VŠEOBECNÁ MIKROBIOLÓGIA
Kapitola I. Mikroskop a mikroskopická technika
1. Svetelná optická mikroskopia
2. Mikroskopia v tmavom poli
3. Fázová kontrastná mikroskopia
4. Luminiscenčná (fluorescenčná) mikroskopia
Kapitola II. Všeobecné zastúpenia o pestovaní, osevnej technike a potrebnom zariadení na prácu s mikroorganizmami
Kapitola III. Spôsoby prípravy prípravkov z mikroorganizmov
Kapitola IV. výskum mikrobiálnych buniek
1. Formy buniek mikroorganizmov
2. Štruktúra buniek mikroorganizmov (metódy cytochemického výskumu)
3. Gramovo farbenie buniek mikroorganizmov
4. Sfarbenie spór v baktériách
5. Farbenie kapsúl
6. Farbenie bičíkov
7. Farbenie jadrovej substancie baktérií
8. Farbenie bunkových inklúzií mikroorganizmov
Kapitola V. Výživa mikroorganizmov
1. Význam jednotlivých živín
2. Príprava kultivačných médií
3. Metódy sterilizácie
Kapitola VI. Zohľadnenie počtu baktérií a izolácia čistej kultúry
1. Účtovanie počtu baktérií v pôde
2. Stanovenie kvalitatívneho zloženia baktérií
3. Účtovanie počtu mikroorganizmov vo vode a iných kvapalinách
4. Účtovanie počtu baktérií vo vzduchu
5. Izolácia čistých bakteriálnych kultúr
Kapitola VII. Určenie typu baktérií
Kapitola VIII. Transformácia mikroorganizmami bez dusíka organickej hmoty
Fermentačné procesy
1. Alkoholové kvasenie
2. Mliečna fermentácia
3. Maslová fermentácia
4. Fermentácia pektínových látok
5. Fermentácia celulózy
6. Oxidácia vlákna
7. Oxidácia tukov
8. Oxidácia uhľovodíkov
Kapitola IX. Transformácia organických a minerálnych zlúčenín dusíka mikroorganizmami
1. Amonifikácia
2. Nitrifikácia
3. Denitrifikácia (dýchanie dusičnanov)
4. Biologická fixácia atmosférického dusíka
Kapitola X
1. Konverzia zlúčenín síry mikroorganizmami
2. Účasť mikroorganizmov na premene železa
3. Transformácia zlúčenín fosforu mikroorganizmami
POĽNOHOSPODÁRSKA MIKROBIOLÓGIA
Kapitola XI. Všeobecný mikrobiologický rozbor pôdy
1. Metódy výskumu
2. Skupiny mikroorganizmov, zloženie a príprava kultivačných médií
3. Odoberanie priemernej vzorky pôdy a príprava vzorky na mikrobiologickú analýzu
4. Príprava pôdnej suspenzie
5. Účtovanie rôznych skupín mikroorganizmov
6. Stanovenie celkového počtu mikroorganizmov v pôde priamym počítaním pod mikroskopom
Kapitola XII. Štúdium cenóz mikroorganizmov
1. Metóda znečistenia skla podľa N. G. Kholodnyho
2. Štúdium mikrobiálnych cenóz v pôde podľa metódy Perfilieva a Gabea
3. Perfilievova kapilárna metóda modifikovaná Aristovskou
4. Identifikácia mikroorganizmov autochtónnej skupiny podieľajúcich sa na rozklade humínových látok podľa metódy Winogradského pri modifikácii Teppera.
5. Identifikácia mikroorganizmov podieľajúcich sa na rozklade humínových látok podľa Tepperovej metódy
Kapitola XIII. Stanovenie biologickej aktivity pôdy
1. Stanovenie biologickej aktivity pôdy intenzitou rozkladu plátna (metóda Mišustin, Vostrov a Petrova)
2. Stanovenie celkovej mikrobiologickej aktivity pôdy vylučovaním oxid uhličitý
3. Stanovenie amonizačnej aktivity pôdy
4. Stanovenie amonifikačnej aktivity mikroorganizmov
5. Stanovenie nitrifikačnej aktivity pôdy
6. Stanovenie denitrifikačnej aktivity pôdy
7. Stanovenie aktivity mikroorganizmov viazania dusíka
Kapitola XIV. Štúdium baktérií v koreňovej zóne rastlín a na koreňoch
1. Účtovanie baktérií v rizosfére Krasilnikovovou metódou
2. Účtovanie rizosféry a koreňovej mikroflóry metódou postupného premývania koreňov podľa E. 3. Tepper
3. Izolácia čistých kultúr nodulových baktérií, kvantitatívne účtovanie v pôde, stanovenie ich aktivity a virulencie
Kapitola XV. Analýza bakteriálnych prípravkov
Kapitola XVI. Mikrobiológia krmív
1. Epifytická mikroflóra zrna a jej zmena počas skladovania krmiva
2. Analýza sila
3. Kvasenie krmiva
Kapitola XVII. Mikroflóra mlieka a mliečnych výrobkov
1. Bakteriologický rozbor mlieka
2. Spôsoby izolácie baktérií mliečneho kvasenia do čistej kultúry
3. Zoznámenie sa s mikroflórou masla
Index literatúry

Usmernenia

na realizáciu praktických prác

pre profesiu:

19.01.17 Cook. Cukrár

Vývojár:

Veretenníková O.M. učiteľ

Valuiki, 2016

Vysvetľujúca poznámka

Tieto usmernenia na vykonávanie praktickej práce na disciplíne "základy mikrobiológie, sanitácie a hygieny pri výrobe potravín » boli vyvinuté na základe spolkového štátu vzdelávací štandard(ďalej len GEF) podľa povolania:

19.01.17 Kuchár. Cukrár

Pokyny na realizáciu praktickej práce sú určené pre žiakov prvého ročníkaRealizácia praktických a laboratórnych prác je zameraná na riešenie nasledovnéhoúlohy:

zvýšiť povedomie a silu získavania vedomostí;

rozvíjať schopnosť analyzovať, porovnávať skúmané objekty, vykonávať výskum, zostavovať tabuľky, diagramy, zhluky, vyvodzovať závery;

rozvíjať u študentov logické myslenie, kognitívne schopnosti, nezávislosť;

naučiť sa nadobudnuté vedomosti a zručnosti využívať v živote.

Pri štúdiu, upevňovaní materiálu sa používajú nasledujúce typy samostatná práca:

Práca s textom učebnice.

Prezentačná práca.

Práca so študovaným objektom.

Práca so stolom.

Práca na zostavení klastra, schémy.

Práca s pripravenými mikroprípravkami. Príprava mikropreparátov.

Štruktúra pokynov:

1. téma
2. účel práce
3. vybavenie pre prácu
4. postup práce
5. kontrola a aktualizácia vedomostí žiakov potrebných na dokončenie práce
6. pracovné podmienky

Každá praktická a laboratórna práca by mala byť vypracovaná v zošite pre praktickú prácu v súlade s odporúčaniami. (Príloha 1)

Kontrola výsledkov vykonanej práce sa vykonáva na základe písomnej správy a výsledkov sledovania študenta v priebehu práce v súlade s ust.hodnotiace kritériá pre realizáciu praktickej práce.

Zoznam praktických prác

Praktická práca č.1

Zariadenie mikroskopu a pravidlá práce s ním.

Praktická práca č.2 Mikroskopické vyšetrenie morfológie kvasiniek a plesní

Praktická práca č.3 Schémy štruktúry buniek baktérií, kvasiniek, húb.

Praktická práca č.4-5

Praktická práca č.6Schémy na prípravu dezinfekčných roztokov a ich skladovanie

Praktická úloha zameraná na kontroluschopnosť študentov aplikovať teoretické poznatky v odbore v praxi

Praktická práca č. 1 MIKROSKOPOVÉ ZARIADENIE A PRAVIDLÁ PRÁCE S NÍM.

Cieľ práce: Študovať prístroj svetelného biologického mikroskopu a osvojiť si pravidlá práce s ním.

Vybavenie, materiály: mikroskop; hotové mikroprípravky

Mikroskop (z gréčtiny.mikr- malý ascopio- Pozerám) je optické zariadenie pozostávajúce z troch hlavných častí: mechanickej, optickej a osvetľovacej.

Schéma svetelného biologického mikroskopu je na obr. 1.

Mechanický alebo statív pozostáva z nohy, základne, držiaka trubice, stolíka na predmety, monokulárneho nástavca (tubusu), otočného zariadenia, rukoväte hrubého zaostrovania (makrometrická skrutka), rukoväte jemného zaostrovania (mikrometrická skrutka).

Tubus je ďalekohľad mikroskopu. Do horného otvoru tubusu je voľne zasunutý okulár, na spodnom konci tubusu je okolo svojej osi rotujúce otočné zariadenie (revolver), do ktorého sa skrutkujú šošovky. Otáčaním revolvera môžete pri práci s mikroskopom rýchlo meniť šošovky, pričom akúkoľvek šošovku dostanete pod tubus. Šošovka musí byť vycentrovaná, t.j. namontované na optickej osi mikroskopu. Za týmto účelom sa revolver otáča okolo svojej osi, kým sa neobjaví kliknutie.

Tabuľka objektov sa používa na umiestnenie skúšaného lieku na ňu. Liečivo je upevnené na stole pomocou svoriek (svoriek). V strede stolíka objektu je otvor pre priechod svetelných lúčov a osvetlenie preparátu. V niektorých návrhoch mikroskopov sa môže stolík pohybovať pomocou skrutiek umiestnených po obvode stolíka. To umožňuje skúmať liek v rôznych zorných poliach.

1 – okulár

2 – monokulárna hlava

(trubica)

3 - revolver

4 - šošovka

5 - predmetová tabuľka

6 - kondenzátor

7 - Puzdro zbernej šošovky

8 - zásuvka so svietidlom

9 - záves

10 – rukoväť na posúvanie držiaka kondenzora

11 - gombík na jemné zaostrenie (mikrometrová skrutka)

12 - gombík na hrubé zaostrenie (skrutka makrometra)

13 - držiak trubice

14 - skrutka na upevnenie trysky

Ryža. 1Schéma zariadenia svetelného biologického mikroskopu

Gombíky hrubého a jemného zaostrenia (makro a mikro skrutky) slúžia na pohyb trubice nahor a nadol, čo umožňuje nastaviť ju do požadovanej vzdialenosti od preparátu. Otáčaním skrutiek v smere hodinových ručičiek sa rúrka znižuje, otáčaním proti smeru hodinových ručičiek sa zdvíha. Pri otáčaní makrometrickej skrutky je objektív približne nastavený na zaostrenie, t.j. vo vzdialenosti od prípravku, v ktorej sa stáva viditeľným. Otočenie makro skrutky umožňuje posunúť rúrku o 20 mm. Na presné zaostrenie slúži mikrometrická skrutka. Úplným otočením sa trubica posunie o 0,1 mm. S mikroskrutkou treba zaobchádzať veľmi opatrne: je dovolené otáčať mikroskrutkou maximálne o 180 0 C tak či onak.

Optická časť je najcennejšou časťou mikroskopu. Skladá sa zo šošoviek a okuláru.

Okulár (z lat.oculus- oko) pozostáva z dvoch plankonvexných šošoviek uzavretých v spoločnom kovovom ráme. Horná šošovka je očná šošovka (zväčšovacia), spodná je zbiehavá. Vzdialenosť medzi šošovkami je polovica súčtu ich ohniskových vzdialeností. Okuláre s vysokým zväčšením majú kratšie ohnisko, takže aj dĺžka okuláru je kratšia. Medzi šošovkami je clona, ​​ktorá obmedzuje zorné pole a oneskoruje okrajové lúče svetla. Domáce mikroskopy sú vybavené tromi vymeniteľnými okulármi, ktorých zväčšenie je vyznačené na tele okuláru (x7; x10; x15).

Objektívy sú naskrutkované do objímok otočného zariadenia a pozostávajú zo sústavy šošoviek uzavretých v kovovom ráme. Predná (predná) šošovka objektívu je najmenšia a jediná poskytuje zväčšenie. Zvyšné šošovky v šošovke len korigujú nedokonalosti výsledného obrazu (javy sférickej a chromatickej aberácie) a nazývajú sa korekčné.

Do objímok otočného zariadenia sú naskrutkované štyri šošovky, ktorých zväčšenie je vyznačené na tubuse objektívu (x8; x20; x40; x90 alebo 100). Každá šošovka je charakterizovaná svojou ohniskovou vzdialenosťou (vzdialenosťou medzi sklíčkom a prednou šošovkou): šošovka x8 má ohniskovú vzdialenosť približne 9 mm, šošovka x40 má ohniskovú vzdialenosť 0,65 mm a šošovka x90 má ohniskovú vzdialenosť 0,15 mm.

osvetľovacia časť Mikroskop pozostáva z dvojšošovkového kondenzora, irisovej clony a kazety s nízkonapäťovou žiarovkou, napájanou cez znižovací transformátor z napäťovej siete 120 ... 220 V.

Kondenzátor slúži na lepšie osvetlenie prípravku. Zhromažďuje svetelné lúče do lúča a smeruje ich cez otvor javiska do prípravku. Rameno kondenzora je možné posúvať hore a dole pomocou rukoväte na pohyb ramena kondenzora, čím sa mení uhol zbiehania lúčov a následne aj stupeň osvetlenia objektu. Čím vyššia je poloha kondenzátora, tým lepšie je prípravok osvetlený.

Irisová clona je umiestnená pod kondenzorom a slúži na reguláciu toku svetla vstupujúceho do kondenzora. Skladá sa z kovových dosiek v tvare polmesiaca. Pomocou špeciálnej páky môžete zväčšiť alebo zúžiť otvor membrány. Pri otáčaní v smere hodinových ručičiek sa apertúra irisovej clony zväčšuje a následne sa zvyšuje aj stupeň osvetlenia objektu.

Pri práci s imerznými šošovkami by mal byť stupeň osvetlenia preparátu maximálny, takže clona irisovej clony sa otvorí a kondenzor sa zdvihne do najvyššej polohy.

Pri práci so suchými šošovkami sa spravidla berú do úvahy nenatreté predmety. Na dosiahnutie kontrastu sa kondenzor zníži a apertúra irisovej clony sa zníži.

Pravidlá pre prácu s mikroskopom

Na pracovnej ploche je mikroskop umiestnený držiakom trubice smerom k sebe vo vzdialenosti 3 ... 5 cm od okraja stola;

Zapnite mikroskop a nastavte správne osvetlenie

Skúšobný prípravok sa umiestni na stôl na predmety a upevní sa svorkami;

Požadovaný objektív sa umiestni pod tubus a pomocou makro a mikro skrutiek sa nastaví ohnisková vzdialenosť. Takže pri práci s imerznými šošovkami sa na prípravok najskôr nanesie kvapka imerzného oleja a držiak tuby sa makroskrutkou opatrne spustí, až sa dostane do kontaktu so sklom. Potom sa pri pozornom pohľade do okulára veľmi pomaly zdvihne držiak tubusu a otáča sa ním proti smeru hodinových ručičiek, až kým neuvidíte obraz. Jemné zaostrenie šošovky sa vykonáva pomocou mikrometrovej skrutky. Pri práci so suchými objektívmi sa preparát najskôr vyšetrí objektívom x8. Zdvihnutím držiaka tubusu pomocou makroskrutky a pozorným pohľadom do okuláru nastavte ohniskovú vzdialenosť (asi 9 mm) a pomocou mikrometrovej skrutky dosiahnite čistotu obrazu. Ďalej posunutím stola na objekt alebo skleneného podložného sklíčka sa oblasť prípravku nastaví do stredu poľa, v ktorom je skúmaný objekt najlepšie viditeľný. Potom otáčaním otočného zariadenia okolo jeho osi sa pod trubicu umiestni šošovka x20 alebo x40. V tomto prípade by šošovka x90 nemala spadnúť pod tubus. V otočnom prístroji sú šošovky usporiadané tak, že ak sa nájde obraz so šošovkou x8, potom pri skúmaní preparátu šošovkami s väčším zväčšením je potrebné mierne upraviť jasnosť obrazu pomocou makro- a mikrometrických skrutiek;

Pri mikroskopii je potrebné mať obe oči otvorené a používať ich striedavo;

Po skončení práce vyberte prípravok zo stola na predmety, sklopte kondenzor, pod tubus umiestnite objektív x8, mäkkou handričkou alebo gázou namočenou v alkohole odstráňte imerzný olej z prednej šošovky objektívu x90, pod objektív vložte gázový obrúsok, sklopte držiak tubusu.

Aké je zariadenie biologického mikroskopu?

Z akých častí a mechanizmov pozostáva mechanická časť mikroskopu?

Aký je optický systém mikroskopu?

Čo je súčasťou osvetľovacieho systému mikroskopu?

Ako by mal byť nastavený systém osvetlenia pri práci s imerzným objektívom?

Uveďte základné pravidlá pre prácu s mikroskopom.

Podmienky na splnenie úlohy
1. Miesto (čas) úlohy
Hodina biológie

Praktická práca č.2 Mikroskopické vyšetrenie morfológie kvasiniek a plesní.

Cieľ práce : Oboznámte sa s morfologickými znakmi húb a kvasiniek vyskytujúcich sa pri výrobe potravín. Osvojiť si techniku ​​mikroskopického vyšetrenia húb a kvasiniek v prípravkoch „rozdrvených kvapiek“.

Vybavenie, materiály: mikroskop; pitevné ihly, podložné sklíčka a krycie sklíčka; filtračný papier; duchovná lampa; kultúry rodov húbMucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; čistá kvasinková kultúraSaccharomycescerevisiae.

1. STRUČNÉ TEORETICKÉ USTANOVENIA

1. 1. Morfológia a kultúrne znaky mikroskopických húb

Vegetatívne telo húb je tzvmycélium . Mycélium pozostáva z mnohých prepletených vlákien nazývaných tubuly.hýfy . Priemer hýf sa pohybuje od 5 do 50 mikrónov. V závislosti od štruktúry mycélia sa huby delia na vyššie a nižšie. U vyšších húb sú hýfy oddelené priečkami (septami), v strede ktorých je veľký pór. Rastú a súčasne dochádza k deleniu jadra, ale k deleniu buniek nedochádza. Vegetatívnym telom huby je teda jedna veľká viacjadrová bunka. Všetky mikroskopické huby sa môžu vegetatívne rozmnožovať s kúskom mycélia.

Počas nepohlavného rozmnožovania produkujú fykomycetysporangiofory a v Ascomyceteskonídiofory .

Kultúrne znaky mikroskopických húb

Kolónie mikroskopických húb sú mnohonásobne väčšie ako kolónie jednobunkových organizmov (baktérie, huby) a často prerastajú po celom povrchu. rastové médium v Petriho miskách. Konzistencia kolónií húb je rôzna. Častejšie sa tvoria plstnaté a kožovité kolónie, menej často drobivé. Povrch kolónií môže byť našuchorený, ako vata, zamatový, múčny, pavučinový, vláknitý, kožovitý alebo hladký. Pri pestovaní na pevnom a tekutom médiu prerastú niektoré hýfy do živného média a tvoria sasubstrát mycélium a tvorí sa druhá časť hýfvzduchu mycélium vo forme nadýchaného povlaku, viditeľného voľným okom. Mycélium môže byť aj bezfarebné (biele, sivasté) alebo farebné (čierne, hnedé, zelené, žlté atď.). Pigmentované je iba plodové mycélium.

Charakteristika mikroskopických húb rôzne triedy

Morfologické znaky húb rôznych tried sú uvedené na obr. 5.

RodMucor . Môžu sa rozmnožovať nepohlavne a pohlavne s tvorbou sporangioforov (obr. 5). Vonku je sporangium pokryté tenkými hrotmi kryštálov šťavelanu vápenatého. V dospelosti výtrusnica praskne, výtrusy výtrusníc sa uvoľnia a unášajú prúdením vzduchu. Na sporangiofore, po uvoľnení sporangia zo spór, zostáva stĺpec a v jeho spodnej časti - golier. Farba mycélia húb slizníc je spočiatku biela, potom sivasto olivová, vzhľad je plstnatý.

A

b

V

G

Ryža. 5Morfologické znaky húb rôznych tried:

A - Mucor; b - Penicillium; V - Aspergillus; G - Alternaria

Mucorové huby rastú na povrchu vlhkého obilia, sladu, okopanín, na potravinárskych výrobkoch, na stenách vlhkých miestností vo forme sivastého nadýchaného povlaku.Mucornigricanovje pôvodcom svorkovej hniloby cukrovej repy. Mnoho húb slizníc sa používa v priemysle na výrobu rôznych organických kyselín a alkoholu (huby druhuMucorjavanicus, Mucorracemosus), enzýmové prípravky, karotenoidy, steroidy.

Zástupcovia roduAspergillus A Penicillium patria do triedy Ascomycetes, ktorá spája najvyššie mikroskopické dokonalé huby. Pri nepohlavnom rozmnožovaní pomocou spór tvoria tieto huby konídiofory (obr. 5). Aspergillus a penicillium sú huby. To znamená, že pri pohlavnom rozmnožovaní sa na špeciálnych plodniciach tvoria asci (vrecia), v ktorých je 8 askospór.

K roduPenicillium tvorí asi polovicu všetkých plesňové huby. Sú široko rozšírené v pôde, vo vzduchu v nedostatočne vetraných priestoroch a spôsobujú znehodnotenie rôznych výrobkov a materiálov. Táto huba má rozvetvené prepážkové mycélium (priemer hýf - 2 ... 3 mikróny) a prepážkové konídiofory (pripomínajúce kefky), ktoré sa na konci rozvetvujú vo forme procesov - sterigm. Odchádzajú z nich konídie, pozostávajúce z reťazcov spór. Podľa druhu konídií môžu byť rôznej farby (biela, zelená atď.). Mnohé penicily sa používajú v priemysle na získanie rôznych cenných produktov. Spomedzi izolovaných kmeňov tohto rodu má 25 % antibiotickú aktivitu a také druhy ako naprPenicilliumnotatum, Penicilliumchrysogenumsa používajú ako výrobcovia penicilínu. Niektoré druhy penicilia sa používajú ako producenti enzýmov a lipidov. Ušľachtilé formy sa používajú pri výrobe mäkkých syrov Roquefort a CamembertPenicilliumroquefortiAPenicilliumcamamberti.

