ÁLTALÁNOS MIKROBIOLÓGIA
I. fejezet Mikroszkóp és mikroszkópos technika
1. Fény-optikai mikroszkópia
2. Sötéttér-mikroszkópia
3. Fáziskontraszt mikroszkópia
4. Lumineszcens (fluoreszcens) mikroszkópia
fejezet II. Általános ábrázolások a termesztésről, a vetéstechnikáról és a mikroorganizmusokkal való munkavégzéshez szükséges eszközökről
fejezet III. Módszerek mikroorganizmus-készítmények előállítására
fejezet IV. mikrobiális sejtkutatás
1. Mikroorganizmusok sejtjeinek formái
2. A mikroorganizmus sejtek szerkezete (citokémiai kutatási módszerek)
3. Mikroorganizmussejtek Gram-festése
4. A spórák színezése baktériumokban
5. Kapszula színező
6. A flagellák színezése
7. A baktériumok nukleáris anyagának színezése
8. Mikroorganizmus sejtzárványok festése
V. fejezet A mikroorganizmusok táplálkozása
1. Az egyes tápanyagok jelentősége
2. Tenyésztáptalaj készítése
3. Sterilizálási módszerek
fejezet VI. A baktériumok számának elszámolása és a tiszta kultúra izolálása
1. A talajban lévő baktériumok számának elszámolása
2. A baktériumok minőségi összetételének meghatározása
3. A mikroorganizmusok számának elszámolása vízben és egyéb folyadékokban
4. A levegőben lévő baktériumok számának elszámolása
5. Tiszta baktériumtenyészetek izolálása
fejezet VII. A baktériumok típusának meghatározása
fejezet VIII. A mikroorganizmusok általi nitrogénmentes átalakulás szerves anyag
Fermentációs folyamatok
1. Alkoholos erjesztés
2. Tejsavas erjesztés
3. Vajas erjesztés
4. Pektin anyagok fermentációja
5. Cellulóz fermentáció
6. Rostok oxidációja
7. Zsír oxidációja
8. Szénhidrogén oxidáció
fejezet IX. Szerves és ásványi nitrogénvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
1. Ammonifikáció
2. Nitrifikáció
3. Denitrifikáció (nitrát légzés)
4. A légköri nitrogén biológiai rögzítése
X. fejezet
1. Kénvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
2. Mikroorganizmusok részvétele a vas átalakulásában
3. Foszforvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
MEZŐGAZDASÁGI MIKROBIOLÓGIA
fejezet XI. A talaj általános mikrobiológiai vizsgálata
1. Kutatási módszerek
2. A mikroorganizmusok csoportjai, a táptalaj összetétele és elkészítése
3. Átlagos talajminta vétele és a minta előkészítése mikrobiológiai vizsgálatra
4. Talajszuszpenzió készítése
5. A mikroorganizmusok különböző csoportjainak számbavétele
6. A talajban található mikroorganizmusok összszámának meghatározása közvetlen mikroszkópos számlálással
fejezet XII. A mikroorganizmusok cenózisainak vizsgálata
1. Üvegszennyezési módszer N. G. Kholodny szerint
2. A talajban előforduló mikrobiális cenózisok vizsgálata Perfiliev és Gabe módszerével
3. Aristovskaya által módosított Perfiliev kapilláris módszer
4. A humuszanyagok lebontásában részt vevő őshonos csoportba tartozó mikroorganizmusok azonosítása Winogradsky módszere szerint a Tepper módosításában
5. A humuszanyagok lebontásában részt vevő mikroorganizmusok azonosítása Tepper-módszer szerint
fejezet XIII. A talaj biológiai aktivitásának meghatározása
1. A talaj biológiai aktivitásának meghatározása a vászon bomlási intenzitásával (Mishustin, Vosztrov és Petrova módszere)
2. A talaj teljes mikrobiológiai aktivitásának meghatározása ürítéssel szén-dioxid
3. A talaj ammonifikáló aktivitásának meghatározása
4. Mikroorganizmusok ammonifikáló aktivitásának meghatározása
5. A talaj nitrifikáló aktivitásának meghatározása
6. A talaj denitrifikáló aktivitásának meghatározása
7. Mikroorganizmusok nitrogénmegkötő aktivitásának meghatározása
fejezet XIV. Baktériumok vizsgálata a növények gyökérzónájában és a gyökereken
1. Baktériumok számbavétele a rizoszférában Krasilnikov módszerrel
2. A rizoszféra és a gyökér mikroflóra számbavétele a gyökerek egymást követő mosásának módszerével az E szerint. 3. Tepper
3. Göbbaktériumok tiszta tenyészeteinek izolálása, mennyiségi elszámolása a talajban, aktivitásuk és virulenciájuk meghatározása
fejezet XV. Bakteriális készítmények elemzése
fejezet XVI. Takarmánymikrobiológia
1. A szemek epifita mikroflórája és változása a takarmánytárolás során
2. Silóanalízis
3. Takarmányélesztő
fejezet XVII. A tej és tejtermékek mikroflórája
1. A tej bakteriológiai elemzése
2. Módszerek tejsavbaktériumok tiszta kultúrába történő izolálására
3. Ismerkedés a vaj mikroflórájával
Irodalmi index

