja suunab need läbi lava avause ettevalmistusse. Kondensaatori õla saab liigutada üles ja alla, kasutades kondensaatori õla liigutamiseks käepidet, mis muudab kiirte lähenemisnurka ja sellest tulenevalt ka objekti valgustusastet. Mida kõrgem on kondensaatori asend, seda paremini on preparaat valgustatud.

Iirise diafragma asub kondensaatori all ja reguleerib kondensaatorisse siseneva valguse voolu. See koosneb metallist poolkuukujulistest plaatidest. Diafragma ava saate laiendada või kitsendada spetsiaalse hoova abil. Päripäeva pöörates suureneb iirise diafragma ava ja sellest tulenevalt suureneb objekti valgustusaste.

Sukelläätsedega töötades peaks preparaadi valgustusaste olema maksimaalne, nii et iirise diafragma katik avatakse ja kondensaator tõstetakse kõrgeimasse asendisse.

Kuivate läätsedega töötamisel arvestatakse reeglina värvimata esemeid. Kontrastsuse saavutamiseks langetatakse kondensaator alla ja iirise diafragma ava vähendatakse.

Mikroskoobiga töötamise reeglid

Töölaual asetatakse mikroskoop toruhoidikuga enda poole 3 ... 5 cm kaugusele laua servast;

Lülitage mikroskoop sisse ja seadke õige valgustus

Katsepreparaat asetatakse objektilauale ja kinnitatakse klambritega;

Soovitud objektiiv asetatakse toru alla ja fookuskaugus määratakse makro- ja mikrokruvide abil. Niisiis kantakse immersioonläätsedega töötamisel preparaadile esmalt tilk immersiooniõli ja toruhoidik lastakse makrokruviga ettevaatlikult alla, kuni see puutub kokku klaasiga. Seejärel, vaadates ettevaatlikult okulaari, tõstetakse toruhoidik väga aeglaselt üles, pöörates seda vastupäeva, kuni pilt on näha. Objektiivi peenteravustamine toimub mikromeetri kruviga. Kuivate objektiividega töötamisel uuritakse näidist esmalt x8 objektiiviga. Makrokruviga toruhoidjat tõstes ja okulaari ettevaatlikult sisse vaadates seadke fookuskaugus (umbes 9 mm) ja saavutage mikromeetrikruvi abil pildi selgus. Edasi seatakse objektilauda või klaasslaidi liigutades põllu keskele preparaadi ala, kus uuritav objekt on kõige paremini nähtav. Seejärel, pöörates pöörlevat seadet ümber oma telje, asetatakse toru alla x20 või x40 objektiiv. Sellisel juhul ei tohiks x90 objektiiv toru alla kukkuda. Pöörlevas seadmes on läätsed paigutatud nii, et kui leitakse x8 objektiiviga pilt, siis suurema suurendusega läätsedega isendit uurides on vaja pildi selgust veidi korrigeerida kasutades makro- ja mikromeetri kruvid;

Mikroskoopia ajal on vaja hoida mõlemad silmad lahti ja kasutada neid vaheldumisi;

Pärast töö lõpetamist eemaldage preparaat objektilaualt, langetage kondensaator, asetage objektiiv x8 toru alla, eemaldage immersioonõli objektiivi x90 esiläätse küljest pehme lapi või alkoholis niisutatud marli abil, asetage marli salvrätik. objektiivi all langetage toruhoidik.

Mis on bioloogilise mikroskoobi seade?

Millistest osadest ja mehhanismidest koosneb mikroskoobi mehaaniline osa?

Mis on mikroskoobi optiline süsteem?

Mida sisaldab mikroskoobi valgustussüsteem?

Kuidas peaks valgustussüsteem olema sukelläätsega töötamisel seadistatud?

Loetlege mikroskoobiga töötamise põhireeglid.

Ülesande täitmise tingimused
1. Ülesande koht (aeg).
Bioloogia tund

Praktiline töö nr 2 Pärm- ja hallitusseente morfoloogia mikroskoopiline uurimine.

Töö eesmärk : Tutvuge toiduainete tootmisel leiduvate seente ja pärmseente morfoloogiliste tunnustega. Õppida "purustatud tilga" preparaatides seente ja pärmseente mikroskoopilise uurimise tehnikat.

Varustus, materjalid: Mikroskoop; lahkamisnõelad, klaasklaasid ja katteklaasid; filterpaber; piirituslamp; seeneperekondade kultuuridMucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; puhas pärmikultuurSaccharomycescerevisiae.

1. TEOREETILISED LÜHISÄTTED

1. 1. Mikroskoopiliste seente morfoloogia ja kultuurilised tunnused

Seente vegetatiivset keha nimetatakseseeneniidistik . Mütseel koosneb paljudest omavahel põimunud filamentidest, mida nimetatakse tuubuliteks.hüüfid . Hüüfide läbimõõt on vahemikus 5 kuni 50 mikronit. Sõltuvalt seeneniidistiku ehitusest jagunevad seened kõrgemateks ja madalamateks. Kõrgematel seentel eraldavad hüüfid vaheseintega (vaheseinad), mille keskel on suur poor. Nad kasvavad ja samal ajal toimub tuumade jagunemine, kuid raku jagunemine ei toimu. Seega on seene vegetatiivne keha üks suur mitmetuumaline rakk. Kõik mikroskoopilised seened võivad seeneniidistiku tükiga vegetatiivselt paljuneda.

Mittesugulise paljunemise ajal toodavad fükomütseedidsporangiofoorid ja Ascomyceteskonidiofoorid .

Mikroskoopiliste seente kultuurilised märgid

Mikroskoopiliste seente kolooniad on kordades suuremad kui üherakuliste organismide (bakterid, seened) kolooniad ja kasvavad sageli üle kogu pinna. kasvukeskkond Petri tassides. Seenekolooniate konsistents on erinev. Sagedamini moodustuvad vilditaolised ja nahkjad kolooniad, harvem murenevad. Kolooniate pind võib olla kohev, nagu vati, sametine, jahune, ämblikuvõrgutaoline, niitjas, nahkjas või sile. Tihedal ja vedelal söötmel kasvades kasvab osa hüüfidest toitainekeskkonda, moodustubsubstraat seeneniidistik ja teine ​​osa hüüfidestõhku mütseel koheva katte kujul, nähtav palja silmaga. Mütseel võib olla ka värvitu (valge, hallikas) või värviline (must, pruun, roheline, kollane jne). Ainult vilja seeneniidistik on pigmenteerunud.

Mikroskoopiliste seente omadused erinevad klassid

Erinevate klasside seente morfoloogilised tunnused on toodud joonisel fig. 5.

PerekondMucor . Nad võivad paljuneda aseksuaalselt ja suguliselt, moodustades sporangiofoore (joonis 5). Väljaspool on sporangium kaetud kaltsiumoksalaadi kristallide õhukeste naeludega. Küpsuse saavutamisel eosed rebenevad, eoslehekesed eralduvad ja õhuvoolude toimel kannavad. Sporangiofoorile jääb pärast sporangiumi eostest vabanemist kolonn ja selle alumisse ossa - krae. Mukorseente seeneniidistiku värvus on algul valge, seejärel hallikas-oliiv, välimus on viltjane.

A

b

V

G

Riis. 5Erinevate klasside seente morfoloogilised tunnused:

A - Mucor; b - Penicillium; V - Aspergillus; G - Alternaria

Mucor seened kasvavad märgade teraviljade, linnaste, juurviljade pinnal, toiduainetel, niiskete ruumide seintel hallika koheva katte kujul.Mucornigrilasedon suhkrupeedi klambrimädaniku tekitaja. Paljusid limaskesta seeni kasutatakse tööstuses erinevate orgaaniliste hapete ja alkoholi (liigi seente) tootmiseksMucorjavanicus, Mucorracemosus), ensüümpreparaadid, karotenoidid, steroidid.

Perekonna esindajadAspergillus Ja Penicillium kuuluvad klassi Ascomycetes, mis ühendab endas kõrgeimad mikroskoopilised täiuslikud seened. Eoste abil mittesugulise paljunemise korral moodustavad need seened konidiofoore (joonis 5). Aspergillus ja penicillium on seened. See tähendab, et sugulisel paljunemisel moodustuvad spetsiaalsetele viljakehadele askid (kotid), milles on 8 askospoori.

PerekonnalePenicillium moodustab umbes poole kõigist hallitusseened. Need on laialt levinud pinnases, halvasti ventileeritavate ruumide õhus ning põhjustavad erinevate toodete ja materjalide riknemist. Sellel seenel on hargnev vaheseintega mütseel (hüüfide läbimõõt - 2 ... 3 mikronit) ja vaheseintega konidiofoorid (meenutavad pintsleid), mis hargnevad lõpus protsesside - sterigmade - kujul. Eoste ahelatest koosnevad koniidid lahkuvad neist. Olenevalt koniidide tüübist võivad need olla erinevat värvi (valged, rohelised jne). Paljusid penitsille kasutatakse tööstuses erinevate väärtuslike toodete saamiseks. Selle perekonna isoleeritud tüvedest on 25% antibiootilise toimega ja sellistel liikidel naguPenicilliumnotatum, Penicilliumkrüsogeenkasutatakse penitsilliini tootjatena. Teatud tüüpi penitsilliumi kasutatakse ensüümide ja lipiidide tootjatena. Väärisvorme kasutatakse pehmete Roqueforti ja Camemberti juustude valmistamiselPenicilliumroquefortiJaPenicilliumcamamberti.

Seened perekonnastAspergillus seal on üle 200 liigi. Nendel seentel on hästi arenenud hargnev seeneniidistik koos arvukate vaheseintega. Konidiofoorid ei ole vaheseintega, nende ülemised otsad on pirnikujulised või sfääriliselt laienenud väikese pea kujul. Peas on nööpnõelakujulised koniidiahelatega sterigmad, mis meenutavad kastekannu väljavalavaid veejugasid. Sellest ka nimi "lekkiv hallitus" (aspergeerladina keeles - kastma, pihustama). Aspergillus koniidid omandavad küpsedes erinevat värvi, mis koos muude tunnustega määrab nende liigilise kuuluvuse.

Nagu ka penitsillid, perekonna esindajadAspergilluson looduses laialt levinud ja mängivad olulist rolli orgaaniliste ainete mineraliseerumisel. Nad põhjustavad paljudes toiduainetes hallitust. Need seened on paljude väärtuslike ainete tootjad ja neid kasutatakse laialdaselt tööstuses. Niisiis,AspergillusNiger, mida kasutatakse tööstuses sidrunhappe tootmiseks;Aspergillusterreus- itakoonhapeAspergillusflavusJaAspergillusterricolamoodustavad kõige aktiivsema proteolüütiliste ensüümide kompleksi;AspergillusoryzaeJaAspergillusawamorion parimad amülolüütiliste ensüümide tootjad.

Seened perekonnastAlternaria kuuluvad ebatäiuslike seente klassi - deuteromycetes. Need on kõrgemad seened. Neil on vaheseintega seeneniidistik ja lühikesed vaheseinata konidiofoorid, millel on pirnikujulised või sidrunikujulised mitmerakulised koniidid (joon. 5). Seen on musta mädaniku - juurviljade ja puuviljade haiguse, samuti toidu riknemise põhjustaja.

Pärmi morfoloogia ja nende omadused

Pärm on kõrgemad üherakulised seened. Enamik pärme kuulub kahte seente klassi - ascomycetes ja deuteromycetes.

Hapniku suhtes jagunevad pärmid fakultatiivseteks anaeroobideks (aeroobsetes tingimustes hingavad ja koguvad aktiivselt biomassi ning anaeroobsetes tingimustes põhjustavad alkohoolset käärimist) ja aeroobideks.

Morfoloogiliselt on pärmid mitmekesised. Need erinevad üksteisest rakkude suuruse ja kuju poolest. Pärmirakkude suurused varieeruvad olenevalt liigist järgmistes piirides; Läbimõõt 2,5–10 µm ja pikkus 4–20 µm. Pärmivormide morfoloogiline mitmekesisus on näidatud joonisel fig. 6.

A

b

V

G

d

e

ja

h

Riis. 6Pärmirakkude vormid: a - ovaalne munajas;

b - silindriline; c - apikaalne; sidrunikujuline; g - pühitud;

e - kolmnurkne; e - poolkuu; g - koonusekujuline; h, i - mütseloid

Pärmirakkude kuju ja suurus sõltuvad tüübist, vanusest, toitainekeskkonnast ja kultiveerimismeetodist.

Olenevalt liigist võib pärm paljuneda vegetatiivselt pungumise (nii paljuneb ovaalse kujuga pärm), binaarse lõhustumise (tüüpiline silindrilise või pulgakujulise pärmi puhul) või tärkavate jagunemise teel. Lisaks vegetatiivsele paljunemisele võivad pärm-askomütseedid paljuneda ka seksuaalselt koos askospooride moodustumisega.

Ascomycetes klassi kuuluvast pärmist, suur tähtsus neil on pärm-sahharomütseedid perekonnastSaccharomyces , mis kasutatakse laialdaselt toiduainetööstuses. Nende pärmide peamine biokeemiline omadus on see, et nad kääritavad suhkruid, moodustades etüülalkoholi ja süsinikdioksiidi. Tööstuses kasutatavat pärmi nimetataksekultuurpärm. Niisiis, pagaritööstuses ja alkoholi tootmisel pärmi perekonnastSaccharomycescerevisiae. Pärmi liigidSaccharomycesalaealineleidis rakendust rukkileiva ja kalja valmistamisel. Rohujuurepärmi kasutatakse pruulimiselSaccharomycescarlsbergensis. Sahharomütseedpärmseened on ovaalse kujuga, paljunevad vegetatiivselt pungudes ja ebasoodsates tingimustes sugulisel teel askospooridega.

Mõned sporogeensed pärmseened onmetsik pärm . Need pärmid, nagu ka kultuurpärmid, on võimelised alkohoolseks kääritamiseks, kuid lisaks alkoholile moodustavad nad palju kõrvalsaadusi (nt aldehüüdid, kõrgemad alkoholid, estrid jne) ning seetõttu halvendavad toote organoleptilised omadused. Need pärmseened on kahjurid erinevate jookide (õlu, vein, karastusjoogid) tootmisel, aga ka riknejad paljudes toiduainetes.

Pärm - deuteromütseedid võivad paljuneda ainult vegetatiivselt. Mõned neist pärmidest (näiteks pärmid perekonnastCandida) kasutatakse tööstuses söödavalgu, orgaaniliste hapete, vitamiinide ja muude mikroobse sünteesi saaduste saamiseks. Pärmi liigidTorulopsiskeefiron osa sümbiootilisest juuretisest – keefirist. Teised ebatäiuslikud (asporogeensed) pärmseened on looduslikud pärmseened ja põhjustavad paljudes toiduainetes riknemist. Tootmise pärmikahjurite hulka kuuluvad pärmi perekonnadPichia, Hansenula, Candida, Rhodotorula,Torula, Torulopsis, Mükoderma, Trichosporonjne Asporogeensete pärmseente hulgas onvale pärm , mis moodustavad pseudomütseeli ja kasvavad vedelatel substraatidel kilede kujul.

1. TÖÖKORD

Klaasklaasile kantakse toru või pipetiga suur tilk vett;

Katseklaasist või Petri tassist võetakse väike kogus seeneniidistikut, järgides aseptika reegleid.

Mütseel asetatakse ettevaatlikult slaidile kantud tilga sisse ja kahe nõela abil sirgendatakse see vees;

Preparaat kaetakse katteklaasiga ja surutakse kergelt alla. Liigne vesi eemaldatakse filterpaberiga.

Preparaati “purustatud tilk” mikroskoobitakse esmalt x8 objektiiviga ja seejärel x40 pimendatud vaateväljas (kondensaator langetatakse, iirise katik kaetakse).

Seenepreparaatide valimisel ja mikroskoopial võetakse arvesse järgmisi soovitusi:

a) seen Mucor . Valitakse mustjashall kohev õhumütseel. Mikroskoopimisel pööratakse tähelepanu eostega täidetud eoslehekestega hüüfidele ja sammastele, mis tekivad eoslehe vabanemisel;

b) perekonna seened Aspergillus . Valitakse veidi kohev värviliste koniididega seeneniidistik, süvendades nõelaga veidi toitainekeskkonda. Pöörake tähelepanu unsepteerimata konidiofooridele;

c) perekonna seened Penicillium . Selekteerimisel püütakse võtta noor seeneniidistik (värvilise ja valge seeneniidistiku piiril), süvendades nõelaga söötmesse. Pöörake tähelepanu harjadega vaheseintele.

d) perekonna seened Alternaria . Nad võtavad seeneniidistiku mustadesse kohtadesse, süvenedes sellesse nõeltega. Pöörake tähelepanu vaheseintele, halvasti arenenud konidiofooridele ja suurtele koniididele, mis näevad välja nagu ümarad või teravatipulised mitmerakulised moodustised, mis meenutavad "sidrun-granaatõuna".

Pärmi uurimisel klaasklaasile kantakse pärmi suspensioon, kaetakse katteklaasiga, liigne vesi eemaldatakse filterpaberiga. Proov mikroskoobitakse x8 ja x40 objektiiviga.

Uurimistulemuste registreerimine ja analüüs

Kirjeldage lühidalt teoreetiline materjal. Uuritud seene- ja pärmikultuuridest tehakse mikroskoopilised pildid, võttes arvesse iga mikroorganismi morfoloogilisi iseärasusi. Iga joonise all on alla kirjutatud ladinakeelne nimetus ja preparaadi suurenemine. Kirjeldage uuritavate seente kultuurilisi omadusi.

Vastus Kontrollküsimused

Kuidas valmistatakse mikroskoopiliste seente ja pärmi preparaate?

Kirjeldage mikroskoopiliste seente morfoloogilisi ja kultuurilisi omadusi.

Milliseid seeni kasutatakse tööstuses orgaaniliste hapete, ensüümide, antibiootikumide ja muude väärtuslike toodete saamiseks?

Kirjelda morfoloogilised omadused pärm.

Mis on kultuuripärm? Millistes toiduainetööstuse valdkondades neid kasutatakse?

Ülesande täitmise tingimused

Bioloogia tund

2. Maksimaalne ülesande täitmise aeg: 90 min

Praktiline töö nr 3: Bakterite, pärmseente, seente rakkude ehituse skeemid.

Töö eesmärk: Uurige raku struktuuribakterid, pärm, seened

Materjali tugi: praktiliste tööde juhendkaardid, õpik, pliiatsid

1. harjutus

Tutvuge õpiku materjaliga. Vastavalt uuringu tulemustele:

Joonistage vihikusse bakteri-, pärmi- ja seenraku struktuur ning märkige ära eristavad tunnused

Vastake järgmistele küsimustele kirjalikult:

1. Millise kujuga on bakterirakud?

2. Millised on bakterite suurused?

3. Kuidas toimub bakterite paljunemine, paljunemise kiirus?

4. Kuidas ja millistel tingimustel toimub eoste teke bakterites?

5. Kas bakterid on võimelised iseseisvalt liikuma?

Tehke oma töö tulemuste põhjal järeldus.

Ülesande täitmise tingimused

1. Ülesande koht (aeg).

Bioloogia tund

2. Maksimaalne ülesande täitmise aeg: 90 min

Praktiline töö teemal nr 4 Töö regulatiivse ja tehnilise dokumentatsiooniga: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Töö eesmärk: Tutvuda ühiskondlike toitlustusasutuste korrastamise ja korrashoiu sanitaarnõuetega

Materjali tugi: praktiliste tööde juhised, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. harjutus

Tutvuge õpiku materjaliga. SanPiN 2.3.6. 1079-01. Vastavalt uuringu tulemustele:

1. Lisa laused: Koht, kuhu toitlustusasutus rajatakse, peab olema

Tootmisrajatised hõlmavad järgmist:

Hoone ____________________ ossa on projekteeritud laod.

Joogivesi peab olema sama kvaliteediga

Õhu puhastamiseks kasutatakse ventilatsiooni

Tüüp.

Kõik tootmispinnad peavad olema valgustatud

Valgus.

Igakuist majapidamist nimetatakse

2. Defineerige järgmised terminid.

Desinfitseerimine on...

Deratiseerimine on -

Desinsektsioon on...

3. Kasutades õppematerjali, täida tabel:

köögiviljapood

lihuniku kauplus

Kalapood

Kuum pood

külmpood

Maiustuste pood

Jaotusmaterjal

Ülesande täitmise tingimused

1. Ülesande koht (aeg).