Huby roduAspergillus existuje viac ako 200 druhov. Tieto huby majú dobre vyvinuté rozvetvené mycélium s početnými priehradkami. Konidiofory nie sú septované, ich horné konce sú hruškovité alebo guľovité rozšírené v podobe malej hlavičky. Na hlave sú špendlíkovité sterigmata s retiazkami konídií, ktoré pripomínajú prúdy vody tečúce z kanvy. Odtiaľ pochádza názov „úniková pleseň“ (aspergerepo latinsky – polievať, striekať). Konídie Aspergillus získavajú pri dozrievaní rôzne farby, čo spolu s ďalšími znakmi určuje ich druhovú príslušnosť.

Rovnako ako penicily, zástupcovia roduAspergillussú v prírode široko rozšírené a zohrávajú dôležitú úlohu pri mineralizácii organických látok. Spôsobujú plesne v mnohých potravinách. Tieto huby sú producentmi mnohých cenných látok a sú široko používané v priemysle. takže,AspergillusNiger, používané v priemysle na výrobu kyseliny citrónovej;Aspergillusterreus- kyselina itakónováAspergillusflavusAAspergillusterricolatvoria najaktívnejší komplex proteolytických enzýmov;AspergillusoryzaeAAspergillusawamorisú najlepšími producentmi amylolytických enzýmov.

Huby roduAlternaria patria do triedy nedokonalých húb - deuteromycétov. Toto sú vyššie huby. Majú septované mycélium a krátke neseptované konídiofóry, na ktorých sú hruškovité alebo citrónovité mnohobunkové konídie (obr. 5). Huba je pôvodcom čiernej hniloby - choroby koreňových plodín a ovocia, ako aj pôvodcom kazenia potravín.

Morfológia kvasiniek a ich charakteristika

Kvasnice sú vyššie jednobunkové huby. Väčšina kvasiniek patrí do dvoch tried húb - askomycéty a deuteromycéty.

Vo vzťahu ku kyslíku sa kvasinky delia na fakultatívne anaeróby (za aeróbnych podmienok dýchajú a aktívne akumulujú biomasu a za anaeróbnych podmienok spôsobujú alkoholové kvasenie) a aeróby.

Morfologicky sú kvasinky rôznorodé. Líšia sa od seba veľkosťou a tvarom buniek. Veľkosti kvasinkových buniek sa v závislosti od druhu líšia v nasledujúcich medziach; 2,5 až 10 µm naprieč a 4 až 20 µm na dĺžku. Morfologická diverzita foriem kvasiniek je znázornená na obr. 6.

A

b

V

G

d

e

a

h

Ryža. 6Formy kvasinkových buniek: a - oválny vajcovitý;

b - valcový; c - apikálny; v tvare citróna; g - pozametaný;

e - trojuholníkový; e - polmesiac; g - kužeľovitý; h, i - myceloid

Tvar a veľkosť kvasinkových buniek závisí od typu, veku, živného média a spôsobu kultivácie.

V závislosti od druhu sa kvasinky môžu množiť vegetatívne pučaním (takto sa rozmnožujú kvasinky oválneho tvaru), binárnym štiepením (typické pre cylindrické alebo tyčinkovité kvasinky) alebo delením pučaním. Okrem vegetatívneho rozmnožovania sa kvasinky - askomycéty môžu rozmnožovať pohlavne s tvorbou askospór.

Z kvasiniek patriacich do triedy Ascomycetes, veľký význam majú kvasinky-sacharomycéty roduSaccharomyces , ktorý široko používaný v potravinárskom priemysle. Hlavnou biochemickou vlastnosťou týchto kvasiniek je, že fermentujú cukry za vzniku etylalkoholu a oxidu uhličitého. Kvasinky používané v priemysle sa nazývajúkultúrny kvas. Takže v pekárenskom priemysle a pri výrobe alkoholu, jazdecké kvasnice roduSaccharomycescerevisiae. Druhy kvasnícSaccharomycesmaloletýnašiel uplatnenie pri výrobe ražného chleba a kvasu. Trávové kvasnice sa používajú v pivovarníctveSaccharomycescarlsbergensis. Kvasinky sacharomycét sú oválneho tvaru, rozmnožujú sa vegetatívne pučaním, v nepriaznivých podmienkach sa rozmnožujú pohlavne askospórami.

Niektoré sporogénne kvasinky súdivoký droždie . Tieto kvasinky, podobne ako kultúrne, sú schopné alkoholovej fermentácie, ale okrem alkoholu tvoria mnohé vedľajšie produkty (ako sú aldehydy, vyššie alkoholy, estery atď.), a preto zhoršujú organoleptické vlastnosti produktu. Tieto kvasinky sú škodcami pri výrobe rôznych nápojov (pivo, víno, nealkoholické nápoje), ako aj kaziacimi činidlami v mnohých potravinách.

Kvasinky – deuteromycéty sa môžu rozmnožovať len vegetatívne. Niektoré z týchto kvasiniek (napríklad kvasinky rodCandida) sa používajú v priemysle na získavanie kŕmnych bielkovín, organických kyselín, vitamínov a iných produktov mikrobiálnej syntézy. Druhy kvasnícTorulopsiskefírsú súčasťou symbiotického kysnutého cesta – kefírovej huby. Ďalšie nedokonalé (asporogénne) kvasinky sú divoké kvasinky a spôsobujú kazenie mnohých potravín. K kvasinkovým škodcom produkcie patria kvasinkové rodyPichia, Hansenula, Candida, Rhodotorula,Torula, Torulopsis, Mycoderma, Trichosporonatď. Medzi asporogénne kvasinky patriafalošné kvasnice , ktoré tvoria pseudomycélium a rastú na tekutých substrátoch vo forme filmov.

1. PRACOVNÝ POSTUP

Na podložné sklíčko sa pomocou skúmavky alebo pipety nanesie veľká kvapka vody;

Malé množstvo mycélia sa odoberie zo skúmavky alebo Petriho misky pri dodržaní pravidiel asepsie

Mycélium sa opatrne vloží do kvapky nanesenej na podložné sklíčko a pomocou dvoch ihiel sa narovná vo vode;

Prípravok sa prikryje krycím sklíčkom a zľahka sa pritlačí. Prebytočná voda sa odstráni filtračným papierom.

Prípravok „rozdrvená kvapka“ sa najskôr mikroskopuje šošovkou x8 a potom x40 v stmavenom zornom poli (kondenzor je spustený, clona clony je zakrytá).

Pri výbere a mikroskopovaní hubových prípravkov sa berú do úvahy nasledujúce odporúčania:

a) huba Mucor . Vyberie sa čierno-sivé našuchorené vzdušné mycélium. Pri mikroskopii sa pozornosť venuje hýfam so spórami naplnenými výtrusmi a stĺpcami, ktoré vznikajú pri uvoľnení výtrusnice;

b) huba rodu Aspergillus . Vyberá sa trochu nadýchané mycélium s farebnými konídiami, ktoré sa mierne prehĺbi ihlou do živného média. Dávajte pozor na neseptické konídiofory;

c) huba rodu Penicillium . Pri výbere sa snažia odobrať mladé mycélium (na hranici farebného a bieleho mycélia), prehĺbené ihlou do média. Dávajte pozor na prepážkové hýfy s kefami.

d) huba rodu Alternaria . Berú mycélium v ​​čiernych oblastiach a prehlbujú sa do neho ihlami. Pozor na septátové mycélium, slabo vyvinuté konídiofóry a veľké konídie, ktoré vyzerajú ako zaoblené alebo špicaté mnohobunkové útvary pripomínajúce „citrónové granátové jablká“.

Pri štúdiu kvasiniek na podložné sklíčko sa nanesie suspenzia kvasníc, prikryje sa krycím sklíčkom, prebytočná voda sa odstráni filtračným papierom. Vzorka je mikroskopovaná šošovkami x8 a x40.

Registrácia a analýza výsledkov výskumu

Stručne načrtnite teoretický materiál. Nakreslia sa mikroskopické snímky študovaných kultúr húb a kvasiniek, berúc do úvahy morfologické znaky každého mikroorganizmu. Pod každým číslom je podpísaný latinský názov a zvýšenie prípravku. Popíšte kultúrne vlastnosti študovaných húb.

Odpoveď Kontrolné otázky

Ako sa pripravujú preparáty mikroskopických húb a kvasiniek?

Opíšte morfologické a kultúrne vlastnosti mikroskopických húb.

Aké huby sa používajú v priemysle na získanie organických kyselín, enzýmov, antibiotík a iných cenných produktov?

Popíšte morfologické vlastnosti droždie.

Čo je kultúrny kvas? V akých oblastiach potravinárskeho priemyslu sa využívajú?

Podmienky na splnenie úlohy

Hodina biológie

2. Maximálny čas dokončenia úlohy: 90 min

Praktická práca č.3: Schémy štruktúry buniek baktérií, kvasiniek, húb.

Cieľ práce: Študujte štruktúru bunkybaktérie, kvasinky, plesne

Materiálna podpora: kartičky s návodom na praktickú prácu, učebnica, ceruzky

Cvičenie 1

Preštudujte si látku v učebnici. Podľa výsledkov štúdie:

Nakreslite do zošita štruktúru bunky baktérií, kvasiniek a húb a naznačte rozlišovacie znaky

Odpovedzte písomne ​​na nasledujúce otázky:

1. Aký tvar majú bakteriálne bunky?

2. Aké sú veľkosti baktérií?

3. Ako prebieha rozmnožovanie baktérií, rýchlosť rozmnožovania?

4. Ako a za akých podmienok vzniká u baktérií tvorba spór?

5. Sú baktérie schopné samostatného pohybu?

Na základe výsledkov svojej práce urobte záver.

Podmienky na splnenie úlohy

1. Miesto (čas) úlohy

Hodina biológie

2. Maximálny čas dokončenia úlohy: 90 min

Praktická práca na tému č. 4 Práca s regulačnou a technickou dokumentáciou: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Cieľ práce: Študovať hygienické požiadavky na usporiadanie a údržbu zariadení verejného stravovania

Materiálna podpora: inštruktážne karty pre praktickú prácu, SanPiN 2.3.6. 1079-01

Cvičenie 1

Preštudujte si látku v učebnici. SanPiN 2.3.6. 1079-01. Podľa výsledkov štúdie:

1. Doplňte frázy: Miesto, kde je vybudované stravovacie zariadenie, musí byť

Výrobné zariadenia zahŕňajú:

Sklady sú navrhnuté v _____________________ časti objektu.

Pitná voda musí mať rovnakú kvalitu

Na čistenie vzduchu sa používa vetranie

Typ.

Všetky výrobné priestory musia byť osvetlené

Svetlo.

Mesačné upratovanie je tzv

2. Definujte nasledujúce pojmy:

Dezinfekcia je...

Deratizácia je -

Dezinsekcia je...

3. Pomocou vzdelávacieho materiálu vyplňte tabuľku:

obchod so zeleninou

mäsiarstvo

Obchod s rybami

Hot obchod

chladiareň

Cukráreň

Pracovný list

Podmienky na splnenie úlohy

1. Miesto (čas) úlohy

Hodina biológie

2. Maximálny čas dokončenia úlohy: 90 min

Praktická práca č.5 Práca s regulačnou a technickou dokumentáciou: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Cieľ práce : Preštudovať si sanitárne požiadavky na vybavenie, inventár, náčinie, nádoby. Preprava a skladovanie potravinárskych výrobkov.

materiálnu podporu : inštruktážne karty pre praktickú prácu, SanPiN 2.3.6. 1079-01

Cvičenie 1

Preštuduje si materiál učebnice SanPiN 2.3.6. 1079-01. Podľa výsledkov štúdie:

1. Písomne ​​odpovedzte na nasledujúce otázky:

A čo kuchynské náčinie?

Prečo označovať riad?

Čo so stolovým riadom?

Aké materiály sú povolené na výrobu zariadení a zásob

pre stravovacie zariadenia?

Aký je zásadný rozdiel medzi umývaním riadu a príborov?

2. Uveďte pravidlá a požiadavky:

2.1. Hygienické pravidlá pre prepravu polotovarov:

2.2. Hygienické pravidlá pre skladovanie potravín:

3. Pridajte frázy:

Pred distribúciou musí byť kvalita pripravovaných jedál

Pri podávaní musia mať prvé jedlá a teplé nápoje teplotu

_______ °С, hlavné jedlá a prílohy teplota ______ °С, porciované jedlá

teplota ______ °С, studené misy a nápoje ______ °С.

V liečebno-preventívnych a detských inštitúciách v zimno-jarnom období je potrebné z dôvodu nedostatku zeleninových jedál ___________________ obohatiť niektoré jedlá.

________________ zodpovedá za kvalitu hotového výrobku a dodržiavanie pravidiel pre jeho výdaj v stravovacích zariadeniach.

Podmienky na splnenie úlohy

1. Miesto (čas) úlohy

Hodina biológie

2. Maximálny čas dokončenia úlohy: 90 min

Praktická práca č.6 Schémy na prípravu dezinfekčných roztokov a ich skladovanie

Cieľ: študovať názov dezinfekčných prostriedkov, spôsoby prípravy dezinfekčných roztokov v závislosti od účelu. Pripravte roztok danej koncentrácie.

materiálnu podporu : inštruktážne karty pre praktickú prácu, SanPiN 2.3.6. 1079-01, učebnica

Cvičenie 1

Preštuduje si materiál vzdelávacej literatúry, SanPiN 2.3.6. 1079-01. Podľa výsledkov štúdie:

1. Odpovedzte na otázky:

Aké riešenia sú dezinfekčné prostriedky?

Aký je účel dezinfekčných prostriedkov?

Aké lieky sa používajú ako dezinfekčné prostriedky?

Ako spoznať, že riad bol ošetrený dezinfekčnými prostriedkami?

2. Preštudovať si schémy prípravy a účel dezinfekčných prostriedkov. Vyplňte tabuľku.

3. Pripravte si 1 liter 0,2 % roztoku chloramínu B.

4. Na základe výsledkov práce urobte záver.

Podmienky na splnenie úlohy

1. Miesto (čas) úlohy

Hodina biológie

2. Maximálny čas dokončenia úlohy: 90 min

Hodnotiace kritériá pre realizáciu praktickej práce:
Skóre „5“ je dané, ak :
1. Správne nezávisle určuje účel týchto prác; vykonáva prácu v plnom rozsahu pri dodržaní potrebnej postupnosti výkonu.
2. Samostatne racionálne vyberá a pripravuje potrebné vybavenie na výkon práce; vykonáva tieto práce v podmienkach, ktoré poskytujú najpresnejšie výsledky.
3. Kompetentne, logicky popisuje postup prác, správne formuluje závery; presne a presne vykonáva všetky záznamy, tabuľky, výkresy, nákresy, grafy, výpočty.
4. Preukazuje organizačné a pracovné schopnosti: udržiava čisté pracovisko, poriadok na stole, hospodárne využíva materiály; pri vykonávaní prác dodržiava bezpečnostné predpisy.
Skóre „4“ je dané, ak :
1. Laboratórne práce vykonáva plne v súlade s požiadavkami pri hodnotení výsledkov „5“, ale pripúšťa dva až tri nedostatky alebo jednu drobnú chybu a jeden nedostatok vo výpočtoch, meraniach.
2. Pri vypracovávaní práce pripúšťa nepresnosti v popise postupu; pri zovšeobecňovaní vyvodzuje neúplné závery.
Skóre „3“ je dané, ak :
1.1 Správne vykoná prácu najmenej o 50%, avšak objem dokončenej časti je taký, že vám umožní získať správne výsledky a vyvodiť závery o hlavných, základných dôležité úlohy práca.
2. Vyberá zariadenie, materiál, začína prácu s pomocou učiteľa; alebo v priebehu meraní, výpočtov, pozorovaní robí chyby, nepresne formuluje závery, zovšeobecňovanie.
3. Vykonáva prácu v iracionálnych podmienkach, čo vedie k výsledkom s veľkými chybami; alebo v protokole povoľuje celkovo najviac dve chyby (v zaznamenávaní čísel, výsledkov meraní, výpočtov, zostavovania grafov, tabuliek, schém a pod.), ktoré nemajú zásadný význam pre túto prácu, ale ovplyvnili výsledok vykonania.
4. Robí hrubú chybu v priebehu práce: vo vysvetľovaní, v návrhu, v dodržiavaní pravidiel bezpečnosti, ktoré žiak na požiadanie učiteľa opraví.
Skóre „2“ je dané, ak :
1. Neurčuje samostatne účel práce, nevie pripraviť vhodné vybavenie bez pomoci učiteľa; vykonáva prácu neúplne a objem dokončenej časti neumožňuje vyvodiť správne závery.
2. v priebehu práce urobí dve a viac hrubých chýb, ktoré nie je možné na žiadosť vyučujúceho opraviť; alebo robí merania, výpočty, pozorovania nesprávne.

APLIKÁCIA.

Príloha 1

PRIPOMIENKA ŠTUDENTOV

Pri vykonávaní práce musí študent:

Predbežne sa podrobne oboznámte s teoretickým materiálom a dobre porozumiete mikrobiologickým zákonitostiam a procesom, ktoré sa majú študovať v praxi.

Pri vykonávaní experimentu dodržiavajte všetky bezpečnostné opatrenia, postupnosť operácií a vykonajte potrebné pozorovania.

Výsledky experimentu zapíšte do zošita podľa schémy navrhnutej v práci:

Po skončení práce urobte poriadok pracovisko a odovzdať laborantovi alebo učiteľovi.

Federálna agentúra pre vzdelávanie

Štátna vzdelávacia inštitúcia

"Irkutská štátna univerzita"

MALÝ WORKSHOP O MIKROBIOLOGII

Učebná pomôcka

Irkutsk 2009

UDC 579 (076,5)

Publikované rozhodnutím redakčnej a vydavateľskej rady Irkutskej štátnej univerzity

Zhilkinov workshop o mikrobiológii: učebnicová metóda. príspevok pre študentov. vyššie učebnica inštitúcie v odboroch "Mikrobiológia", "Biológia" a "Fyziológia".

6. Mikrobiálna hmota by nemala kontaminovať ruky, stôl a okolité predmety. Rozliata mikrobiálna suspenzia sa neutralizuje dezinfekčnými prostriedkami.

7. Po ukončení práce sa kultúry odovzdajú vyučujúcemu, naočkované skúmavky a poháre sa vložia do termostatu.

8. Bakteriologické slučky, ihly, pinzety a iné kovové predmety sa po kontakte s mikroorganizmami spália v plameni liehovej lampy a umiestnia sa do špeciálneho stojana.

9. Použité sklíčka a krycie sklíčka, pipety, špachtle atď. sa vložia do 3–5 % roztoku kyseliny karbolovej alebo iných dezinfekčných roztokov.

10. Použité kultúry v skúmavkách, Petriho miskách a pod. sa počas dňa neutralizujú dezinfekčnými roztokmi, potom sa misky uvaria a umyjú.

11. Treba dôsledne dodržiavať osobnú hygienu – po skončení práce si dôkladne umyť ruky mydlom a vodou.

12. Pri práci s elektrospotrebičmi a chemikáliami je potrebné dodržiavať bezpečnostné opatrenia.

Ministerstvo školstva mesta Moskvy

Vysoká škola technologická č. 28

Zhukova L.A.

METODICKÉ POKYNY

Komu laboratórne práce №№1-4

Pre študentov mimovládnych organizácií

Moskva

2012

"Základy mikrobiológie, sanitácie a hygieny"

METODICKÉ POKYNY

do laboratórnych prác №№1-4

pre študentov mimovládnych organizácií

34.17 Prevádzkovateľ procesov výroby klobás.

_______________________________________________________________

Príručka je určená pre vysokoškolákov. Môže byť použitý pre samoštúdium na študijné stretnutia a mimoškolskú samostatnú prácu.

Zostavila: Zhukova L.A. - učiteľ špeciálnych odborov

Recenzent: Sukhanova N.V. - učiteľka špeciálnych disciplín

Strih: Malkova L.A. - Zástupca riaditeľa pre výchovnú a metodickú prácu

Rukopis bol posúdený a prerokovaný na zasadnutí Ústredného výboru technologických disciplín, protokol č. __ zo dňa __ _______ 2012.

VYSVETLIVKA

Pokyny boli vypracované v súlade s aktuálnym programom kurzu mikrobiológie, ktorý prijala Štátna autonómna vzdelávacia inštitúcia stredného vzdelávania mesta Moskva Technologická vysoká škola č. 28 pre študentov študujúcich v odbore 260301 „Technológia mäsa a mäsových výrobkov“.

Pri súčasnej úrovni rozvoja prírodných vied sú potrebné hlboké znalosti mikrobiologických procesov, ktoré sú základom mnohých biotechnologických odvetví a slúžia ako záruka ochrany. životné prostredie z antropogénneho vplyvu.

Okrem získavania teoretických vedomostí z mikrobiológie potrebujú budúci špecialisti laboratórne a praktické hodiny, čo sú v podstate malé výskumné projekty.

Realizáciou laboratórnych prác sa zabezpečuje upevnenie teoretických vedomostí žiakov, rozvoj zručností v mikrobiologickej kontrole a schopnosť robiť samostatné závery a zovšeobecnenia.

Tieto pokyny na vykonávanie laboratórnych prác naznačujú:

kombinovať laboratórne práce na rovnakú tému alebo s rovnakým sémantickým obsahom tak, aby bolo vhodné ich časovo organizovať, ako to vyžadujú špecifiká mikrobiologických analýz;

rozdeliť triedy tak, aby pracovné zaťaženie poslednej hodiny umožnilo prediskutovať výsledky analýzy, vykonať test vykonanej práce;

sústrediť najdôležitejší vzdelávací materiál, ktorý umožňuje študentom osvojiť si praktické zručnosti pri práci mikrobiologické laboratórium;

poskytnúť metodiku na vykonanie analýzy s uvedením podstaty metódy, techniky implementácie, pravidiel spracovania výsledkov;

používať tie metódy mikrobiologickej analýzy, ktoré poskytuje GOST.

Téma a cieľ práce.

Materiálne zabezpečenie laboratórnych prác.