Irányelvek

gyakorlati munka megvalósításához

szakmához:

19.01.17 Szakács. Cukrász

Fejlesztő:

Veretennikova O.M. tanár

Valuiki, 2016

Magyarázó jegyzet

Ezek az iránymutatások a tudományág gyakorlati munkájának végrehajtásához "a mikrobiológia, a higiénia és az élelmiszertermelés alapjai » szövetségi állam alapján fejlesztették ki oktatási színvonal(a továbbiakban - GEF) szakma szerint:

01/19/17 Szakács. Cukrász

A gyakorlati munka végrehajtásának útmutatója az első éves hallgatóknak szólA gyakorlati és laboratóriumi munka megvalósítása a következők megoldására irányulfeladatok:

növeli a tudás megszerzésének tudatosságát és erejét;

fejlessze a vizsgált tárgyak elemzésének, összehasonlításának, kutatások végzésének, táblázatok, diagramok, klaszterek készítésének, következtetések levonásának képességét;

fejlődni a tanulókban logikus gondolkodás, kognitív képességek, önállóság;

megtanulják, hogyan hasznosítsák a megszerzett ismereteket és készségeket az életben.

Az anyag tanulmányozásakor, rögzítésekor a következő típusokat használják önálló munkavégzés:

Dolgozzon a tankönyv szövegével.

Bemutató munka.

Dolgozzon a vizsgált tárggyal.

Munka asztallal.

Dolgozzon egy klaszter, séma összeállításán.

Munkavégzés előkészített mikropreparátumokkal. Mikropreparátumok készítése.

Az irányelvek felépítése:

1. téma
2. a munka célja
3. felszerelés a munkához
4. munka előrehaladása
5. a munka elvégzéséhez szükséges tanulói tudás ellenőrzése, frissítése
6. munkakörülmények

Minden gyakorlati és laboratóriumi munkát egy jegyzetfüzetbe kell készíteni a gyakorlati munkához az ajánlásoknak megfelelően. (1. melléklet)

Az elvégzett munka eredményének ellenőrzése az írásbeli beszámoló és a hallgató munkavégzése során végzett ellenőrzésének eredményei alapján történik a pontban foglaltak szerint.gyakorlati munka megvalósításának értékelési szempontjai.

Gyakorlati munkák listája

1. sz. gyakorlati munka

A mikroszkóp készüléke és a vele való munkavégzés szabályai.

2. sz. gyakorlati munka Élesztő és penész morfológiájának mikroszkópos vizsgálata

3. sz. gyakorlati munka Baktériumok, élesztőgombák, gombák sejtjeinek szerkezeti vázlatai.

Gyakorlati munka 4-5

Gyakorlati munka 6. szA fertőtlenítő oldatok készítésének és tárolásának sémája

Gyakorlati feladat, melynek célja az ellenőrzésa hallgatók képessége a tudományág elméleti ismereteinek gyakorlati alkalmazására

Gyakorlati munka №1 MIKROSZKÓP KÉSZÜLÉK ÉS A VELÉ VALÓ MUNKAVÉGZÉS SZABÁLYAI.

A munka célja: Tanulmányozni a fénybiológiai mikroszkóp eszközét és elsajátítani a vele való munkavégzés szabályait.

Felszerelés, anyagok: Mikroszkóp; kész mikropreparátumok

Mikroszkóp (görögből.mikros- kicsi ésscopia- Nézem) egy optikai eszköz, amely három fő részből áll: mechanikus, optikai és világítási részből.

A fénybiológiai mikroszkóp diagramja az 1. ábrán látható. 1.