Bioloogia tund

2. Maksimaalne ülesande täitmise aeg: 90 min

Praktiline töö nr 5 Töö regulatiivse ja tehnilise dokumentatsiooniga: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Töö eesmärk : Tutvuda sanitaarnõuetega seadmetele, inventarile, riistadele, konteineritele. Toidukaupade transport ja ladustamine.

materiaalne toetus : praktiliste tööde õpetlikud kaardid, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. harjutus

Uurib õpiku materjali, SanPiN 2.3.6. 1079-01. Vastavalt uuringu tulemustele:

1. Vastake järgmistele küsimustele kirjalikult:

Aga köögiriistad?

Miks roogasid sildistada?

Aga lauanõud?

Millised materjalid on lubatud seadmete ja inventari tootmiseks

toitlustusasutustele?

Mis on põhimõtteline erinevus lauanõude ja söögiriistade pesemise vahel?

2. Loetlege reeglid ja nõuded:

2.1. Pooltoodete transportimise sanitaarreeglid:

2.2. Toidu säilitamise sanitaarreeglid:

3. Lisage fraase:

Enne turustamist peab valmistatud toitude kvaliteeti

Serveerimisel peavad esmaroad ja kuumad joogid olema soojas

_______ °С, pearoogade ja lisandite temperatuur __________ °С, portsjonitoidud

temperatuur ______ °С, külmad toidud ja joogid ______ °С.

Meditsiini-, ennetus- ja lasteasutustes on talve-kevadisel perioodil köögiviljaroogade puudumise tõttu _______________________ vaja mõnda rooga sellega rikastada.

________________ vastutab valmistoote kvaliteedi ja toitlustusettevõtetes selle väljastamise reeglite järgimise eest.

Ülesande täitmise tingimused

1. Ülesande koht (aeg).

Bioloogia tund

2. Maksimaalne ülesande täitmise aeg: 90 min

Praktiline töö nr 6 Desinfitseerimislahuste valmistamise ja nende säilitamise skeemid

Sihtmärk: uurida desinfektsioonivahendite nimetusi, desinfitseerimislahuste valmistamise meetodeid sõltuvalt otstarbest. Valmistage etteantud kontsentratsiooniga lahus.

materiaalne toetus : praktiliste tööde õpetlikud kaardid, SanPiN 2.3.6. 1079-01, õpik

1. harjutus

Uurib õppekirjanduse materjali, SanPiN 2.3.6. 1079-01. Vastavalt uuringu tulemustele:

1. Vasta küsimustele:

Millised lahendused on desinfektsioonivahendid?

Mis on desinfektsioonivahendite eesmärk?

Milliseid ravimeid kasutatakse desinfektsioonivahenditena?

Kuidas ära tunda, et nõusid töödeldi desinfektsioonivahenditega?

2. Tutvuda desinfitseerimisvahendite valmistamise skeemidega ja otstarbega. Täida tabel.

3. Valmistage 1 liiter klooramiini B 0,2% lahust.

4. Tee järeldus töö tulemuste põhjal.

Ülesande täitmise tingimused

1. Ülesande koht (aeg).

Bioloogia tund

2. Maksimaalne ülesande täitmise aeg: 90 min

Hindamiskriteeriumid praktilise töö läbiviimiseks:
Hindeks "5" antakse, kui :
1. Õige määrab iseseisvalt nende tööde eesmärgi; teostab tööd täies mahus, järgides vajalikku tööde järjekorda.
2. Iseseisvalt, ratsionaalselt valib ja valmistab ette tööde teostamiseks vajalikud seadmed; teostab neid töid tingimustes, mis annavad kõige täpsemad tulemused.
3. Pädevalt, loogiliselt kirjeldab töö edenemist, sõnastab õigesti järeldused; teostab täpselt ja täpselt kõik kirjed, tabelid, joonised, joonised, graafikud, arvutused.
4. Näitab üles organiseerimis- ja tööoskusi: hoiab töökohal puhast, korda laual, kasutab säästlikult materjale; järgib tööde tegemisel ohutusnõudeid.
Hindeks "4" antakse, kui :
1. Teostab laboratoorseid töid tulemuste hindamisel «5-ga» täielikult nõuetele, kuid lubab kaks kuni kolm puudust või ühe pisivea ja ühe puuduse arvutustes, mõõtmistes.
2. Tööde koostamisel lubab ebatäpsusi tegevussuuna kirjelduses; teeb üldistamisel mittetäielikke järeldusi.
Hindeks "3" antakse, kui :
1.1 Teeb tööd õigesti vähemalt 50% ulatuses, kuid lõpetatud osa maht on selline, mis võimaldab saada õigeid tulemusi ja teha järeldusi peamise, fundamentaalse kohta tähtsaid ülesandeid tööd.
2. Valib seadmed, materjali, alustab tööd õpetaja abiga; või mõõtmiste, arvutuste, vaatluste käigus eksib, sõnastab ebatäpselt järeldusi, üldistusi.
3. Teostab töid ebaratsionaalsetes tingimustes, mis viib suurte vigadega tulemusteni; või aruandes on lubatud kokku mitte rohkem kui kaks viga (numbrite salvestamisel, mõõtmistulemustel, arvutustel, graafikute, tabelite, diagrammide jms koostamisel), mis ei ole antud töö jaoks põhimõttelise tähtsusega, kuid mõjutasid töö tulemust. hukkamine.
4. Teeb jäme vea töö käigus: selgituses, kavandis, ohutusreeglite järgimisel, mille õpilane parandab õpetaja nõudmisel.
Hindeks "2" antakse, kui :
1. Ei määra iseseisvalt töö eesmärki, ei oska õpetaja abita sobivat tehnikat ette valmistada; sooritab töö puudulikult ning valminud osa maht ei võimalda teha õigeid järeldusi.
2. Teeb töö käigus kaks või enam jämedat viga, mida ei ole võimalik õpetaja nõudmisel parandada; või teeb mõõtmisi, arvutusi, vaatlusi valesti.

RAKENDUS.

Lisa 1

ÕPILASTE MEELDETULETUS

Töö tegemisel peab õpilane:

Tutvuge eelnevalt üksikasjalikult teoreetilise materjaliga ja omage head arusaamist mikrobioloogilistest mustritest ja protsessidest, mida praktikas uurida.

Katse tegemisel järgige kõiki ettevaatusabinõusid, toimingute järjekorda, tehes vajalikke tähelepanekuid.

Kirjutage katse tulemused vihikusse vastavalt töös pakutud skeemile:

Pärast töö tegemist korda töökoht ja andke see üle laborandile või õpetajale.

Föderaalne Haridusagentuur

Riiklik õppeasutus

"Irkutski Riiklik Ülikool"

VÄIKE MIKROBIOLOOGIA TÖÖTUBA

Õppevahend

Irkutsk 2009

UDC 579(076.5)

Avaldatud Irkutski Riikliku Ülikooli toimetuse ja kirjastusnõukogu otsusega

Zhilkini mikrobioloogia töötuba: õpik-meetod. toetus õpilastele. kõrgemale õpik asutused erialadel "Mikrobioloogia", "Bioloogia" ja "Füsioloogia".

6. Mikroobne mass ei tohi saastada käsi, lauda ega ümbritsevaid esemeid. Mahavalgunud mikroobide suspensioon neutraliseeritakse desinfektsioonivahenditega.

7. Peale töö lõppu antakse kultuurid üle õpetajale, külvatud katseklaasid ja tassid asetatakse termostaadi.

8. Bakterioloogilised aasad, nõelad, pintsetid ja muud metallesemed pärast kokkupuudet mikroorganismidega põletatakse alkohollambi leegis ja asetatakse spetsiaalsesse statiivi.

9. Kasutatud objektiklaasid ja katteklaasid, pipetid, spaatlid jms asetatakse 3–5% karboolhappe või muude desinfitseerivate lahuste lahusesse.

10. Katseklaasides, Petri tassides jne kulutatud kultuurid neutraliseeritakse päeva jooksul desinfitseerivate lahustega, seejärel keedetakse nõud ja pestakse.

11. Rangelt tuleb järgida isiklikku hügieeni – pärast töö lõpetamist peske käed põhjalikult seebi ja veega.

12. Elektriseadmete ja kemikaalidega töötamisel tuleb järgida ettevaatusabinõusid.

Moskva linna haridusosakond

Tehnoloogiakõrgkool nr 28

Zhukova L.A.

METOODILISED JUHISED

To laboritööd №№1-4

MTÜ üliõpilastele

Moskva

2012

"Mikrobioloogia, kanalisatsiooni ja hügieeni alused"

METOODILISED JUHISED

laboritöödele №№1-4

MTÜ üliõpilastele

34.17 Vorstitootmisprotsesside operaator.

_______________________________________________________________

Juhend on mõeldud kolledži üliõpilastele. Saab kasutada iseseisev õppimineõppesessioonidele ja klassivälisele iseseisvale tööle.

Koostanud: Zhukova L.A. - eridistsipliinide õpetaja

Retsensent: Sukhanova N.V. - eridistsipliinide õpetaja

Toimetaja: Malkova L.A. - direktori asetäitja kasvatus- ja metoodilise töö alal

Käsikiri vaadati läbi ja arutati Tehnoloogiadistsipliinide Keskkomitee koosolekul, protokoll nr __ dateeritud __ _______ 2012.a.

SELGITAV MÄRKUS

Juhend töötati välja vastavalt Moskva linna Tehnoloogiakolledži Riikliku Autonoomse Keskhariduse Õppeasutuse nr 28 poolt vastu võetud mikrobioloogia kursuse kehtivale programmile erialal 260301 "Liha ja lihatoodete tehnoloogia" õppivatele üliõpilastele.

Loodusteaduste praegusel arengutasemel on vaja sügavaid teadmisi paljude biotehnoloogiatööstuse aluseks olevate mikrobioloogiliste protsesside kohta, mis on kaitse tagatis. keskkond antropogeensest mõjust.

Lisaks mikrobioloogia teoreetiliste teadmiste omandamisele vajavad tulevased spetsialistid labori- ja praktilisi tunde, mis on sisuliselt väikesed uurimisprojektid.

Laboratoorsete tööde teostamine tagab õpilaste teoreetiliste teadmiste kinnistumise, mikrobioloogilise tõrje oskuste kujunemise ning iseseisvate järelduste ja üldistuste tegemise oskuse.

Need laboritööde läbiviimise juhised näitavad:

kombineerima samateemalisi või sama semantilise sisuga laboratoorseid töid nii, et neid oleks mugav õigeaegselt korraldada vastavalt mikrobioloogiliste analüüside spetsiifikale;

jaotada klassid nii, et viimase tunni töökoormus võimaldaks analüüsitulemuste üle arutleda, tehtud töö kohta testi läbi viia;

koondada kõige olulisem õppematerjal, mis võimaldab õpilastel omandada praktilisi tööoskusi mikrobioloogiline labor;

annab analüüsi läbiviimise metoodika, näidates ära meetodi olemuse, rakendamise tehnika, tulemuste töötlemise reeglid;

kasutage neid mikrobioloogilise analüüsi meetodeid, mida pakub GOST.

Töö teema ja eesmärk.

Laboritööde materiaalne toetus.

Soovitused laboritööde tegemiseks, ülesanne, töö selgitus, analüüsimeetodid, aruande koostamise vormid, laboriküsimuste kontrollküsimused ja lisakirjandus.

Tulenevalt osade meetodite keerukusest ja mikroorganismide kasvatamise kestusest valmistab osa laborimaterjalist eelnevalt õpetaja ette, kuid selle valmistamise meetod on ette antud.

Laboratoorsetes tundides omandatud oskused on vajalikud tootmise mikrobioloogilise kontrolli läbiviimiseks, mille eesmärk on õigeaegselt tuvastada tootmise ja seadmete sanitaarseisundi rikkumised, avastada mikroobse saastumise kohad ja viisid, rakendada vajalikke meetmeid nende ohtlike koldete likvideerimiseks. ja saavutada kõrge väljund.kvaliteet.

MIKROBIOLOOGIALABORORI TÖÖREEGLID

Mikrobioloogilises laboris töötamine eeldab erireeglite ranget järgimist, mille määravad kaks põhisätet.

Esiteks kasutatakse mikrobioloogilises praktikas peamiselt mikroorganismide puhaskultuure, st sama liigi mikroorganismide populatsioone, sageli ühe raku järglasi.

Kuna õhus, meid ümbritsevate esemete pinnal, riietel, kätel, juustel on alati suures koguses erinevat mikrofloorat, tuleb uuringute steriilsuse tagamiseks ja kultuuride saastumise vältimiseks teha tööd vastavalt nõuetele. aseptika reeglitega.

Teiseks, identifitseerimata mikroorganismidega tehtud uuringutes, kui neid avastatakse keskkonnaobjektidest ja tehnogeensetest vooludest, saab isoleerida patogeensed ja tinglikult patogeensed mikroorganismid.

Lisaks võivad nii saprofüütiliste kui ka patogeensete mikroorganismide rakud olla teatud isikute jaoks allergeenid. Seega tuleb usaldusväärsete uurimistulemuste saamiseks, isikliku ja teiste turvalisuse tagamiseks järgida teatud reegleid.

Mikroorganismide uuesti külvamisel saavutatakse steriilsus tänu sellele, et kogu töö on tehtud leegi lähedal põletid. Tahkest keskkonnast mikroorganismide teisaldamiseks kasutatavad bakterioloogilised aasad süüdatakse põleti leegis ning klaasnõud ja toitekeskkond steriliseeritakse vastavalt kuivatuskappides ja autoklaavides.

Töölaua pinda desinfitseeritakse nii enne kui ka pärast tööd, pühkides klooramiini 3% lahusega, lüsooliga või 70% isopropüül- või etüülalkoholi lahusega. Nende alkoholide lahuseid saab kasutada ka käte desinfitseerimiseks.

Ruumide ettevalmistamine hõlmab märgpuhastust ja põhjalikku ventilatsiooni, millele järgneb kiiritamine bakteritsiidlampide ultraviolettvalgusega. Sõltuvalt õhusaaste astmest on selle steriliseerimiseks vajalik kiiritamine 30 minutist mitme tunnini. Ultraviolettkiired on silmadele ohtlikud, seetõttu ei saa bakteritsiidse lambi põlemisel ruumis viibida.

Mikrobioloogialaboris töötades peavad õpilased järgima järgmisi reegleid:

1. Iga õpilane peab töötama alalises kohas.
2. Töökoht peaks olema vaba võõrkehadest (sh portfellid ja kotid). Põletiga töötades ei tohiks laual olla ka vihikuid, mida läheb hiljem vaja mikroskoopia ja visandite tegemiseks.
3. Kõik tööd tehakse puhtas hommikumantlis. Pikad juuksed tuleb kinni siduda, et need ei satuks soojenduspadja leeki.
4. Mikroorganismide kultiveerimiseks kasutatavatele anumatele (katseklaasid, kolvid, Petri tassid, madratsid) tuleb kanda kultuuri üld- ja spetsiifiline nimetus, nakatamise kuupäev, õpilase nimi ja rühma number.
5. Kõik eluskultuuridega töötamisel kasutatavad esemed tuleb desinfitseerida kas põleti leegis põletamise või desinfitseerimislahusesse kastmisega (objekt ja katteklaasid, pipetid, spaatlid).
6. Kõik inokuleeritud katseklaasid, tassid või kolvid asetatakse termostaati või antakse üle laborandile.
7. Jäätmed paigutatakse teatud mahutitesse nende edasiseks desinfitseerimiseks.
8. Suitsetamine ja söömine on laboris rangelt keelatud.
9. Tunni lõpus peab iga õpilane töökoha korda tegema.

Saadud andmed tuleks registreerida laboritööde päevikusse. Kirjed peaksid sisaldama: töö numbrit ja pealkirja, selle alguse ja lõpu kuupäeva, uurimisobjektide nimetusi, katsete läbiviimise tingimusi, analüüsimeetodeid, samuti saadud tulemusi ja nende põhjal tehtud järeldusi. Kultuuride morfoloogiat uurides tehakse nende visandid mikroskoobi teatud suurendustega. (Värvilised pliiatsid, vähemalt punased ja sinised, peaksid klassis olemas olema.) Numbrilised andmed võetakse kokku tabelite, graafikute või diagrammidena.

LAB nr 1

Mikrobioloogilise labori korraldus ja varustus. Optilise mikroskoobi seade ja sellega töötamise reeglid. Mikroobide mikroskoopia tehnika valdamine.

Tunni eesmärk.

Tutvustada õpilasi mikrobioloogialabori töökorralduse ja sisseseadega. Optilise mikroskoobi seadme uurimiseks. Tutvuge peamiste bakterite vormidega.

Materiaalne tugi.

Hariduslik mikrobioloogialabor varustatud termostaatide, sterilisaatorite, külmikute, veevanni, destilleerija, bakteritsiidsete lampidega, töölauad koos kõigi vajalike tarvikutega, mikroskoobid.

See labor sisaldab märkimisväärses koguses õppematerjal Seetõttu on soovitav tutvustada õpilasi näidismeetodil labori korralduse ja sisseseadega.

Mikroskoobiseadme uurimisel kasutage plakatit, millel on kõik selle üksikasjad.

Ülesanded.

1. Lugege töökirjeldust:

1. Haridusliku mikrobioloogilise labori seadmed.
2. Varustus ja tootmise korraldus

1. Mikrobioloogialabori tööreeglid.
2. Optilise mikroskoobi seade ja selle hooldus.

MBR-1 mikroskoobiga töötamise reeglid.

1. Bakterite põhivormid.

1. Viige läbi põhivormidega valmispreparaatide mikroskoopia

bakterid.

Seletus tööle

1.1 Õppemikrobioloogilise labori varustus.

Õppemikrobioloogilise labori ruumid peaksid koosnema õppe-, tehnilistest ruumidest ja õpetajate ruumist.

Koolitusruumis peaks olema järgmine inventar: laborilauad, lauad mikroskoopia jaoks, laud õpetajale, termostaadid, taburetid, tiitrimislahustega riiul, kaalud, tahvel, nõudelaud, kraanikauss.

Treeninguteks võib kasutada tavalist laborilauda.

Mikroskoopialaud tuleb asetada akna ette; selle kõrgus peaks olema umbes 80 cm, laius - umbes 40 cm. Suurema stabiilsuse tagamiseks on mikroskoopia laud paigutatud sulgudele.

Termostaadid. Mikroobe tuleb kasvatada sellistes tingimustes, et ümbritseva õhu temperatuur oleks ehk kõige vähem kõikuv. Selleks kasutatakse termostaate, mis on kapid, milles hoitakse püsivat temperatuuri.

Olemas on õhu ja vee termostaadid.

Õhutermostaate soojendatakse sooja õhuga, tavaliselt soojendatakse elektri-šokk.

Topeltseinte vahel asuvates veetermostaatides on elektrivoolu, gaasi või muu soojusallikaga soojendatav vesi. Nendes termostaatides on temperatuurikõikumised väiksemad kui õhuga termostaatides.

Laboris peaks olema vähemalt kolm termostaati: ühe temperatuur on 30°C, teise 37°C ja kolmanda 43°C. Mikroobe, mis kasvavad hästi 20°C juures, võib kasvatada toatemperatuuril.

Konstantset temperatuuri termostaatides hoiavad spetsiaalsed seadmed - termostaadid. Täpse temperatuuriregulaatoriga termostaadis ei tohiks temperatuuri kõikumine ületada 2 ° C.

Autoklaav või sterilisaator.Autoklaav on topeltseinte ja massiivse kaanega metallsilinder, mis suletakse kruviklambritega.

Silindrile asetatakse metallkest. Autoklaav on varustatud auru väljalasketoru, manomeetri, kaitseklapi ja veemõõturi klaasiga. See steriliseerib toitaineid, erinevaid vedelikke ja riistu.

Enne steriliseerimist valatakse autoklaavi läbi veemõõteklaasi lehtri destilleeritud või keedetud vett (toorvee kasutamisel tekib kiiresti katlakivi) kuni autoklaavi korpusel näidatud jooneni. Pärast seda laaditakse autoklaavi steriliseeritava materjaliga (viimane tuleb pealtpoolt paberiga katta), kaas keeratakse tihedalt kinni, avatakse aurutoru ventiil ja algab kuumutamine.