Odporúčania na vykonávanie laboratórnych prác, úloha, vysvetlenie k práci, spôsoby rozboru, formuláre na zostavenie správy, kontrolné otázky k laboratórnym otázkam a doplnková literatúra.

Vzhľadom na náročnosť niektorých metód a dĺžku rastu mikroorganizmov je v niektorých prípadoch časť laboratórneho materiálu vopred pripravená učiteľom, ale spôsob jeho prípravy je daný.

Zručnosti získané v laboratórnych triedach sú potrebné na mikrobiologickú kontrolu výroby, ktorej účelom je včas identifikovať porušenia hygienických podmienok výroby a zariadení, odhaliť miesta a spôsoby mikrobiálnej kontaminácie, prijať potrebné opatrenia na odstránenie týchto nebezpečných ložísk a dosiahnuť vysokú kvalitu výrobkov.

PRAVIDLÁ PRÁCE V MIKROBIOLOGICKOM LABORATÓRII

Práca v mikrobiologickom laboratóriu si vyžaduje prísne dodržiavanie osobitných pravidiel, ktoré určujú dve hlavné ustanovenia.

Po prvé, v mikrobiologickej praxi sa používajú najmä čisté kultúry mikroorganizmov, teda populácie mikroorganizmov rovnakého druhu, často potomkov jednej bunky.

Keďže vo vzduchu, na povrchu predmetov okolo nás, na oblečení, rukách, vlasoch je vždy veľké množstvo rôznych mikroflórov, aby sa zabezpečila sterilita štúdií a aby sa zabránilo kontaminácii kultúr, práca sa musí vykonávať v súlade s pravidlami asepsie.

Po druhé, v štúdiách s neidentifikovanými mikroorganizmami, keď sú detegované z environmentálnych objektov a technogénnych tokov, môžu byť izolované patogénne a podmienene patogénne mikroorganizmy.

Navyše bunky saprofytických aj patogénnych mikroorganizmov môžu byť alergénmi pre určitých jedincov. Na získanie spoľahlivých výsledkov výskumu, na zaistenie osobnej bezpečnosti a bezpečnosti ostatných je teda potrebné dodržiavať určité pravidlá.

Pri preosievaní mikroorganizmov sa sterilita dosahuje vďaka tomu, že sa vykonáva všetka práca blízko plameňa horáky. Bakteriologické slučky používané na prenos mikroorganizmov z pevných médií sa zapália v plameni horáka a sklenené nádoby a živné médiá sa predsterilizujú v sušiarňach a autoklávoch.

Povrch pracovnej plochy sa dezinfikuje pred aj po práci utretím 3% roztokom chloramínu, lyzolu, alebo 70% roztokom izopropylu alebo etylalkoholu. Roztoky týchto alkoholov možno použiť aj na dezinfekciu rúk.

Príprava priestorov zahŕňa mokré čistenie a dôkladné vetranie, po ktorom nasleduje ožiarenie ultrafialovým svetlom z germicídnych lámp. V závislosti od stupňa znečistenia ovzdušia je na jeho sterilizáciu potrebné ožiarenie od 30 minút do niekoľkých hodín. Ultrafialové lúče sú nebezpečné pre oči, preto, keď je baktericídna lampa zapnutá, nie je možné byť v miestnosti.

Pri práci v mikrobiologickom laboratóriu musia študenti dodržiavať tieto pravidlá:

1. Každý študent musí pracovať na trvalom mieste.
2. Na pracovisku by sa nemali nachádzať cudzie predmety (vrátane kufríkov a tašiek). Pri práci s napaľovačkou by tiež nemali byť na stole zošity, ktoré budú neskôr potrebné na prípravu mikroskopu a skicovania.
3. Všetky práce sa vykonávajú v čistom župane. Dlhé vlasy musia byť zopnuté, aby sa nezachytili plameňom vyhrievacej podložky.
4. Nádoby používané na kultiváciu mikroorganizmov (skúmavky, banky, Petriho misky, matrace) musia byť označené všeobecným a špecifickým názvom kultúry, dátumom očkovania, menom študenta a číslom skupiny.
5. Všetky predmety používané pri práci so živými kultúrami musia byť dekontaminované buď spálením v plameni horáka alebo ponorením do dezinfekčného roztoku (predmet a krycie sklíčka, pipety, špachtle).
6. Všetky naočkované skúmavky, poháre alebo banky sa vložia do termostatu alebo sa odovzdajú laborantovi.
7. Odpadový materiál sa ukladá do určitých nádob na ich ďalšiu dezinfekciu.
8. V laboratóriu je prísne zakázané fajčiť a jesť.
9. Na konci hodiny musí každý žiak upratať na pracovisku.

Získané údaje by sa mali zaznamenávať do denníka pre laboratórne práce. Záznamy by mali obsahovať: číslo a názov práce, dátum jej začiatku a konca, názvy predmetov výskumu, podmienky vykonávania experimentov, metódy analýzy, ako aj získané výsledky a závery z nich. Pri štúdiu morfológie kultúr sa ich náčrty robia pri určitých zväčšeniach mikroskopu. (V triede by mali byť k dispozícii farebné ceruzky, aspoň červené a modré.) Číselné údaje sú zhrnuté v tabuľkách, grafoch alebo tabuľkách.

LAB #1

Organizácia a vybavenie mikrobiologického laboratória. Zariadenie optického mikroskopu a pravidlá práce s ním. Zvládnutie techniky mikroskopie mikróbov.

Účel lekcie.

Oboznámiť študentov s organizáciou a vybavením mikrobiologického laboratória. Študovať zariadenie optického mikroskopu. Oboznámte sa s hlavnými formami baktérií.

Materiálna podpora.

Edukačné mikrobiologické laboratórium vybavené termostatmi, sterilizátormi, chladničkami, vodným kúpeľom, destilátorom, baktericídnymi lampami, pracovnými stolmi so všetkým potrebným príslušenstvom, mikroskopmi.

Toto laboratórium obsahuje značné množstvo vzdelávací materiál Preto je žiaduce oboznámiť študentov s organizáciou a vybavením laboratória demonštračnou metódou.

Pri štúdiu mikroskopického zariadenia použite plagát zobrazujúci všetky jeho detaily.

Úlohy.

1. Prečítajte si popis práce:

1. Vybavenie edukačného mikrobiologického laboratória.
2. Vybavenie a organizácia výroby

1. Pravidlá práce v mikrobiologickom laboratóriu.
2. Zariadenie optického mikroskopu a starostlivosť oň.

Pravidlá pre prácu s mikroskopom MBR-1.

1. Základné formy baktérií.

1. Vykonajte mikroskopiu hotových prípravkov so základnými formami

baktérie.

Vysvetlenie pre prácu

1.1 Vybavenie edukačného mikrobiologického laboratória.

Priestory edukačného mikrobiologického laboratória by mali pozostávať z edukačných, technických miestností a učiteľskej miestnosti.

V školiacej miestnosti by mal byť inventár: laboratórne stoly, stoly na mikroskopiu, stôl pre učiteľa, termostaty, stoličky, polička s titrovanými roztokmi, váhy, tabuľa, stolík na riad, drez.

Na školenia možno použiť bežný laboratórny stôl.

Mikroskopický stolík musí byť umiestnený pred oknom; jeho výška by mala byť asi 80 cm, šírka - asi 40 cm.Pre väčšiu stabilitu je stôl pre mikroskopiu usporiadaný na konzolách.

Termostaty. Mikróby sa musia pestovať za takých podmienok, aby teplota okolitého vzduchu podliehala azda najmenším výkyvom. Na to slúžia termostaty, čo sú skrinky, v ktorých sa udržiava stála teplota.

K dispozícii sú termostaty vzduchu a vody.

Vzduchové termostaty sú ohrievané teplým vzduchom, zvyčajne vyhrievaným elektrický šok.

Vo vodných termostatoch medzi dvojitými stenami je voda ohrievaná elektrickým prúdom, plynom alebo inými zdrojmi tepla. Teplotné výkyvy v týchto termostatoch sú menšie ako pri vzduchových.

V laboratóriu by mali byť aspoň tri termostaty: teplota jedného je 30 °C, druhého 37 °C a tretieho 43 °C. Mikróby, ktoré dobre rastú pri 20 °C, sa môžu pestovať pri izbovej teplote.

Konštantnú teplotu v termostatoch udržiavajú špeciálne zariadenia - termostaty. V termostate s presným regulátorom teploty by teplotné výkyvy nemali presiahnuť 2 °C.

Autokláv alebo sterilizátor.Autokláv je kovový valec s dvojitými stenami a masívnym vekom, ktorý sa uzatvára skrutkovými svorkami.

Na valec je nasadený kovový kryt. Autokláv je vybavený trubicou na výstup pary, manometrom, poistným ventilom a vodomerným sklom. Sterilizuje živné pôdy, rôzne tekutiny a náčinie.

Pred sterilizáciou sa do autoklávu naleje destilovaná alebo prevarená voda cez lievik vodnej odmerky (pri použití surovej vody sa rýchlo tvorí vodný kameň) až po rysku vyznačenú na plášti autoklávu. Potom sa autokláv naplní materiálom, ktorý sa má sterilizovať (ten musí byť zhora pokrytý papierom), veko sa pevne priskrutkuje, otvorí sa ventil parnej trubice a začne sa zahrievanie.

Ohrev sa vykonáva elektrinou, parou (v tomto prípade sa do autoklávu nenalieva voda) alebo niekoľkými plynovými horákmi. Keď sa autokláv zahrieva, najskôr začne unikať vzduch a potom para, ktorá sa do autoklávu dostane cez otvory v hornej časti valca. Keď para začne vychádzať nepretržitým prúdom, uvoľňuje sa ďalšie 2-3 minúty, aby sa vytlačil vzduch z autoklávu, a potom sa ventil uzavrie. V dôsledku toho sa výstup pary zastaví a postupne sa začne zvyšovať tlak v autokláve (zdvihnutie ihly tlakomeru).

Po nastavení požadovaného tlaku sa stupeň ohrevu autoklávu zníži tak, aby ručička tlakomeru zostala po určitú dobu na rovnakej úrovni. Začiatok sterilizácie sa považuje za okamih, keď šípka dosiahne správny tlak.

Údaje tlakomeru zodpovedajú určitej teplote pary.

Údaj manometra v ati Teplota pary v ˚C

0,5 112,0

1,0 121,4

1,5 128,8

2,0 135,1

Na konci sterilizácie sa zahrievanie zastaví a ručička tlakomeru sa nechá klesnúť na nulu. Až potom sa otvorí ventil výstupnej rúrky pary, vypustí sa para a vpustí sa vzduch, následne sa odskrutkuje veko, zdvihne sa a po vychladnutí autoklávu v tejto polohe sa sterilizovaný materiál vyberie.

Riad a inventár.

Petriho misky slúžia na siatie plodín. Používajte poháre s priemerom 10 cm (výška 1,5 cm). Sklo by malo byť tenké, priehľadné, bez vzduchových bublín.

Pipety. Na bakteriologickú prácu sa používajú pipety s objemom 1-5 a 10 ml. Najčastejšie používané pipety sú 1 ml, dlhé cca 28 cm (bez predĺženia).

Skúmavky. Na naliatie vody do 10 ml sa používajú skúmavky s rozmermi 18 x 2,0 cm; Používajú sa aj skúmavky 18 x 1,5 cm Pre kultivačné médiá sa používajú skúmavky 15 x 1,8 cm.

Ihly a slučky. Na odber testovaného materiálu a na očkovanie sa používajú ihly a slučky.

Na umývanie laboratórneho sklaumývadlový stôl.

Pri práci s mikroskopom použitepredmet a krycia vrstva sklo . Poháre by mali byť bezfarebné s hladkým povrchom, bez vzduchových bublín. Pre špeciálne štúdie,sklenené sklíčka s jamkami.

1.2 Vybavenie a organizácia výrobných prác

Mikrobiologické (bakteriologické) laboratórium.

Bakteriologické vyšetrenie potravinových surovín a výrobkov z neho sa vykonáva v špeciálnom laboratóriu, ktoré má povolenie na prácu s mikroorganizmami III-IV skupín patogenity. Mikrobiologické (bakteriologické) laboratórium (alebo bakteriologické oddelenie ako súčasť výrobného laboratória mäsokombinátu) je určené na sanitárnu a bakteriologickú kontrolu surovín, hotových výrobkov, pomocných materiálov, sanitárneho a hygienického stavu technologických zariadení, inventára, nádob, odevov a rúk personálu.

Laboratórne priestory.Všeobecné umiestnenie laboratória a jeho infraštruktúry musí spĺňať požiadavky GOST R 51446-99 (ISO 7218-96). Laboratórium poskytuje tieto samostatné miestnosti alebo izolované pracovné priestory:

na príjem, skladovanie, prípravu a spracovanie vzoriek;

na primárny výsev, opätovný výsev, prípravu riedení a iné práce v aseptických podmienkach;

na prípravu, sterilizáciu, plnenie do fliaš a skladovanie živných médií, prípravu laboratórneho skla a zariadení;

na dezinfekciu a čistenie zariadení, použitých živných pôd a materiálov kontaminovaných mikroflórou.

Termostaty, chladničky, mrazničky môžu byť umiestnené v oddelených miestnostiach.

Priestory musia byť umiestnené tak, aby bola zabezpečená ich ochrana pred vplyvom vonkajších faktorov (zvýšená teplota, vlhkosť, prašnosť, hluk, vibrácie), organizovať tok čistých a kontaminovaných materiálov.

Mäso môže byť kontaminované patogénnou mikroflórou, ktorá predstavuje vážne nebezpečenstvo pre ľudské zdravie a priestory laboratória musia byť izolované od ostatných oddelení. Ak nie je možné zorganizovať samostatnú miestnosť, je dovolené inštalovať stôl v spoločenskej miestnosti na počiatočné očkovanie vzoriek. Presklený box je vhodné vybaviť predboxom, aby sa zabezpečili aseptické pracovné podmienky.

Laboratórne miestnosti by mali byť svetlé (osvetlenie povrchu stola do 500 luxov) a priestranné – pre každého analytika je odporúčaná pracovná plocha cca 20 m 2. Steny, strop a podlaha by mali byť hladké, ľahko čistiteľné, odolné voči čistiacim a dezinfekčným prostriedkom. Pre uľahčenie čistenia a dezinfekcie je povrch laboratórneho vybavenia a nábytku pokrytý hladkým nepriepustným materiálom, ako je plast, a pracovisko je pokryté zrkadlovým stolíkom.

Na bakteriologickú analýzu potravinárskych výrobkov, najmä údenín a údenín, sú potrebné 1-2 škatule s predškatuľkami. Boxy sú izolované, presklené miestnosti chránené proti prachu; maximálny povolený počet častíc väčších ako 0,5 mikrónu na 1 m by nemal presiahnuť 4000.

Priestory laboratória sú pravidelne čistené a dezinfikované, ktorých kvalita je pravidelne kontrolovaná mikrobiologickou metódou.

V každej miestnosti by mal byť prívod studenej a teplej vody, fľaša s dezinfekčným roztokom na umývanie rúk.

1.3 Pravidlá pre prácu v mikrobiológii

laboratóriách

Priamy kontakt s mikroorganizmami a nutnosť dodržiavať sterilné podmienky pri všetkých operáciách si vyžadujú znalosť a prísne dodržiavanie nasledujúcich pravidiel:

práca v županoch;

udržiavať čistotu a poriadok na pracovisku;

nedotýkajte sa prstami mikrobiálnych usadenín a kondenzovanej vody v skúmavkách a kultivačných miskách;

mikrobiálne usadeniny z podložných sklíčok a krycích sklíčok a iných predmetov neumývajte obrúskami, filtračným papierom, dezinfikujte ich umiestnením do roztoku alkoholu alebo kyseliny karbolovej;

v procese práce a po zasiatí zničte zvyšky mikrobiálnych usadenín na bakteriologických ihličkách a slučkách kalcináciou v plameni alkoholovej lampy alebo plynového horáka;

neutralizovať použité kontaminované materiály a použité kultúry mikróbov sterilizáciou v autokláve (túto prácu vykonávajú pracovníci laboratória);

liehové lampy nedržte blízko tváre, liehovú lampu zapaľujte len zápalkou;

vyčistiť a spracovať pracovisko na konci práce dezinfekčným roztokom pod dohľadom laboranta; umiestniť kultúry mikroorganizmov potrebné pre ďalšiu prácu, v chladničke alebo trezore, ktorý je uzavretý a zapečatený; do termostatu vložte skúmavky a Petriho misky naočkované mikroflórou;

po práci si dôkladne umyte ruky, nejedzte v laboratóriu.

1.4 Zariadenie optického mikroskopu a starostlivosť oň.

Mikroskop je komplexný optický prístroj, ktorý zväčšuje objekt 1000-1500-krát. Moderný mikroskop pozostáva z dvoch hlavných častí – mechanickej a optickej.

Mechanická časť pozostáva zo statívu, ktorý rozlišuje nohu, základňu, držiak trubice a stolík na predmety pripevnený k základni statívu. Držiak tubusu sa zdvíha a spúšťa pomocou makrometrických a mikrometrických skrutiek určených na hrubé a jemné zaostrenie objektu.

Optická časť mikroskopu pozostáva z osvetľovacích a pozorovacích zariadení.

Osvetľovacia aparatúra je umiestnená pod stolom objektu a pozostáva zo zrkadla, kondenzora a irisovej clony.

Zrkadlo odráža svetelné lúče a smeruje ich ku kondenzátoru.

Kondenzor je sústava šošoviek a slúži na zvýšenie jasu osvetlenia predmetného objektu.

Pozorovacie prístroje zahŕňajú šošovky a okuláre.

Objektívy sú zaskrutkované do objímok revolverov a pozostávajú zo sústavy šošoviek uzavretých v kovovom ráme. Predná alebo predná šošovka objektívu je najmenšia a jediná, ktorá poskytuje zväčšenie. Ostatné šošovky v šošovke sú korekčné.

Biologické mikroskopy MBR-1 a MBI-1 majú zvyčajne tri alebo štyri šošovky s digitálnym označením x8, x20, x40, x90, zobrazujúce skutočné zväčšenie týchto objektov.

Okulár sa vkladá do horného konca tubusu. Okulár je systém dvoch plankonvexných šošoviek, ktoré sú konvexné smerom k objektívu. Šošovka smerujúca k oku sa nazýva očná šošovka a šošovka smerujúca k prípravku sa nazýva zbiehavá šošovka. Okuláre domácich mikroskopov sú označené číslami znázorňujúcimi ich vlastné zväčšenie: x5, x7, x10, x15.

Zväčšenie mikroskopu sa rovná súčinu zväčšenia okuláru zväčšením objektívu.

Návod na údržbu mikroskopu:

Mikroskop je chránený pred prachom, vlhkosťou a slnečným žiarením. Po práci s ním je umiestnený v puzdre alebo pokrytý uzáverom vyrobeným z hustej tkaniny.

Objektívy a okuláre sú utierané semišom alebo flanelom.

Nenechávajte tubus mikroskopu otvorený, t.j. bez okuláru, pretože to vedie k hromadeniu prachu v tubuse a kontaminácii objektívov.

Mikroskop pozostáva z dvoch hlavných častí. Základom mikroskopu je statív. K nej je pripevnená trubica s optickou časťou a stolík na predmety. Statív sa skladá zo základne (alebo nohy v tvare podkovy) a držiaka trubice. Držiak tubusu je spojený so základňou pomocou pántu, ktorý umožňuje naklonenie vrchnej časti mikroskopu pre jednoduché použitie. V tubuse sú umiestnené objektívy a okuláre. Šošovky sú zaskrutkované do spodnej časti tubusu, nazývaného revolver. Okuláre voľne zapadajú do hornej časti tubusu. Zväčšenie je možné meniť pomocou rôznych šošoviek, ktoré sú naskrutkované do otočného bubna revolvera.

Držiak tubusu sa zdvíha a spúšťa pomocou makrometrických a mikrometrických skrutiek určených na hrubé a jemné zaostrenie objektu. Aby bol prípravok dobre viditeľný, musí sa tuba pohybovať v smere jej optickej osi pomocou mechanizmov hrubého alebo mikrometrického pohybu. Hrubý pohyb by sa mal vykonávať pomerne ľahko, ale bez spontánneho spúšťania trubice. Pre presnejšie nastavenie slúži mikrometrická skrutka. Mikrometrická skrutka má komplexná štruktúra, je jednou z najľahšie poškodených častí mikroskopu. Neotáčajte skrutkou o viac ako pol otáčky jedným alebo druhým smerom (po hrubej inštalácii mikroskopu). Tabuľka objektov sa používa na umiestnenie skúmaného lieku.

Optická časť pozostáva zo zrkadla, kondenzoru s clonou, objektívov a okulárov. Zrkadlo mikroskopu je pohyblivé. Pri umelom svetle je lepšie použiť konkávne zrkadlo, v rozptýlenom svetle - ploché. Zrkadlo odráža svetelné lúče a smeruje ich ku kondenzátoru. Kondenzátor sa používa na dosiahnutie silnejšieho osvetlenia prípravku. Membrána slúži na reguláciu osvetlenia prípravku. Membrána je umiestnená medzi spodným povrchom kondenzora a zrkadlom.

Objektívy sú najdôležitejšou súčasťou mikroskopu, určujúce jeho optickú mohutnosť. Objektívy sú zaskrutkované do objímok revolverov a pozostávajú zo sústavy šošoviek uzavretých v kovovom ráme. Predná alebo predná šošovka objektívu je najmenšia a jediná, ktorá poskytuje zväčšenie. Zvyšné šošovky v šošovke sú korekčné. Okuláre zväčšujú obraz poskytovaný šošovkou, ale neodhaľujú žiadne podrobnosti o skúmanom lieku.

Šošovky, ktoré je potrebné počas prevádzky ponoriť do cédrového oleja, sa nazývajú ponorné alebo ponorné. Suchá šošovka je šošovka, ktorá má vzduch medzi prípravkom a šošovkou. Každý mikroskop je vybavený suchými a ponornými objektívmi. Šošovky s prirodzeným zväčšením 8 a 40 sú suché, objektív s vlastným zväčšením 90 je imerzný.