Mechanikai vagy állvány lábból, talpból, csőtartóból, tárgyasztalból, monokuláris rögzítésből (cső), forgóeszközből, durva fókuszáló fogantyúból (makrometrikus csavar), finom fókuszáló fogantyúból (mikrometrikus csavar) áll.

A cső a mikroszkóp teleszkópja. A cső felső furatába szabadon behelyezhető egy szemlencse, a cső alsó végén a tengelye körül forgó forgóeszköz (revolver) található, amelybe a lencséket csavarozzák. A revolver elforgatásával mikroszkóppal végzett munka közben gyorsan lecserélheti az objektíveket, és minden lencsét a cső alá visz. A lencsét középre kell helyezni, pl. a mikroszkóp optikai tengelyére szerelve. Ehhez a revolvert a tengelye körül kell forgatni, amíg egy kattanás meg nem jelenik.

A tárgyasztalt arra használjuk, hogy ráhelyezzük a vizsgált gyógyszert. A gyógyszert bilincsekkel (terminálokkal) rögzítik az asztalra. A tárgyasztal közepén egy lyuk található a fénysugarak áthaladásához és a készítmény megvilágításához. Egyes mikroszkóp-kialakításoknál a tárgyasztal mozgatható a tárgyasztal peremén elhelyezett csavarokkal. Ez lehetővé teszi a kábítószer különböző látószögű vizsgálatát.

1 – szemlencse

2 – monokuláris fej

(cső)

3 - revolver

4 - lencse

5 - tárgytáblázat

6 - kondenzátor

7 - Kollektorlencse ház

8 - foglalat lámpával

9 - zsanér

10 – fogantyú a kondenzátor tartó mozgatásához

11 - finom fókusz gomb (mikrométer csavar)

12 – durva fókusz gomb (makrométer csavar)

13 - csőtartó

14 - csavar a fúvóka rögzítéséhez

Rizs. 1Fénybiológiai mikroszkóp készülékének vázlata

A cső fel-le mozgatásához durva és finom fókuszgombok (makró és mikrocsavarok) szolgálnak, ami lehetővé teszi, hogy a készítménytől a kívánt távolságra állítsa. A csavarokat az óramutató járásával megegyező irányba forgatva leengedi a csövet, míg az óramutató járásával ellentétes irányba forgatva felemeli. A makrometrikus csavar elforgatásakor az objektív hozzávetőlegesen fókuszálásra van állítva, azaz. a készítménytől olyan távolságban, amelyen láthatóvá válik. A makrócsavar elfordítása lehetővé teszi a cső 20 mm-rel történő elmozdítását. A mikrométeres csavart a pontos fókuszáláshoz használják. Egy teljes fordulattal 0,1 mm-rel elmozdítja a csövet. A mikrocsavart nagyon óvatosan kell kezelni: a mikrocsavart legfeljebb 180-kal szabad elforgatni. 0 C így vagy úgy.

Optikai rész a mikroszkóp legértékesebb része. Lencsékből és okulárból áll.

Okulár (a lat.oculus- szem) két sík-domború lencséből áll, amelyek közös fémkeretbe vannak zárva. A felső lencse szemlencse (nagyító), az alsó konvergáló. A lencsék közötti távolság a gyújtótávolságuk összegének a fele. A nagy nagyítású szemlencsék fókusza rövidebb, így a szemlencse hossza is rövidebb. A lencsék között van egy membrán, amely korlátozza a látómezőt és késlelteti a szélsugarakat. A háztartási mikroszkópok három cserélhető okulárral vannak felszerelve, amelyek nagyítása a szemlencse testén látható (x7; x10; x15).

Az objektívek a forgó eszköz foglalataiba vannak csavarva, és egy fémkeretbe zárt lencserendszerből állnak. Az objektív elülső (elülső) lencséje a legkisebb és az egyetlen, amely nagyítást ad. Az objektívben megmaradt lencsék csak a kapott kép tökéletlenségeit korrigálják (szférikus és kromatikus aberráció jelenségei), és ezeket korrekciósnak nevezik.

A forgó eszköz foglalataiba négy lencse van csavarozva, amelyek nagyítása az objektív hengerén van feltüntetve (x8; x20; x40; x90 vagy 100). Mindegyik objektívre jellemző a gyújtótávolsága (az üveglap és az elülső lencse távolsága): az x8-as objektív gyújtótávolsága körülbelül 9 mm, az x40-es objektív gyújtótávolsága 0,65 mm, az x90-es objektív gyújtótávolsága kb. gyújtótávolság 0,15 mm.

világító rész A mikroszkóp kétlencsés kondenzátorból, írisz membránból és kisfeszültségű izzólámpával ellátott patronból áll, 120...220 V feszültségű hálózatról lecsökkentő transzformátoron keresztül.