Küte toimub elektri, auru (sel juhul vett autoklaavi ei valata) või mitme gaasipõletiga. Kui autoklaav kuumeneb, hakkab esmalt väljuma õhk ja seejärel aur, mis siseneb autoklaavi silindri ülemises osas olevate aukude kaudu. Kui aur hakkab pideva joana välja tulema, lastakse see veel 2-3 minutiks välja, et õhk autoklaavist välja suruda, ja seejärel suletakse klapp. Selle tulemusena auru väljumine peatub ja järk-järgult hakkab rõhk autoklaavis tõusma (manomeetri nõela tõstmine).

Pärast vajaliku rõhu määramist vähendatakse autoklaavi kuumutamise astet nii, et manomeetri nõel jääb teatud aja jooksul samal tasemel. Steriliseerimise algust peetakse hetkest, mil nool saavutab õige rõhu.

Manomeetri näidud vastavad teatud aurutemperatuurile.

Manomeetri näit in ati Auru temperatuur ˚C

0,5 112,0

1,0 121,4

1,5 128,8

2,0 135,1

Steriliseerimise lõppedes kuumutamine peatatakse ja manomeetri nõel lastakse langeda nulli. Alles pärast seda avatakse auru väljalasketoru kraan, lastakse välja aur ja lastakse õhku, seejärel keeratakse kaas lahti, tõstetakse üles ja pärast autoklaavil selles asendis jahtumist eemaldatakse steriliseeritud materjal.

Nõud ja inventar.

Petri tassid serveerida põllukultuuride külvamiseks. Kasutage 10 cm läbimõõduga tasse (kõrgus 1,5 cm). Klaas peaks olema õhuke, läbipaistev, ilma õhumullideta.

Pipetid. Bakterioloogiliseks tööks kasutatakse pipette mahuga 1-5 ja 10 ml. Kõige sagedamini kasutatavad pipetid on 1 ml, umbes 28 cm pikad (ilma pikendamiseta).

Katseklaasid. Vee valamiseks 10 ml-sse kasutatakse katseklaase mõõtmetega 18 x 2,0 cm; Kasutatakse ka 18 x 1,5 cm katseklaase.Söötme jaoks kasutatakse 15 x 1,8 cm katseklaase.

Nõelad ja aasad. Uuritava materjali võtmiseks ja inokuleerimiseks kasutatakse nõelu ja silmuseid.

Laboriklaasinõude pesemiseksvalamu laud.

Mikroskoobiga töötades kasutageteemaline ja terviklik klaasist . Klaasid peaksid olema värvitud, sileda pinnaga, ilma õhumullideta. Spetsiaalsete õpingute jaokskaevudega klaasist liumäed.

1.2 Varustus ja tootmistööde korraldus

Mikrobioloogiline (bakterioloogiline) labor.

Toidu tooraine ja sellest saadud toodete bakterioloogiline uuring viiakse läbi spetsiaalses laboris, millel on luba töötada III-IV patogeensusrühma mikroorganismidega. Mikrobioloogiline (bakterioloogiline) labor (või lihatöötlemisettevõtte tootmislabori osana asuv bakterioloogiaosakond) on ette nähtud tooraine, valmistoodete, abimaterjalide, tehnoloogiliste seadmete sanitaar- ja hügieenilise seisukorra, inventari sanitaar- ja bakterioloogiliseks kontrolliks. , konteinerid, riided ja personal käed.

Laboratooriumi ruumid.Labori üldine asukoht ja selle infrastruktuur peavad vastama GOST R 51446-99 (ISO 7218-96) nõuetele. Laboris on järgmised eraldi ruumid või isoleeritud tööruumid:

proovide vastuvõtmiseks, säilitamiseks, ettevalmistamiseks ja töötlemiseks;

esmaseks külvamiseks, korduskülviks, lahjenduste valmistamiseks ja muudeks töödeks aseptilistes tingimustes;

toitekeskkonna ettevalmistamiseks, steriliseerimiseks, villimiseks ja säilitamiseks, laboriklaaside ja -seadmete ettevalmistamiseks;

seadmete, kasutatud toitainete ja mikroflooraga saastunud materjalide desinfitseerimiseks ja puhastamiseks.

Termostaadid, külmikud, sügavkülmikud võivad asuda eraldi ruumides.

Ruumid peavad asuma selliselt, et oleks tagatud nende kaitse välistegurite mõju eest (kõrgenenud temperatuur, niiskus, tolm, müra, vibratsioon), korraldada puhaste ja saastunud materjalide vool.

Liha võib saastuda patogeense mikroflooraga, mis kujutab endast tõsist ohtu inimese tervisele ning laboriruumid tuleb isoleerida teistest osakondadest. Kui eraldi ruumi ei ole võimalik korraldada, on proovide esmaseks inokuleerimiseks lubatud ühisesse ruumi paigaldada laud. Aseptiliste töötingimuste tagamiseks on soovitav varustada klaasitud kast eelkastiga.

Laboriruumid peaksid olema valgusküllased (lauapinna valgustus 500 luksi piires) ja avarad - iga analüütiku jaoks on soovitatav tööpind ca 20 m2 Seinad, lagi ja põrand peaksid olema siledad, kergesti puhastatavad, pesu- ja desinfektsioonivahenditele vastupidavad. Puhastamise ja desinfitseerimise hõlbustamiseks kaetakse laboriseadmete ja mööbli pind sileda mitteläbilaskva materjaliga, näiteks plastikuga, töökoht aga peeglilauaga.

Toiduainete, eriti vorstide ja suitsuliha bakterioloogiliseks analüüsiks on vaja 1-2 kasti eelkastidega. Boksid on soojustatud, tolmukaitsega klaasitud ruumid; maksimaalne lubatud osakeste arv, mis on suuremad kui 0,5 mikronit 1 m kohta, ei tohiks ületada 4000.

Laboriruume korrapäraselt puhastatakse ja desinfitseeritakse, mille kvaliteeti kontrollitakse perioodiliselt mikrobioloogilise meetodiga.

Igas toas peaks olema külma ja sooja veevarustus, pudel desinfitseeriva lahusega käte pesemiseks.

1.3 Mikrobioloogias töötamise reeglid

laborid

Otsene kokkupuude mikroorganismidega ja vajadus järgida steriilseid tingimusi kõigi operatsioonide ajal nõuavad teadmisi ja järgmiste reeglite ranget järgimist:

töö hommikumantlites;

hoida töökohal puhtust ja korda;

ärge puudutage sõrmedega katseklaasides ja kultiveerimisnõudes mikroobide ladestusi ja kondensatsioonivett;

mitte pesta mikroobide ladestusi slaididelt ja katteklaasidelt ning muudelt esemetelt salvrätikute, filterpaberiga, desinfitseerida neid alkoholi või karboolhappe lahusesse asetamisega;

töö käigus ja pärast külvi hävitada bakterioloogilistel nõeltel ja aasadel mikroobide ladestumise jäänused, kaltsineerides need piirituslambi või gaasipõleti leegis;

neutraliseerida kasutatud saastunud materjale ja kasutatud mikroobikultuure autoklaavis steriliseerimise teel (seda tööd teevad laboritöötajad);

ära hoia piirituslampe näo lähedal, süüta piirituslampi ainult tikuga;

puhastama ja töötlema töökoha töö lõpus desinfitseerimislahusega laborandi järelevalve all; paigutada vajalikud mikroorganismide kultuurid edasine töö, külmikus või seifis, mis on suletud ja pitseeritud; panna termostaadi mikroflooraga nakatatud katseklaasid ja Petri tassid;

pärast tööd peske hoolikalt käsi, ärge sööge laboris.

1.4 Optilise mikroskoobi seade ja selle hooldus.

Mikroskoop on kompleksne optiline instrument, mis suurendab objekti 1000-1500 korda. Kaasaegne mikroskoop koosneb kahest põhiosast – mehaanilisest ja optilisest.

Mehaaniline osa koosneb statiivist, mis eristab jalga, alust, toruhoidjat ja statiivi aluse külge kinnitatud objektilauda. Toruhoidjat tõstetakse ja langetatakse makro- ja mikromeetriliste kruvide abil, mis on ette nähtud objekti jämedaks ja peeneks teravustamiseks.

Mikroskoobi optiline osa koosneb valgustus- ja vaatlusseadmetest.

Valgustusaparaat asub objektilaua all ja koosneb peeglist, kondensaatorist ja iirisdiafragmast.

Peegel peegeldab valguskiiri ja suunab need kondensaatori poole.

Kondensaator on läätsede süsteem ja selle eesmärk on suurendada kõnealuse objekti valgustuse heledust.

Vaatlusaparaat sisaldab läätsi ja okulaare.

Objektiivid kruvitakse revolvri pesadesse ja koosnevad metallraamiga suletud läätsede süsteemist. Objektiivi esi- või eesmine lääts on väikseim ja ainuke, mis annab suurendust. Ülejäänud objektiivis olevad läätsed on korrigeerivad.

Bioloogilistel mikroskoopidel MBR-1 ja MBI-1 on tavaliselt kolm või neli objektiivi digitaalsete tähistustega x8, x20, x40, x90, mis näitavad nende objektide tegelikku suurendust.

Okulaar sisestatakse toru ülemisse otsa. Okulaar on kahe tasapinnalise kumera läätse süsteem, mis on kumerad objektiivi poole. Silma poole jäävat läätse nimetatakse oftalmiliseks läätseks ja preparaadi poole jäävat läätse koonduvaks läätseks. Kodumaiste mikroskoopide okulaarid on tähistatud numbritega, mis näitavad nende enda suurendust: x5, x7, x10, x15.

Mikroskoobi suurendus on võrdne okulaari suurenduse korrutisega objektiivi suurendusega.

Mikroskoobi hooldusjuhised:

Mikroskoop on kaitstud tolmu, niiskuse ja päikesevalguse eest. Pärast sellega töötamist asetatakse see ümbrisesse või kaetakse tihedast kangast korgiga.

Objektiivid ja okulaarid pühitakse seemisnaha või flanelliga.

Ärge jätke mikroskoobi toru lahti, st ilma okulaarita, kuna see põhjustab tolmu kogunemist torusse ja objektiivide saastumist.

Mikroskoop koosneb kahest põhiosast. Mikroskoobi alus on statiiv. Selle külge on kinnitatud toru, millesse on suletud optiline osa ja objektilaud. Statiiv koosneb alusest (või hobuserauakujulisest jalast) ja toruhoidikust. Toruhoidja on liigendiga ühendatud alusele, mis võimaldab mikroskoobi ülaosa kasutamise hõlbustamiseks kallutada. Objektiivid ja okulaarid asetatakse torusse. Läätsed kruvitakse toru põhja, mida nimetatakse revolveriks. Okulaarid sobivad vabalt toru ülaossa. Suurendust saab muuta erinevate objektiivide abil, mis keeratakse revolvri pöörlevasse trumlisse.

Toruhoidjat tõstetakse ja langetatakse makro- ja mikromeetriliste kruvide abil, mis on ette nähtud objekti jämedaks ja peeneks teravustamiseks. Selleks, et preparaat oleks selgelt nähtav, tuleb toru liigutada oma optilise telje suunas, kasutades jämedaid või mikromeetrilisi liikumismehhanisme. Karm liikumine tuleks läbi viia üsna lihtsalt, kuid ilma toru spontaanse langetamiseta. Täpsemaks seadistamiseks kasutatakse mikromeetri kruvi. Mikromeetri kruvil on keeruline struktuur, on üks mikroskoobi kõige kergemini kahjustatavaid osi. Ärge keerake kruvi ühes või teises suunas rohkem kui pool pööret (pärast mikroskoobi jämedat paigaldamist). Objekti tabelit kasutatakse uuritava ravimi paigutamiseks.

Optiline osa koosneb peeglist, diafragmaga kondensaatorist, objektiividest ja okulaaridest. Mikroskoobi peegel on liigutatav. Kunstliku valguse korral on parem kasutada nõgusat peeglit, hajutatud valguses - tasast. Peegel peegeldab valguskiiri ja suunab need kondensaatori poole. Kondensaatorit kasutatakse preparaadi tugevama valgustuse saavutamiseks. Diafragmat kasutatakse preparaadi valgustuse reguleerimiseks. Diafragma asub kondensaatori alumise pinna ja peegli vahel.

Objektiivid on mikroskoobi kõige olulisem osa, mis määravad selle optilise võimsuse. Objektiivid kruvitakse revolvri pesadesse ja koosnevad metallraamiga suletud läätsede süsteemist. Objektiivi esi- või eesmine lääts on väikseim ja ainuke, mis annab suurendust. Objektiivi ülejäänud läätsed on korrigeerivad. Okulaarid suurendavad läätse antud pilti, kuid ei paljasta uuritava ravimi üksikasju.

Objektiivid, mida tuleb töötamise ajal seedriõli sisse kasta, nimetatakse immersiooniks ehk sukeldatavateks. Kuiv lääts on lääts, mille preparaadi ja läätse vahel on õhk. Iga mikroskoop on varustatud kuiv- ja keelekümblusobjektiividega. Natiivse suurendusega 8 ja 40 objektiivid on kuivad, sisemise suurendusega 90 objektiiv on keelekümblus.

MBR-1 mikroskoobiga töötamise reeglid

1. Mikroskoopi hoitakse kapis, et kaitsta seda tolmu, niiskuse ja valguse eest. Mikroskoopi kantakse parema käega, hoides statiivi käepidemest, vasakpoolse toega altpoolt.
2. Enne mikroskoobiga töötamist pühkige okulaari, objektiivi ja peeglit lapiga.
3. Asetage mikroskoop statiiviga enda poole nii, et objekti staadium oleks teist eemal. Istumismikroskoopi tuleks nihutada vasakule õlale lähemale. Mikroskoobist paremal on album, pliiatsid, värvilised pliiatsid ja kustutuskumm.
4. Asetage väikese suurendusega objektiiv tööasendisse. Selleks keerake revolvrit, kuni soovitud objektiiv on keskmises asendis (üle lavaava). Kui objektiiv on keskmises asendis, vallandub revolvris spetsiaalne seade - riiv, samal ajal kostab kerge klõps ja revolver fikseeritakse. Pidage meeles, et mis tahes objekti uurimine algab väikese tõusuga.
5. Tõstke objektiiv makromeetrilise kruvi abil lava kohale umbes 1 cm. Avage diafragma, tõstke kondensaator lava tasemele.
6. Vaadates vasaku silmaga läbi okulaari, suuna valguse peegli abil nii, et kogu vaateväli oleks eredalt ja ühtlaselt valgustatud.
7. Asetage ettevalmistatud näidis katteklaasiga lavale nii, et objekt oleks lava ava keskel. Langetage objektiiv makromeetrilise kruvi abil preparaadi kohale 0,2 cm võrra.
8. Vaadake okulaari, pöörake samal ajal hammaslatti aeglaselt enda poole ja tõstke toru õrnalt kuni (0,5 cm), kuni vaatevälja ilmub objekti kujutis; Selge ülevaate saamiseks keerake mikromeetri kruvi ettevaatlikult mitte rohkem kui ½ või ¾ täispöörde võrra.
9. Pöördudes objekti suure suurendusega arvestamise poole, on vaja preparaati tsentreerida, s.o. asetage huvipakkuva objekti osa vaatevälja päris keskele. Selleks liigutage preparaati vanemate ettevalmistuste abil või kätega, kuni objekt võtab soovitud asendi. Kui objekt ei ole tsentreeritud, siis suure suurenduse korral jääb see vaateväljast välja.
10. Lülitudes väiksemalt suurenduselt suuremale, keerake revolvrit, et asetada suurema suurendusega objektiiv vastu toru alumist ava. Vaadake okulaari ja saavutage mikromeetri kruvi ettevaatlikult keerates selge pilt.
11. Preparaadi visandamisel vaadake vasaku silmaga okulaari ja parema silmaga albumisse.
12. Pärast revolvriga mikroskoobiga töötamist asendage suure suurendusega objektiiv väikese läätsega, eemaldage preparaat laualt ja asetage see tagasi oma kohale.
13. Korista oma laud; ravimid ja juhised õpetaja laual.

1.5 Bakterite põhivormid.

Kuju järgi jagunevad bakterid tavaliselt kerakujulisteks (kokid), pulgakujulisteks (klostriidid, batsillid) ja keerdunud (vibrio, spirilla, spiroheedid).

Kokkoidvormid jagunevad kokkide asukoha järgi mikrokokkideks - üksikult paiknevad rakud; diplokokid - kahega ühendatud kookid; tetracocci - kookid, mis on ühendatud neljaga; streptokokid - pika või lühikese ahela kujul paiknevad kokid; sarksiinid - pakendite kujul paigutatud kokid; stafülokokid - juhuslik kokkide kogunemine, sageli viinamarjade kujul.

Vardakujulised vormid vastavalt varraste asukohale jagunevad diplobakteriteks - paarikaupa ühendatud vardadeks; streptobakterid - ahelasse paigutatud pulgad. Spoore moodustavate bakterite hulgas eristatakse batsillid ja klostriidid. Batsillides ei ületa eoste läbimõõt vegetatiivse raku laiust ja Clostridiumis on eos suurem kui raku laius, mistõttu rakk on spindli, tennisereketi, trummipulga kuju.

Keerdunud vormid jagunevad vibrioonideks, millel on koma, spirilla kuju, millel on mitu (kuni 5) lokki, ja spiroheedid, millel on suur hulk väikesi lokke.

Täitmise järjekord

2. Valmispreparaatide mikroskoopia bakterite põhivormidega.

Mikroskoopia tehnika.

Katsepreparaat asetatakse objektilauale ja kinnitatakse klambritega.

Sukeldusobjektiiviga 90 töötades kantakse preparaadile tilk immersiooniõli ja seejärel lastakse makromeetrilise kruvi abil tsentreeritud objektiiviga 90 toru ettevaatlikult alla nii, et selle esiklaas oleks õlitilga sisse sukeldatud ja fookus on allpool ettevalmistust. Seejärel, vaadates okulaari, tõstetakse toru sama kruviga väga aeglaselt (sajandikumillimeetri võrra), kuni on näha mikroobide kujutist. Ravimi täpne paigaldamine läätse fookusesse toimub mikromeetrilise kruvi abil.

Märge.

Keelekümblussüsteemi eeliseks on see, et kui lääts on õlisse sukeldatud, siis klaasõli kandjat läbivad valguskiired peaaegu ei murdu, kuna nende kandjate valguse murdumisnäitaja on peaaegu sama. Selle tulemusena on valgustus õliga mikroskoopia ajal maksimaalne.

Töö lõpus eemaldatakse immersioonõli objektiivi 90 esiläätselt pehme koelapiga, õli täielikumaks eemaldamiseks pühitakse esilääts alkoholi segus niisutatud lapiga ja eetriga vahekorras 1: 1, seejärel pühitakse objektiiv kuivaks. Mikroskoop asetatakse hoidlasse.

Mikroskoopimisel pöörake tähelepanu uuritava mikroorganismi rakkude kujule ja suurusele, rakkude struktuurilistele tunnustele - eoste ja kapslite olemasolu bakterites, pungade olemasolu pärmis; vormi ettevalmistamisel - mitmesuguste rakukujude jaoks: ümmargused, ovaalsed, piklikud, silindrilised, hargnenud.

Mikroskoopia aruanne.

Mikroskoopia tulemused märgitakse tabelisse (vorm 1).

Vorm 1

Kontrollküsimused.

1. Millised seadmed peaksid olema varustatud mikrobioloogilise laboriga, selle eesmärk?
2. Mikrobioloogialaboris töötamise põhireeglid.
3. Mis on seade optiline süsteem bioloogiline mikroskoop?
4. Milliseid reegleid tuleb järgida mikroskoobi kasutamisel ja hooldamisel?
5. Millised on peamised bakterite vormid?

LABORITÖÖ № 2.

Mikrobioloogiliste preparaatide valmistamine elusate mikroorganismide uurimiseks ("purustatud tilk" ja "rippuv tilk"). Mikroobikultuuridest määrde valmistamine.

Mis tahes tööd mikroorganismide preparaatide valmistamisel ja mikroorganismide ülekandmisel tehakse vastavalt aseptika reeglitele.

Laborilaua varustus.

Mikroorganismidega töötamiseks on vaja teatud seadmeid. Töötaval laborilaual peaks olema piirituslamp või gaasipõleti, bakterioloogiline silmus, slaidid ja katteklaasid, värvide komplekt, mikroskoop, salvrätik, seedriõli, pintsetid, sillaga küvett, veenõu , liivakell, pliiats klaasil, filterpaber.

Tunni eesmärk.

Tutvuge bakterite motoorika uurimise meetoditega.

Materiaalne tugi.

Noored mikroorganismide puljongikultuurid katseklaasides liikuvuse uurimiseks, klaasklaasid ja katteklaasid, auguga klaasklaasid, bakterioloogilised aasad, Pasteuri pipetid, mikroskoobid, tikud, piirituse- või gaasipõletid.