Pravidlá pre prácu s mikroskopom MBR-1

1. Mikroskop je uložený v skrinke, ktorá ho chráni pred prachom, vlhkosťou a svetlom. Mikroskop sa prenáša pravou rukou, drží sa za rukoväť statívu, s ľavou podperou zospodu.
2. Pred prácou s mikroskopom utrite okulár, objektív a zrkadlo handričkou.
3. Umiestnite mikroskop statívom smerom k sebe a stolíkom s objektom smerom od vás. Vo vzťahu k sediacemu mikroskopu by mal byť posunutý bližšie k ľavému ramenu. Napravo od mikroskopu je album, ceruzky, farebné ceruzky a guma.
4. Umiestnite šošovku s malým zväčšením do pracovnej polohy. Za týmto účelom otáčajte revolverom, kým nebude požadovaný objektív v strednej polohe (nad otvorom stolíka). Keď je šošovka v strednej polohe, v revolveri sa spustí špeciálne zariadenie - západka, pričom sa ozve jemné cvaknutie a revolver je zafixovaný. Pamätajte, že štúdium akéhokoľvek objektu začína malým nárastom.
5. Pomocou makrometrickej skrutky zdvihnite šošovku nad stolík asi o 1 cm, otvorte membránu, zdvihnite kondenzor na úroveň stolíka.
6. Pri pohľade cez okulár ľavým okom použite zrkadlo na nasmerovanie svetla tak, aby bolo celé zorné pole jasne a rovnomerne osvetlené.
7. Pripravený preparát položte na stolík krycím sklíčkom nahor tak, aby bol predmet v strede otvoru stolíka. Spustite šošovku nad prípravok o 0,2 cm pomocou makrometrickej skrutky.
8. Pozerajte sa do okuláru, súčasne pomaly otáčajte stojanom smerom k sebe a jemne zdvíhajte tubus, kým sa v zornom poli neobjaví obraz objektu (0,5 cm); opatrným otáčaním mikrometrovej skrutky nie viac ako o ½ alebo ¾ celej otáčky, aby ste dosiahli čistý výhľad.
9. Pokiaľ ide o zváženie objektu pri veľkom zväčšení, je potrebné preparáciu vycentrovať, t.j. umiestnite časť predmetu záujmu do úplného stredu zorného poľa. Za týmto účelom posúvajte prípravok pomocou prípravkov rodičov alebo rukami, kým objekt nezaujme požadovanú polohu. Ak objekt nie je vycentrovaný, potom pri veľkom zväčšení zostane mimo dohľadu.
10. Prepnutím z menšieho na väčšie zväčšenie otáčajte revolverom, aby ste šošovku s vyšším zväčšením umiestnili proti spodnému otvoru tubusu. Pozerajte sa do okuláru a opatrným otáčaním mikrometrovej skrutky dosiahnete čistý obraz.
11. Pri skicovaní prípravku sa ľavým okom pozerajte do okuláru a pravým okom do albumu.
12. Po práci pomocou mikroskopu s revolverom vymeňte šošovku s veľkým zväčšením za malú šošovku, vyberte prípravok zo stola a vráťte ho na miesto.
13. Upratujte si stôl; drogy a usmernenia na učiteľskom stole.

1.5 Základné formy baktérií.

Podľa tvaru sa baktérie zvyčajne delia na guľovité (koky), tyčinkovité (klostridia, bacily) a stočené (vibrio, spirilla, spirochéty).

Kokoidné formy podľa lokalizácie kokov sa delia na mikrokoky - bunky umiestnené jednotlivo; diplokoky - koky spojené dvoma; tetrakoky - koky spojené štyrmi; streptokoky - koky usporiadané vo forme dlhého alebo krátkeho reťazca; sarcíny - koky usporiadané vo forme balíčkov; stafylokoky - náhodné nahromadenie kokov, často vo forme hrozna.

Tyčinkové formy podľa umiestnenia tyčiniek sa delia na diplobaktérie – tyčinky spojené do párov; streptobaktérie – tyčinky usporiadané do reťaze. Spomedzi baktérií tvoriacich spóry sa rozlišujú bacily a klostrídie. U bacilov priemer spór nepresahuje šírku vegetatívnej bunky a u Clostridium je spóra väčšia ako šírka bunky, takže bunka má podobu vretena, tenisovej rakety, paličky.

Spletité formy sa delia na vibriá, ktoré majú tvar čiarky, spirily s niekoľkými (až 5) kučier a spirochéty s veľkým počtom malých kučier.

Poriadok vykonania

2. Mikroskopia hotových prípravkov s hlavnými formami baktérií.

Mikroskopická technika.

Skúšobný prípravok sa umiestni na objektový stôl a upevní sa svorkami.

Pri práci s imerzným objektívom 90 sa na preparát nanesie kvapka imerzného oleja a následne sa pomocou makrometrickej skrutky tubus s vycentrovaným objektívom 90 opatrne spustí tak, aby jeho predná šošovka bola ponorená do kvapky oleja a ohnisko bolo pod preparátom. Potom sa pri pohľade do okuláru trubica veľmi pomaly zdvihne tou istou skrutkou (o stotiny milimetra), až kým sa nezobrazí obraz mikróbov. Presná inštalácia lieku v ohnisku šošovky sa vykonáva pomocou mikrometrovej skrutky.

Poznámka.

Výhodou imerzného systému je, že keď je šošovka ponorená do oleja, svetelné lúče prechádzajúce cez sklo-olejové médiá sa takmer nelámu, keďže index lomu svetla pre tieto médiá je takmer rovnaký. Vďaka tomu je osvetlenie pri mikroskopovaní olejom maximálne.

Na konci práce sa imerzný olej odstráni z prednej šošovky objektívu 90 handričkou z mäkkej tkaniny, pre úplnejšie odstránenie oleja sa predná šošovka utrie handričkou navlhčenou v zmesi alkoholu a éteru v pomere 1: 1, potom sa šošovka utrie dosucha. Mikroskop je uložený v sklade.

Pri mikroskopii dávajte pozor na tvar a veľkosť buniek skúmaného mikroorganizmu, na štrukturálne znaky buniek - prítomnosť spór a kapsúl v baktériách, púčiky - v kvasinkách; v príprave formy - pre rôzne tvary buniek: okrúhle, oválne, predĺžené, valcové, rozvetvené.

Správa z mikroskopu.

Výsledky mikroskopie sú zaznamenané v tabuľke (formulár 1).

Formulár 1

Kontrolné otázky.

1. Aké zariadenie by malo byť vybavené mikrobiologickým laboratóriom, jeho účel?
2. Základné pravidlá pre prácu v mikrobiologickom laboratóriu.
3. Aké je zariadenie optický systém biologický mikroskop?
4. Aké pravidlá treba dodržiavať pri používaní a starostlivosti o mikroskop?
5. Aké sú hlavné formy baktérií?

LABORATÓRNE PRÁCE № 2.

Príprava mikrobiologických prípravkov na štúdium živých mikroorganizmov ("rozdrvená kvapka" a "visiaca kvapka"). Príprava náterov z mikrobiálnych kultúr.

Akékoľvek práce na príprave prípravkov mikroorganizmov, ako aj na prenosoch mikroorganizmov sa vykonávajú v súlade s pravidlami asepsie.

Vybavenie laboratórneho stola.

Na prácu s mikroorganizmami je potrebné určité vybavenie. Na pracovnom laboratórnom stole by mala byť alkoholová lampa alebo plynový horák, bakteriologická slučka, sklíčka a krycie sklíčka, sada farieb, mikroskop, obrúska, cédrový olej, pinzeta, kyveta s mostíkom, nádoba s vodou, presýpacie hodiny, ceruzka na skle, filtračný papier.

Účel lekcie.

Oboznámte sa s metódami štúdia motility baktérií.

Materiálna podpora.

Mladé bujónové kultúry mikroorganizmov v skúmavkách na štúdium pohyblivosti, podložné a krycie sklíčka, podložné sklíčka s otvorom, bakteriologické slučky, Pasteurove pipety, mikroskopy, zápalky, liehové alebo plynové horáky.

Učiteľ musí preukázať techniku ​​prípravy nefarbených preparátov mikroorganizmov, prípravu mikroskopu na prácu, úpravu osvetlenia zorného poľa, inštaláciu lupy, mikroskopovanie preparátov.

Počas práce žiakov by mal učiteľ neustále kontrolovať osvetlenie zorného poľa v každom mikroskope, v prípade potreby ho pomôcť upraviť a pozrieť si obrázky nájdených predmetov. Prehliadka nezafarbeného prípravku by mala byť poskytnutá Osobitná pozornosť, keďže študenti tu musia vidieť tvar buniek aj ich pohyblivosť.

Úlohy.

1. Pripravte prípravky "rozdrvené a visiace kvapky" na určenie pohyblivosti baktérií.
2. Pripravte náter z mikrobiálnej kultúry.
3. Naučte sa techniku ​​mikroskopovania a pozrite sa na pripravené preparáty pod mikroskopom.
4. Pripravte správu o výsledkoch mikroskopie.
5. Obsah hodiny si zapíšte do pracovného zošita.

Poriadok vykonania

1. Štúdium mobility mikróbov v prípravkoch „rozdrvená a visiaca kvapka“.

Drvená kvapka.

Ak sú organizmy v kvapalnom médiu, kvapka suspenzie sa nanesie na odtučnené podložné sklíčko pomocou sterilnej pipety. (Po použití sa pipeta ihneď vloží do porcelánového pohára s dezinfekčným roztokom. Položiť špinavú pipetu na plochu je neprípustné!). Ak sa kultúra pestuje na pevnom živnom médiu, na sklo sa najskôr nanesie kvapka vody a potom sa do nej vložia bunky mikroorganizmov alebo testovaná vzorka testovaného produktu s bakteriologickou slučkou kalcinovanou v plameni horáka a dôkladne sa premieša.

Kvapka tekutiny je pokrytá krycím sklíčkom. Aby sa pod ním netvorili vzduchové bubliny, krycie sklíčko sa najprv jedným okrajom položí na podložné sklíčko a potom sa jemne spustí, pričom sa kvapka „rozdrví“ zatlačením. Je žiaduce vyhnúť sa prebytočnej tekutine, aby sa suspenzia mikroorganizmov nevytlačila spod krycieho sklíčka. Ak k tomu dôjde, prebytočná kvapalina sa odstráni filtračným papierom. Použitý papier treba ihneď vložiť do dezinfekčného roztoku.

Na mikroskopovanie preparátu „rozdrvených kvapiek“ sa používajú len objektívy so suchým systémom, teda bez ponorenia. Tento typ lieku vám umožňuje určiť tvar buniek, ich veľkosť, spôsob sporulácie a ak sú bunky živé, potom prítomnosť alebo neprítomnosť mobility.

Výhodou lieku je, že sa získa tenká vrstva kvapaliny, kde môžete vidieť živé organizmy.

Nevýhodou je, že rýchlo schne a pohyb sa zastaví, vzduch sa často dostane dovnútra, čo narúša mikroskopický obraz.

Na prípravu lieku"visiaca kvapka" na krycie sklíčko sa nanesie malá kvapka suspenzie mikroorganizmov, obráti sa hore dnom a umiestni sa na špeciálne sklíčko s vybraním (otvorom) v strede. Kvapka by mala voľne visieť bez toho, aby sa dotýkala okrajov a dna otvoru. Ak prichádza veľa dní pozorovania, potom sa okraje otvoru natrie vazelínou a kvapka sa hermeticky uzavrie do vlhkej komory. Prípravok "visiaca kvapka" sa používa na zisťovanie pohyblivosti mikroorganizmov, štúdium spôsobov rozmnožovania a sledovanie klíčenia spór.

Na varenie príprava tampónu študovaná kultúra mikróbov sa opatrne rozloží v rovnomernej tenkej vrstve na podložnom sklíčku. Pri príprave kultúr pestovaných na pevnom médiu postupujte nasledovne. Kvapka sterilnej vody z vodovodu alebo fyziologického roztoku sa aplikuje na čisté sklenené podložné sklíčko pomocou sterilnej pipety alebo bakteriologickej slučky.

a) Odoberie sa kultivačná skúmavka, z ktorej je potrebné pripraviť náter. Bakteriologická slučka sa kalcinuje v plameni horáka a drží ju vo vertikálnej polohe.

b) Podržte korok medzi malíčkom a dlaňou pravej ruky, vyberte ho zo skúmavky a držte ho koncom nadol, pričom sa vyhýbajte kontaktu s rukou tej časti korku, ktorá bola v skúmavke.

c) Otvorený koniec skúmavky spálime na plameni.

d) Do skúmavky zavedieme slučku (ešte raz prejdeme plameňom), ochladíme dotykom na stenu skúmavky a odoberieme malé množstvo materiálu, pričom sa zľahka dotýkame kultúry a neškriabeme médium slučkou.

e) Okraje skúmavky a koniec vatovej zátky sa spália nad plameňom horáka.

f) Skúmavku uzavrite bavlnenou zátkou.

g) Odobratý materiál sa emulguje do kvapky prítomnej na podložnom sklíčku a rovnomerne sa rozloží po povrchu (1,5 x 2 cm) tenkou vrstvou slučky.

h) Slučka sa kalcinuje a umiestni sa na miesto.

Ak sa kultúra pestuje v tekutom živnom médiu, potom sa do kvapaliny spustí sterilná slučka, kvapka sa zachytí a rozotrie sa na podložné sklíčko.

3. Mikroskopická technika.

Mikroskop je umiestnený na pracovnej ploche od okraja o 3-5 cm s držiakom trubice smerom k vám.

Vytvorí sa dobré rovnomerné osvetlenie zorného poľa mikroskopu, pre ktoré zrkadlo pri pohľade do okuláru nasmeruje lúč svetla zo zdroja do šošovky. Kondenzátor by mal byť hore a membrána by mala byť otvorená. Zorné pole mikroskopu by malo byť dobre a rovnomerne osvetlené vo všetkých bodoch.

Skúšobný prípravok sa umiestni na stôl s predmetmi rozmazaním alebo kvapkou smerom nahor a zafixuje sa svorkami.

Nezafarbené preparáty sa mikroskopujú s objektívmi x8 a x40, pričom sa kondenzor zníži o 1-0,5 cm k preparátu, čím sa dosiahne najlepšia viditeľnosť nezafarbených buniek.

Pri mikroskopii "živých" mikróbov (nezafarbený prípravok) si všimnite pohyblivosť.

4. Správa o výsledkoch mikroskopie.

c) kresba buniek pod mikroskopom (uveďte prítomnosť spór, toboliek, púčikov, pohyblivosť).

5. Zapíšte si obsah hodiny do pracovného zošita.

Kontrolné otázky

1. Aká je technika prípravy prípravkov „drvená a visiaca kvapka“?
2. Aký je postup prípravy náteru z kultúry baktérií pestovaných na pevnom živnom médiu?
3. Čo vám umožňuje nainštalovať drogu "drvená kvapka"?
4. Na aký výskum sa liek „visiaca kvapka“ používa?

LABORATÓRNE PRÁCE №3.

Príprava zafarbených prípravkov baktérií.

Účel lekcie.

Naučte sa pripravovať a farbiť bakteriálne prípravky jednoduchou a Gramovou metódou.

Materiálna podpora.

Sada hotových roztokov farieb v liekovkách, sada suchých farieb v liekovkách alebo v skúmavkách s gumovými alebo korkovými zátkami: zásaditý a kyslý fuchsín, genciánová violeť, metylénová modrá, safranín, malachit a brilantná zeleň, zmes mikróbov: kultúry grampozitívnych baktérií (Bac. subtilis, Staph. couslitic couslitic cousli) mikroorganizmy pestované na mikroorganizmoch Staph. podložné sklíčka, roztok vodného fuchsínu (Pfeifferova purpurová), bakteriologické slučky, filtračný papier, mikroskopy, liehové alebo plynové horáky.

Učiteľ musí preukázať techniku ​​prípravy farbených preparátov mikroorganizmov, prípravu mikroskopu na prácu, úpravu osvetlenia zorného poľa, inštaláciu lupy, mikroskopovanie preparátov.

Počas práce žiakov by mal učiteľ neustále kontrolovať osvetlenie zorného poľa v každom mikroskope, v prípade potreby ho pomôcť upraviť a pozrieť si obrázky nájdených predmetov. Pri prezeraní farebného preparátu by mal žiak vidieť prítomnosť spór a kapsúl v mikroorganizmoch.

Úlohy.

1. Jednoduchým spôsobom pripravte náter a škvrnu z plaku.
2. Pripravte náter zo zmesi stafylokoka a Escherichia coli na jednom podložnom sklíčku a zafarbite podľa Grama.
3. Prezrite si zafarbené šmuhy pomocou ponornej šošovky.
4. Obsah hodiny si zapíšte do pracovného zošita.

Odpovedzte na bezpečnostné otázky.

Vysvetlenie pre prácu

Na štúdium tvaru mikrobiálnej bunky a niektorých jej štruktúr sa zafarbí prípravok (náter) z materiálu obsahujúceho skúmaný mikrób.

Väčšina mikróbov sa rýchlo a dobre farbí anilínovými roztokmi farbív. Autor: chemické vlastnosti zvyčajne sa delia na zásadité a kyslé. Pre zásadité farbivá je chromofor (ión, ktorý dáva farbu) katión, pre kyslé farbivá je to anión.

Medzi hlavné farbivá patrí červená - neutrálna červená, purpurová zásaditá, safranín, tionín, pyronín, hematoxylín; modrá - metylénová modrá; fialová - krištáľová fialová, metylénová fialová; zelená - malachitová zelená, metylénová zelená. Zásadité farbivá sa spravidla ľahko viažu na jadrové (kyslé) ​​zložky buniek.

Kyslé farbivá zahŕňajú červenú a ružovú - kyslý fuchsín, eozín; žltá - kyselina pikrová, kongo, fluorescenčné; čierny - nigrozín. Kyslé farbivá farbia (základné) zložky buniek intenzívnejšie.

Príprava pracovných roztokov farieb.Pred prípravou pracovných roztokov farieb určených na farbenie mikróbov, často vopred zo suchých farieb určených na farbenie mikróbov, sa často vopred pripravujú zo suchých farieb nasýtené alkoholové roztoky. K tomu sa farba naleje 96% alkoholom v pomere 1:10. Pri tomto pomere je alkohol nasýtený farbou (nerozpustená časť farieb sa vyzráža). Aby ste ušetrili peniaze, odporúča sa na 100 cm³ alkoholu užívať metylénovú modrú 7,0, genciánovú violeť 4,8, zásaditý fuchsín 8,1.

Pre lepšiu saturáciu sa alkoholové roztoky umiestnia do termostatu a udržiavajú sa, kým sa farby úplne nerozpustia. Vodné pracovné roztoky sa podľa potreby pripravujú z nasýtených alkoholových roztokov.

Najbežnejšie používané roztoky farbív sú:

Tsil' fuchsínový karbolický roztok.Do 100 ml 5 % roztoku kryštalickej kyseliny karbolovej sa pridá 10 ml nasýteného alkoholového roztoku zásaditého fuchsínu. Nasýtený roztok fuchsínu sa získa zmiešaním 8 g kryštálov fuchsínu v 10 ml alkoholu. Farba je červená.

Fuchsin Pfeifferje karbolický roztok Zielovho fuchsínu, zriedený v destilovanej vode 1:10. Pripravené bezprostredne pred použitím. Farba má sýtu ružovú farbu.

Karbolický roztok genciánovej violeti.K 10 ml nasýteného alkoholového roztoku farby pridajte 100 ml 2% vodného roztoku kyseliny karbolovej. Nasýtený roztok sa získa rozpustením 1 g kryštalickej genciánovej violeti v 10 ml 96 % alkoholu. Náter má modrofialovú farbu.

Safranin. Pripravte bezprostredne pred použitím pridaním 1 g safranínu do 100 ml horúcej vody. Náter je červeno-hnedý.

Metylénová modrá (Lefflerova modrá).Pripravte pridaním 30 ml nasýteného alkoholového roztoku farby a 1 ml 1% vodného roztoku KOH alebo NaOH do 100 ml destilovanej vody. Roztok má tmavomodrú farbu.

Malachitová zelená.1 g farby sa rozpustí v 100 ml destilovanej vody, prefiltruje sa. Roztok má modrozelenú farbu.

Lugolov roztok. Vezmite 1 g kryštalického jódu a 2 g jodidu draselného na 300 ml destilovanej vody. Najprv sa v malom množstve vody rozpustí jodid draselný a potom sa pridajú kryštály jódu. Po úplnom rozpustení sa pridá zvyšok destilovanej vody.

Komplexné metódy farbeniaslúži na podrobné štúdium štruktúry bunky, ako aj na odlíšenie niektorých mikroorganizmov od iných. Sofistikované metódy farbenia sú založené na vlastnostiach fyzikálno-chemickej štruktúry bunky a jej častí. Najväčšie praktické znalosti má Gramovo farbenie, ktoré umožňuje rozlíšiť baktérie podľa chemického zloženia a štruktúry bunkovej steny.

Metódu vyvinul dánsky vedec Christian Gram v roku 1885. Pri farbení podľa Gramovej metódy sú všetky baktérie rozdelené do dvoch skupín: grampozitívne a gramnegatívne.

Poriadok vykonania

Technika farbenia podľa Grama.

1. Jednoduchá metóda farbenia.O jednoduchá metóda farbenie, používa sa niektorý z farbiacich roztokov, najčastejšie Pfeiffer fuchsín alebo metylénová modrá.

Niekoľko kvapiek roztoku farbiva sa nanesie na fixovaný prípravok pomocou pipety tak, aby pokryl celý povrch náteru: Pfeiffer fuchsin na 1-2 minúty, metylénová modrá na 3-5 minút. Potom sa farba zmyje vodou a škvrna sa vysuší medzi listami filtračného papiera alebo na vzduchu.

2. Sofistikované metódy maľovaniapoužíva sa na účely diagnostiky, identifikácie charakteristických štruktúr mikróbov v prípadoch, keď tieto mikróby nie sú zafarbené jednoduchým spôsobom.

Na odlíšenie mikrobiálnych buniek, ktoré sa líšia chemickým zložením a štruktúrou bunkových stien, sa používa komplexná metóda farbenia - Gramovo farbenie.

Gram-farbiace baktérie sú rozdelené do dvoch skupín: gram-pozitívne a gram-negatívne.