A kondenzátor a készítmény jobb megvilágítását szolgálja. A fénysugarakat sugárnyalábba gyűjti, és a színpad nyílásán át a felkészüléshez irányítja. A kondenzátorkar a fogantyú segítségével fel-le mozgatható a kondenzátorkar mozgatásához, ami megváltoztatja a nyalábok konvergenciaszögét, és ennek következtében a tárgy megvilágítási fokát. Minél magasabb a kondenzátor pozíciója, annál jobban megvilágítja a készítményt.

Az írisz membrán a kondenzátor alatt található, és a kondenzátorba belépő fény áramlásának szabályozására szolgál. Félhold alakú fémlemezekből áll. Egy speciális kar segítségével bővítheti vagy szűkítheti a membrán rekesznyílását. Az óramutató járásával megegyező irányba forgatva az írisz membrán nyílása megnő, és ennek következtében nő a tárgy megvilágítási foka.

Merülő lencsékkel végzett munka során a készítmény megvilágítási foka maximális legyen, így az írisz membrán redőnye kinyílik, és a kondenzátor a legmagasabb pozícióba kerül.

Ha száraz lencsékkel dolgozik, általában a festetlen tárgyakat veszik figyelembe. A kontraszt elérése érdekében a kondenzátort leengedjük, és az írisz diafragma rekesznyílását csökkentjük.

A mikroszkóppal végzett munka szabályai

Az asztalon a mikroszkópot a csőtartóval maga felé helyezzük el, az asztal szélétől 3 ... 5 cm távolságra;

Kapcsolja be a mikroszkópot és állítsa be a megfelelő világítást

A tesztkészítményt a tárgyasztalra helyezzük és bilincsekkel rögzítjük;

A kívánt lencsét a cső alá helyezzük, és a gyújtótávolságot a makro- és mikrocsavarokkal állítjuk be. Tehát az immerziós lencsékkel végzett munka során először egy csepp immerziós olajat kell a készítményre felvinni, és a csőtartót óvatosan leengedni egy makrocsavarral, amíg érintkezésbe nem kerül az üveggel. Ezután óvatosan az okulárba nézve a tubustartót nagyon lassan emeljük fel, az óramutató járásával ellentétes irányba forgatva, amíg a kép meg nem jelenik. Az objektív finom fókuszálása mikrométeres csavarral történik. Ha száraz objektívekkel dolgozik, a mintát először egy x8-as objektívvel vizsgálják meg. Emelje fel a csőtartót egy makrócsavarral, és óvatosan néz a szemlencsébe, állítsa be a gyújtótávolságot (kb. 9 mm), és egy mikrométeres csavarral érje el a kép tisztaságát. Továbbá a tárgyasztal vagy üvegcsúszda mozgatásával a preparátum területe a mező közepére kerül, ahol a vizsgált tárgy a legjobban látható. Ezután a forgó eszközt a tengelye körül forgatva egy x20-as vagy x40-es lencsét helyeznek a cső alá. Ebben az esetben az x90-es objektív nem eshet a cső alá. A forgó eszközben a lencsék úgy vannak elrendezve, hogy ha x8-as objektíves képet találunk, akkor nagyobb nagyítású lencsés minta vizsgálatakor a kép tisztaságát enyhén módosítani kell makro-, ill. mikrométeres csavarok;

A mikroszkópos vizsgálat során mindkét szemet nyitva kell tartani és felváltva kell használni;

A munka befejezése után távolítsa el a készítményt a tárgyasztalról, engedje le a kondenzátort, helyezze az x8 objektívet a cső alá, távolítsa el az immerziós olajat az x90 objektív elülső lencséjéről egy puha ruhával vagy alkohollal átitatott gézzel, tegyen gézszalvétát az objektív alatt engedje le a csőtartót.

Mi a biológiai mikroszkóp eszköze?

Milyen alkatrészekből és mechanizmusokból áll a mikroszkóp mechanikus része?

Mi a mikroszkóp optikai rendszere?

Mit tartalmaz a mikroszkóp világítási rendszere?

Hogyan kell beállítani a világítási rendszert, ha merülőlencsével dolgozik?