Õpetaja peab demonstreerima mikroorganismide värvimata preparaatide valmistamise tehnikat, mikroskoobi tööks ettevalmistamist, vaatevälja valgustuse reguleerimist, luubi paigaldamist, preparaatide mikroskoopiat.

Õpetaja peaks õpilaste töö käigus pidevalt kontrollima igas mikroskoobis vaatevälja valgustatust, vajadusel aitama seda reguleerida ja vaatama leitud objektide pilte. Värvimata preparaati tuleks vaadata Erilist tähelepanu, kuna õpilased peavad siin nägema nii rakkude kuju kui ka nende liikuvust.

Ülesanded.

1. Bakterite liikuvuse määramiseks valmistage "purustatud ja rippuvad tilgad" preparaadid.
2. Valmistage mikroobikultuurist äige.
3. Õppige mikroskoopia tehnikat ja vaadake valmistatud preparaate mikroskoobi all.
4. Koostage aruanne mikroskoopia tulemuste kohta.
5. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Täitmise järjekord

1. Mikroobide liikuvuse uurimine preparaatides "purustatud ja rippuv tilk".

Purustatud tilk.

Kui organismid on vedelas keskkonnas, kantakse tilk suspensiooni steriilse pipeti abil rasvatustatud slaidile. (Pärast kasutamist asetatakse pipett koheselt desinfitseeriva lahusega portselanklaasi. Määrdunud pipeti panemine töölauale on lubamatu!). Kui kultuuri kasvatatakse tahkel toitesöötmel, kantakse klaasile esmalt tilk vett ja seejärel asetatakse sellesse põleti leegis kaltsineeritud bakterioloogilise ahelaga mikroorganismirakud või uuritava toote testproov. ja segatakse põhjalikult.

Tilk vedelikku kaetakse katteklaasiga. Et vältida õhumullide tekkimist selle alla, asetatakse katteklaas esmalt ühe servaga klaasklaasile ja seejärel langetatakse õrnalt alla vajutades, et tilk “muljuda”. Soovitav on vältida liigset vedelikku, et mikroorganismide suspensioon katteklaasi alt välja ei pressiks. Kui see juhtub, eemaldatakse liigne vedelik filterpaberiga. Kasutatud paber tuleb kohe panna desinfitseerimislahusesse.

Purustatud tilga preparaadi mikroskoopiaks kasutatakse ainult kuiva süsteemiga objektiive, st ilma sukeldamiseta. Seda tüüpi ravimid võimaldavad teil määrata rakkude kuju, suurust, sporulatsiooni meetodit ja kui rakud on elus, siis liikuvuse olemasolu või puudumist.

Ravimi eeliseks on see, et saadakse õhuke kiht vedelikku, kus on näha elusorganisme.

Puuduseks on see, et see kuivab kiiresti ja liikumine peatub, õhk satub sageli sisse, mis rikub mikroskoopilist pilti.

Ravimi valmistamiseks"rippuv tilk" katteklaasile kantakse väike tilk mikroorganismide suspensiooni, pööratakse tagurpidi ja asetatakse spetsiaalsele klaasslaidile, mille keskel on süvend (auk). Tilk peaks rippuma vabalt ilma augu servi ja põhja puudutamata. Kui on tulemas mitu vaatluspäeva, määritakse augu servad vaseliiniga ja tilk suletakse hermeetiliselt niiskesse kambrisse. "Rippuva tilga" preparaati kasutatakse mikroorganismide liikuvuse tuvastamiseks, paljunemismeetodite uurimiseks ja eoste idanemise jälgimiseks.

Toiduvalmistamiseks tampooni ettevalmistamine uuritud mikroobikultuur jaotatakse ettevaatlikult ühtlase õhukese kihina klaasklaasile. Tahkel söötmel kasvatatud kultuuride valmistamisel toimige järgmiselt. Tilk steriilset kraanivett või soolalahust kantakse steriilse pipeti või bakterioloogilise silmusega puhtale slaidile.

a) Võetakse kultiveerimistoru, millest on vaja valmistada äigepreparaadi. Bakterioloogiline silmus kaltsineeritakse põleti leegis, hoides seda vertikaalses asendis.

b) Hoides korki väikese sõrme ja parema käe peopesa vahel, võta see katseklaasist välja ja hoia otsaga allapoole, vältides kokkupuudet selle korgiosa käega, mis oli katseklaasis.

c) Katseklaasi lahtise otsa põletame leegil.

d) Sisestame katseklaasi (veel kord leegi läbinud) silmuse, jahutame selle katseklaasi seina puudutades ja kogume väikese koguse materjali, puudutades kergelt kultuuri ja mitte kriimustades söödet silmusega.

e) Katseklaasi servad ja vatikorgi otsa põletame põleti leegi kohal.

f) Sulgege toru vatikorgiga.

g) Võetud materjal emulgeeritakse slaidil olevaks tilgaks ja jaotatakse õhukese silmusekihiga ühtlaselt üle pinna (1,5 x 2 cm).

h) Silmus kaltsineeritakse ja asetatakse kohale.

Kui kultuuri kasvatatakse vedelas toitekeskkonnas, lastakse steriilne silmus vedelikku, tilk püütakse kinni ja hõõrutakse slaidile.

3. Mikroskoopia tehnika.

Mikroskoop asetatakse töölauale servast 3-5 cm kaugusele toruhoidikuga enda poole.

Luuakse mikroskoobi vaatevälja hea ühtlane valgustus, mille jaoks okulaari vaadates suunab peegel valguskiire allikast objektiivi. Kondensaator peab olema üleval ja diafragma avatud. Mikroskoobi vaateväli peaks olema kõigis punktides hästi ja ühtlaselt valgustatud.

Katsepreparaat asetatakse määrdumise või tilgaga ülespoole objektilauale ja kinnitatakse klambritega.

Värvimata preparaate mikroskoobitakse x8 ja x40 objektiividega, langetades kondensaatori 1-0,5 cm võrra preparaadini, saavutades värvimata rakkude parima nähtavuse.

Kui mikroskoopia "elus" mikroobid (värvimata preparaat) tähele liikuvust.

4.Aruanne mikroskoopia tulemuste kohta.

c) rakkude joonistamine mikroskoobi all (näidata eoste, kapslite, pungade olemasolu, liikuvust).

5. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Kontrollküsimused

1. Milline on preparaatide "purustatud ja rippuv tilk" valmistamise tehnika?
2. Kuidas valmistatakse tahkel toitainekeskkonnas kasvatatud bakterikultuurist määrd?
3. Mis võimaldab teil installida ravimi "purustatud tilk"?
4. Milliste uuringute jaoks kasutatakse ravimit "rippuv tilk"?

LABORITÖÖD №3.

Bakterite värvitud preparaatide valmistamine.

Tunni eesmärk.

Siit saate teada, kuidas valmistada ja värvida bakteripreparaate lihtsa ja Grami meetodiga.

Materiaalne tugi.

Valmis värvilahuste komplekt pudelites, kuivade värvide komplekt pudelites või kummi- või korkkorgiga katseklaasides: aluseline ja happeline fuksia, emajuurviolett, metüleensinine, safraniin, malahhiit ja briljantroheline, mikroobide segu : grampositiivsete bakterite (Bac. subtilis, Staph . saprophyticus) kultuurid, kaldus MPA-l kasvatatud gramnegatiivsed mikroobid (E. coli), slaidid, fuksiini vesilahus (Pfeifferi magenta), bakterioloogilised aasad, filterpaber, mikroskoobid, alkoholi- või gaasipõletid.

Õpetaja peab demonstreerima mikroorganismide peitsitud preparaatide valmistamise tehnikat, mikroskoobi tööks ettevalmistamist, vaatevälja valgustuse reguleerimist, luubi paigaldamist, preparaatide mikroskoopiat.

Õpetaja peaks õpilaste töö käigus pidevalt kontrollima igas mikroskoobis vaatevälja valgustatust, vajadusel aitama seda reguleerida ja vaatama leitud objektide pilte. Värvilise preparaadi vaatamisel peaks õpilane nägema eoste ja kapslite esinemist mikroorganismides.

Ülesanded.

1. Valmistage ette naastude määrdumine ja peitsige lihtsal meetodil.
2. Valmistage ühele objektiklaasile stafülokoki ja Escherichia coli segust äigemäär ning värvige Grami abil.
3. Vaadake määrdunud määrdeid sukelläätsega.
4. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Vastake turvaküsimustele.

Seletus tööle

Mikroobiraku kuju ja mõningate selle struktuuride uurimiseks värvitakse uuritavat mikroobi sisaldavast materjalist preparaat (äigemäär).

Enamik mikroobe värvib kiiresti ja hästi aniliinvärvi lahustega. Kõrval keemilised omadused tavaliselt jagatakse need aluselisteks ja happelisteks. Aluseliste värvainete puhul on kromofoor (värvi andev ioon) katioon, happelistel aga anioon.

Peamised värvained on punane - neutraalne punane, magenta aluseline, safraniin, tioniin, püroniin, hematoksüliin; sinine - metüleensinine; violetne - kristallviolett, metüleenviolett; roheline - malahhiitroheline, metüleenroheline. Põhivärvid seostuvad reeglina kergesti rakkude tuuma (happeliste) komponentidega.

Happevärvide hulka kuuluvad punane ja roosa - happeline fukssiin, eosiin; kollane - pikriinhape, kongo, fluorestseen; must - nigrosiin. Happelised värvid värvivad intensiivsemalt rakkude (põhi)komponente.

Värvide töölahuste valmistamine.Enne mikroobide värvimiseks mõeldud värvide töölahuste valmistamist, sageli eelnevalt mikroobide värvimiseks mõeldud kuivadest värvidest, valmistatakse küllastunud alkoholilahused sageli eelnevalt kuivadest värvidest. Selleks valatakse värv 96% alkoholiga vahekorras 1:10. Selle suhte korral on alkohol värviga küllastunud (värvide lahustumata osa sadestub). Raha säästmiseks soovitatakse 100 cm³ alkoholi kohta võtta metüleensinist 7,0, emajuurvioletti 4,8, aluselist fuksiini 8,1.

Parema küllastumise tagamiseks asetatakse alkoholilahused termostaati ja hoitakse, kuni värvid on täielikult lahustunud. Vajadusel valmistatakse küllastunud alkoholi lahustest vesilahused.

Kõige sagedamini kasutatavad värvilahendused on:

Tsil' fuksia karboollahus.100 ml kristallilise karboolhappe 5% lahusele lisage 10 ml aluselise fuksiini küllastunud alkoholilahust. Fuchsiini küllastunud lahus saadakse 8 g fuksiakristallide segamisel 10 ml alkoholis. Värv on punane.

Fuchsin Pfeifferon Zieli fuksia karboollahus, mis on lahjendatud destilleeritud vees 1:10. Valmistatakse vahetult enne kasutamist. Värvil on rikkalik roosa värv.

Egentianvioleti karboollahus.10 ml värvi küllastunud alkoholilahusele lisage 100 ml karboolhappe 2% vesilahust. Küllastunud lahus saadakse 1 g kristallilise emajuurvioleti lahustamisega 10 ml 96% alkoholis. Värv on sinakasvioletset värvi.

Safraniin. Valmistage vahetult enne kasutamist, lisades 100 ml kuumale veele 1 g safraniini. Värv on punakaspruun.

Metüleensinine (Leffleri sinine).Valmistamiseks lisage 100 ml destilleeritud veele 30 ml värvi küllastunud alkoholilahust ja 1 ml KOH või NaOH 1% vesilahust. Lahus on tumesinist värvi.

Malahhiitroheline.1 g värvi lahustatakse 100 ml destilleeritud vees, filtreeritakse. Lahus on sinakasroheline.

Lugoli lahus. 300 ml destilleeritud vee kohta võetakse 1 g kristalset joodi ja 2 g kaaliumjodiidi. Esmalt lahustatakse kaaliumjodiid väikeses koguses vees ja seejärel lisatakse joodikristalle. Pärast täielikku lahustumist lisatakse ülejäänud destilleeritud vesi.

Komplekssed värvimismeetodidkasutatakse raku struktuuri üksikasjalikuks uurimiseks, samuti mõnede mikroorganismide eristamiseks teistest. Keerukad värvimismeetodid põhinevad raku ja selle osade füüsikalis-keemilise struktuuri tunnustel. Gram-peitsil on suurimad praktilised teadmised, mis võimaldavad eristada baktereid rakuseina keemilise koostise ja struktuuri järgi.

Meetodi töötas välja Taani teadlane Christian Gram aastal 1885. Grami meetodil värvimisel jagunevad kõik bakterid kahte rühma: grampositiivsed ja gramnegatiivsed.

Täitmise järjekord

Grami peitsitehnika.

1. Lihtne värvimismeetod.Kell lihtne meetod värvimiseks kasutatakse mõnda värvilahust, kõige sagedamini Pfeiffer fuksiini või metüleensinist.

Fikseeritud preparaadile kantakse pipetiga paar tilka värvainelahust nii, et see kataks kogu määrdumise pinna: Pfeiffer fuchsin 1-2 minutit, metüleensinine 3-5 minutit. Seejärel pestakse värv veega maha ja määrdumine kuivatatakse filterpaberi lehtede vahel või õhu käes.

2. Keerukad värvimismeetodidkasutatakse diagnoosimiseks, mikroobide iseloomulike struktuuride tuvastamiseks juhtudel, kui viimased ei värvita lihtsal viisil.

Mikroobirakkude eristamiseks, mis erinevad rakuseinte keemilise koostise ja struktuuri poolest, kasutatakse kompleksset värvimismeetodit - Grami värvimist.

Gram-värvivad bakterid jagunevad kahte rühma: grampositiivsed ja gramnegatiivsed.

Grampositiivsetel bakteritel (G+) on rakuseina paksus 15-80 nm, see koosneb mitmes kihis paiknevast peptidoglükaanist (60-90%), proteiinist (umbes 1%) ja lipiididest (umbes 1%). Leiti peptidoglükaaniga kovalentselt seotud eritüüpi polümeere, teikhoehappeid. Peptiidoglükaani kõrge sisaldus tagab grammi järgi värvimisel emajuurvioletse ja joodiga alkoholikindla kompleksi moodustumise, mille tulemusena värvuvad need sinakasvioletseks.

Gramnegatiivsete bakterite (G-) rakuseina paksus on 10-15 nm, kuid selle struktuur on palju keerulisem kui grampositiivsetel bakteritel. See põhineb orienteeritud sisemistel lipiididel (10-20%), mis moodustavad lipopolüsahhariidi kihi pindmiselt paiknevate polüsahhariididega. Valgud ja polüsahhariidid paiknevad rakuseina pinnal mosaiikselt. Peptidoglükaan on esindatud ühe kihina paksusega ainult 2-3 nm (umbes 5-10%), see asub lipopolüsahhariidi kihi all ja katab tihedalt protoplasti. Gramnegatiivsete bakterite rakusein moodustab tänu kõrgele lipiidide sisaldusele Grami järgi värvimisel emajuurvioletse ja joodiga kompleksi, mis alkoholiga töötlemisel hävib, mille tagajärjel muutuvad rakkude värvused.

Mikroorganismide ebavõrdne suhtumine Grami plekisse on seotud erinevustega bakteriraku seina struktuuris ja keemilises koostises.

Gram-positiivsete mikroorganismide hulka kuuluvad kookid, batsillid (eosed moodustavad pulgad), aktinomütseedid, mükobakterid, klostriidide bakterid.

Gramnegatiivsete mikroorganismide hulka kuuluvad: bakterid (eosteta vardad), spirilla, salmonella, E coli, Pseudomonas, Azotbacter, vibrios.

On Gram-muutuvaid mikroorganisme, mille suhtumine Grami plekkidesse nende elutsükli teatud etappidel muutub. Kuna rakkude võime värvuda Grami järgi sõltub nende vanusest, kasutatakse Grami värvimiseks noore, sageli ühepäevase kultuuri rakke. Võrdluseks, samaaegselt määratava objektiga on soovitatav värvida mikroorganismide rakud, mille seos Grami plekiga on teada (kontroll).

Grami värvimine toimub järgmiselt:

1. Klaasklaasil valmistatakse kolm mikroorganismikultuuri määrdumist: keskel - uuritava kultuuri määrdumine, vasakul ja paremal - kontrollmikroorganismide määrded.

Märgid peaksid olema õhukesed, et rakud jaotuksid ühtlaselt üle klaasi pinna ega moodustaks kobaraid, kuna värvimistulemused võivad sõltuda määrdumise paksusest. Kuivatage määrded õhu käes, kinnitage põleti leegi kohale.

1. Plekimäärded karboolse emajuurvioletiga. Määrdudele kantakse piisav kogus värvainet, hoitakse 1-2 minutit, värv kurnatakse ja ilma veega mahapesemata töödeldakse määrdeid Lugoli lahusega kuni mustaks saamiseni (umbes 1-2 minutit).
2. Lugoli lahus kurnatakse ja preparaati töödeldakse 0,5-1 min (rangelt) 96% etüülalkoholiga, kastes see alkoholiklaasi või määrides alkoholiga määrdeid (kogu värvimise tulemus sõltub määrdumise ajast alkoholiga töödeldud: ebapiisava töötlemise korral jäävad kõik bakterid määrdunud, ülemäärase värvi korral).
3. Preparaati pestakse kohe veega ja värvitakse 1-2 minutit magenta vesilahusega. Värv kurnatakse, preparaat pestakse veega, kuivatatakse filterpaberiga.
4. Preparaati mikroskoobitakse sukeldussüsteemiga. Grampositiivsed bakterid värvivad tumelilla, gramnegatiivsed bakterid punaseks või magenta roosaks (lisavärvi värv).

Ekspressmeetod mikroorganismide grammitüübi määramiseks (vastavalt Kregenseni järgi).

Meetod põhineb gramnegatiivsete bakterite rakkude hävitamisel aluseline keskkond ja vaba DNA määramine.

Objektiklaasile kantakse tilk 3% KOH lahust, millesse lisatakse bakterisilmusega uuritud bakterid (24-tunnine kultuur kald-agarilt) ja segatakse silmusega korralikult läbi.

5-10 s pärast, kui silmus liigub mööda klaasi, tekib positiivse reaktsiooni korral gramnegatiivsete bakterite testimise tulemusena 1-2 cm pikkune limane jälg.Kui lima ei teki, siis reaktsioon on negatiivne, siis testitakse grampositiivset kultuuri.

3. Aruanne mikroskoopia tulemuste kohta.

a) mikroskoopiasüsteem;

b) mikroskoopiline kultuur;

c) rakkude joonistamine mikroskoobi all (näidata eoste, kapslite olemasolu).

4. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Kontrollküsimused

1. Milliseid värvilahuseid kasutatakse lihtsas värvimismeetodis?
2. Kirjeldage bakterite Gram-värvimise protseduuri.
3. Miks bakterid tajuvad Grami plekke erinevalt?
4. Millised bakterid on grampositiivsed ja millised gramnegatiivsed??

LAB nr 4

Toitekeskkonnad ja nende valmistamise tehnikad.

Tunni eesmärk.

Õppige toitainekeskkonna valmistamise tehnikat.

Materiaalne tugi.

Kuiv toitainekeskkond, kasutusvalmis sööde, elektripliit, kööginõud, indikaatorpaber, 20% naatriumhüdroksiid, 20% vesinikkloriidhape, katseklaasid, pipetid, Petri tassid.

Enne töö tegemist kordavad õpilased mikroorganismide toitumist, toitekeskkonda, toitekeskkonna klassifikatsiooni, põhinõudeid toitekeskkonnale.

Laboritööde tegemisel valmistavad õpilased ette toitekeskkonna.

Ülesanded.

1. Lugege töökirjeldust.
2. Valmistage ette toitekeskkond (õpetaja korraldusel).
3. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Vastake turvaküsimustele.

Seletus tööle

Bakterioloogilised laborid ei saa hakkama ilma toitaineteta. Mikroorganismi tüübi määramiseks, nakkushaiguse tekitaja tuvastamiseks, s.o haiguse diagnoosi panemiseks, spetsiifiliste preparaatide (vaktsiinide, seerumite) valmistamiseks, nakkushaiguste raviks ja ennetamiseks, antibiootikumide saamiseks, sanitaartehniliste protseduuride läbiviimiseks. ja keskkonnaobjektide mikrobioloogilised uuringud, liha ja lihatoodete bakterioloogiliseks uurimiseks kasutavad mikroorganismide kunstlikku kasvatamist toitainekeskkonnas.