U grampozitívnych baktérií (G+) je hrúbka bunkovej steny 15-80 nm, pozostáva z peptidoglykánu (od 60-90 %) umiestneného v niekoľkých vrstvách, proteínu (asi 1 %) a lipidov (asi 1 %). Boli nájdené polyméry špeciálneho typu, kyseliny teichoové, kovalentne viazané na peptidoglykán. Vysoký obsah peptidoglykánu zaisťuje pri farbení podľa Grama tvorbu komplexu odolného voči alkoholu s genciánovou violeťou a jódom, v dôsledku čoho sú sfarbené do modrofialova.

Hrúbka bunkovej steny gramnegatívnych baktérií (G-) je 10-15 nm, ale jej štruktúra je oveľa komplikovanejšia ako u grampozitívnych baktérií. Jeho základom sú orientované vnútorné lipidy (10-20%), ktoré tvoria lipopolysacharidovú vrstvu s povrchovo umiestnenými polysacharidmi. Na povrchu bunkovej steny sú mozaikovo usporiadané proteíny a polysacharidy. Peptidoglykán je reprezentovaný jednou vrstvou s hrúbkou len 2-3 nm (asi 5-10%), leží pod vrstvou lipopolysacharidu a tesne pokrýva protoplast. Vďaka vysokému obsahu lipidov tvorí bunková stena gramnegatívnych baktérií pri farbení podľa Grama komplex s genciánovou violeťou a jódom, ktorý sa úpravou alkoholom ničí, v dôsledku čoho dochádza k odfarbeniu buniek.

Nerovnaký postoj mikroorganizmov k farbeniu podľa Grama je spojený s rozdielmi v štruktúre a chemickom zložení bakteriálnej bunkovej steny.

Medzi grampozitívne mikroorganizmy patria koky, bacily (tyčinky tvoriace spóry), aktinomycéty, mykobaktérie, klostrídiové baktérie.

Medzi gramnegatívne mikroorganizmy patria: baktérie (tyčinky netvoriace spóry), spirilla, salmonela, E coli, Pseudomonas, Azotbacter, vibrios.

Existujú gram-variabilné mikroorganizmy, ktorých postoj k Gramovmu farbeniu sa v určitých fázach ich životného cyklu mení. Keďže schopnosť buniek farbiť podľa Grama závisí od ich veku, na Gramovo farbenie sa používajú bunky mladej kultúry, často staré jeden deň. Na porovnanie je vhodné súčasne so stanovovaným objektom zafarbiť bunky mikroorganizmov, ktorých vzťah k farbeniu podľa Grama je známy (kontrola).

Gramovo farbenie sa vykonáva takto:

1. Na podložnom skle sa pripravia tri nátery kultúry mikroorganizmov: v strede - náter študovanej kultúry, vľavo a vpravo - nátery kontrolných mikroorganizmov.

Nátery by mali byť tenké, aby boli bunky rovnomerne rozložené po povrchu skla a nevytvárali zhluky, pretože výsledky farbenia môžu závisieť od hrúbky náteru. Nátery vysušte na vzduchu, zafixujte nad plameňom horáka.

1. Škvrny sa roztierajú karbolickou genciánovou violeťou. Na nátery sa nanesie dostatočné množstvo farbiva, udržiava sa 1-2 minúty, farbivo sa vypustí a bez zmytia vodou sa nátery upravia Lugolovým roztokom až do sčernenia (približne 1-2 minúty).
2. Lugolov roztok sa scedí a prípravok sa na 0,5-1 min (prísne) ošetrí 96% etylalkoholom ponorením do pohára s alkoholom alebo nanesením alkoholu na nátery (výsledok celého zafarbenia závisí od času ošetrenia náteru alkoholom: pri nedostatočnom spracovaní si všetky baktérie zachovajú škvrny, pri nadmernom odfarbení).
3. Prípravok sa ihneď premyje vodou a farbí sa 1-2 minúty vodnou purpurovou. Farbivo sa scedí, prípravok sa premyje vodou, vysuší filtračným papierom.
4. Prípravok sa mikroskopuje ponorným systémom. Gram-pozitívne baktérie sa farbia na tmavo fialovo, Gram-negatívne baktérie sa farbia na červeno alebo purpurovo ružovo (farba prídavného farbiva).

Expresná metóda na stanovenie gramového typu mikroorganizmov (podľa Kregensena).

Metóda je založená na deštrukcii buniek gramnegatívnych baktérií v alkalické prostredie a stanovenie voľnej DNA.

Kvapka 3% roztoku KOH sa nanesie na podložné sklíčko, do ktorého sa bakteriálnou slučkou pridajú študované baktérie (24-hodinová kultúra zo šikmého agaru) a dobre sa premieša slučkou.

Po 5-10 s, keď sa slučka pohybuje po skle, s pozitívnou reakciou, ako výsledok testovania gramnegatívnych baktérií, sa vytvorí slizká stopa dlhá 1-2 cm.Ak sa netvorí hlien, potom je reakcia negatívna, potom sa testuje grampozitívna kultúra.

3. Správa o výsledkoch mikroskopie.

a) mikroskopický systém;

b) mikroskopická kultúra;

c) kresba buniek pod mikroskopom (uveďte prítomnosť spór, toboliek).

4. Obsah hodiny si zapíšte do pracovného zošita.

Kontrolné otázky

1. Aké farbiace roztoky sa používajú pri jednoduchom farbení?
2. Opíšte postup farbenia baktérií podľa Grama.
3. Prečo baktérie vnímajú Gramove škvrny inak?
4. Ktoré baktérie sú grampozitívne a ktoré gramnegatívne??

LAB #4

Živné médiá a techniky ich prípravy.

Účel lekcie.

Osvojiť si techniku ​​prípravy živných médií.

Materiálna podpora.

Suché živné médiá, médiá pripravené na použitie, elektrický sporák, kuchynské náčinie, indikátorový papierik, 20% hydroxid sodný, 20% kyselina chlorovodíková, skúmavky, pipety, Petriho misky.

Pred vykonaním práce si žiaci zopakujú výživu mikroorganizmov, živné pôdy, klasifikáciu živných pôd, základné požiadavky na živné pôdy.

Pri vykonávaní laboratórnych prác si žiaci pripravujú živnú pôdu.

Úlohy.

1. Prečítajte si popis práce.
2. Pripravte si živnú pôdu (podľa pokynov učiteľa).
3. Obsah hodiny si zapíšte do pracovného zošita.

Odpovedzte na bezpečnostné otázky.

Vysvetlenie pre prácu

Bakteriologické laboratóriá sa nezaobídu bez živných médií. Na určenie typu mikroorganizmu, na zistenie pôvodcu infekčnej choroby, to znamená na stanovenie diagnózy choroby, na výrobu špecifických prípravkov (vakcíny, séra), na liečbu a prevenciu infekčných chorôb, na získanie antibiotík, na vykonávanie sanitárnych a mikrobiologických štúdií objektov životného prostredia, na bakteriologické štúdium mäsa a mäsových výrobkov sa využíva umelá kultivácia mikroorganizmov na živných médiách.

V laboratóriách sa mikroorganizmy kultivujú in vitro, t.j. v sklenených skúmavkách, bankách alebo iných nádobách. In vitro kultivácia vyžaduje substráty, ktoré mikroorganizmy využívajú ako živiny.

Podľa potreby živín možno všetky mikroorganizmy rozdeliť do troch skupín:

prvá skupina - nenáročné, rastúce na jednoduchých médiách (hnilobné, väčšina kokových a iných mikroorganizmov);

druhá skupina - vyžadujúce pre svoj rast ďalšie živiny: kompletné bielkoviny (kuracie mäso alebo srvátka), vitamíny, určitý súbor aminokyselín, stopové prvky (tuberkulóza, tularémia bacil, leptospira atď.);

tretia skupina - nerastú na umelých živných médiách, ale sú schopné rozmnožovania iba vo vnútri živých buniek (vírusy, rickettsie).

Požiadavky na živné médiá sú nasledovné:

1. Musia obsahovať zdroje dusíka a uhlíka, anorganické zlúčeniny, stopové prvky, ako aj rastové faktory, vitamíny hlavne skupiny B.

Peptóny sa používajú ako univerzálny zdroj dusíka. Peptóny sú produkty hydrolýzneho rozkladu mäsa alebo kazeínu. Obsahujú polypeptidy, aminokyseliny a esenciálne minerály.

Ako univerzálny zdroj uhlíka sa do živných médií pridávajú sacharidy (cukry) - glukóza, laktóza, sacharóza, organické kyseliny - mliečna, citrónová atď., viacsýtne alkoholy - manitol, glycerín, sorbitol atď.

2. Živné médiá musia mať určitú reakciu média. Takže pre väčšinu kokových, hnilobných a patogénnych mikroorganizmov je optimálne pH 7,0 ... 7,4 a plesňové huby, kvasinky a mikroorganizmy kyseliny mliečnej sa vyvíjajú lepšie pri pH 6,0.

3. Živná pôda musí byť sterilná, t.j. neobsahujú mikroorganizmy.

4. Živné médium musí byť vlhké, pretože výživa mikroorganizmov sa uskutočňuje podľa zákonov difúzie a osmózy. Mnohé médiá musia byť transparentné, aby bolo možné rozlíšiť rast mikroorganizmov na nich a sledovať fyziologické zmeny, ku ktorým dochádza v dôsledku ich životnej činnosti.

Podľa konzistencie sú živné pôdy tekuté, polotekuté a hutné. Na prípravu hustého média sa do tekutého média pridá agar-agar s koncentráciou 2 ... 3%, pre polotekutý - agar-agar s koncentráciou 0,2 ... 0,3%.

Podľa pôvodu sa rozlišujú prírodné a umelé prostredia.

Prirodzené pestovateľské médiású produkty živočíšneho pôvodu (krv, krvné sérum, mlieko, žlč...) alebo rastlinného pôvodu (zelenina, ovocie, obilniny), ktoré slúžia na pestovanie mikroorganizmov bez špeciálneho ošetrovania pri plnom zachovaní ich prirodzených vlastností.

Umelé kultivačné médiápripravené z produktov spracovania rastlín, mäsa, mlieka, pečene atď., často s prídavkom uhľohydrátov, stolová soľ, farby atď.

Medzi umelými prostrediami sa rozlišujú syntetické prostredia, t.j. prostredia s presne známym chemickým zložením. Umelé živné médiá sa delia na jednoduché alebo konvenčné a zložité.

Jednoduché živné pôdy slúžia na kultiváciu väčšiny mikroorganizmov. Proteínovým základom všetkých médií je živný bujón. Na prípravu hlavného živného bujónu sa zvyčajne používajú dva spôsoby: na mäsovej vode s prídavkom hotového peptón - mäsovo-peptónového bujónu, na štiepení produktov hydrolýzy suroviny pomocou enzýmov (trypsín - Hottinger bujón, pepsín - kuní bujón) alebo kyselín, takéto médiá sú bohatšie na aminokyseliny.

Obsah celkového a aminodusíka v médiu závisí od zloženia dusíka v mäsovo-peptónovom médiu a od stupňa rozkladu bielkovín v mäse a iných hydrolyzátoch.

Pre dobrý rast väčšiny mikroorganizmov je potrebné obsahovať aspoň 250 ... 300 mg celkového dusíka v 100 cm bujónu v prítomnosti aminodusíka (aminokyselín) v tomto množstve, v priemere asi 25 ... 30 %.

Najbežnejšími jednoduchými živnými médiami sú mäsovo-peptónový bujón (MPB), mäsovo-peptónový agar (MPA), mäsovo-peptónová želatína (MPG).

Mäsový peptónový agar (MPA) – používa sa na stanovenie celkového počtu mikroorganizmov.

Základom pre všetky tri médiá je mäsová voda, ktorá sa pripravuje z mletého hovädzieho mäsa, naplní sa vodou a varí sa 1,5 ... 2 hodiny, prefiltruje sa a sterilizuje sa 20 ... 30 minút pri 120 °C.

Mäsovo-peptónový vývar.Do 1 litra mäsovej vody sa pridá 1 % peptónu a 0,5 % kuchynskej soli, zalkalizuje sa 10 % roztokom NaOH na pH 7,4, prefiltruje sa a sterilizuje sa 15 ... 20 min pri tlaku 0,1 MPa.

Mäso-peptónový agar.Do mäsovo-peptónového bujónu sa pridá jemne mletý agar-agar (2…3%), zmes sa zahrieva, kým sa agar neroztopí, pH sa nastaví na 7,2…7,6, prefiltruje sa cez filter z bavlnenej gázy, naleje sa do skúmaviek a sterilizuje sa v bankách 20…30 minút pri 120˚C.

V prípade potreby sa MPA zahrieva vo vodnom kúpeli až do úplného roztavenia. Skúmavky sa umiestnia do špeciálnych stojanov pod uhlom 10˚ a po stuhnutí sa získa takzvaný šikmý agar, ktorý sa používa na mikrobiálne kultúry. Roztopený mäsovo-peptónový agar sa leje aj do Petriho misiek.

Podobne sa pripraví mäsovo-peptónová želatína.

Poriadok vykonania

2. Príprava živného média z hotového suchého živného média.

Suché živné médiá.Vyrábajú sa jednoduché, voliteľné a diferenciálne diagnostické suché živné médiá. Suché živné médiá sú hygroskopické prášky, ľahko rozpustné vo vode. Suché kultivačné médiá sú dostupné v sklenených nádobách s tesným skrutkovacím uzáverom.

Takéto médiá sa pripravujú podľa návodu rozpustením prášku v uvedenom množstve destilovanej vody, filtráciou a sterilizáciou pri teplote 120°C počas 20 minút.

Suchý živný agarpripraví sa nasledovne: do rozpusteného suchého agaru (5 g agaru na 100 ml) sa pridá malé množstvo kvasnicového extraktu, mäsová voda ako rastové faktory, prefiltruje sa cez filter z bavlnenej gázy, naleje sa do skúmaviek alebo fľaštičiek a sterilizuje sa pri 0,1 MPa 20 minút.

3. Zapíšte si obsah hodiny do pracovného zošita.

Kontrolné otázky

1. Aké sú základné požiadavky na živné pôdy?
2. Aké sú najčastejšie používané živné pôdy určené na kultiváciu mikroorganizmov, ich účel?
3. Aké sú zložky jednoduchých živných médií?

Bibliografia

1. Gradova N. B. Laboratórny workshop zo všeobecnej mikrobiológie - M.: DeLi print, 2010.
2. Marmuzova L.V. Základy mikrobiológie, sanitácie a hygieny v potravinárskom priemysle - M.: 2005.
3. Mudretsova-Viss K. A. Mikrobiológia, sanitácia a hygiena - M .: DL, 2010.

„Základy mikrobiológie, sanitácie a hygieny“.

METODICKÉ POKYNY

do laboratórnych prác №№1-4

pre študentov mimovládnych organizácií

34.17 Prevádzkovateľ procesov výroby klobás.

__________________________________________________________________

Žukova Lyubov Anatolyevna, učiteľka špeciálnych disciplín Štátnej autonómnej vzdelávacej inštitúcie stredného školstva mesta Moskvy TK č.28

Štátna autonómna vzdelávacia inštitúcia

stredná odborné vzdelanie Mesto Moskva

Vysoká škola technická č.28

Adresa: Moskva, ul. Horné polia, 27

Zaslané do tlače 07.02.2012.

Rozmer papiera 60x90/16

Náklad 16 kópií.

Vytlačené v tlačiarni:

Štátna autonómna vzdelávacia inštitúcia

stredné odborné vzdelanie v Moskve

AKTIVITA #1

PRÍPRAVA ŽIVNÝCH MÉDIÍ A METÓDY ICH STERILIZÁCIE

ZNAKY PESTOVANIA MIKROORGANIZMOV

Cieľ: Študovať pravidlá práce v mikrobiologickom laboratóriu, vlastnosti kultivácie mikroorganizmov, spôsoby prípravy živných médií a spôsoby ich sterilizácie.

Úlohy

Oboznámte sa s pravidlami správania sa pri vykonávaní mikrobiologického workshopu.

Študovať vlastnosti kultivácie mikroorganizmov.

Naučte sa spôsoby prípravy a plnenia kultivačných médií.

Naučiť sa metódy sterilizácie skla a kultivačných médií.

Pripravte a nalejte živnú pôdu MPA.

Získajte obohatenú kultúru sena a zemiakových tyčiniek.

Literatúra

Anikeev V.V., Lukomskaya K.A. Sprievodca praktickými cvičeniami z mikrobiológie. M.: Osveta, - 1983.

Gusev M.V. Mikrobiológia: učebnica pre vysoké školy / M.V. Gusev, L.A. Minejev. - Moskva, 2004

Emtsev V.T. Mikrobiológia: učebnica pre vysoké školy / V.T. Emtsev, E.N. Mišustin. – M.: Drop, 2005.

Lukomskaya K.A. Mikrobiológia so základmi virológie. M.: Osveta, - 1983.

Základy mikrobiológie, virológie a imunológie. / Pod. Editoval Vorobyov A.A. a Krivoshein Yu.S. - M.: Masterstvo, 2001.

Pimenová M.N. Sprievodca praktickými cvičeniami z mikrobiológie. Moskva, 1971.

Workshop z mikrobiológie. Ed. Netrusová A.I. - M .: Akadémia, - 2005.

Tepper E.Z. Workshop z mikrobiológie. – M.: Drop, 2004.

Materiály a vybavenie.Sterilné Petriho misky, ssterilné kužeľové banky 100-150 ml,živný agar, peptón, seno, zemiakové hľuzy, krieda, obkladačky, liehové lampy, banky, vata, gáza, pipety, váhy, závažia, termostat.

Základné pojmy.Kultivácia, kultivácia, povrchová kultivácia, hĺbková kultivácia, vsádzková kultivácia, kontinuálna kultivácia, čistá kultúra, obohacovacia kultúra, očkovanie, inkubácia, pasážovanie, elektívne médiá, obohacovacie médiá, optimálne médiá, prírodné médiá, syntetické médiá, polosyntetické médiá, agar, sterilizácia, flambovanie, tyndalizácia, pasterizácia, autoklávovanie, MPA.

Pokrok

Úloha číslo 1. Naučte sa pravidlá práce pri vykonávaní mikrobiologického workshopu.

Úloha číslo 2. Študovať klasifikáciu živných médií, vlastnosti ich prípravy a plnenia do fliaš, metódy sterilizácie živných médií a skleneného tovaru.

Úloha číslo 3. Pripravte a nalejte živné médium MPA do sterilných Petriho misiek.

Úloha číslo 4. Získajte obohatenú kultúru sena(Bacillus subtilis).

Seno sa nadrobno naseká a vloží do 500 ml banky, naplní sa do jednej štvrtiny objemu, pridá sa štipka kriedy a varí sa 15 – 20 minút, kým médium nezíska farbu silného čajového nálevu. Senný odvar sa naleje do sterilných 100-150 ml kužeľových baniek s vrstvou 1,0-1,5 cm, uzatvorí sa vatovými zátkami a vloží sa do termostatu pri teplote 22-25 °C.

Po dvoch dňoch sa na povrchu média vytvorí belavý film. vy. subtilis, ktorá sa počas starnutia na 3.-4.deň stáva sivozelenkastou. Ostatné mikroorganizmy súčasne rastú zriedkavo a v malých množstvách.

Úloha číslo 5. Získajte obohatenú kultúru zemiakovej tyčinky(Vas. subtilis var. mesentericus).

Umyté zemiakové hľuzy, bez šupky, nakrájame na kolieska. Ich povrch sa pretrie kriedou na neutralizáciu média a vloží sa do sterilných Petriho misiek na dvojitú vrstvu filtračného papiera navlhčeného destilovanou vodou. Poháre so zemiakovým médiom sa udržiavajú v autokláve pri 0,5 atm počas 10 minút a umiestnia sa do termostatu pri teplote 27-30 °C na 3-4 dni.

Na povrchu plátkov zemiakov sa vytvorí hustý zvrásnený film kultúry zemiakových tyčiniek. Farba filmu môže byť rôzna: belavo-šedá, ružovkastá, žltohnedá, čierna, čo závisí od odrôd kultúry, ktoré dostali prevládajúci vývoj.

Kontrolné otázky

Klasifikácia živných médií.

Spôsoby sterilizácie laboratórneho skla a kultivačných médií.

Spôsoby prípravy jednotlivých živných pôd (MPB, MPA, MPZH, SA, KA atď.) Nalievanie živných pôd.

Vlastnosti kultivácie mikroorganizmov (povrchové a hlboké, periodické a kontinuálne). obohatenie a čisté kultúry.

Spôsoby prípravy natívnych a fixných preparátov mikroorganizmov.

Študovať hlavné etapy rozvoja vedy mikrobiológie, prínos ruských a zahraničných vedcov k jej rozvoju. Vyplňte tabuľku číslo 1.

Tabuľka číslo 1. História vývoja mikrobiológie

ČINNOSŤ č. 2

PRÍPRAVA ŽIVÝCH A PEVNÝCH PRÍPRAVKOV MIKROORGANIZMOV A OBOZNÁMENIE SA S ICH MORFOLÓGIOU

Cieľ: Študovať metódy a techniky prípravy mikropreparátov pri štúdiu mikroorganizmov a zoznámiť sa s ich morfológiou.

Úlohy:

Študovať vlastnosti morfológie bakteriálnych buniek.

Pripravte intravitálne a fixné mikropreparáty mikroorganizmov.

Materiály a vybavenie.Podložné sklo, bakteriologická slučka, liehová lampa, filtračný papier, kryštalizátor s mostíkom na prípravky, umývacia fľaša s vodou, vodné roztoky farbív - fuchsín, metylénová modrá, genciánová violeť (ďalej len zariadenie na prípravu mikropreparátov); imerzný olej, mikroskop; mäsová voda, kvasnice, kultúry sena a zemiakové tyčinky.

Pokrok

Úloha číslo 1. Vykonajte celoživotné štúdium bakteriálnych buniek nasledujúcimi metódami, urobte kresby:

metóda drvených kvapiek.Kvapka jednej z kvapalín sa nanesie na podložné sklíčko s mikrobiologickou slučkou. Krycie sklo sa položí na okraj na okraj kvapky a postupne sa na ňu spustí.

metóda zavesenia kvapky.Do stredu krycieho skla sa bakteriologickou slučkou nanesie malá kvapka testovacej kvapaliny a prevráti sa cez priehlbinu špeciálneho podložného skla.