Laborites kultiveeritakse mikroorganisme in vitro, s.o. klaasist katseklaasides, kolbides või muudes anumates. In vitro kasvatamiseks on vaja substraate, mida mikroorganismid kasutavad toitainetena.

Vastavalt toitainete vajadusele võib kõik mikroorganismid jagada kolme rühma:

esimene rühm - tagasihoidlik, kasvab lihtsal söötmel (mädanevad, enamik kooki ja muid mikroorganisme);

teine ​​rühm - nende kasvamiseks on vaja täiendavaid toitaineid: täisvalk (kana või vadak), vitamiinid, teatud aminohapete komplekt, mikroelemendid (tuberkuloos, tulareemiabatsill, leptospira jne);

kolmas rühm - ei kasva kunstlikul toitainekeskkonnal, vaid on võimeline paljunema ainult elusrakkude sees (viirused, riketsiad).

Toitekeskkonnale esitatavad nõuded on järgmised:

1. Need peavad sisaldama lämmastiku ja süsiniku allikaid, anorgaanilisi ühendeid, mikroelemente, aga ka kasvufaktoreid, vitamiine, peamiselt rühma B.

Peptoone kasutatakse universaalse lämmastikuallikana. Peptoonid on liha või kaseiini hüdrolüüsi lagunemise saadused. Need sisaldavad polüpeptiide, aminohappeid ja olulisi mineraale.

Universaalse süsinikuallikana lisatakse süsivesikuid (suhkruid) toitainetesse - glükoos, laktoos, sahharoos, orgaanilised happed - piim-, sidrunhape jne, mitmehüdroksüülsed alkoholid - mannitool, glütseriin, sorbitool jne.

2. Toitekeskkonnas peab olema söötme teatud reaktsioon. Nii et enamiku kokkide, mädanevate ja patogeensete mikroorganismide jaoks on optimaalne pH 7,0 ... 7,4 ning hallitusseened, pärm, piimhappe mikroorganismid arenevad paremini pH 6,0 juures.

3. Toitekeskkond peab olema steriilne, s.t. ei sisalda mikroorganisme.

4. Toitekeskkond peab olema niiske, kuna mikroorganismide toitumine toimub difusiooni ja osmoosi seaduste järgi. Paljud söötmed peavad olema läbipaistvad, et oleks võimalik eristada nendel mikroorganismide kasvu ja jälgida nende elutegevuse tulemusena tekkivaid füsioloogilisi muutusi.

Konsistentsi järgi on toitekeskkonnad vedelad, poolvedelad ja tihedad. Tiheda söötme valmistamiseks lisatakse vedelale söötmele agar-agar kontsentratsiooniga 2 ... 3%, poolvedela jaoks - agar-agar kontsentratsiooniga 0,2 ... 0,3%.

Päritolu järgi eristatakse looduslikku ja tehiskeskkonda.

Looduslikud kasvusubstraatidon loomse päritoluga (veri, vereseerum, piim, sapp ...) või taimset päritolu tooted (köögiviljad, puuviljad, teraviljad), mida kasutatakse mikroorganismide kasvatamiseks ilma eritöötluseta, säilitades täielikult nende looduslikud omadused.

Tehiskultuuri kandjadvalmistatud taimse töötlemise saadustest, lihast, piimast, maksast jne, millele on sageli lisatud süsivesikuid, lauasool, värvid jne.

Tehiskeskkondadest eristatakse sünteetilisi keskkondi, s.o. täpselt teadaoleva keemilise koostisega keskkonnad. Kunstlikud toitainekeskkonnad jagunevad lihtsateks ehk tavapärasteks ja keerukateks.

Lihtsad toitesöötmed sobivad enamiku mikroorganismide kasvatamiseks. Kõigi söötmete valgubaas on toitainepuljong. Põhitoitepuljongi valmistamiseks kasutatakse tavaliselt kahte meetodit: lihaveel, millele on lisatud valmis peptooni - liha-peptoonpuljongit, lähteaine hüdrolüüsi saaduste seedimisel ensüümide abil (trüpsiin - Hotingeri puljong, pepsiin - Marteni puljong) või happed, on sellised söötmed aminohapete poolest rikkamad.

Üld- ja aminolämmastiku sisaldus söötmes oleneb liha-peptoonkeskkonna lämmastiku koostisest ning valkude lagunemisastmest lihas ja muudes hüdrolüsaatides.

Enamiku mikroorganismide heaks kasvuks on vaja 100 cm puljongis sisaldada vähemalt 250 ... 300 mg üldlämmastikku aminolämmastiku (aminohapete) juuresolekul, keskmiselt umbes 25 ... 30%.

Levinumad lihtsad toitainekeskkonnad on liha-peptoonpuljong (MPB), liha-peptoonagar (MPA), liha-peptoonželatiin (MPG).

Lihapeptoonagar (MPA) – kasutatakse mikroorganismide koguarvu määramiseks.

Kõigi kolme söötme aluseks on lihavesi, mis valmistatakse veisehakklihast, täidetakse veega ja keedetakse 1,5 ... 2 tundi, filtreeritakse ja steriliseeritakse 20 ... 30 minutit temperatuuril 120 ° C.

Liha-peptoonpuljong.1 liitrile lihaveele lisatakse 1% peptooni ja 0,5% keedusoola, leelitatakse 10% NaOH lahusega pH väärtuseni 7,4, filtreeritakse ja steriliseeritakse 15 ... 20 min rõhul 0,1 MPa.

Liha-peptoonagar.Liha-peptoonpuljongile lisatakse peeneks hakitud agar-agar (2…3%), segu kuumutatakse kuni agar sulamiseni, seatakse pH 7,2…7,6, filtreeritakse läbi vati-marli filtri, valatakse katseklaasidesse. ja steriliseeriti kolbides 20…30 min 120˚С juures.

Vajadusel kuumutatakse MPA-d veevannis kuni täieliku sulamiseni. Katseklaasid asetatakse spetsiaalsetesse riiulitesse 10˚ nurga all ja pärast tahkumist saadakse nn kaldus agar, mida kasutatakse mikroobikultuuride jaoks. Petri tassidesse valatakse ka sulatatud liha-peptoonagar.

Liha-peptoonželatiin valmistatakse sarnaselt.

Täitmise järjekord

2. Toitekeskkonna valmistamine valmis kuivast toitekeskkonnast.

Kuiv toitainekeskkond.Toodetakse lihtsat, valikulist ja diferentsiaaldiagnostilist kuivtoitekeskkonda. Kuiv toitainekeskkond on hügroskoopsed pulbrid, mis lahustuvad vees kergesti. Kuivkultuurisöötmed on saadaval tihedalt keeratava korgiga klaaspurkides.

Sellised söötmed valmistatakse vastavalt juhistele, lahustades pulbri näidatud koguses destilleeritud vees, filtreerides ja steriliseerides temperatuuril 120 °C 20 minutit.

Kuivtoiteagarvalmistatakse järgmiselt: lahustunud kuivale agarile (5 g agarit 100 ml kohta) lisatakse kasvufaktorina väike kogus pärmiekstrakti, lihavett, filtreeritakse läbi puuvillase marli filtri, valatakse katseklaasidesse või viaalidesse ja steriliseeritakse. 0,1 MPa juures 20 minutit.

3. Kirjuta tunni sisu töövihikusse.

Kontrollküsimused

1. Millised on toitainekeskkonna põhinõuded?
2. Millised on kõige sagedamini kasutatavad mikroorganismide kasvatamiseks mõeldud toitekeskkonnad, nende otstarve?
3. Millised on lihtsa toitainekeskkonna komponendid?

Bibliograafia

1. Gradova N. B. Üldise mikrobioloogia laboritöökoda - M .: DeLi print, 2010.
2. Marmuzova L.V. Toiduainetööstuse mikrobioloogia, kanalisatsiooni ja hügieeni alused - M .: 2005.
3. Mudretsova-Viss K. A. Mikrobioloogia, kanalisatsioon ja hügieen - M .: DL, 2010.

"Mikrobioloogia, kanalisatsiooni ja hügieeni alused".

METOODILISED JUHISED

laboritöödele №№1-4

MTÜ üliõpilastele

34.17 Vorstitootmisprotsesside operaator.

__________________________________________________________________

Žukova Ljubov Anatoljevna, Moskva linna Riikliku Autonoomse Keskhariduse Õppeasutuse nr 28 eridistsipliinide õpetaja

Riiklik autonoomne õppeasutus

keskel kutseharidus Moskva linn

Tehnikakõrgkool nr 28

Aadress: Moskva, st. Ülemised väljad, 27

Trükkimiseks esitatud 07.02.2012.

Paberi suurus 60x90/16

Tiraaž 16 eksemplari.

Trükikojas trükitud:

Riiklik autonoomne õppeasutus

keskeriharidus Moskvas

TEGEVUS nr 1

TOITINESÖÖTTE VALMISTAMINE JA NENDE STERILISEERIMISE MEETODID

MIKROORGANISMIDE KASVATAMISE TUNNUSED

Sihtmärk: Uurida mikrobioloogialabori tööreegleid, mikroorganismide kultiveerimise iseärasusi, toitekeskkonna valmistamise meetodeid ja nende steriliseerimise meetodeid.

Ülesanded

Tutvuge käitumisreeglitega mikrobioloogilise töötoa läbiviimisel.

Uurida mikroorganismide kasvatamise iseärasusi.

Õppige söötme valmistamise ja valamise meetodeid.

Õppida klaasnõude ja söötme steriliseerimise meetodeid.

Valmistage ette ja valage MPA toitainekeskkond.

Hankige heina- ja kartulipulkade rikastuskultuur.

Kirjandus

Anikeev V.V., Lukomskaja K.A. Mikrobioloogia praktiliste harjutuste juhend. M.: Valgustus, - 1983.

Gusev M.V. Mikrobioloogia: õpik ülikoolidele / M.V. Gusev, L.A. Minejev. - Moskva, 2004

Emtsev V.T. Mikrobioloogia: õpik ülikoolidele / V.T. Emtsev, E.N. Mishustin. – M.: Bustard, 2005.

Lukomskaya K.A. Mikrobioloogia viroloogia alustega. M.: Valgustus, - 1983.

Mikrobioloogia, viroloogia ja immunoloogia alused. / All. Toimetanud Vorobjov A.A. ja Krivoshein Yu.S. - M.: Masterstvo, 2001.

Pimenova M.N. Mikrobioloogia praktiliste harjutuste juhend. Moskva, 1971.

Mikrobioloogia töötuba. Ed. Netrusova A.I. - M .: Akadeemia, - 2005.

Tepper E.Z. Mikrobioloogia töötuba. – M.: Bustard, 2004.

Materjalid ja seadmed.Steriilsed Petri tassid, koossteriilsed koonilised kolvid 100-150 ml,toitaineagar, peptoon, hein, kartulimugulad, kriit, plaadid, piirituselambid, kolvid, vatt, marli, pipetid, kaalud, raskused, termostaat.

Põhimõisted.Kultiveerimine, kultuur, pinnakultuur, süvakultuur, partiikultuur, pidevkultuur, puhaskultuur, rikastuskultuur, nakatamine, inkubeerimine, passeerimine, valiksöötmed, rikastussöötmed, optimaalne sööde, looduslik sööde, sünteetiline sööde, poolsünteetiline sööde, agar, steriliseerimine, põletamine, tündaliseerimine, pastöriseerimine, autoklaavimine, MPA.

Edusammud

Ülesanne number 1. Õppige tundma tööreegleid mikrobioloogilise töötoa läbiviimisel.

Ülesanne number 2. Uurida toitekeskkondade klassifikatsiooni, nende valmistamise ja villimise iseärasusi, toitekeskkonna ja klaasnõude steriliseerimise meetodeid.

Ülesanne number 3. Valmistage ette ja valage MPA toitekeskkond steriilsetesse Petri tassidesse.

Ülesanne number 4. Hankige heinapulkade rikastuskultuur(Bacillus subtilis).

Hein hakitakse peeneks ja pannakse 500 ml kolbi, täites veerandi mahust, lisatakse näpuotsatäis kriiti ja keedetakse 15-20 minutit, kuni sööde omandab kange teeleotise värvuse. Heina keetmine valatakse steriilsetesse 100-150 ml koonilistesse kolbidesse, mille kiht on 1,0-1,5 cm, suletakse vatikorkidega ja asetatakse termostaati temperatuuril 22-25 °C.

Kahe päeva pärast tekib söötme pinnale valkjas kile. Sina. subtilis, mis vananemise käigus 3-4. päeval muutub hallikasroheliseks. Teised mikroorganismid kasvavad samal ajal harva ja väikestes kogustes.

Ülesanne number 5. Hankige kartulipulgast rikastuskultuur(Vas. subtilis var. mesentericus).

Pestud kartulimugulad, koorimata, lõigatud viiludeks. Nende pinda hõõrutakse keskkonna neutraliseerimiseks kriidiga ja asetatakse steriilsetesse Petri tassidesse destilleeritud veega niisutatud kahekihilisele filterpaberile. Kartulisöötmega tasse hoitakse autoklaavis 0,5 atm juures 10 minutit ja asetatakse 3-4 päevaks termostaadi temperatuurile 27-30°C.

Kartuliviilude pinnale tekib tihe kortsus kartulipulgakultuuri kile. Kile värvus võib olla erinev: valkjashall, roosakas, kollakaspruun, must, mis sõltub valdava arengu saanud kultuurisortidest.

Kontrollküsimused

Toitekeskkonna klassifikatsioon.

Laboratoorsete klaasnõude ja söötme steriliseerimise meetodid.

Üksikute toitekeskkonna valmistamise meetodid (MPB, MPA, MPZH, SA, KA jne) Toitekeskkonna valamine.

Mikroorganismide kasvatamise tunnused (pindmine ja sügav, perioodiline ja pidev). rikastamine ja puhaskultuurid.

Mikroorganismide looduslike ja fikseeritud preparaatide valmistamise meetodid.

Uurida mikrobioloogiateaduse arengu peamisi etappe, Venemaa ja välismaa teadlaste panust selle arengusse. Täitke tabel number 1.

Tabel number 1. Mikrobioloogia arengu ajalugu

TEGEVUS #2

MIKROORGANISMIDE ELUS- JA PÜSIVALMISTUSTE VALMISTAMINE NING NENDE MORFOLOOGIAGA TUTVUMINE

Sihtmärk: Uurida mikropreparaatide valmistamise meetodeid ja võtteid mikroorganismide uurimisel ning tutvuda nende morfoloogiaga.

Ülesanded:

Uurida bakterirakkude morfoloogia tunnuseid.

Valmistage mikroorganismide intravitaalsed ja fikseeritud mikropreparaadid.

Materjalid ja seadmed.Klaasklaasid, bakterioloogiline silmus, piirituslamp, filterpaber, sillaga kristallisaator preparaatide jaoks, pesupudel veega, värvainete vesilahused - fukssiin, metüleensinine, emajuurviolett (edaspidi mikropreparaatide valmistamise seadmed); immersiooniõli, mikroskoop; lihavesi, pärm, heina- ja kartulipulgad.

Edusammud

Ülesanne number 1. Viige läbi eluaegne bakterirakkude uuring järgmiste meetoditega, tehke joonised:

purustatud tilga meetod.Tilk ühte vedelikku kantakse mikrobioloogilise silmusega objektiklaasile. Katteklaas asetatakse tilga servas olevale servale ja langetatakse sellele järk-järgult.

rippuva tilga meetod.Katteklaasi keskele kantakse bakterioloogilise silmusega väike tilk uuritavat vedelikku ja see keeratakse ümber spetsiaalse klaasklaasi süvendi.

Ravim "jälg".Agarsöötmest, millel mikroorganismid kasvavad pidevas murus või üksikute kolooniatena, lõigatakse välja väike kuubik ja kantakse see slaidile nii, et mikroorganismidega pind jääks ülespoole. Seejärel kantakse murule või kolooniale puhas katteklaas, surutakse sellele kergelt silmuse või pintsettidega ja eemaldatakse kohe, püüdes mitte liikuda. Saadud preparaat asetatakse prindituna tilga vette või metüleensinisesse (1:40) slaidile.

Ülesanne number 2. Valmistage ette fikseeritud preparaatSina. subtilis, Vas. subtilis var mesentericus, St. lactis, S. cerevisiae, E. coli(Joonis nr 1, 2, 3, 4 taotlused),teha jooniseid.

Rakendus. Klaasklaas kuivatatakse alkohollambi leegil. Põleti leegil steriliseeritud bakterioloogiline silmus kantakse slaidi keskele uuritava materjali määrdusega. Kui mikroorganismi kultuuri kasvatatakse tihedal toitekeskkonnal, siis lastakse esmalt klaasile tilk vett, sisestatakse bakterioloogilise silmusega väike kogus materjali ja tehakse määrd.

Kuivatamine ja kinnitamine. Ravim kuivatatakse õhu käes ja seejärel fikseeritakse. Tavalised mikroorganismide määrded fikseeritakse termiliselt, lastes klaasi 2-3 korda läbi põleti leegi määrdiga ülespoole.Märgi fikseerimine toob kaasa mikroorganismide surma, nende tiheda kleepumise klaasi pinnale ja mikroobide kergema vastuvõtlikkuse värvainele.

Värvimine. Valage pind 2-3 minutiks mis tahes värvaine lahusega (metüleensinine, emajuurvioletne, magenta). Eristamalihtne ja erinevmikroorganismide värvimine. Esimesel juhul värvitakse kogu rakk, nii et selle kuju ja mõõtmed muutuvad selgelt nähtavaks. Diferentsiaalvärvimine paljastab ainult teatud rakustruktuure ja säilitusaineid.

Õhetus. Seejärel pestakse määrdumist saadud värv pesupudelist veega maha, preparaadi alumine pool pühitakse filterpaberi ribaga, ülemine külg kuivatatakse hoolikalt ja mikroskoobiga.

Mikroorganismide üldised omadused. Prokarüootide ja eukarüootide eristavad tunnused.

Bakterirakkude kuju ja suurus. Bakterite morfoloogilised tüübid.

Mikroorganismide süstemaatika alused. Bakterite asend organismide süsteemis ja nende varieeruvus. Liikide määramisel kasutatavate bakterite omadused.

lühikirjeldus tellige Schizomycetales.

Lühikirjeldus seltsist Actinomycetales. Nokardia. Mükobakterid.

Myxobacteriales seltsi lühikirjeldus.

Seened. Sügo-, asko- ja deuteromütseedide lühikirjeldus.

Täitke tabel number 2.

Tabel number 2. Erinevused eukarüootide ja prokarüootide vahel

Lineaarsed kromosoomid

Küsimused iseõppimiseks

Üksikute bakterirühmade lühikirjeldus (vastavalt Bergey bakterideterminandile).

Vetikate morfoloogilised omadused ja süstemaatika.

Algloomade morfoloogilised omadused ja süstemaatika.

TEGEVUS #3

KAASADE, KAPSLITE JA ENDOSPOORIDE VÄRVIMINE, GRAM-värvimine

Sihtmärk: Siit saate teada, kuidas eoseid, kapsleid ja kandjaid värvida bakterirakk; uurida selle tsütoloogilisi omadusi, kasutades näitena Grami peitsi.

Ülesanded:

Lipiidigraanulite tuvastamine pärmirakkudes.

Tuvastage pärmirakkudes glükogeenitaolisi polüsahhariide.

Tuvastage bakteriraku kapslid negatiivse kontrasti meetodil (näiteks Azotobakter).

Tehke eoste ja tsütoplasma diferentsiaalne värvimine vastavalt Ozheshka meetodile.

Tehke bakteritele Grami värvimine.

Materjalid ja seadmed.Slaidid, bakterioloogiline silmus, piirituslamp, filterpaber, sillaga kristallisaator preparaatide jaoks, pesupudel veega, mikroskoop. Värvainete vesilahused - fuksian, metüleensinine, emajuurvioletne, Tsilya karboolfuksiin, Sudaan III. Immersiooniõli, väävelhape 1%, tint, soolhape 0,5%, Lugoli lahus. kultuuridVas.subtilis, Vas.mycoides, S.cerevisiae, E.coli.

Põhimõisted.Mureiin, volutiin, nukleoid, glükogeen, kapslid, rakusein, polüsahhariidid, polüfosfaadid, metakromaatilised terad, monotrihhid, peritrichis, lofotrichid, batsillaarvorm, klostriidivorm, plektriidne vorm, eksiin, intiin, metakromoos.

Edusammud

Ülesanne number 1. Tuvastage polüfosfaatide (volutiini) lisamine pärmirakkudes.Seene- ja pärmirakkudes sisalduv volutiin paikneb tsütoplasmas vakuoolides, bakterites ja aktinomütseetides. See on varufosforit ja lämmastikku sisaldav aine, derivaat nukleiinhapped. iseloomulik omadus- metakroos, st võime omandada teist värvi kui seda värvivad ained.

Volutiini värvimine Omeljanski meetodil.Mikroorganismi kultuurist valmistatakse alusklaasil õhuke määre, kuivatatakse õhu käes, fikseeritakse leegil, värvitakse 30–40 s karboolfuksiiniga ja pestakse veega. Eristage, kastke see 20-30 sekundiks 1% väävelhappe lahusega kolbi ja loputage kohe veega. Väävelhape muudab tsütoplasma värvi ja volutiini terad jäävad magenta värviliseks. Preparaati värvitakse 20-30 s metüleensinisega (1:40), pestakse veega, kuivatatakse õhu käes ja uuritakse mikroskoobiga. Preparaadil on volutiini terad värvitud punaseks, rakkude tsütoplasma - siniseks (joonis nr 1, 2 lisa).

Ülesanne number 2. Lipiidigraanulite tuvastamine pärmirakkudes. Varuslipiidid pärmis ja niitjas seentes on esindatud neutraalsete rasvadega; bakterites täidab seda funktsiooni hüdroksüvõihape.

Rasvalisandite värvimine.Tilk Sudan III lahust lisatakse tilgale mikroorganismide vesisuspensioonile klaasklaasil, kaetakse katteklaasiga ja mikroskoobitakse VI-40 objektiiviga. Sudan III lahustub bakteriraku rasvhapetes, värvides need oranžikaspunaseks. Raku tsütoplasma jääb värvituks.

Ülesanne number 3. Tuvastage pärmirakkudes glükogeenitaolisi polüsahhariide. Süsivesikute loomuga varuained bakterirakkudes kogunevad graanulite kujul. Granuloos on tärkliselaadne aine, mis Lugoli reagendiga suhtlemisel muutub siniseks; glükogeen on polüsahhariid, mis muutub samadel tingimustel punakaspruuniks. Granuloosi leidub ainult prokarüootsetes rakkudes.

Glükogeen ja granuloosplekk.Tilk nõrka Lugoli lahust lisatakse objektiklaasil olevale mikroorganismisuspensiooni tilgale, kaetakse katteklaasiga ja mikroskoobitakse VI-40 objektiiviga.

Ülesanne number 4. Tuvastage bakteriraku kapslid negatiivse kontrasti abil (in Azotobakter).

Kapslite tuvastamine negatiivsel intravitaalsel preparaadil.Mikrobioloogilise silmusega hästi rasvatustatud slaidile kantakse suur tilk musta tinti, millesse viiakse tilk uuritavat mikroorganismikultuuri, jagatakse alusklaasi abil laiali ja kuivatatakse. Töötle sukeldussüsteemiga. Rümba tumedal taustal ilmuvad teravalt piiritletud rakkude ümber läbipaistvad kapslitsoonid (joonis nr 8. Lisa).

Ülesanne number 5. Tehke eoste ja tsütoplasma diferentsiaalne värvimine (in Sina. mükoiidid).

Ožeška meetod. Kuivatatud preparaat valatakse 0,5% vesinikkloriidhape ja kuumutatakse 2 minutit, kuni tekivad aurud. Määri pestakse veega, kaetakse filterpaberiga ja täidetakse Zieli karboolfuksiiniga. Värvige kuumutamisel 5 minutit, kuni ilmuvad aurud. Pestud veega ja diferentseeritud 1% väävelhappes 0,5-1 min (aeg määratakse empiiriliselt). Pesti veega ja värviti 30 metüleensinisega. Loputage uuesti, kuivatage ja uurige mikroskoobiga. Eosed on värvunud roosaks, tsütoplasma on sinine (lisa joon. nr 2).

Ülesanne number 6. Tehke bakteritele Grami värvimine. Bakterite rakuseinte keemilise koostise erinevus mõjutab nende värvimisvõimet Grami järgi. Selle põhjal jagatakse bakterid grampositiivseteks ja gramnegatiivseteks (tabel nr 3). Grampositiivsed kestad sisaldavad rohkem polüsahhariide, mureiini ja teikhoehappeid; gramnegatiivsetel kestadel on mitmekihiline struktuur ja kõrge lipiidide sisaldus (lipoproteiinid ja liposahhariidid). Grampositiivsed mikroorganismid moodustavad värvimisel põhivärviga alkoholis lahustumatu joodiühendi, gramnegatiivsetes mikroorganismides lahustub see ühend alkoholis.

Grami plekk.Objektiklaasile kantakse kolm määrdeainet ja seejärel töödeldakse neid korraga: teadaolevalt grampositiivsest bakterikultuurist, teadaolevalt gramnegatiivsest bakterikultuurist ja nende vahel uuritava mikroorganismi kultuurist pärit määrd. . Kasutatakse noori ühepäevakultuure.

Määrd kuivatatakse õhu käes, fikseeritakse põleti leegil ja värvitakse 1% emajuurvioleti vesilahusega 1 min. Värvaine pestakse maha Lugoli lahusega ja määrded valatakse 1 minuti jooksul sama lahusega. Preparaati pestakse veega ja diferentseeritakse 95% etanooliga kolvis (0,5-1,0 min). Pärast määrdumise diferentseerumist pestakse preparaat kohe põhjalikult veega ja värvitakse 2-3 minuti jooksul täiendava värvainega - fuksiini 0,1% vesilahusega. Lõpuks pestakse preparaati veega, kuivatatakse õhu käes ja mikroskoobitakse õliimmersiooniga. Preparaadil on grampositiivsed bakterid värvunud lilla-violetseks, gramnegatiivsed - roosa-vaarikaks (lisa joonis nr 2).

Tabel number 3. Bakterite ja Grami plekkide suhe

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Streptokokk

Proteus vulgaris

Bacillus subtilis

Pseudomonas aeruginosa

Sacharomyces

Shigella sp.

Kontrollküsimused ja ülesanded

Bakteriraku seina struktuur. Kapsli moodustumine.

Bakterite ja Grami plekkide suhe. Grampositiivsete ja gramnegatiivsete mikroorganismide eristavad tunnused.

Rakumembraan ja rakusisese membraani struktuurid.

Tuumaaparaat, koostis, korraldus ja replikatsioon.

Ribosoomid, gaasivakuoolid ja muud bakteriaalsed organellid; nende tähendus.

Bakterirakkude kandmised (polüsahhariidid, polüfosfaadid, lipiidid, väävli kandmised).

Bakterite paljunemise viisid. Sporulatsioon bakterites.

Flagella. bakterite liikumine. Taksod.

Küsimused iseõppimiseks

Mikroorganismide pärilikud tegurid.

Muutusi põhjustavad mehhanismid geneetiline teave mikroorganismid.

TEGEVUS #4

ÕHU JA VEE MIKROFLOORA KVANTITATIIVNE ARVESTUS

MIKROOBIARVU MÄÄRAMINE

Sihtmärk: Viia läbi õhu ja vee mikroorganismide kvantitatiivne arvestus.

Ülesanded

Õppida õhu ja vee mikrofloora kvantitatiivse arvestuse meetodeid.

Viia läbi õhu mikrobioloogiline analüüs ja vee sanitaar-bakterioloogiline uuring.

Materjalid ja seadmed.Petri tassid steriilse MPA-ga, steriilsed 1 ml pipetid, veevann, elektripliit, termomeeter, kraanivesi, tiigivesi, piirituslamp, tikud.

Põhimõisted.vee kogu mikroobide arv,õhu mikroobide koguarv, if-indeks, if-tiiter, sanitaar-indikatiivsed mikroorganismid, autohtoonne mikrofloora, allohtoonne mikrofloora, saprobaalsustsoonid.

Edusammud

Ülesanne number 1. Kasutage õhu TMC (mikroobide koguarvu) määramiseks kogemust.

Nakatumiseks avatakse Petri tassid katseruumis või õues 5 minutiks. Petri tassi kaas eemaldatakse ja asetatakse kõrvuti ilma ümber pööramata. Petri tassi kaanele märkige katse variant, külvikuupäev. Nakatunud Petri tassid asetatakse termostaati temperatuuril 25-28 °C.

2-3 päeva pärast loendatakse Petri tassi agarplaadil arenenud mikroorganismide kolooniate arv.Sel juhul võetakse arvesse järgmist: ligikaudsete hinnangute kohaselt (Omeljansky) 100 cm suurusel alal 2 5 minuti jooksul settib nii palju mikroorganisme ja eoseid, kui on 10 liitris õhus. Eeldame, et iga koloonia pärines ühest rakust või eosest. ESee meetod annab küll vaid ligikaudsed andmed, kuid võimaldab üsna täpselt tuvastada erinevate ruumide õhus olevate mikroorganismide suhtelist arvu.Täitke tabel number 4, tehke järeldused.

Näiteks: Petri tassist leiti 5 kolooniat, tassi raadius on 2 cm Pindala on S=πr 2 =3,14*4=12,5. Siis sisaldab 10 liitrit

Tabel number 4. Siseõhu mikroobide koguarv (TMC).

Liikide tuvastamiseks saab kasutada MPA plaatidel õhust eraldatud mikroorganismide kolooniaid. Kõige sagedamini eraldatakse õhust mikrokokkide, sarkiinide, mõnede batsillide ja bakterite kolooniad.

Ülesanne number 2. Kasutage vee TMF-i määramiseks kogemust.

Uurimiseks võetakse kraanivett steriilsetesse kolbidesse. Kolvist võetakse steriilse pipetiga 1 ml vett ja lisatakse sirgendatud söötmega (MPA) Petri tassile (selle temperatuur ei tohi olla kõrgem kui 45°C). Tass suletakse ja õrnalt kallutades segatakse toitainekeskkond, lastakse plaadil taheneda ja asetatakse termostaadi. 3-5 päeva pärast loendatakse Petri tassidel arenenud kolooniad ja määratakse bakterite arv 1 ml vees.

Pärast kolooniate loendamist määratakse vee mikroobide arv - mikroorganismide arv 1 ml uuritava vee kohta, võttes arvesse lahjendust, kui see on olemas.

Andmed vormistatakse tabeli nr 5 kujul, tehakse järeldused.

Tabel number 5. Mikroobide koguarv (TMC) joogivesi

kraanivesi

Kontrollküsimused

Õhu mikrofloora omadused. Mikroorganismide levik õhus.

Siseõhu sanitaarseisundi standardid.

Õhu sanitaar- ja mikrobioloogiline uuring.

Joogivee mikrofloora.

Looduslike vete mikrofloora. Mikroorganismide jaotumine vees.

Joogivee sanitaarnäitajad. Mikroobide koguarv vees. Kui-indeks, kui-tiiter vett.

Veekogude reostus ja isepuhastus. Mikroorganismide roll veekogude isepuhastumisprotsessides.

Joogi- ja reovee bioloogiline puhastamine.

Vee sanitaar-bakterioloogiline uuring. TMC, if-indeksi, if-tiitri määramine.

Õhu, vee, pinnase sanitaar-indikatiivsed mikroorganismid.

Nõuded sanitaar-indikatiivsetele mikroorganismidele.

Toiduainete mikrofloora (hapupiim, kala, liha, vorstid, konservid).

Toidu tooraine ja toidukaupade ohutuse hindamisel kasutatavate mikroorganismide rühmade tunnused.

Erinevate toiduainete sanitaar- ja bakterioloogilised standardid.

Toiduainete sanitaar-bakterioloogilise uurimise meetodid.

Muld kui mikroorganismide elupaik.

Mulla mikroorganismide leviku ökoloogilised tegurid.

Mulla mikroorganismide vahelised seosed.

Mulla mikrofloora osalemine orgaaniliste ainete mineraliseerumise ja huumuse moodustumise protsessides.

Mulla sanitaar- ja bakterioloogiline uuring.

TEGEVUS #5

MIKROORGANISMIDE PUHTA KULTUURI SAAMINE

KVANTITATIIVSETE MIKROORGANISMIDE NEHELOMEETRILINE MEETOD

Sihtmärk: Teostada mikroorganismide puhaskultuuride eraldamist, omandada mikroorganismide arvu arvestamise nefelomeetriline meetod.

Ülesanded

Viia läbi puhaskultuuri isoleerimine "kurnava" insuldi meetodil.

Mikroorganismide kvantifitseerimine nefelomeetrilise meetodiga

Materjalid ja seadmed.Petri tassid steriilse MPA-ga, FEK, Gorjajevi kaamera, mikroskoobid, mikrobioloogilised aasad, piirituslamp, tikud.

Põhimõisted. Puhaskultuur, kasv, paljunemine, binaarne lõhustumine, tärkamine, rakutsükkel (monomorfne, dimorfne, polümorfne), generatsiooniaeg, kasvu erikiirus, biomassi saagikus, majanduslik tegur, statsionaarne kasvufaas, viivitusfaas, eksponentsiaalne paljunemise faas, statsionaarne faas, suremine faas, stagnatsioonikultuur, voolukultuur, sünkroonkultuur.

Edusammud

Ülesanne number 1. Mikroorganismide puhaskultuuri saamine

Aeroobide puhaskultuuride eraldamine toimub rikastuskultuuri sõelumisega tahke toitekeskkonna pinnal. Külvamine toimub ammendava löögimeetodiga. Pärast kolooniate kasvu kontrollitakse isoleeritud kolooniate puhtust visuaalselt ja mikroskoobiga. 3-6 päeva pärast valitakse välja ja kirjeldatakse isoleeritud mikroorganismide koloonia (kasutades lisa jooniseid).Kolooniat kirjeldatakse järgmiselt:

Koloonia suurus: täpiline (D - alla 1 mm), väike (D - 1-2 mm), keskmine (D - 2-4 mm) ja suur (D - 4-6 mm või rohkem).

Koloonia kuju on ümmargune, amööboidne, risoidne.

Optilised omadused - läbipaistev, matt, fluorestseeruv, poolläbipaistev (läbipaistev), läbipaistmatu, läikiv.

Värv – märkige koloonia värvus ja pigmendi eraldumine söötmesse.

Pind on sile, kare, volditud, konarlik.

Profiil - lame, kumer, kraatritaoline, agariks kasvav jne.

Koloonia serv on sile, laineline, labane, risoidne jne.

Koloonia struktuur on homogeenne, peene või jämedateraline.

Konsistents - õline, pastane, viskoosne, kilejas.

Ülesanne number 2. Viia läbi mikroorganismide kvantitatiivne hindamine nefelomeetrilise meetodiga.

a) Nefelomeetriline meetod.rakkude tihedus S.cerevisiae Vedelas keskkonnas määratakse nefelomeetriliselt (FEC), kasutades küvetti optilise tee pikkusega 0,5 cm ja rohelise valguse filtrit (A = X 540 nm). Usaldusväärsete tulemuste saamiseks peaks rakkude tihedus olema vahemikus 0,1-0,6. Kui rakukontsentratsioon on üle 0,6, tekib sekundaarne valguse hajumine, mille tulemuseks on alahinnatud tulemused. Seetõttu tuleks suure tihedusega suspensioone enne valguse läbilaskvuse mõõtmist lahjendada veega 2, 4, 6, 8 ja 10 korda. Iga suspensiooni optilise tiheduse mõõtmistulemused (kontrolliks on vesi) on kirjas tabelis nr 6.

b) Rakkude loendamine Gorjajev-Tomi kambris.Fotoelektrokolorimeetri (FEC) näitude vahetamiseks söötmes olevate mikroorganismide rakkude arvule loendatakse nende arv Goryaev-Toma loenduskambri ja pärmi suspensiooni lahjenduste abil, mida kasutati nende tiheduse määramiseks nefelomeetrilise meetodiga. Lahtrid loendatakse suurtes ruudustikuruutudes, kasutades 8* objektiivi. Koguarv loendatud rakke peaks olema vähemalt 600. Rakkude arv 1 ml vastavas suspensioonis arvutatakse valemiga M = 1000*a*n/h*S, kus M on rakkude arv 1 ml suspensioonis; a on lahtrite keskmine arv suures ruudustikuruudus; h on kambri sügavus (1/10 mm); S on suure ruudustiku pindala (1/25 mm 2 ); n on suspensiooni lahjendusaste; 1000 mm 3 - 1 ml. Saadud tulemused, miljon rakku 1 ml-s, on registreeritud tabelis. nr 6.

Tabel number 6. Pärmirakkude arv suspensioonis, mis on määratud Gorjajevi kaameraga, ja vastavad FEC näidud

FEK näidustused

Koostage tabeli andmete põhjal kalibreerimiskõver. nr 6, kandes abstsissteljele pärmirakkude arvu ja ordinaatteljel vastava suspensiooni optilise tiheduse. Kalibreerimiskõver on koostatud, et kiiresti määrata teatud tüüpi mikroorganismide rakkude arv FEC näitude järgi.

Kontrollküsimused ja ülesanded

Akumulatiivsed kultuurid ja valikulisuse printsiip. Puhaskultuurid, valmistamismeetodid ja tähendus.

Mikroorganismide paljunemine.

Bakterite rakutsüklid. Üksikute mikroorganismide ja populatsioonide kasv. Tasakaalustatud ja tasakaalustamata kasv.

Põllukultuuride kasvuparameetrid: generatsiooniaeg, kasvu erikiirus, biomassi saagikus, majanduslik tegur.

Kasvukõverad, üksikute faaside tunnused. Mikroorganismide kasv pideval kasvatamisel. Sünkroonsed kultuurid.

TEGEVUS #6

TOIDUAINETE SANITAAR-BAKTERIOLOOGILINE UURING

Sihtmärk: Viia läbi toidu seisundi sanitaar-bakterioloogiline hindamine.

Ülesanded

1. Määrake teatud toiduainete mikroobide koguarv.

2. Määrake BGKP (Escherichia coli rühma bakterid) olemasolu.

Materjalid ja seadmed.Petri tassid MPA-ga, Petri tassid Endo söötmega, 1 ml pipetid, uhmrid uhmritega, skalpellid, katseklaasid 9 ml steriilse veega, katseklaasid Kessleri söötmega, steriilsed kolvid 100 ml veega, kaalud.

Põhimõisted.Toiduainete spetsiifiline mikrofloora, toiduainete mittespetsiifiline mikrofloora, BGKP, sanitaar-indikatiivsed mikroorganismid.

Edusammud

Ülesanne number 1. Määrake BGKP olemasolu ja toiduainete kogusaaste, tehes järjestikku järgmisi samme:

1. Toiduainete ettevalmistamine uurimistööks.

Jahvatage steriilses portselanmördis 10 g proovi (võetud steriilselt erinevatest kohtadest), lisades järk-järgult 90 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust ja jätke toatemperatuurile mitmeks minutiks seisma. Seejärel klopitakse laia ninaga steriilse pipetiga maha inokuleerimiseks ja lahjendamiseks mõeldud suspensioon (1 ml). Eeldatakse, et 1 ml valmistatud suspensiooni sisaldab 0,1 g algprodukti (lahjendus 10-1 ). Vedela konsistentsiga tooteid külvatakse ja kasvatatakse põllukultuuride jaoks ilma eelneva ettevalmistamiseta.

2. Toidulahjenduste valmistamine külvamiseks.

Vedela konsistentsiga toodete jaoks valmistatakse lahjendused järgmiselt: 1 ml toodet võetakse steriilse pipetiga ja lisatakse katseklaasi, mis sisaldab 9 ml steriilset isotoonilist naatriumkloriidi lahust, segatuna. Saadud lahjendus (10-2 ) lahjendatakse samal viisil täiendavalt vajalik arv kordi (10-kordne).

Joonis nr 1. Lahjenduste valmistamine ja mullasuspensiooni külvamine tahkele toitekeskkonnale

3. Kogusaaste määramine.

Inokuleerimiseks valitud lahjendused lisatakse 1 ml steriilsetele Petri tassidele sulatatud temperatuuril 45–50 °C. 0 MPA, mille järel need segatakse. Söötmel lastakse tahkuda, põllukultuure kasvatatakse päeva jooksul 37°C juures, seejärel loendatakse kasvanud kolooniate arv (CFU). Määrake bakterite koguarv 1 ml või 1 g tootes.