Droga "odtlačok".Z agarového média, na ktorom rastú mikroorganizmy v súvislom trávniku alebo vo forme jednotlivých kolónií, sa vyreže malá kocka a prenesie sa na podložné sklíčko tak, aby povrch s mikroorganizmami smeroval nahor. Potom sa na trávnik alebo kolóniu nanesie čisté krycie sklíčko, zľahka sa naň pritlačí slučkou alebo pinzetou a ihneď sa odstráni, pričom sa snažte nehýbať. Výsledný prípravok sa umiestni potlačou do kvapky vody alebo metylénovej modrej (1:40) na podložné sklíčko.

Úloha číslo 2. Pripravte si fixný prípravokvy. subtilis, Vas. subtilis var mesentericus, sv. lactis, S. cerevisiae, E. coli(obr. č. 1, 2, 3, 4 aplikácie),robiť kresby.

Aplikácia. Podložné sklíčko sa suší na plameni alkoholovej lampy. Bakteriologická slučka sterilizovaná na plameni horáka sa aplikuje do stredu podložného skla s náterom testovaného materiálu. Ak sa kultúra mikroorganizmu pestuje na hustom živnom médiu, na sklo sa najskôr nanesie kvapka vody, bakteriologickou slučkou sa do nej zavedie malé množstvo materiálu a urobí sa náter.

Sušenie a fixácia. Liečivo sa suší na vzduchu a potom sa fixuje. Bežné šmuhy mikroorganizmov sa tepelne fixujú tak, že sklo prejde 2 až 3-krát cez plameň horáka škvrnou nahor.Fixácia náteru vedie k smrti mikroorganizmov, ich hustému priľnutiu k povrchu skla a ľahšej náchylnosti mikróbov na farbivo.

Farbenie. Povrch zalejeme roztokom ľubovoľného farbiva na 2-3 minúty (metylénová modrá, genciánová violeť, purpurová). Rozlišovaťjednoduché a diferenciálnefarbenie mikroorganizmov. V prvom prípade je celá bunka zafarbená, takže jej tvar a rozmery sú jasne viditeľné. Diferenciálne farbenie odhalí len určité bunkové štruktúry a zásobné látky.

Splachovanie. Potom sa farbivo z náteru zmyje vodou z premývacej fľaše, spodná strana prípravku sa pretrie pásikom filtračného papiera, vrchná sa opatrne vysuší a podrobí mikroskopii.

Všeobecná charakteristika mikroorganizmov. Charakteristické znaky prokaryotov a eukaryotov.

Tvar a veľkosť bakteriálnych buniek. Morfologické typy baktérií.

Základy systematiky mikroorganizmov. Postavenie baktérií v systéme organizmov a ich variabilita. Charakteristika baktérií používaných pri identifikácii druhov.

stručný popis rád Schizomycetales.

Stručný opis radu Actinomycetales. Nokardia. Mykobaktérie.

Stručný popis radu Myxobacteriales.

Huby. Stručný opis zygo-, asko- a deuteromycét.

Vyplňte tabuľku číslo 2.

Tabuľka číslo 2. Rozdiely medzi eukaryotmi a prokaryotmi

Lineárne chromozómy

Otázky pre samoukov

Stručný popis jednotlivých skupín baktérií (podľa Bergeyho determinantu baktérií).

Morfologická charakteristika a systematika rias.

Morfologická charakteristika a systematika prvokov.

ČINNOSŤ č. 3

FARBENIE INKLÚZIE, KAPSÚL A ENDOSPÓR, farbenie GRAM

Cieľ: Naučte sa, ako zafarbiť spóry, kapsuly a inklúzie bakteriálna bunka; študovať jeho cytologické vlastnosti pomocou Gramovho farbenia ako príkladu.

Úlohy:

Zistite lipidové granuly v kvasinkových bunkách.

Zistite polysacharidy podobné glykogénu v kvasinkových bunkách.

Detekujte kapsuly bakteriálnej bunky metódou negatívneho kontrastu (napr. Azotobakter).

Vykonajte diferenciálne farbenie spór a cytoplazmy podľa metódy Ozheshka.

Vykonajte Gramovo farbenie na baktériách.

Materiály a vybavenie.Podložné sklíčka, bakteriologická slučka, alkoholová lampa, filtračný papier, kryštalizátor s mostíkom na prípravky, umývacia fľaša s vodou, mikroskop. Vodné roztoky farbív - fuchsín, metylénová modrá, genciánová violeť, karbolický fuchsín Tsilya, Sudán III. Imerzný olej, kyselina sírová 1%, atrament, kyselina chlorovodíková 0,5%, Lugolov roztok. kultúrVas.subtilis, Vas.mycoides, S.cerevisiae, E.coli.

Základné pojmy.Mureín, volutín, nukleoid, glykogén, kapsuly, bunková stena, polysacharidy, polyfosfáty, metachromatické zrná, monotrichy, peritrichis, lofotrichy, bacilová forma, klostrídiová forma, lektridiová forma, exín, intín, metachromóza.

Pokrok

Úloha číslo 1. Zistite inklúzie polyfosfátov (volutín) v kvasinkových bunkách.Volutín v bunkách húb a kvasiniek je lokalizovaný vo vakuolách, v baktériách a aktinomycétach v cytoplazme. Je to rezervná látka obsahujúca fosfor a dusík, derivát nukleových kyselín. charakteristickú vlastnosť- metachromóza, teda schopnosť získať inú farbu ako látky, ktoré ju farbia.

Farbenie volutínu podľa Omelyanského metódy.Na podložnom sklíčku sa pripraví tenký náter z kultúry mikroorganizmu, vysuší sa na vzduchu, zafixuje sa na plameni, zafarbí sa karbolickým fuchsínom na 30–40 s a premyje sa vodou. Rozlišujte tak, že ho ponoríte do banky s 1 % roztokom kyseliny sírovej na 20 – 30 sekúnd a ihneď opláchnete vodou. Kyselina sírová odfarbí cytoplazmu a zrná volutínu zostanú zafarbené purpurovou farbou. Prípravok sa kontrastne farbí metylénovou modrou (1:40) počas 20-30 s, premyje sa vodou, suší sa na vzduchu a mikroskopuje sa. Na prípravku sú zrná volutínu sfarbené do červena, cytoplazma buniek - do modra (obr. č. 1, 2 prílohy).

Úloha číslo 2. Zistite lipidové granuly v kvasinkových bunkách. Rezervné lipidy v kvasinkách a vláknitých hubách predstavujú neutrálne tuky; v baktériách túto funkciu plní kyselina hydroxymaslová.

Farbenie tukových inklúzií.Kvapka roztoku Sudan III sa pridá ku kvapke vodnej suspenzie mikroorganizmov na podložnom sklíčku, prikryje sa krycím sklíčkom a mikroskopuje sa pomocou objektívu VI-40. Sudan III sa rozpúšťa v tukových inklúziách bakteriálnej bunky a farbí ich oranžovo-červeno. Cytoplazma bunky zostáva bezfarebná.

Úloha číslo 3. Zistite polysacharidy podobné glykogénu v kvasinkových bunkách. Rezervné látky sacharidovej povahy sa v bakteriálnych bunkách hromadia vo forme granúl. Granulóza je látka podobná škrobu, ktorá sa pri interakcii s Lugolovým činidlom zmení na modrú; glykogén je polysacharid, ktorý sa za rovnakých podmienok mení na červenohnedý. Granulóza sa nachádza iba v prokaryotických bunkách.

Farbenie glykogénom a granulózou.Kvapka slabého Lugolovho roztoku sa pridá ku kvapke suspenzie mikroorganizmov na podložnom sklíčku, prikryje sa krycím sklíčkom a mikroskopuje sa pomocou objektívu VI-40.

Úloha číslo 4. Detekujte kapsuly bakteriálnych buniek negatívnym kontrastom (v Azotobakter).

Identifikácia kapsúl na negatívnom intravitálnom prípravku.Na dobre odtučnené podložné sklíčko s mikrobiologickou slučkou sa nanesie veľká kvapka čierneho atramentu, do ktorého sa vnesie kvapka skúmanej kultúry mikroorganizmov, rozdelí sa pomocou podložného sklíčka a vysuší sa. Ošetrite ponorným systémom. Na tmavom pozadí jatočného tela sa odkrývajú priehľadné zóny toboliek okolo ostro ohraničených buniek (obr. č. 8. Príloha).

Úloha číslo 5. Vykonajte diferenciálne farbenie spór a cytoplazmy (v vy. mycoides).

Ozheshka metóda. Vysušený prípravok sa zaleje 0,5 % kyselina chlorovodíková a zahrieva sa 2 minúty, kým sa neobjavia výpary. Náter sa premyje vodou, prekryje filtračným papierom a naplní sa Zielovým karbolickým fuchsínom. Farbte 5 minút zahrievaním, kým sa neobjavia výpary. Premyté vodou a diferencované v 1% kyseline sírovej počas 0,5-1 min (čas je stanovený empiricky). Premyté vodou a zafarbené metylénovou modrou na 30 °C. Znova opláchnite, vysušte a mikroskopujte. Výtrusy sú sfarbené do ružova, cytoplazma je modrá (obr. č. 2 prílohy).

Úloha číslo 6. Vykonajte Gramovo farbenie na baktériách. Rozdiel v chemickom zložení bunkových stien baktérií ovplyvňuje ich schopnosť farbiť sa podľa Grama. Na tomto základe sa baktérie delia na grampozitívne a gramnegatívne (tabuľka č. 3). Gram-pozitívne škrupiny obsahujú viac polysacharidov, mureínu a kyseliny teichoovej; škrupiny gramnegatívnych majú viacvrstvovú štruktúru s vysokým obsahom lipidov (lipoproteíny a liposacharidy). Gram-pozitívne mikroorganizmy pri farbení tvoria s hlavným farbivom v alkohole nerozpustnú zlúčeninu jódu, u gramnegatívnych mikroorganizmov je táto zlúčenina rozpustná v alkohole.

Gramova škvrna.Na podložné sklíčko sa aplikujú tri nátery a potom sa súčasne spracujú naraz: z bakteriálnej kultúry, o ktorej je známe, že je gram-pozitívna, z bakteriálnej kultúry, o ktorej je známe, že je gramnegatívna, a medzi nimi náter z kultúry skúmaného mikroorganizmu. Používajú sa mladé jednodňové kultúry.

Nátery sa sušia na vzduchu, fixujú sa na plameni horáka a farbia sa 1 % vodným roztokom genciánovej violeti počas 1 minúty. Farbivo sa zmyje Lugolovým roztokom a tým istým roztokom sa 1 minútu nalejú šmuhy. Prípravok sa premyje vodou a diferencuje sa v banke s 95 % etanolom (0,5-1,0 min). Po odlíšení náteru sa prípravok ihneď dôkladne premyje vodou a farbí sa dodatočným farbivom - 0,1% vodným roztokom fuchsínu počas 2-3 minút. Prípravok sa nakoniec premyje vodou, vysuší na vzduchu a podrobí mikroskopii s olejovou imerziou. Na preparáte sú grampozitívne baktérie zafarbené fialovo-fialovou farbou, gramnegatívne - ružovo-malinovou (obr. č. 2 prílohy).

Tabuľka číslo 3. Pomer baktérií k Gramovmu farbeniu

Staphyloccocus aureus

Escherichia coli

Streptococcus

Proteus vulgaris

Bacillus subtilis

Pseudomonas aeruginosa

Sacharomyces

Shigella sp.

Kontrolné otázky a úlohy

Štruktúra bakteriálnej bunkovej steny. Tvorba kapsúl.

Pomer baktérií k Gramovmu farbeniu. Charakteristické znaky grampozitívnych a gramnegatívnych mikroorganizmov.

Bunkové membrány a intracelulárne membránové štruktúry.

Jadrový aparát, zloženie, organizácia a replikácia.

ribozómy, plynové vakuoly a iné bakteriálne organely; ich význam.

Inklúzie bakteriálnych buniek (polysacharidy, polyfosfáty, lipidy, inklúzie síry).

Spôsoby rozmnožovania baktérií. Sporulácia v baktériách.

Flagella. pohyb baktérií. Taxíky.

Otázky pre samoukov

Dedičné faktory mikroorganizmov.

Mechanizmy spôsobujúce zmenu genetická informácia mikroorganizmy.

ČINNOSŤ č. 4

KVANTITATÍVNE ÚČTOVNÍCTVO VZDUCHU A VODY MIKROFlóRA

STANOVENIE MIKROBIÁLNEHO ČÍSLA

Cieľ: Vykonať kvantitatívny prehľad mikroorganizmov vzduchu a vody.

Úlohy

Študovať metódy kvantitatívneho účtovania vzdušnej a vodnej mikroflóry.

Vykonajte mikrobiologický rozbor vzduchu a sanitárno-bakteriologickú štúdiu vody.

Materiály a vybavenie.Petriho misky so sterilným MPA, sterilné 1 ml pipety, vodný kúpeľ, elektrický varič, teplomer, voda z vodovodu, voda z jazierka, liehová lampa, zápalky.

Základné pojmy.celkový mikrobiálny počet vody,celkový mikrobiálny počet vzduchu, if-index, if-titer, sanitárne indikačné mikroorganizmy, autochtónna mikroflóra, alochtónna mikroflóra, zóny saprobity.

Pokrok

Úloha číslo 1. Položte skúsenosti na určenie TMC (celkové mikrobiálne číslo) vzduchu.

Na infekciu sa Petriho misky otvoria v testovacej miestnosti alebo vonku na 5 minút. Veko Petriho misky sa odstráni a umiestni vedľa seba bez prevrátenia. Na vrchnáku Petriho misky uveďte variant pokusu, dátum výsevu. Infikované Petriho misky sa umiestnia do termostatu pri teplote 25-28°C.

Po 2-3 dňoch sa spočíta počet kolónií mikroorganizmov, ktoré sa vyvinuli na agarovej platni Petriho misky.V tomto prípade sa berú do úvahy nasledovné: podľa hrubých odhadov (Omelyansky) na ploche 100 cm 2 do 5 minút sa usadí toľko mikroorganizmov a spór, koľko je v 10 litroch vzduchu. Predpokladáme, že každá kolónia vznikla z jednej bunky alebo spóry. ETáto metóda poskytuje iba približné údaje, ale umožňuje pomerne presne zistiť relatívny počet mikroorganizmov vo vzduchu rôznych miestností.Vyplňte tabuľku číslo 4, vyvodzujte závery.

Napríklad: V Petriho miske sa našlo 5 kolónií, polomer misky je 2 cm. Plocha je S=πr 2 = 3,14 x 4 = 12,5. Potom obsahuje 10 litrov

Tabuľka číslo 4. Celkový počet mikroorganizmov (TMC) vnútorného vzduchu.

Kolónie mikroorganizmov izolované zo vzduchu na MPA platniach sa môžu použiť na identifikáciu druhov. Najčastejšie sa zo vzduchu izolujú kolónie mikrokokov, sarcínov, niektorých bacilov a baktérií.

Úloha číslo 2. Položte skúsenosti na určenie TMF vody.

Na výskum sa voda z vodovodu odoberá do sterilných baniek. 1 ml vody sa odoberie z banky sterilnou pipetou a pridá sa do Petriho misky s narovnaným médiom (MPA) (jej teplota by nemala byť vyššia ako 45 °C). Pohár sa uzavrie a jemným naklonením sa premieša živná pôda, doska sa nechá stuhnúť a vloží sa do termostatu. Po 3-5 dňoch sa spočítajú kolónie vyvinuté v Petriho miskách a stanoví sa počet baktérií v 1 ml vody.

Po spočítaní kolónií sa stanoví mikrobiálne číslo vody - počet mikroorganizmov na 1 ml testovacej vody, pričom sa berie do úvahy prípadné riedenie.

Údaje sú spracované vo forme tabuľky č. 5, sú vyvodené závery.

Tabuľka číslo 5. Celkový počet mikroorganizmov (TMC) pitná voda

voda z vodovodu

Kontrolné otázky

Vlastnosti vzdušnej mikroflóry. Šírenie mikroorganizmov vo vzduchu.

Normy pre hygienický stav vnútorného vzduchu.

Sanitárne a mikrobiologické štúdium ovzdušia.

Mikroflóra pitnej vody.

Mikroflóra prírodných vôd. Distribúcia mikroorganizmov vo vode.

Hygienické ukazovatele pitnej vody. Celkový mikrobiálny počet vody. If-index, if-titer vody.

Znečistenie a samočistenie vodných útvarov. Úloha mikroorganizmov v procesoch samočistenia vodných útvarov.

Biologické čistenie pitných a odpadových vôd.

Sanitárno-bakteriologické štúdium vody. Stanovenie TMC, if-index, if-titer.

Sanitárne indikačné mikroorganizmy vzduchu, vody, pôdy.

Požiadavky na sanitárne indikačné mikroorganizmy.

Mikroflóra potravinárskych výrobkov (kyslé mlieko, ryby, mäso, údeniny, konzervy).

Charakteristika skupín mikroorganizmov používaných pri hodnotení bezpečnosti potravinárskych surovín a potravinárskych výrobkov.

Sanitárne a bakteriologické normy pre rôzne potravinárske výrobky.

Metódy sanitárno-bakteriologického výskumu potravinárskych výrobkov.

Pôda ako biotop pre mikroorganizmy.

Ekologické faktory šírenia pôdnych mikroorganizmov.

Vzťahy medzi pôdnymi mikroorganizmami.

Účasť pôdnej mikroflóry na procesoch mineralizácie organických látok a tvorbe humusu.

Sanitárne a bakteriologické štúdium pôdy.

AKTIVITA #5

ZÍSKAVANIE ČISTEJ KULTÚRY MIKROORGANIZMOV

NEFELOMETRICKÁ METÓDA KVANTITATÍVNYCH MIKROORGANIZMOV

Cieľ: Vykonávať izoláciu čistých kultúr mikroorganizmov, ovládať nefelometrickú metódu účtovania počtu mikroorganizmov.

Úlohy

Vykonajte izoláciu čistej kultúry metódou "vyčerpacieho" mŕtvice.

Kvantifikujte mikroorganizmy nefelometrickou metódou

Materiály a vybavenie.Petriho misky so sterilným MPA, FEK, Gorjajevova kamera, mikroskopy, mikrobiologické slučky, liehová lampa, zápalky.

Základné pojmy. Čistá kultúra, rast, rozmnožovanie, binárne štiepenie, pučanie, bunkový cyklus (monomorfný, dimorfný, polymorfný), generačný čas, špecifická rýchlosť rastu, výťažok biomasy, ekonomický faktor, stacionárna rastová fáza, lag fáza, exponenciálna reprodukčná fáza, stacionárna fáza, fáza odumierania, stagnujúca kultúra, prietoková kultúra, synchrónna kultúra.

Pokrok

Úloha číslo 1. Získanie čistej kultúry mikroorganizmov

Izolácia čistých kultúr aeróbov sa uskutočňuje preosievaním obohatenej kultúry na povrchu pevného živného média. Výsev sa vykonáva metódou vyčerpávajúceho zdvihu. Potom, čo kolónie vyrástli, čistota izolovaných kolónií sa skontroluje vizuálne a mikroskopicky. Po 3-6 dňoch sa vyberie a opíše izolovaná kolónia mikroorganizmov (pomocou nákresov v prílohe).Kolónia je opísaná takto:

Veľkosť kolónie: bodkovaná (D - menej ako 1 mm), malá (D - 1-2 mm), stredná (D - 2-4 mm) a veľká (D - 4-6 mm alebo viac).

Tvar kolónie je okrúhly, améboidný, rizoidný.

Optické vlastnosti - transparentné, matné, fluorescenčné, priesvitné (priesvitné), nepriehľadné, lesklé.

Farba – všimnite si farbu kolónie a uvoľňovanie pigmentu do média.

Povrch je hladký, drsný, skladaný, hrboľatý.

Profil - plochý, konvexný, kráterovitý, prerastajúci do agaru atď.

Okraj kolónie je hladký, zvlnený, laločnatý, rizoidný atď.

Štruktúra kolónie je homogénna, jemná alebo hrubozrnná.

Konzistencia - mastná, pastovitá, viskózna, filmová.

Úloha číslo 2. Vykonajte kvantitatívne hodnotenie mikroorganizmov nefelometrickou metódou.

a) Nefelometrická metóda.hustota buniek S.cerevisiae v kvapalnom médiu sa stanoví nefelometricky (FEC) pomocou kyvety s dĺžkou optickej dráhy 0,5 cm a filtrom zeleného svetla (A = X 540 nm). Na získanie spoľahlivých výsledkov by hustota buniek mala byť v rozsahu 0,1-0,6. Pri koncentrácii buniek nad 0,6 dochádza k sekundárnemu rozptylu svetla, čo vedie k podhodnoteným výsledkom. Preto by sa suspenzie s vysokou hustotou mali pred meraním priepustnosti svetla zriediť vodou 2, 4, 6, 8 a 10-krát. Výsledky meraní optickej hustoty každej suspenzie (voda slúži ako kontrola) sú zaznamenané v tabuľke č.6.

b) Počítanie buniek v komore Gorjajev-Tom.Aby sa prešlo z meraní fotoelektrokolorimetrom (FEC) na počet buniek mikroorganizmov v médiu, ich počet sa počíta pomocou Goryaev-Tomovej počítacej komôrky a riedenia suspenzie kvasiniek, ktoré sa použili na stanovenie ich hustoty nefelometrickou metódou. Bunky sa počítajú vo veľkých štvorcoch mriežky pomocou 8* objektívu. Celkový počet počet buniek by mal byť aspoň 600. Počet buniek v 1 ml zodpovedajúcej suspenzie sa vypočíta podľa vzorca M = 1000*a*n/h*S, kde M je počet buniek v 1 ml suspenzie; a je priemerný počet buniek vo veľkom štvorci mriežky; h je hĺbka komory (1/10 mm); S je plocha veľkého štvorca mriežky (1/25 mm 2 ); n je stupeň zriedenia suspenzie; 1000 mm 3 - 1 ml. Získané výsledky, milión buniek v 1 ml, sú zaznamenané v tabuľke. č. 6.