4. BGKP olemasolu määramine.

Külvamiseks kasutatakse toote kogust, milles vastavalt kehtestatud normidele on ette nähtud CGB puudumine. Uuritud tooteproovide valitud lahjendustest võetakse 1 ml ja nakatatakse katseklaasidesse Kessleri söötmega. Inokuleeritud katseklaase inkubeeritakse 24 tundi temperatuuril 37° C. Kasvumärkide puudumisel (gaaside moodustumine või söötme värvuse muutused) tehakse järeldus uuritava toote standardile vastavuse kohta. Kasvumärkide olemasolul külvatakse Endo söötmele. Põllukultuure inkubeeritakse 18-20 tundi 37°C juures. Põllukultuuride vaatamisel täheldatakse kahtlaseid või CGB-le tüüpilisi kolooniaid (moodustavad punased, roosad, kahvaturoosad kolooniad metallilise läikega või ilma). Neid kasutatakse elus- ja fikseeritud rakkude preparaatide valmistamiseks, Gramiga värvitud ja mikroskoobi all. Gramnegatiivsete, eoseid mittemoodustavate ümarate otstega varraste tuvastamine näitab CGB võimalikku olemasolu.

Andmed kogusaaste ja Escherichia coli esinemise kohta on kantud tabelisse. Tehke järeldused erinevate toiduainete mikrofloora kohta, kasutades sanitaar- ja mikrobioloogilisi standardeid (SanPiN 2.3.2.560-96) (tabel nr 7).

Tabel number 7. Mõned sanitaar- ja bakterioloogilised standardid (SanPiN 2.3.2.560-96)

Juust vene

0,001

Jäätis

1*10 5

0,01

Kontrollküsimused, vt õppetund number 4.

TEGEVUS #7

MULLA MIKROBOTSENOOOSID

Sihtmärk: Uurida mulla mikroorganismide liigilist koosseisu ja levikut.

Ülesanded

1. Uurida mulla mikrofloora olemust ja domineerivaid liike.

2. Tehke mulla mikrofloora kvantitatiivne ja kvalitatiivne arvestus.

Materjalid ja seadmed.Slaidid, steriilsed Petri tassid MPA-ga,kaalud, raskused, skalpell, mört, kummikinnas, kolb steriilse destilleeritud veega 90 ml, steriilne kolb 250 ml, katseklaasid 9 ml steriilse veega, pipetid 10 ml ja 1 ml, mikropipetid 0,1 ml, klaaslabidad.

Edusammud

Ülesanne number 1. Uurida pinnase ja risosfääri mikrobiotsenooside olemust klaasi saastumise meetodil (Kholodny järgi).

Tasasel mullapinnal tehakse noaga lõige, mille sügavus sõltub uuritavast horisondist. Pestud ja rasvatustatud klaasid (võtetakse mitu klaasi korraga) surutakse tihedalt vastu lõikekoha vertikaalset seina ja kaetakse mullaga. Klaase hoitakse mullas nädalast mitme kuuni.

Pärast kokkupuuteaja möödumist eemaldatakse klaaside tagaküljelt mustus, klaaside katsepind kuivatatakse õhu käes ja kinnitatakse kolm korda, juhtides tagumist külge üle põleti leegi. Pärast kinnitamist kastetakse klaas katsepinnaga allapoole vette, ilma seda põhja viimata. Pärast pesemist kastetakse preparaat 30 minutiks kuni 24 tunniks karboolse erütrosiini lahusesse.Pearendatud preparaate uuritakse mikroskoobi all immersioonisüsteemiga. Mikroskoopimisel märgitakse ära mikrofloora olemus, klaaside määrdumise tihedus ja domineerivad vormid.

Ülesanne number 2. Tehakse pinnase TMC määramine.

Mullasuspensiooni valmistamine lahjendusmeetodil.Steriilsust jälgides kaaluge 10 g mulda ja viige see steriilsesse mörti. Niisutage mullaproov uhmris pastataoliseks, lisades esimesest 90 ml steriilset vett sisaldavast kolvist 2–3 ml vett, ja hõõruge 5 minutit sõrmega kummikinnas. Pärast jahvatamist viiakse mördi pinnas veega üle teise kuiva kolbi, saadakse esimene lahjendus - 1/10. Kolvis olevat mullasuspensiooni loksutatakse 5 min, lastakse seista 30 s ja seejärel viiakse 1 ml mullasuspensiooni kolvist 9 ml steriilse destilleeritud veega steriilse pipetiga katseklaasi nr 1. saadakse teine ​​lahjendus - 1/100. Sarnaselt valmistatakse mullasuspensiooni järgnevate lahjenduste seeria -1/1000, 1/10000, 1/100000 ja rohkem, sõltuvalt eeldatavast mikroorganismide arvust (joonis nr 1, õppetund nr 6).

Bakterite isoleerimiseks ja kvantifitseerimiseks külvatakse mullasuspensioon ühele toitekeskkonnast (MPA, KAA, mullaagar, Ashby sööde; aktinomütseedi arvestamiseks kasutatakse KAA või Chapeki söödet). Bakterite kolooniad Petri tassidel loendatakse 3-5 päeva pärast, seened ja pärmseened - 5-7, aktinomütseedid - 7-15. Mikroorganismide sisaldus 1 g mullas määratakse valemiga: a \u003d b * c, kus a - mikroorganismide arv 1 grammis mullas, b on kolooniate keskmine arv, V - aretus. Võrrelge mulla, vee ja õhu mikrofloora liigilist koosseisu ja mitmekesisust ning tehke järeldus.

Kontrollküsimused ja ülesanded, vaata õppetundi number 4.

TEGEVUS #8

LÄMMASKUÜHENDITE MUUTMINE MIKROORGANISMIDE POOLT

Sihtmärk: Uurida mikroorganismide transformatsiooniprotsesside iseärasusi orgaanilised ühendid lämmastik.

Ülesanded

Uurida valkude ammonifikatsiooni protsessides osalevaid mikroorganisme.

Uurea ammonifikatsiooni protsessides osalevate mikroorganismide uurimine.

Materjalid ja varustus:Valgu ja karbamiidi ammonifikatsiooniprotsessi reprodutseerimiskeskkond, mikroskoobid, seadmed mikropreparaatide valmistamiseks.

Põhimõisted.Ammonifikatsioon, proteaasid, peptidaasid, ureaas, deamineerimine, dekarboksüülimine.

Edusammud

Ülesanne number 1. Valkude ammonifikatsiooni teostavate mikroorganismide uurimiseks joonistage pilt. Valguainete ammonifikatsiooni uurimiseks võib toitekeskkonnana kasutada lihapuljongit, millele on lisatud 3% peptooni.30 ml söödet valatakse 100 ml kolbi ja lisatakse 1/3 teelusikatäit mulda. Kolvid suletakse vatikorkidega. Söötme kohale riputatakse kaks paberitükki – punane lakmus ehk universaalne indikaatorpaber, mis on niisutatud destilleeritud veega, et tuvastada eralduvat ammoniaaki ja filterpaber, mis on niisutatud leeliselise pliatsetaadi lahusega, et tuvastada vesiniksulfiidi ja merkaptaani. Kinnitage need korgi ja kolvi kaela seinte vahele. Paberid ei tohi puudutada kandjat. Inkubeerimise 3.–5. päeval temperatuuril 28–30 °C analüüsitakse kolvi sisu. Määratakse valkude ammonifikatsiooniprotsessi põhjustajad ja nende ainevahetusproduktid.

Mikroskoopia.Valguainete putrefaktiivse lagunemise patogeenide tuvastamiseks valmistatakse elusbakterite preparaat purustatud tilgana, samuti fikseeritud ja värvitud preparaat. Teistest sagedamini leidub preparaadil mobiilseid rakke. Proteus vulgaris (Avalduse joonis nr 4)valdav valkude lagunemise esimestel etappidel. Need on eoseid mittemoodustavad, ebavõrdse pikkusega pulgad. Lisaks on preparaadil palju eoseid moodustavaid rakke. Bacillus mycoides ja Clostridium sp. (Joon. nr 1, 4 lisa). Viimases paiknevad eosed terminaalselt ja nende läbimõõt ületab raku laiuse. Sina. mükoiidid põhjustab valkude ammonifikatsiooni aeroobsetes tingimustes ja C. putrificus - anaeroobses, kuid võib areneda ka aeroobsetes tingimustes, kui keskkond sisaldab aeroobseid mikroorganisme, mis neelavad hapnikku.

NH vabanes atmosfääri 3, määrib punase lakmuspaberi riputatud riba siniseks. Pliipaber mustab vesiniksulfiidi mõjul, kui see on kaetud hõbedase kattega, mis tähendab, et koos H-ga 2 Samuti vabanevad S-merkaptaanid (näiteks metüülmerkaptaan CH 3SH).

Ülesanne number 2. Karbamiidi ammonifikatsiooni protsessides osalevate mikroorganismide uurimiseks tehke joonis. Karbamiidi ammonifikatsiooni protsessi jälgimiseks võite kasutada järgmise koostisega toitainekeskkonda (g / l destilleeritud vett): kaalium- või naatriumtartraat (viinhape, võite soolata õunhapet) - 5,0; uurea - 5,0; TO 2 NRO 4 - 0,5; MgS047H20 - 0,2.

Sööde valatakse 100 ml kolbidesse, igaüks 30 ml, nakatatakse mullaga ja asetatakse 25–30 °C termostaadi. Ammoniaagi tuvastamiseks riputatakse vatikorgi alla punase lakmuspaberi riba. 3-5 päeva pärast analüüsitakse kultuuri. Määrake ammoniaagi vabanemine punase lakmuspaberi sinisel värvil.

Mikroskoopia.Karbamiidi ammonifikatsiooni põhjustajate uurimiseks valmistatakse preparaat söötme pinnal olevast vaevumärgatavast kilest ja värvitakse fuksiaga. Kõige sagedamini nähakse rakke mikroskoobi all. Urobacillus pasteurii (te. probatus), harvem - Planosarcina ureae (Avalduse joon. nr 5).

Kontrollküsimused ja ülesanded

lämmastiku mineraliseerumine. Valkude ammonifikatsioonis osalevad bakterid.

Nukleiinhapete lagunemine.

Karbamiidi, kusi- ja hippurihappe lagunemine.

Nitrifikatsiooniprotsesside iseloomustus. Mikroorganismid, mis toodavad pinnases nitraate.

Nitraatide ja nitritite taaskasutamine looduses.

Denitrifikatsioon (dissimilatsiooninitraadi redutseerimine).

Assimilatsiooninitraatide vähendamine.

Lämmastiku sidumine vabalt elavate mikroorganismide poolt.

Assotsiatiivne lämmastiku sidumine.

Sümbiootiline lämmastiku sidumine. Sõlmebakterite omadused.

Sõlmebakterite koostoime peremeestaimega. Bakteroidide moodustumine.

Mitteliblikõieliste taimede sümbiootiline lämmastiku sidumine.

Lämmastiku sidumisprotsesside keemia.

14. Täida tabel number 8.

Tabel number 8. Lämmastikutsükli protsesside ja lämmastikuühendite muundamises osalevate mikroorganismide omadused

Karbamiidi ammonifikatsioon

Nitrifikatsiooni I faas

Sümbiootiline lämmastiku sidumine

TEGEVUS #9

LÄMMASKUÜHENDITE MUUDUMINE MIKROGANISMIDE POOLT

Sihtmärk: Uurida lämmastiku mineraalsete ühendite muundumisprotsesside iseärasusi mikroorganismide poolt.

Ülesanded

1. Uurida nitrifikatsiooniprotsesside (I, II faas) kulgemise iseärasusi ja neis osalevaid mikroorganisme.

2. Uurida denitrifikatsiooniprotsesside iseärasusi ja neis osalevaid mikroorganisme.

3. Uurida lämmastiku sidumise protsesside iseärasusi ja neis osalevaid mikroorganisme.

Materjalid ja seadmed.Kolvid vedela Ashby söötmega lämmastikufiksaatorite kultiveerimiseks, Winogradsky söötmega nitrifikaatorite kultiveerimiseks, Giltai söötmega denitrifikaatorite kultiveerimiseks, seadmed mikropreparaatide värvimiseks, mikroskoobid.

Põhimõisted.Nitrifikatsioon (I ja II faas), lämmastiku immobilisatsioon, assimilatsiooninitraadi redutseerimine, dissimilatsiooninitraadi redutseerimine (denitrifikatsioon), lämmastiku sidumine vabalt elavate mikroorganismide poolt, assotsiatiivne lämmastiku sidumine, sümbiootiline lämmastiku sidumine, leghemoglobiin, lämmastikreduktasetraat.

Edusammud

Ülesanne number 1. Uurida nitrifikatsiooniprotsessides osalevaid mikroorganisme, joonistada pilt. Nitrifitseerivate bakterite akumuleerimiseks kasutatakse S. N. Vinogradsky toitainekeskkonda (g / l destilleeritud vett):

Sööde steriliseeritakse ja valatakse 1,0–1,5 cm paksuse kihiga kolbidesse ja nakatatakse kasvuhoonemulla tükiga. Kolvid suletakse vatikorkidega ja asetatakse 14.–21. päeval termostaadi temperatuurile 25–28 °C.

Mikroskoopia.Nitrifitseerivate bakterite uurimiseks valmistatakse vedelikust kolbides mikropreparaadid. Mikroskoobi vaateväljas on näha ovaalsete või kookosrakkude klastrid Nitrosomonas (esimene faas) ja lühikesed varrasrakud Nitrobakter (teine ​​faas). Perekonna esindajad Nitrosomonas (Avalduse joonis nr 6)on ovaalse kujuga, mõnel juhul lähenevad pallile, on liikuvad ja varustatud ühe pika lipuga. Erinevad tüübid Nitrosomonas on pinnases väga levinud ja erinevad üksteisest nii rakkude suuruse või kuju kui ka seose poolest keskkonna aktiivse reaktsiooniga. Enamik uuritud Nitrosomonas europea. Rakud on kookoidsed või ovaalsed, 0,5–1,5 µm suurused, liikuvad, pika polaarse lipukesega. Nitrobakter - väikesed ümarad, muna- või pirnikujulised pulgad, liikumatud, üksikud või ühendatud väikestesse rühmadesse, ümbritsetud limakapsliga(Avalduse joonis nr 7). Selle perekonna bakterite hulgas on tavaks eristada kahte tüüpi: Nitrobacter winogradskii ja Nitrobacter agilis.

Samuti viiakse läbi ammooniumivormi oksüdeerimine nitritivormiks Nitrosocystis ja Nitrosospira , nitrit nitraadiks Nitrospina.

Ülesanne number 2. Denitrifikatsiooniprotsesse läbi viivate mikroorganismide uurimiseks joonistage pilt. Denitrifitseerivate bakterite akumuleerimiseks kasutatakse järgmist söödet (g/l): Rochelle'i sool - 20; KNO 3 - 2,0; K 2 NRO 4 - 0,5; MgS047H20 - 0,2; FeSO 4 7H 2 Oh jälgi. Sööde valatakse kõrge kihina ääreni suurtesse katseklaasidesse ja steriliseeritakse. Sega õhumullide eemaldamiseks põhjalikult mullaga ja kata kummitoruga, millesse on torgatud kahelt poolt avatud klaastoru, mis on keskosas laiendatud. Kork tõrjub osa vedelikust klaastorusse. Korgi all ei tohiks olla õhumulle. Vaseliiniõli valatakse anaeroobsete tingimuste loomiseks väikese kihina söötme kohal olevasse torusse, asetatakse 5-6 päevaks termostaadi temperatuurile 30-35 ° C.

Mikroskoopia.Substraadi keskelt võetakse puhta pipetiga tilk ning valmistatakse fikseeritud ja peitsitud preparaat, mida seejärel uuritakse sukeldumissüsteemiga mikroskoobi all. Preparaadis domineerivad eoseid mittemoodustavad sfäärilised rakud või lühikesed vardad Paracoccus denitrificans (Bacterium denitrificans ) (lisa joonis nr 7). Rochelle'i soolaga söötmel areneb sageli P. stutzeri (Achromobacter stutzeri - vardakujulised rakud suurusega 2,0 - 4,0 mikronit, mobiilsed) (lisa joon. nr 7). Sel juhul moodustab kultuur rohekaskollase fluorestseeruva pigmendi. Denitrifikaatorite hulka kuuluvad ka: Pseudomonas aeruginosa - väikesed vardad (suurusega 1,0 - 1,5 mikronit), üksikud või paaris, mobiilsed, kannavad 1 - 2 polaarset vippu. Sageli täheldatakse söötme rohelust, eriti sidrunhappe süsiniku kasutamisel, mis viitab arengule Pseudomonas fluorescens - väikesed vardad (suurusega 1,0 - 2,0 mikronit), mobiilsed, neil on 3 - 4 polaarset lipukest.

Ülesanne number 3. Õhulämmastiku fikseerimisega seotud mikroorganismide uurimiseks, pildi joonistamiseks. Ashby söödet kasutatakse vabalt elavate lämmastikufiksaatorite kogumiseks. Toitekeskkonna koostis (g/l destilleeritud vett):mannitool, glükoos või sahharoos - 20,0; TO 2 NRO 4 - 0,2; MgS04 - 0,2; NaCl - 0,2; K2S04 - 0,1; CaCO3 - 5,0.

Toitekeskkond ilma steriliseerimiseta valatakse 100–150 ml mahuga kolbidesse, mille kiht on 1–1,5 cm ja nakatatakse kasvuhoonemullaga (1/3 teelusikatäit). Kolvid suletakse vatikorkidega ja asetatakse termostaati temperatuurile 28–30 °C.

5-7 päeva pärast moodustub söötme pinnale pruunikaspruun Azotobakteri kile. Kolvis olev vedelik vahutab ja eritab võihappe lõhna, mis viitab bakterite arengule keskkonnas. Cl. pasteurianum.

Mikroskoopia.Pinnakilest valmistatakse fikseeritud mikropreparaat. Kaks levinumat Azotobakteri tüüpi on: Azotobacter chroococcum - noores kultuuris on pulgakujulised rakud, liikuvad, suurusega 3–7 mikronit(Avalduse joonis nr 8). Vanas kultuuris on rakud kookoidsed, paaris- ja sarksiinilaadsed pakikesed, mida tavaliselt ümbritseb limakapsel. Rakkudes on palju läikivaid volutiini terakesi. Tihedal toitainekeskkonnal asuvad kolooniad on limased, laialivalguvad või kumerad, värvitud või tumepruunid kuni mustad; Azotobacter vinelandii - noores kultuuris on rakud vardakujulised, suurusega 2-3 mikronit. Vanas kultuuris on rakkude kuju sfääriline. Ravim valmistatakse tilgast vedelikust Clostridium pasteurianum - liikuvad vardakujulised rakud, suurusega 3-7 mikronit, üksikud või paarikaupa ja lühikeste ahelatena(Avalduse joonis nr 1.10). Eosed on ovaalsed, moodustuvad ekstsentraalselt, spoore kandvad rakud võtavad sidruni kuju. Rakkudesse koguneb palju granuloosi. Kolooniad valkjad, siledad, läikivad.

Kontrollküsimused, vt õppetund number 8.

TEGEVUS #10

Sihtmärk:

Ülesanded:

Uurida alkohoolse käärimise mehhanismi ja selle patogeenide morfoloogiat.

Uurida piimhappekäärimise kulgu ja liike, selle patogeenide morfoloogiat.

Uurida alkoholi äädikhappeks muutumise iseärasusi ja äädikhappebakterite morfoloogiat.

Uurida võihappe kääritamise mehhanismi ja selle patogeenide morfoloogiat.

Materjalid ja seadmed. Soolvesi, keefir, pagaripärm, õlu, võihappebakterite sööde, preparaatide värvimisseadmed, mikroskoobid.

Põhimõisted.Alkohoolne käärimine, Pasteuri efekt, homofermentatiivne piimhape, heterofermentatiivne piimhape.

Edusammud

Ülesanne number 1. Alkohoolses kääritamises osalevate mikroorganismide uurimiseks joonistage pilt. 250 ml kolbi valatakse 50 ml 20% sahharoosilahust ja umbes 1 g pärmi, mis on lahjendatud 10 ml sahharoosilahuses (20%). Sulgege ja hoidke temperatuuri umbes 35-40 °C mitu päeva.

Mikroskoopia.Enamik praktikas kasutatavaid kultiveeritud pärme kuulub perekonda Saccharomyces (Saccharomyces cerevisiae, riis. nr 1, 2 avaldust) ja Schizosaccharomyces. Need pärmid erinevad metsikutest selle poolest, et taluvad kõrgeid suhkru- (kuni 70%) ja alkoholi (kuni 14%) kontsentratsioone, arenevad pH 4-6 juures ning moodustavad vähem käärimise kõrvalsaadusi.

Ülesanne number 2. Piimhappe fermentatsioonis osalevate mikroorganismide uurimiseks joonistage pilt.Piimhappekäärimise (homofermentatiivne käärimine) bakteritega tutvumiseks saab kasutada valmis piimhappetooteid (kalgendatud piim, acidophilus, keefir) ja soolvett (heterofermentatiivne fermentatsioon). Need tooted kantakse slaidile ja tehakse õhuke määrdumine. Värvige 3-5 minutit metüleensinise vesilahusega.

Mikroskoopia.Piimhappetoodetes leitakse kõige sagedamini järgmisi homofermentatiivse fermentatsiooni patogeene - Streptococcus lactis (lisa joon. nr 9), millel on 0,5-1,0 mikroni läbimõõduga ovaalsed kokid, paiknevad kultuuris paarikaupa (diplokokid) või lühikeste ahelatena (streptokokid), harvemini üksikutes rakkudes; Lactobacillus bulgaricus (lisa joon. nr 9) - suur varras (4-5 mikronit pikk), liikumatu, grampositiivne, paikneb üksikute rakkude ja lühikeste ahelate kujul, optimaalne arengutemperatuur on 40-45 ° C; Lactobacillus acidophilus - morfoloogias on see lähedane bulgaaria omale, kuid tal on erinev arengutemperatuuri optimum - 37 ° C.

Heterofermentatiivse fermentatsiooni põhjustajate hulgas on tavaliseltLactobacillus brevis, Lactobacillus brassicae, Leuconostoc mesenteroidesja teised (soolvee mikrofloora). Valge või kreemjas sametine kortsus kile soolvee või keefiri pinnal viitab selle olemasolule. Geotrichum candidum ( Oidium lactis) (lisa joon. nr 9) - piimhappekäärimisega alati kaasas käiv piimahallitus.

Ülesanne number 3.Alkoholi äädikhappeks muutmisel osalevate mikroorganismide uurimiseks joonistage pilt.Koonilistesse kolbidesse valatakse õhuke kiht õlut (0,5-1,0 cm3). Kolvid suletakse vatikorkidega ja asetatakse 30°C temperatuuriga termostaadi. 5-7 päeva pärast kirjeldatakse moodustunud kilede olemust, värvitud määrdeid uuritakse mikroskoopiliselt.

Mikroskoopia.Äädikhappebakterid on perekonda ühendatudAtsetobakter, tüüpi vaadeAtsetobakter(lisa joon. nr 9) on kujutatud nõrgalt liikuvate vardakujuliste elliptiliste rakkudega, mille laius on 0,6-0,8, pikkus 1,0-3,0 µm, üksikud, paaris või ahelas. Moodustab sageli involutsioonilisi vorme paistes, hargnenud või filiformsete moodustiste kujul. Äädikhappebakterid on õllest kergesti eraldatavad.

Ülesanne number 4.Võihappe fermentatsioonis osalevate mikroorganismide uurimine. Lõika koorimata kartulid viiludeks, täida nendega katseklaas 1/3 mahust, lisa näpuotsaga kriiti ja täida ääreni veega. Katseklaasid asetatakse 10-15 minutiks veevanni, mille temperatuur on 80°C. Seejärel suletakse katseklaasid ja viiakse termostaadile, mille temperatuur on 25 °C0 C. 2-3 päeva pärast leitakse vedelikust võihappekäärimise baktereid.

Mikroskoopia.On fikseeritud preparaadid on leitudCl. pasteurianum, Cl. butiricum(lisa joon. nr 1, 10) - ümarate otstega liigutatavad pulgad, üksikud ja paaris. Vanades kultuurides leidub eos raku ühes otsas.

Kontrollküsimused

Alkohoolne kääritamine.

Pärm. Vorm, struktuur, reprodutseerimine ja klassifikatsioon.

Etüülalkoholi oksüdeerimine äädikhappeks.

Piimhappekäärimise keemia ja tekitajad (homofermentatiivne tüüp).

Keemia ja piimhappekäärimise tekitajad (heterofermentatiivne tüüp).

Võihapeja atsetobutüülfermentatsioon.

Pektiinsete ainete võikäärimine.

Kiudude anaeroobne lagunemine.

Kiudude oksüdeerimine mikroorganismide poolt.

Täida tabel nr 9 "Käärimisprotsesside tunnused."

Tabel number 9.Süsiniku muundamise protsesside (lämmastikku mittesisaldavate ühendite käärimis- ja oksüdatsiooniprotsessid) iseloomustus

Küsimused iseõppimiseks

Toitumise meetodid ja toitainete sisseviimine rakku.

Mikroorganismide toitumisvajadused.

Mikroorganismide toitumise tüübid.

Mikroorganismide ainevahetus. Fermentatsioon, hingamine, fotosüntees.

TEGEVUS #11

SÜSIKUÜHENDITE MUUDUMINE MIKROORGANISMIDE POOLT

Sihtmärk:Tutvuge funktsioonidega mitmesugused kääritamine ja nende patogeenide morfoloogia.

Ülesanded:

Uurida pektiini fermentatsiooni mehhanismi ja selle patogeenide morfoloogiat.

Uurida tselluloosi aeroobsetes tingimustes transformatsiooni iseärasusi ja patogeenide morfoloogiat.

Uurida tselluloosi kääritamise tunnuseid anaeroobsetes tingimustes ja selle patogeenide morfoloogiat.

Materjalid ja seadmed. Mikroorganismide akumulatiivsed kultuurid, mis viivad läbi pektiinainete kääritamist, kiudude lagundamist, mikroskoobid, preparaatide värvimisseadmed.

Põhimõisted.Võikäärimine, pektiin, pektinaas, tselluloos, tsellulaas.

Edusammud

Ülesanne number 1.Uurida pektiinainete kääritamisel osalevaid mikroorganisme, joonistada pilt. Pektiini hävitavate bakterite isoleerimiseks kasutatakse linaseemne või nõgese toitekeskkonda. Varredest valmistatakse 5–7 cm pikkused viilud, asetatakse katseklaasidesse, valatakse kraaniveega ja keedetakse 10–15 minutit. Keetmisel eemaldatakse ekstraktiivained, mis võivad olla süsinikuallikaks kaasnevatele võihappebakteritele. Vesi tühjendatakse, rattad täidetakse uue veega, katseklaasid suletakse tihedalt vatikorkidega ja steriliseeritakse autoklaavis 1 atm juures 20 minutit. Kui torud on jahtunud, nakatatakse sööde värske linaõlgede tükiga. Nakatunud katseklaasid asetatakse termostaati temperatuuril 35 °C. 3-5 päeva pärast algab pektiini käärimisprotsess, vedelik muutub häguseks ja vahutab.

Mikroskoopia.Pektiini fermentatsioonibakterite morfoloogia uurimiseks valmistatakse elukestvaid preparaate. Snopik võetakse katseklaasist välja, tilk vedelikku pressitakse klaasklaasile, valmistatakse fikseeritud ja eluaegsed preparaadid (Lugoli lahuses). Preparaadil on nähtavad rakudClostridium pectinovorumJaClostridium felsineum, vegetatiivne ja sporuleeriv, joodiga värvitud granuloosi jaoks tumesinisega (lisa joon. nr 9).

Ülesanne number 2.Kiudude lagunemisel osalevate mikroorganismide uurimiseks (anaeroobsed tingimused) joonistage pilt.Anaeroobsete vormide akumulatsioonikultuuri saamisekstselluloosi hävitavad bakteridkasutada Imshenetsky keskkonda. INümmargusse lamedapõhjalisse kolbi lisatakse umbes 1–2 g filterpaberit või vatti ja täidetakse ülaosaga järgmise koostisega söötmega (g/l): KNH4 HPO4 – 1,0; KN2 RO4 – 0,5; TO2 NRA4 – 0,5; CaCl2 – 0,03; peptoon - 5; MgSO4 – 0,4; CaCO3 – 2,0; NaCl - 0,5; MnSO4 ja FeSO4 jalajäljed;keskmine pH 7,0-7,4. Keskkonda nakatatakse vähesel määral mullaga, kolb suletakse korkkorgiga, millel on auk gaaside eraldumiseks ja asetatakse 30-35°C termostaati. Sel juhul määravad valikulised tingimused tselluloosi olemasolu, süsinikuallika, mida saavad tarbida ainult spetsiifilised tselluloosi lagundavad bakterid, millel on tsellulaasi ensüüm, samuti anaeroobsed tingimused. Väikeses koguses söötmesse viidud peptoon stimuleerib tugevalt käärimisprotsessi. 7-10 päeva pärast algab tselluloosi käärimine, mis kestab 2-3 nädalat. Filterpaber muutub käärimisel kergelt limaseks, muutub kollaseks ja vajub järk-järgult kokku.

Mikroskoopia.Mikroskoobiga paberitükk. Anaeroobsetes tingimustes viivad tselluloosi lagunemise protsessi läbi selle perekonna bakteridClostridium. Cl. omelianskii(lisa joon. nr 9) on pikkade, kuni 8 mikronite pulgakujuliste rakkude välimusega, vanades kultuurides on pikkus umbes 10-15 mikronit, mis paiknevad üksikult või keermesena ühendatud. Eosed on sfäärilised, moodustuvad raku otsas, rakk võtab trummipulga kuju. See on isoleeritud pinnasest ja veest. Optimaalne kasvutemperatuur on 30-35°C.

Ülesanne number 3.Kiudude lagunemisel osalevate mikroorganismide uurimiseks (aeroobsed tingimused) joonistage pilt.Aeroobsete kiudaineid hävitavate bakterite eraldamiseks kasutatakse Hutchinsoni toitekeskkonda. Keskmise koostis (g/l): K2 NRA4 – 1,0; NaCl - 0,1; CaCl2 – 0,1; FeCl3 – 0,01; MgSO4 – 0,3; NaNO3 - 2,5; keskmine pH 7,2-7,3. Steriilne toitainekeskkond valatakse koonilistesse kolbidesse, mille kiht on 1,5–2,0 cm, sööde nakatatakse mullatükiga ja söötme pinnale lastakse kurdfilter koonusega ülespoole. Kolvid suletakse vatikorkidega ja asetatakse 10-14 päevaks termostaadi temperatuurile 25-30°C. Toitekeskkonna ja õhu piiril luuakse optimaalsed tingimused toitumiseks ja kiudaineid hävitavate bakterite aeroobseks hingamiseks. Selles tsoonis on kõige intensiivsem filterpaberi hävitamise protsess. 8-10 päeva pärast ilmuvad filtrile kollakasoranžid laigud kiudaineid hävitavate bakterite kolooniatest. Paber laguneb ja filter settib järk-järgult põhja.

Mikroskoopia.Hävitatud kiudainemassidest valmistatakse mikrobioloogilise silmusega kolvis vedelikutilgas määrdumine. Enamasti leitakse tellimuste esindajad preparaadist.KärbsebakteridJaTsütofagaalidlibisevate bakterite rühmad (lisa joon. nr 10).PerekondTsütofagamida esindavad pikad vardakujulised teravate otstega rakud, mis on mõnevõrra kumerad (2-10 mikronit). Kolooniad on kollased, oranžid, pruunikaspruunid, siledad, limased.

PerekondСellvibrlomida esindavad väikesed, kergelt kumerad liigutatavad vardad (2-4 mikronit). Kolooniad on ookerkollase limaskestaga. RulliCellfalciculaon lühikeste jämedate kõverate teravate otstega pulkade kujul (2,0 * 0,7 mikronit).

Perekondsorangiumnoores kultuuris näeb see välja nagu paksud, kergelt kumerad vardakujulised ümarate otstega rakud (2-5 mikronit). Kultuuri vananedes moodustuvad viljakehad, mis koosnevad mikrotsüstidest. Vardakujulised rakud on lühenenud, kaetud paksu membraaniga, omandades ebakorrapärased piirjooned. Kolooniad ereoranžid, lillad.

PerekondPolyangiummida esindavad peaaegu sirged vardakujulised ümarate otstega rakud (3,5-8 mikronit). Vananedes tekivad ovaalsed mikrotsüstid, mis on ühendatud ja pirnikujulised viljakehad. Viljakehad on kollased, oranžid, istuvad otse substraadil.

Lisaks bakteritele osalevad kiudude aeroobses hävitamises hallitusseened.Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Trichodermaja mõned aktinomütseedid.

Kontrollküsimused, vt õppetund number 10.

TEGEVUS #12

MIKROORGANISMIDE ÖKOLOOGIA

Sihtmärk:Uurida keskkonnategurite mõju mikroorganismide kasvule ja arengule.

Põhimõisted.Kohustuslikud psührofiilid, psührotroofsed mikroorganismid (fakultatiivsed psührofiilid), termofiilid, osmotolerantsed mikroorganismid, gallofiilid, lüofiliseerimine, kohustuslikud aeroobid ja anaeroobid, mikroaerofiilid, aerotolerantsed anaeroobid, antiseptikumid.

Kontrollküsimused

Temperatuuri mõju mikroorganismide kasvule ja arengule. Bakterite ökoloogilised rühmad seoses temperatuuriga.

Niiskuse mõju mikroorganismide kasvule ja arengule.

Valguse ja erinevate kiirguste mõju mikroorganismide kasvule ja arengule. Magnetvälja mõju.

Hapniku kontsentratsiooni mõju mikroorganismide kasvule ja arengule.

Keskkonnareaktsiooni mõjumikroorganismide kasvu ja arengu kohta. Bakteritele mürgised ühendid ja ioonid.

Mikroorganismide kohanemisreaktsioonid.

TEGEVUS #13

BAKTERIIDE TUNDLIKKUSE MÄÄRAMINE ANTIBIOOTIKULE

Sihtmärk:Määrata mikroorganismide tundlikkus antibiootikumide suhtes.

Ülesanded:

1. Määrake mikroorganismide tundlikkus antibiootikumide suhtes difusiooni teel agarisse, kasutades paberkettaid.

Materjalid ja seadmed.MPA-ga Petri tassid, antibiootikumilahustega niisutatud steriilsed kettad, saprofüütsete bakterite ja hallitusseente puhaskultuurid, pipetid, piirituslambid, spaatlid.

Põhimõisted.Antibiootikumid, bakteriostaatiline ja bakteritsiidne toime, R-faktorid, resistentsus.

Edusammud

Ülesanne number 1.Määrata mikroorganismide tundlikkus antibiootikumide suhtes difusiooni teel agarisse, kasutades paberkettaid.

Mikroorganismide antibiootikumide suhtes tundlikkuse määramise ketaste difusioonimeetod põhineb paberketta ümber asuva kasvu inhibeerimise tsooni läbimõõdu registreerimisel antibiootikumiga. Petri tasside toitaineagari pinnale, mis on inokuleeritud testmikroobidega, kantakse antibiootikumidega immutatud paberkettad jatasse inkubeeritakse 37°C juures. Mikroobide kasvu pärssiva tsooni olemasolu ümberkettad näitavad patogeeni tundlikkust ravimi suhtes, kasvu inhibeerimise tsooni puudumine näitab resistentsust.

Definitsiooni edenemine.Steriilsetele MPA-ga Petri tassidele kantakse mikroorganismide kultuur. Inokulatsioonimaterjalina kasutatakse igapäevast puljongikultuuri - 0,2 ml bakterisuspensiooni kantakse MPA pinnale ja jaotatakse tassi raputades ühtlaselt, seejärel imetakse pipetiga liigne vedelik ära.

Topse kuivatatakse 30-40 minutit toatemperatuuril. Seejärel asetatakse külvatud söötme pinnale pintsettidega erinevate antibiootikumidega immutatud kettad. Kettad kantakse tihedalt pinnale, et tagada tihe kontakt söötmega. Kettad asetatakse üksteisest võrdsele kaugusele ja tassi servast umbes 2 cm kaugusele. Topsid asetatakse termostaadi tagurpidi või asetatakse topsi kaane alla filterpaberist ring, et vältida muru erosiooni kondensatsiooniveega, ja inkubeeritakse 37°C juures 18 tundi.

Tulemuste hindamine.Määrake joonlaua abil ketaste ümber olevate mikroobide kasvu pärssivate tsoonide läbimõõt, sealhulgas ketta enda läbimõõt. Arvesse ei võeta üksikuid kolooniaid või õhukest mikroorganismide kasvu kilet kasvu inhibeerimise tsoonis. Mikroobide kasvu inhibeerivate tsoonide puudumine ketaste ümber näitab mikroobi tundlikkuse puudumist selle antibiootikumi suhtes. Kuni 10 mm läbimõõduga mikroobide kasvu pärssiva tsooni korral peetakse tüve veidi tundlikuks. Mikroobide kasvu pärssimise tsoon üle 10 mm näitab tüve tundlikkust. Kuidas rohkem tsooni kasvupeetus, seda suurem on mikroorganismide tundlikkus antibiootikumi suhtes. Märkige tulemused tabelisse nr 10.

Tabel number 10.Mikroorganismide tundlikkus antibiootikumide suhtes.

Streptomütsiini antibiootilised omadused. Penitsilliini antibiootilised omadused. TEGEVUS #14 MEDITSIINILISE MIKROBIOLOOGIA ALUSED Sihtmärk:Uurida mikroorganisme – loomade ja inimeste patogeene. Kirjandus Lebedeva M.N. Mikrobioloogia. - M .: "Meditsiin", 1969. Mikrobioloogia, viroloogia ja immunoloogia alused / Toim. Toimetanud Vorobjov A.A., Krivoshein Yu.S. – M.: Masterstvo, 2001. Arutelu küsimused Patogeensete kokkide iseloomustus stafülokokkide näitel. Naha põletikulised-mädased haigused. Septitseemia. Patogeensete kokkide iseloomustus streptokokkide näitel. Lokaliseeritud püopõletikulised infektsioonid, tonsilliit, sarlakid. Patogeensete kokkide iseloomustus pneumokoki näitel. Kopsupõletik. Patogeensete kokkide iseloomustus meningokoki näitel. Meningiit. Patogeensete kokkide iseloomustus gonokoki näitel. Gonorröa, blenorröa. Gramnegatiivsete spoore mittemoodustavate bakterite iseloomustus katkubatsilli näitel. Katk. Gramnegatiivsete spoore mittemoodustavate bakterite iseloomustus tularemia batsilli näitel. Tulareemia. Gramnegatiivsete spoore mittemoodustavate bakterite iseloomustus Brucella näitel. Brutselloos. Soolebakterite perekond Escherichia coli näitel. Tüüfuse ja paratüüfuse bakterite rühma tunnused. Tüüfus ja paratüüfus. Toidumürgituse tekitajad. Salmonelloos. Düsenteeria tekitajate tunnused. Düsenteeria tüübid. Koolera vibrio omadused. Kapslibakterite struktuur Klebsiella näitel. Siberi katku batsillide iseloomustus. Siberi katku vormid. Hemofiilsete bakterite tunnused läkaköha näitel. Patogeensed anaeroobid gaasigangreeni tekitajate näitel. Patogeensed anaeroobid teetanuse batsilli näitel. Patogeensed anaeroobid botulismi tekitajate näitel. Difteeria batsilli omadused. Happekindlate bakterite iseloomustus tuberkuloosibatsilli ja leeprabatsilli näitel. Patogeensete seente iseloomustus aktinomütseedi näitel. Dermatomükoos. Patogeensete spiroheetide iseloomustus kahvatu treponema näitel. süüfilis. Patogeensete spiroheetide tunnused retsidiveeruva palavikuspiroheedi näitel. Selles juhendis kirjeldatakse lühidalt teoreetiline alus sanitaarmikrobioloogia, samuti mõned katsed, mis on seotud õhu, vee ja pinnase mikrofloora erinevate näitajate määramisega. Varia Koosneb kahest osast – üldrakendusmeditsiiniline mikrobioloogia ja kliiniline mikrobioloogia. Esimeses osas on välja toodud peamised mikrobioloogiliste uuringute meetodid, spetsiifilise ravi meetodid ja nakkushaiguste ennetamine, teises - nende laborimeetodid... 1,32 MB lisatud 11.06.2011 Õpetus. KemTIPP. - Kemerovo, 114 lk. Mikrobioloogia õppeaine ja ülesanded. Mikroorganismide põhiomadused Mikrobioloogia arengu ajalooline visand. Kaasaegse mikrobioloogia arengu väljavaated ja saavutused aastal rahvamajandus, Toidutööstus. Süstemaatika põhimõtted. Struktuurne korraldus mikroorganism...