Tabuľka číslo 6. Počet kvasinkových buniek v suspenziách stanovený pomocou Goryaevovej kamery a zodpovedajúce hodnoty FEC

Indikácie FEK

Zostavte kalibračnú krivku na základe údajov v tabuľke. č. 6, vynesenie počtu kvasinkových buniek na vodorovnú os a optickú hustotu zodpovedajúcej suspenzie na zvislú os. Na rýchle určenie počtu buniek určitého typu mikroorganizmov podľa hodnôt FEC je vytvorená kalibračná krivka.

Kontrolné otázky a úlohy

Skladovacie kultúry a princíp elektivity. Čisté kultúry, spôsoby prípravy a význam.

Rozmnožovanie mikroorganizmov.

Bunkové cykly baktérií. Rast jednotlivých mikroorganizmov a populácií. Vyvážený a nevyvážený rast.

Parametre rastu plodín: generačný čas, špecifická rýchlosť rastu, výnos biomasy, ekonomický faktor.

Rastové krivky, znaky jednotlivých fáz. Rast mikroorganizmov počas kontinuálnej kultivácie. Synchrónne kultúry.

ČINNOSŤ č. 6

SANITÁRNO-BAKTERIOLOGICKÉ ŠTÚDIE POTRAVINÁRSKYCH VÝROBKOV

Cieľ: Vykonajte hygienicko-bakteriologické posúdenie stavu potravín.

Úlohy

1. Určite celkový počet mikróbov v určitých potravinách.

2. Stanovte prítomnosť BGKP (baktérie skupiny Escherichia coli).

Materiály a vybavenie.Petriho misky s MPA, Petriho misky s médiom Endo, 1 ml pipety, mažiare s tĺčikom, skalpely, skúmavky s 9 ml sterilnej vody, skúmavky s Kesslerovým médiom, sterilné banky so 100 ml vody, váhy.

Základné pojmy.Špecifická mikroflóra potravín, nešpecifická mikroflóra potravín, BGKP, sanitárne indikačné mikroorganizmy.

Pokrok

Úloha číslo 1. Stanovte prítomnosť BGKP a celkovú kontamináciu potravinárskych výrobkov vykonaním nasledujúcich krokov v poradí:

1. Príprava potravinárskych výrobkov na výskum.

V sterilnej porcelánovej mažiari rozdrvte 10 g vzorky (sterilne odobratej z rôznych miest), postupne pridajte 90 ml izotonického roztoku chloridu sodného a nechajte niekoľko minút pri izbovej teplote. Potom sa suspenzia na očkovanie a zriedenie (1 ml) odsaje sterilnou pipetou so širokým nosom. Predpokladá sa, že 1 ml pripravenej suspenzie obsahuje 0,1 g východiskového produktu (riedenie 10-1 ). Produkty tekutej konzistencie sa vysievajú a pestujú na plodiny bez predchádzajúcej prípravy.

2. Príprava riedenia potravy na siatie.

Pre produkty tekutej konzistencie sa riedenia pripravia takto: 1 ml produktu sa odoberie sterilnou pipetou a pridá sa do skúmavky obsahujúcej 9 ml sterilného izotonického roztoku chloridu sodného, ​​premieša sa. Výsledné riedenie (10-2 ) sa rovnakým spôsobom podrobí ďalšiemu riedeniu v požadovanom počte opakovaní (násobok 10).

Výkres č.1. Príprava riedení a výsev pôdnej suspenzie na tuhé živné pôdy

3. Stanovenie celkovej kontaminácie.

Riedenie zvolené na očkovanie sa pridá 1 ml do sterilných Petriho misiek s teplotou topenia 45-50 °C. 0 MPA, po ktorom sa zmiešajú. Médium sa nechá stuhnúť, plodiny sa pestujú počas dňa pri 37 °C, potom sa spočíta počet vyrastených kolónií (CFU). Stanovte celkový počet baktérií v 1 ml alebo 1 g produktu.

4. Stanovenie prítomnosti BGKP.

Na siatie sa používa množstvo produktu, v ktorom je v súlade so stanovenými normami zabezpečená absencia CGB. Z vybraných riedení študovaných vzoriek produktu sa odoberie 1 ml a naočkuje sa do skúmaviek s Kesslerovým médiom. Naočkované skúmavky sa inkubujú pri teplote 37 °C počas 24 hodín.V neprítomnosti známok rastu (tvorba plynu alebo zmeny farby média) sa urobí záver o súlade testovaného produktu so štandardom. Ak sú známky rastu, vysievajú sa na Endo medium. Plodiny sa inkubujú 18 až 20 hodín pri 37 °C. Pri prezeraní plodín sú zaznamenané kolónie, ktoré sú podozrivé alebo typické pre CGB (tvoria červené, ružové, svetloružové kolónie s kovovým leskom alebo bez neho). Používajú sa na výrobu preparátov živých a fixovaných buniek, farbených podľa Grama a mikroskopovaných. Detekcia gramnegatívnych tyčiniek netvoriacich spóry so zaoblenými koncami naznačuje možnú prítomnosť CGB.

Údaje o celkovej kontaminácii a prítomnosti Escherichia coli sú uvedené v tabuľke. Vyvodiť závery o mikroflóre rôznych potravinárskych výrobkov pomocou sanitárnych a mikrobiologických noriem (SanPiN 2.3.2.560-96) (tabuľka č. 7).

Tabuľka číslo 7. Niektoré sanitárne a bakteriologické normy (SanPiN 2.3.2.560-96)

Syr ruský

0,001

Zmrzlina

1*10 5

0,01

Kontrolné otázky, pozri lekciu číslo 4.

AKTIVITA #7

PÔDNE MIKROBOCENÓZY

Cieľ: Študovať druhové zloženie a distribúciu pôdnych mikroorganizmov.

Úlohy

1. Študovať povahu pôdnej mikroflóry a dominantných druhov.

2. Urobte kvantitatívny a kvalitatívny prehľad o pôdnej mikroflóre.

Materiály a vybavenie.Podložné sklíčka, sterilné Petriho misky s MPA,váhy, závažia, skalpel, mažiar, gumená rukavica, banka so sterilnou destilovanou vodou 90 ml, sterilná banka 250 ml, skúmavky s 9 ml sterilnej vody, pipety 10 ml a 1 ml, mikropipety 0,1 ml, sklenené špachtle.

Pokrok

Úloha číslo 1. Študovať povahu pôdnych a rizosférických mikrobiocenóz metódou znečistenia skla (podľa Kholodného).

Na rovnom povrchu pôdy sa vykoná rez nožom, ktorého hĺbka závisí od skúmaného horizontu. Umyté a odmastené poháre (súčasne sa odoberie niekoľko pohárov) sa pevne pritlačia k zvislej stene rezu a prikryjú sa zeminou. Okuliare sa uchovávajú v pôde týždeň až niekoľko mesiacov.

Po uplynutí doby expozície sa zo zadnej strany pohárov odstráni nečistota, experimentálny povrch pohárov sa vysuší na vzduchu a trikrát zafixuje, pričom zadná strana prejde cez plameň horáka. Po upevnení sa sklo ponorí do vody experimentálnou plochou nadol, bez toho, aby sa dostalo na dno. Po premytí sa prípravok ponorí do roztoku karbolického erytrozínu na dobu 30 minút až 24 hod.. Zafarbené preparáty sa skúmajú pod mikroskopom s imerzným systémom. Pri mikroskopii sa zaznamenáva povaha mikroflóry, hustota znečistenia skiel a dominantné formy.

Úloha číslo 2. Vykonať stanovenie TMC pôdy.

Príprava pôdnej suspenzie metódou riedenia.Pri dodržaní sterility odvážte 10 g pôdy a preneste ju do sterilnej trecej misky. Vzorku pôdy v mažiari navlhčite do pastovitého stavu pridaním 2 – 3 ml vody z prvej banky obsahujúcej 90 ml sterilnej vody a prstom v gumenej rukavici potierajte 5 minút. Po rozomletí sa pôda z malty prenesie vodou do druhej suchej banky, získa sa prvé riedenie - 1/10. Suspenzia pôdy v banke sa pretrepáva 5 min, nechá sa stáť 30 s a potom sa 1 ml suspenzie pôdy prenesie z banky do skúmavky č. 1 s 9 ml sterilnej destilovanej vody sterilnou pipetou, získa sa druhé riedenie - 1/100. Podobne sa pripraví séria následných riedení pôdnej suspenzie -1/1000, 1/10000, 1/100000 a viac v závislosti od predpokladaného počtu mikroorganizmov (obr. č. 1, lekcia č. 6).

Na izoláciu a kvantifikáciu baktérií sa pôdna suspenzia vysieva na jedno z živných médií (MPA, KAA, pôdny agar, Ashbyho médium; KAA alebo Chapekovo médium sa používa na zohľadnenie aktinomycét). Kolónie baktérií na Petriho miskách sa počítajú po 3-5 dňoch, plesne a kvasinky - po 5-7, aktinomycéty - po 7-15 Obsah mikroorganizmov v 1 g pôdy sa určuje podľa vzorca: a \u003d b * c, kde a - počet mikroorganizmov v 1 g pôdy, b je priemerný počet kolónií, V - chov. Porovnajte druhové zloženie a diverzitu pôdnej, vodnej a vzdušnej mikroflóry a urobte záver.

Kontrolné otázky a úlohy, pozri lekciu číslo 4.

AKTIVITA #8

KONVERZIA ZLÚČENÍN DUSÍKA POMOCOU MIKROORGANIZMOV

Cieľ: Študovať vlastnosti procesov transformácie mikroorganizmami Organické zlúčeniny dusíka.

Úlohy

Študovať mikroorganizmy zapojené do procesov amonifikácie bielkovín.

Študovať mikroorganizmy zapojené do procesov amonifikácie močoviny.

Materiály a vybavenie:Prostredie pre reprodukciu procesu amonifikácie bielkovín a močoviny, mikroskopy, zariadenia na prípravu mikropreparátov.

Základné pojmy.Amonifikácia, proteázy, peptidázy, ureáza, deaminácia, dekarboxylácia.

Pokrok

Úloha číslo 1. Ak chcete študovať mikroorganizmy, ktoré vykonávajú amonifikáciu bielkovín, nakreslite obrázok. Na štúdium amonifikácie bielkovinových látok môže slúžiť ako živné médium mäsový vývar s prídavkom 3% peptónu.30 ml média sa naleje do 100 ml banky a pridá sa 1/3 čajovej lyžičky pôdy. Banky sú uzavreté vatovými zátkami. Nad médiom sú zavesené dva papieriky – červený lakmus, alebo univerzálny indikátorový papierik, navlhčený destilovanou vodou, na detekciu vyvíjajúceho sa amoniaku a filtračný papier, navlhčený alkalickým roztokom octanu olovnatého, na detekciu sírovodíka a merkaptánu. Upevnite ich medzi korok a steny hrdla banky. Papiere sa nesmú dotýkať média. Na 3. – 5. deň inkubácie pri 28 – 30 °C sa obsah banky analyzuje. Stanovujú sa pôvodcovia procesu amonifikácie bielkovín a ich metabolické produkty.

Mikroskopia.Na detekciu patogénov hnilobného rozkladu bielkovinových látok sa v rozdrvenej kvapke pripraví prípravok živých baktérií, ako aj fixovaný a zafarbený prípravok. Častejšie ako iné sa na prípravku nachádzajú mobilné bunky. Proteus vulgaris (obr. č. 4 prihlášky)prevláda v prvých fázach rozkladu bielkovín. Ide o nevýtrusné, palice nerovnakej dĺžky. Okrem toho je na prípravku veľa buniek tvoriacich spóry. Bacillus mycoides a Clostridium sp. (obr. č. 1, 4 prílohy). V druhom z nich sú spóry umiestnené terminálne a ich priemer presahuje šírku bunky. vy. mycoides spôsobuje amonifikáciu bielkovín za aeróbnych podmienok, a C. putrificus - v anaeróbnom, ale môže sa vyvinúť aj za aeróbnych podmienok, ak prostredie obsahuje aeróbne mikroorganizmy absorbujúce kyslík.

NH uvoľnený do atmosféry 3, zafarbí zavesený prúžok červeného lakmusového papierika na modro. Olovený papier sčernie vplyvom sírovodíka, ak je pokrytý striebristým povlakom, čo znamená, že spolu s H 2 Uvoľňujú sa aj S merkaptány (napríklad metylmerkaptán CH 3SH).

Úloha číslo 2. Ak chcete študovať mikroorganizmy zapojené do procesov amonifikácie močoviny, urobte kresbu. Na sledovanie procesu amonifikácie močoviny môžete použiť živné médium s nasledujúcim zložením (g / l destilovanej vody): vínan draselný alebo sodný (kyselina vínna, môžete soľovať kyselinu jablčnú) - 5,0; močovina - 5,0; TO 2 NRO 4 - 0,5; MgS04.7H20 - 0,2.

Médium sa naleje do 100 ml baniek, každá po 30 ml, naočkuje sa pôdou a umiestni sa do termostatu pri 25–30 °C. Na detekciu amoniaku sa pod vatovou zátkou zavesí pásik červeného lakmusového papierika. Po 3 až 5 dňoch sa kultúra analyzuje. Stanovte uvoľňovanie amoniaku na modrom červenom lakmusovom papieriku.

Mikroskopia.Na štúdium pôvodcov amonifikácie močoviny sa pripraví prípravok zo sotva viditeľného filmu na povrchu média a zafarbí sa fuchsínom. Bunky sú najčastejšie viditeľné pod mikroskopom. Urobacillus pasteurii (vy. probatus), menej často - Planosarcina ureae (obr. č. 5 prihlášky).

Kontrolné otázky a úlohy

mineralizácia dusíka. Baktérie zapojené do amonifikácie bielkovín.

Degradácia nukleových kyselín.

Rozklad močoviny, močovej a hippurovej kyseliny.

Charakterizácia procesov nitrifikácie. Mikroorganizmy, ktoré produkujú dusičnany v pôde.

Obnova dusičnanov a dusitanov v prírode.

Denitrifikácia (disimilačné zníženie dusičnanov).

Asimilačná redukcia dusičnanov.

Fixácia dusíka voľne žijúcimi mikroorganizmami.

Asociačná fixácia dusíka.

Symbiotická fixácia dusíka. Charakteristika nodulových baktérií.

Interakcia nodulových baktérií s hostiteľskou rastlinou. Tvorba bakteroidov.

Symbiotická fixácia dusíka nestrukovinových rastlín.

Chémia procesov fixácie dusíka.

14. Vyplňte tabuľku číslo 8.

Tabuľka číslo 8. Charakteristika procesov cyklu dusíka a mikroorganizmov podieľajúcich sa na premene zlúčenín dusíka

Amonifikácia močoviny

I fáza nitrifikácie

Symbiotická fixácia dusíka

ČINNOSŤ č. 9

KONVERZIA ZLÚČENÍN DUSÍKA POMOCOU MIKROGANIZMOV

Cieľ: Študovať vlastnosti procesov transformácie minerálnych zlúčenín dusíka mikroorganizmami.

Úlohy

1. Študovať znaky priebehu nitrifikačných procesov (I, II fáza) a mikroorganizmov, ktoré sa na nich podieľajú.

2. Študovať vlastnosti denitrifikačných procesov a mikroorganizmov, ktoré sa na nich podieľajú.

3. Študovať vlastnosti procesov fixácie dusíka a mikroorganizmov, ktoré sa na nich podieľajú.

Materiály a vybavenie.Banky s tekutým Ashby médiom na kultiváciu fixátorov dusíka, Winogradského médium na kultiváciu nitrifikátorov, Giltai médium na kultiváciu denitrifikátorov, zariadenia na farbenie mikropreparátov, mikroskopy.

Základné pojmy.Nitrifikácia (I. a II. fáza), imobilizácia dusíka, asimilačná redukcia dusičnanov, disimilačná redukcia dusičnanov (denitrifikácia), fixácia dusíka voľne žijúcimi mikroorganizmami, asociatívna fixácia dusíka, symbiotická fixácia dusíka, leghemoglobín, dusitanáza, nitrátreduktáza.

Pokrok

Úloha číslo 1. Študovať mikroorganizmy zapojené do procesov nitrifikácie, nakresliť obrázok. Na akumuláciu nitrifikačných baktérií sa používa živná pôda S. N. Vinogradského (g / l destilovanej vody):

Médiá sa sterilizujú a nalejú do baniek s vrstvou 1,0 až 1,5 cm a infikujú sa hrudkou skleníkovej pôdy. Banky sa uzavrú vatovými zátkami a umiestnia sa do termostatu pri teplote 25–28 °C na 14.–21. deň.

Mikroskopia.Na štúdium nitrifikačných baktérií sa z kvapaliny v bankách pripravujú mikropreparáty. V zornom poli mikroskopu sú viditeľné zhluky oválnych alebo kokoidných buniek Nitrosomonas (prvá fáza) a krátke tyčinkové bunky Nitrobacter (druhá fáza) . Zástupcovia rodu Nitrosomonas (obr. č. 6 prihlášky)majú oválny tvar, v niektorých prípadoch sa približujú k lopte, majú pohyblivosť a sú vybavené jedným dlhým bičíkom. Odlišné typy Nitrosomonas sú v pôde veľmi rozšírené a líšia sa od seba veľkosťou či tvarom buniek, ako aj vzťahom k aktívnej reakcii prostredia. Najviac študované Nitrosomonas europea. Bunky sú kokoidné alebo oválne, 0,5-1,5 µm veľké, pohyblivé, s dlhým polárnym bičíkom. Nitrobacter - malé okrúhle, vajcovité alebo hruškovité tyčinky, nepohyblivé, jednotlivé alebo spojené do malých skupín, obklopené sliznicou(obr. č. 7 prihlášky). Medzi baktériami tohto rodu je obvyklé rozlišovať dva typy: Nitrobacter winogradskii a Nitrobacter agilis.

Tiež sa uskutočňuje oxidácia amónnej formy na dusitanovú formu Nitrosocystis a Nitrosospira dusitany na dusičnany Nitrospina.

Úloha číslo 2. Ak chcete študovať mikroorganizmy, ktoré vykonávajú procesy denitrifikácie, nakreslite obrázok. Na akumuláciu denitrifikačných baktérií sa používa nasledujúce médium (v g/l): Rochellova soľ - 20; KNO 3 - 2,0; K2NRO4 - 0,5; MgS04.7H20 - 0,2; FeS04 7H 2 Ach, stopy. Médium sa naleje vo vysokej vrstve do veľkých skúmaviek až po okraj a sterilizuje sa. Dôkladne premiešame so zeminou, aby sme odstránili vzduchové bubliny a prikryjeme gumenou trubicou, do ktorej sa vloží z 2 strán otvorená sklenená trubica, v strednej časti rozšírená. Korok vytlačí časť kvapaliny do sklenenej trubice. Pod korkom by nemali byť žiadne vzduchové bubliny. Vazelínový olej sa naleje do skúmavky nad médiom v malej vrstve, aby sa vytvorili anaeróbne podmienky, a umiestni sa do termostatu pri teplote 30-35 ° C na 5-6 dní.

Mikroskopia.Zo stredu substrátu sa čistou pipetou odoberie kvapka a pripraví sa fixovaný a zafarbený prípravok, ktorý sa potom skúma pod mikroskopom s imerzným systémom. V prípravku dominujú sférické bunky netvoriace spóry alebo krátke tyčinky Paracoccus denitrificans (Bacterium denitrificans ) (obr. č. 7 prílohy). Na médiu s Rochelle soľou sa často vyvíja P. stutzeri (Achromobacter stutzeri - tyčinkovité bunky s veľkosťou 2,0 - 4,0 mikrónov, mobilné) (obr. č. 7 v prílohe). V tomto prípade kultúra tvorí zeleno-žltý fluorescenčný pigment. Denitrifikátory tiež zahŕňajú: Pseudomonas aeruginosa - malé tyčinky (veľkosť 1,0 - 1,5 mikrónu), jednoduché alebo párové, mobilné, nesú 1 - 2 polárne bičíky. Často sa pozoruje ozelenenie média, najmä pri použití uhlíka kyseliny citrónovej, čo naznačuje vývoj Pseudomonas fluorescens - malé tyčinky (veľkosť 1,0 - 2,0 mikrónov), pohyblivé, majú 3 - 4 polárne bičíky.

Úloha číslo 3. Študovať mikroorganizmy, ktoré sa podieľajú na fixácii atmosférického dusíka, nakresliť obrázok. Ashby médium sa používa na akumuláciu voľne žijúcich fixátorov dusíka. Zloženie živnej pôdy (g/l destilovanej vody):manitol, glukóza alebo sacharóza - 20,0; TO 2 NRO 4 - 0,2; MgS04 - 0,2; NaCl - 0,2; K2S04 - 0,1; CaC03 - 5,0.

Živné médium sa bez sterilizácie naleje do baniek s objemom 100 - 150 ml s vrstvou 1 - 1,5 cm a infikuje sa skleníkovou pôdou (1/3 čajovej lyžičky). Banky sa uzavrú vatovými zátkami a umiestnia sa do termostatu pri teplote 28–30 °C.

Po 5-7 dňoch sa na povrchu média vytvorí hnedo-hnedý film Azotobacter. Kvapalina v banke pení a vydáva zápach kyseliny maslovej, čo naznačuje vývoj baktérií v prostredí. Cl. pasteurianum.

Mikroskopia.Z povrchového filmu sa pripraví fixný mikroprípravok. Dva najbežnejšie typy Azotobacter sú: Azotobacter chroococcum - v mladej kultúre má tyčinkovité bunky, pohyblivé, veľké 3 - 7 mikrónov(obr. č. 8 prihlášky). V starej kultúre sú bunky kokoidné, párové a sarcínu podobné pakety, zvyčajne obklopené sliznicou. V bunkách je veľa lesklých zrniek volutínu. Kolónie na hustých živných pôdach sú slizké, roztiahnuté alebo konvexné, bezfarebné alebo tmavohnedé až čierne; Azotobacter vinelandii - v mladej kultúre sú bunky tyčinkovitého tvaru, veľké 2-3 mikróny. V starej kultúre je tvar buniek guľovitý. Liečivo sa pripravuje z kvapky tekutiny Clostridium pasteurianum - pohyblivé tyčinkovité bunky s veľkosťou 3-7 mikrónov, jednoduché alebo usporiadané v pároch a krátkych reťazcoch(obr. č. 1.10 prihlášky). Výtrusy sú oválne, tvoria sa excentricky, pričom bunky nesúce výtrusy nadobúdajú tvar citróna. V bunkách sa hromadí veľa granulózy. Kolónie belavé, hladké, lesklé.

Kontrolné otázky, pozri lekciu číslo 8.

AKTIVITA #10

Cieľ:

Úlohy:

Študovať mechanizmus alkoholovej fermentácie a morfológiu jej patogénov.

Študovať mechanizmus priebehu a typy fermentácie kyseliny mliečnej, morfológiu jej patogénov.

Študovať vlastnosti premeny alkoholu na kyselinu octovú a morfológiu baktérií kyseliny octovej.

Študovať mechanizmus maslovej fermentácie a morfológiu jej patogénov.

Materiály a vybavenie. Soľanka, kefír, pekárske droždie, pivo, kultivačné médium pre baktérie kyseliny maslovej, prípravné farbiace zariadenia, mikroskopy.

Základné pojmy.Alkoholové kvasenie, Pasteurov efekt, homofermentatívne mliečne kvasenie, heterofermentatívne mliečne kvasenie.

Pokrok

Úloha číslo 1. Ak chcete študovať mikroorganizmy zapojené do alkoholovej fermentácie, urobte kresbu. 50 ml 20 % roztoku sacharózy a asi 1 g kvasníc zriedených v 10 ml roztoku sacharózy (20 %) sa naleje do 250 ml banky. Zatvorte a niekoľko dní udržujte teplotu okolo 35-40°C.

Mikroskopia.Väčšina v praxi používaných kultivovaných kvasiniek patrí do rodu Saccharomyces (Saccharomyces cerevisiae, ryža. č. 1, 2 aplikácie) a Schizosaccharomyces. Tieto kvasinky sa líšia od divokých tým, že sú schopné odolávať vysokým koncentráciám cukru (až 70 %) a alkoholu (až 14 %), vyvíjajú sa pri pH 4-6 a tvoria menej vedľajších produktov kvasenia.

Úloha číslo 2. Ak chcete študovať mikroorganizmy zapojené do fermentácie kyseliny mliečnej, nakreslite obrázok.Na zoznámenie sa s baktériami mliečneho kvasenia (homofermentatívna fermentácia) môžete použiť hotové mliečne výrobky (kydené mlieko, acidofil, kefír) a soľanku (heterofermentatívna fermentácia). Tieto produkty sa nasunú na podložné sklíčko a vytvorí sa tenká škvrna. Farbte 3-5 minút vodným roztokom metylénovej modrej.

Mikroskopia.V produktoch kyseliny mliečnej sa najčastejšie vyskytujú tieto patogény homofermentatívnej fermentácie - Streptococcus lactis (obr. č. 9 prílohy), ktoré majú formu oválnych kokov s priemerom 0,5-1,0 mikrónu, sa v kultúre nachádzajú v pároch (diplokoky) alebo v krátkych reťazcoch (streptokoky), menej často v jednotlivých bunkách; Lactobacillus bulgaricus (obr. č. 9 prílohy) - veľká tyčinka (4-5 mikrónov dlhá), nepohyblivá, gram-pozitívna, umiestnená vo forme jednotlivých buniek a krátkych reťazcov, optimálna vývojová teplota je 40-45 °C; Lactobacillus acidophilus - morfológiou je blízka bulharčine, ale má iné teplotné optimum vývinu - 37°C.

Medzi pôvodcami heterofermentatívnej fermentácie sú zvyčajneLactobacillus brevis, Lactobacillus brassicae, Leuconostoc mesenteroidesa iné (mikroflóra soľanky). Biely alebo krémový zamatový vrásčitý film na povrchu soľanky alebo kefíru naznačuje prítomnosť Geotrichum candidum ( Oidium lactis) (obr. č. 9 prílohy) - mliečna pleseň, ktorá vždy sprevádza mliečne kvasenie.

Úloha číslo 3.Ak chcete študovať mikroorganizmy, ktoré sa podieľajú na premene alkoholu na kyselinu octovú, nakreslite obrázok.Tenká vrstva piva (0,5-1,0 cm3) sa naleje do kužeľových baniek. Banky sa uzavrú vatovými zátkami a umiestnia sa do termostatu pri teplote 30 °C. Po 5-7 dňoch sa opíše povaha vytvorených filmov, zafarbené šmuhy sa mikroskopicky skúmajú.

Mikroskopia.Baktérie kyseliny octovej sú zjednotené v rodeAcetobacter, zadajte zobrazenieAcetobacter aceti(obr. č. 9 v prílohe) predstavujú slabo pohyblivé tyčinkovité elipsovité bunky široké 0,6-0,8 µm, dlhé 1,0-3,0 µm, jednotlivé, v pároch alebo retiazkach. Často tvorí involučné formy vo forme opuchnutých, rozvetvených alebo filiformných útvarov. Baktérie kyseliny octovej sa z piva ľahko izolujú.

Úloha číslo 4.Študovať mikroorganizmy zapojené do maslovej fermentácie. Neošúpané zemiaky nakrájame na plátky, naplníme nimi skúmavku do 1/3 objemu, pridáme štipku kriedy a zalejeme vodou až po okraj. Skúmavky sa umiestnia na 10-15 minút do vodného kúpeľa s teplotou 80 °C. Potom sa skúmavky zazátkujú a prenesú do termostatu s teplotou 25 °C0 C. Po 2-3 dňoch sa v tekutine nachádzajú baktérie maslovej fermentácie.

Mikroskopia.Na fixné prípravky sa nachádzajúCl. pasteurianum, Cl. butiricum(obr. č. 1, 10 prílohy) - pohyblivé palice so zaoblenými koncami, jednoduché a párové. V starých kultúrach sa na jednom konci bunky nachádza spóra.

Kontrolné otázky

Alkoholové kvasenie.

Kvasnice. Forma, štruktúra, reprodukcia a klasifikácia.

Oxidácia etylalkoholu na kyselinu octovú.

Chémia a pôvodcovia mliečnej fermentácie (homofermentatívny typ).

Chémia a pôvodcovia mliečnej fermentácie (heterofermentatívny typ).

Butyrica acetobutylová fermentácia.

Maslová fermentácia pektínových látok.

Anaeróbna degradácia vlákniny.

Oxidácia vlákniny mikroorganizmami.

Vyplňte tabuľku č. 9 "Charakteristika fermentačných procesov."

Tabuľka číslo 9.Charakterizácia procesov konverzie uhlíka (procesy fermentácie a oxidácie zlúčenín, ktoré neobsahujú dusík)

Otázky pre samoukov

Spôsoby výživy a príjem živín do bunky.

Výživové potreby mikroorganizmov.

Druhy výživy mikroorganizmov.

Metabolizmus mikroorganizmov. Fermentácia, dýchanie, fotosyntéza.

AKTIVITA #11

KONVERZIA ZLÚČENÍN UHLÍKA POMOCOU MIKROORGANIZMOV

Cieľ:Preskúmajte funkcie rôzne druhy fermentácia a morfológia ich patogénov.

Úlohy:

Študovať mechanizmus fermentácie pektínu a morfológiu jeho patogénov.

Študovať znaky transformácie celulózy v aeróbnych podmienkach a morfológiu jej patogénov.

Študovať vlastnosti fermentácie celulózy v anaeróbnych podmienkach a morfológiu jej patogénov.

Materiály a vybavenie. Akumulačné kultúry mikroorganizmov, ktoré vykonávajú fermentáciu pektínových látok, rozklad vlákniny, mikroskopy, zariadenia na farbenie prípravkov.

Základné pojmy.Maslová fermentácia, pektín, pektináza, celulóza, celuláza.

Pokrok

Úloha číslo 1.Študovať mikroorganizmy podieľajúce sa na fermentácii pektínových látok, nakresliť obrázok. Na izoláciu baktérií ničiacich pektín sa používa živná pôda z ľanového semena alebo žihľavy. Zo stoniek sa pripravia snopy dlhé 5-7 cm, vložia sa do skúmaviek, zalejú sa vodou z vodovodu a varia sa 10-15 minút. Varením sa odstránia extrakčné látky, ktoré môžu slúžiť ako zdroj uhlíka pre sprievodné baktérie kyseliny maslovej. Voda sa vypustí, snopy sa naplnia novou dávkou vody, skúmavky sa pevne uzavrú vatovými zátkami a sterilizujú sa v autokláve pri 1 atm počas 20 minút. Keď sú skúmavky vychladnuté, médium sa infikuje kúskom čerstvej ľanovej slamy. Infikované skúmavky sa umiestnia do termostatu pri teplote 35 °C. Po 3-5 dňoch začne proces fermentácie pektínu, kvapalina sa zakalí a vytvorí penu.

Mikroskopia.Na štúdium morfológie pektínových fermentačných baktérií sa pripravujú celoživotné prípravky. Snopik sa vyberie zo skúmavky, na podložné sklíčko sa vytlačí kvapka tekutiny, pripravia sa fixné a doživotné prípravky (v Lugolovom roztoku). Na prípravku sú viditeľné bunkyClostridium pectinovorumAClostridium felsineum, vegetatívne a sporulujúce, farbené jódom pre granulózu tmavomodrou farbou (obr. č. 9 prílohy).

Úloha číslo 2.Ak chcete študovať mikroorganizmy, ktoré sa podieľajú na rozklade vlákniny (anaeróbne podmienky), nakreslite obrázok.Získať akumulačnú kultúru anaeróbnych foriembaktérie ničiace celulózupoužite prostredie Imshenetsky. INpribližne 1-2 g filtračného papiera alebo vaty sa pridajú do okrúhlej banky s plochým dnom a naplnia sa po vrch médiom s nasledujúcim zložením (v g/l): KNH4 HPO4 – 1,0; KN2 RO4 – 0,5; TO2 NRA4 – 0,5; CaCl2 – 0,03; peptón - 5; MgSO4 – 0,4; CaCO3 – 2,0; NaCl - 0,5; MnSO4 a FeSO4 stopy;stredné pH 7,0-7,4. Prostredie je infikované malým množstvom zeminy, banka sa uzavrie korkovou zátkou s otvorom na uvoľnenie plynov a umiestni sa do termostatu na 30-35°C. Voliteľné podmienky sú v tomto prípade určené prítomnosťou celulózy, zdroja uhlíka, ktorý môžu spotrebovať len špecifické baktérie rozkladajúce celulózu, ktoré majú enzým celuláza, ako aj anaeróbne podmienky. Peptón zavedený do média v malom množstve silne stimuluje proces fermentácie. Po 7-10 dňoch začína fermentácia celulózy, ktorá trvá 2-3 týždne. Filtračný papier počas fermentácie mierne slizký, žltne a postupne sa rúca.

Mikroskopia.Mikroskop kus papiera. V anaeróbnych podmienkach proces rozkladu celulózy vykonávajú baktérie roduClostridium. Cl. omelianskii(obr. č. 9 prílohy) má vzhľad dlhých tyčinkovitých buniek do 8 mikrónov, v starých kultúrach je dĺžka okolo 10-15 mikrónov, umiestnených jednotlivo alebo spojených v závitoch. Výtrusy sú guľovité, tvoria sa na konci bunky, bunka má podobu paličky. Je izolovaný od pôdy a vody. Optimálna teplota rastu je 30-35°C.

Úloha číslo 3.Ak chcete študovať mikroorganizmy, ktoré sa podieľajú na rozklade vlákniny (aeróbne podmienky), nakreslite obrázok.Na izoláciu aeróbnych baktérií ničiacich vlákninu sa používa Hutchinsonovo živné médium. Stredné zloženie (g/l): K2 NRA4 – 1,0; NaCl - 0,1; CaCl2 – 0,1; FeCl3 – 0,01; MgSO4 – 0,3; NaNO3 - 2,5; médium pH 7,2-7,3. Sterilné živné médium sa naleje do kužeľových baniek s vrstvou 1,5 až 2,0 cm, médium sa infikuje hrudkou pôdy a na povrch média sa kužeľom hore spustí skladaný filter. Banky sa uzavrú bavlnenými zátkami a umiestnia sa do termostatu pri teplote 25-30 °C na 10-14 dní. Na hranici živného média a vzduchu sú vytvorené optimálne podmienky pre výživu a aeróbne dýchanie vlákninu ničiacich baktérií. V tejto zóne je najintenzívnejší proces deštrukcie filtračného papiera. Po 8-10 dňoch sa na filtri objavia žlto-oranžové škvrny kolónií baktérií ničiacich vlákna. Papier sa rozkladá a filter sa postupne usadí na dne.

Mikroskopia.V banke s mikrobiologickou slučkou sa z rozrušenej hmoty vlákniny pripraví náter v kvapke tekutiny. Najčastejšie sa zástupcovia objednávok nachádzajú na príprave.Mušie baktérieACytofágyskupiny kĺzavých baktérií (obr. č. 10 prílohy).RodCytofágareprezentované dlhými tyčinkovitými bunkami so zahrotenými koncami, trochu zakrivenými (2-10 mikrónov). Kolónie sú žlté, oranžové, hnedo-hnedé, hladké, slizké.

RodСellvibrloreprezentované malými, mierne zakrivenými pohyblivými tyčinkami (2-4 mikróny). Kolónie sú okrovožlté slizovité. RollCellfalciculamá formu krátkych hrubých zakrivených tyčiniek so špicatými koncami (2,0 x 0,7 mikrónu).

Rodsorangiumv mladej kultúre vyzerá ako hrubé, mierne zakrivené tyčinkovité bunky so zaoblenými koncami (2-5 mikrónov). Starnutím kultúry sa vytvárajú plodnice pozostávajúce z mikrocyst. Tyčinkovité bunky sú skrátené, pokryté hrubou membránou a získavajú nepravidelné obrysy. Kolónie jasne oranžové, fialové.

RodPolyangiumreprezentované takmer rovnými tyčinkovitými bunkami so zaoblenými koncami (3,5-8 mikrónov). Starnutím vznikajú oválne mikrocysty, čo sú spojené a hruškovité plodnice. Plodnice sú žlté, oranžové, sedia priamo na substráte.

Na aeróbnom ničení vlákniny sa okrem baktérií podieľajú plesňové huby.Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Trichodermaa niektoré aktinomycéty.

Kontrolné otázky, pozri lekciu číslo 10.

AKTIVITA #12

EKOLÓGIA MIKROORGANIZMOV

Cieľ:Študovať vplyv environmentálnych faktorov na rast a vývoj mikroorganizmov.

Základné pojmy.Obligátne psychrofily, psychrotrofné mikroorganizmy (voliteľné psychrofily), termofily, osmotolerantné mikroorganizmy, galofily, lyofilizácia, obligátne aeróby a anaeróby, mikroaerofily, aerotolerantné anaeróby, antiseptiká.

Kontrolné otázky

Vplyv teploty na rast a vývoj mikroorganizmov. Ekologické skupiny baktérií vo vzťahu k teplote.

Vplyv vlhkosti na rast a vývoj mikroorganizmov.

Vplyv svetla a rôznych žiarení na rast a vývoj mikroorganizmov. Vplyv magnetického poľa.

Vplyv koncentrácie kyslíka na rast a vývoj mikroorganizmov.

Vplyv reakcie prostrediao raste a vývoji mikroorganizmov. Zlúčeniny a ióny toxické pre baktérie.

Adaptačné reakcie mikroorganizmov.

ČINNOSŤ č. 13

STANOVENIE CITLIVOSTI BAKTÉRIÍ NA ANTIBIOTIKÁ

Cieľ:Stanoviť citlivosť mikroorganizmov na antibiotiká.

Úlohy:

1. Stanovte citlivosť mikroorganizmov na antibiotiká difúziou do agaru pomocou papierových diskov

Materiály a vybavenie.Petriho misky s MPA, sterilné disky navlhčené roztokmi antibiotík, čisté kultúry saprofytických baktérií a plesní, pipety, liehové lampy, špachtle.

Základné pojmy.Antibiotiká, bakteriostatické a baktericídne účinky, R-faktory, rezistencia.

Pokrok

Úloha číslo 1.Stanovte citlivosť mikroorganizmov na antibiotiká difúziou do agaru pomocou papierových diskov.

Disková difúzna metóda na stanovenie citlivosti mikroorganizmov na antibiotiká je založená na zaznamenávaní priemeru zóny inhibície rastu okolo papierového disku s antibiotikom. Na povrch živného agaru v Petriho miskách, naočkovaných testovacími mikróbmi, sa aplikujú papierové kotúče napustené antibiotikami apoháre sa inkubujú pri 37 °C. Prítomnosť zóny inhibície mikrobiálneho rastu okolodisky indikuje citlivosť patogénu na liečivo, neprítomnosť zóny inhibície rastu indikuje rezistenciu.

Pokrok v definícii.Kultúra mikroorganizmov sa aplikuje na sterilné Petriho misky s MPA. Ako očkovací materiál sa používa denná bujónová kultúra - na povrch MPA sa nanesie 0,2 ml bakteriálnej suspenzie a rovnomerne sa rozdelí pretrepaním pohára a následným odsatím prebytočnej tekutiny pipetou.

Poháre sa sušia 30-40 minút pri izbovej teplote. Potom sa na povrch naočkovaného média pomocou pinzety umiestnia disky impregnované rôznymi antibiotikami. Kotúče sú priložené tesne k povrchu pre tesný kontakt s médiom. Disky sú umiestnené v rovnakej vzdialenosti od seba a asi 2 cm od okraja pohára. Poháre sa umiestnia do termostatu hore dnom alebo sa pod veko pohára umiestni kruh filtračného papiera, aby sa zabránilo erózii trávnika kondenzovanou vodou, a inkubujú sa pri teplote 37 °C počas 18 hodín.

Vyhodnotenie výsledkov.Pomocou pravítka určite priemer inhibičných zón mikrobiálneho rastu okolo diskov, vrátane priemeru samotného disku. Jednotlivé kolónie alebo tenký film rastu mikroorganizmov v zóne inhibície rastu sa neberú do úvahy. Neprítomnosť zón inhibície mikrobiálneho rastu okolo diskov naznačuje neprítomnosť citlivosti mikróbov na toto antibiotikum. So zónou inhibície mikrobiálneho rastu s priemerom do 10 mm sa kmeň považuje za málo citlivý. Zóna inhibície mikrobiálneho rastu väčšia ako 10 mm indikuje citlivosť kmeňa. Ako viac zóny spomalenie rastu, tým vyššia je citlivosť mikroorganizmov na antibiotikum. Výsledky zapíšte do tabuľky č.10.

Tabuľka číslo 10.Citlivosť mikroorganizmov na antibiotiká.

Antibiotické vlastnosti streptomycínu. Antibiotické vlastnosti penicilínu. ČINNOSŤ č. 14 ZÁKLADY LEKÁRSKE MIKROBIOLOGIE Cieľ:Študovať mikroorganizmy - patogény zvierat a ľudí. Literatúra Lebedeva M.N. Mikrobiológia. - M .: "Medicína", 1969. Základy mikrobiológie, virológie a imunológie / Ed. Editoval Vorobyov A.A., Krivoshein Yu.S. – M.: Masterstvo, 2001. Otázky na diskusiu Charakterizácia patogénnych kokov na príklade stafylokokov. Zápalovo-hnisavé ochorenia kože. Septikémia. Charakterizácia patogénnych kokov na príklade streptokokov. Lokalizované pyozápalové infekcie, tonzilitída, šarlach. Charakterizácia patogénnych kokov na príklade pneumokoka. Zápal pľúc. Charakterizácia patogénnych kokov na príklade meningokoka. Meningitída. Charakterizácia patogénnych kokov na príklade gonokoka. Kvapavka, blenorrhea. Charakterizácia gramnegatívnych baktérií netvoriacich spóry na príklade bacila moru. Mor. Charakterizácia gramnegatívnych baktérií netvoriacich spóry na príklade bacil tularemia. Tularémia. Charakterizácia gramnegatívnych baktérií netvoriacich spóry na príklade Brucella. Brucelóza. Rodina črevných baktérií na príklade Escherichia coli. Charakteristika skupiny týfusových a paratýfových baktérií. Týfus a paratýfus. Pôvodcovia otravy jedlom. Salmonelóza. Charakteristika pôvodcov dyzentérie. Typy dyzentérie. Charakteristika cholery vibrio. Štruktúra kapsulárnych baktérií na príklade Klebsielly. Charakterizácia antraxových bacilov. Formy antraxu. Charakteristika hemofilných baktérií na príklade čierneho kašľa. Patogénne anaeróby na príklade pôvodcov plynovej gangrény. Patogénne anaeróby na príklade tetanového bacila. Patogénne anaeróby na príklade pôvodcov botulizmu. Charakteristika bacilu záškrtu. Charakterizácia acidorezistentných baktérií na príklade tuberkulózneho bacila a lepry. Charakterizácia patogénnych húb na príklade aktinomycét. Dermatomykóza. Charakterizácia patogénnych spirochét na príklade bledého treponému. syfilis. Charakteristika patogénnych spirochét na príklade recidivujúcej horúčkovej spirochéty. Táto príručka stručne uvádza teoretický základ sanitárnej mikrobiológie, ako aj niektoré experimenty súvisiace s určovaním rôznych ukazovateľov mikroflóry vzduchu, vody a pôdy. Rôzne Pozostáva z dvoch sekcií – Všeobecná aplikovaná lekárska mikrobiológia a Klinická mikrobiológia. Prvá časť načrtáva hlavné metódy mikrobiologického výskumu, metódy špecifickej terapie a prevencie infekčných chorôb, druhá - metódy ich laboratórnych... 1,32 MB pridané 6.11.2011 Návod. KemTIPP. - Kemerovo, 114 s. Predmet a úlohy mikrobiológie. Základné vlastnosti mikroorganizmov Historický náčrt vývoja mikrobiológie. Perspektívy rozvoja a úspechov modernej mikrobiológie v r národného hospodárstva, Potravinársky priemysel. Princípy systematiky. Štrukturálna organizácia mikroorganizmus...