Sorolja fel a mikroszkóppal végzett munka alapvető szabályait!

A feladat teljesítésének feltételei
1. A feladat helye (időpontja).
Biológia óra

Gyakorlati munka №2 Élesztő- és penészgombák morfológiájának mikroszkópos vizsgálata.

A munka célja : Ismerkedjen meg az élelmiszertermelésben előforduló gombák és élesztőgombák morfológiai jellemzőivel. Elsajátítani a gombák és élesztőgombák mikroszkópos vizsgálatának technikáját „zúzott csepp” készítményekben.

Felszerelés, anyagok: Mikroszkóp; Bonctűk, üveglemezek és fedőlemezek; szűrőpapír; spirituszfőző; gomba nemzetségek kultúráiMucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; tiszta élesztő kultúraSaccharomycescerevisiae.

1. RÖVID ELMÉLETI RENDELKEZÉSEK

1. 1. A mikroszkopikus gombák morfológiája és kulturális jellemzői

A gombák vegetatív testét únmicélium . A micélium sok egymásba fonódó szálból, úgynevezett tubulusból áll.hifák . A hifák átmérője 5 és 50 mikron között van. A micélium szerkezetétől függően a gombákat magasabbra és alacsonyabbra osztják. A magasabb gombákban a hifákat válaszfalak (septa) választják el, amelyek közepén egy nagy pórus található. Növekednek, és ezzel egyidejűleg nukleáris osztódás történik, de sejtosztódás nem következik be. Így a gomba vegetatív teste egyetlen nagy többmagvú sejt. Minden mikroszkopikus gomba képes vegetatívan szaporodni egy darab micéliummal.

Az ivartalan szaporodás során a phycomycetes termelneksporangioforok , és az Ascomycetesbenkonidiofórok .

A mikroszkopikus gombák kulturális jelei

A mikroszkopikus gombák kolóniái sokszor nagyobbak, mint az egysejtű szervezetek (baktériumok, gombák) telepei, és gyakran a teljes felületen növekednek. növekedési közeg Petri-csészékben. A gombakolóniák konzisztenciája eltérő. Gyakrabban alakulnak ki filcszerű és bőrszerű telepek, ritkábban morzsalékosak. A telepek felülete lehet pelyhes, vattaszerű, bársonyos, lisztes, pókhálószerű, fonalas, bőrszerű vagy sima. Sűrű és folyékony táptalajon történő termesztéskor a hifák egy része a táptalajba nő, kialakulszubsztrát micélium, a hifák másik része pedig kialakullevegő micélium bolyhos bevonat formájában, szabad szemmel látható. A micélium színtelen (fehér, szürkés) vagy színes (fekete, barna, zöld, sárga stb.) is lehet. Csak a termő micélium pigmentált.

A mikroszkopikus gombák jellemzői különféle osztályok

A különböző osztályokba tartozó gombák morfológiai jellemzőit az 1. ábra mutatja be. 5.

NemzetségMucor . Ivartalanul és ivarosan is szaporodhatnak sporangioforok képződésével (5. ábra). Kívül a sporangiumot vékony kalcium-oxalát-kristályok borítják. Érett állapotban a sporangiumok felszakadnak, a sporangiumok spórái kiszabadulnak és a légáramlatok magukkal hordják. A sporangioforon a sporangiumnak a spórákból való felszabadulása után egy oszlop marad, alsó részén pedig egy gallér. A nyálkahártya gombák micéliumának színe kezdetben fehér, majd szürkés-olíva, megjelenése filcszerű.

A

b

V

G

Rizs. 5A különböző osztályokba tartozó gombák morfológiai jellemzői:

A - Mucor; b - Penicillium; V - Aspergillus; G - Alternaria

A mucor gombák nedves gabona, maláta, gyökérnövények felületén, élelmiszereken, nedves helyiségek falán szürkés bolyhos bevonat formájában nőnek.Mucornigrikánoka cukorrépa szorítórothadásának kórokozója. Számos nyálkagombát használnak az iparban különféle szerves savak és alkoholok (a fajhoz tartozó gombák) előállításáraMucorjavanicus, Mucorracemosus), enzimkészítmények, karotinoidok, szteroidok.

A nemzetség képviselőiAspergillus És Penicillium az Ascomycetes osztályba tartoznak, amely a legmagasabb mikroszkopikus tökéletes gombákat egyesíti. A spórákkal ivartalan szaporodáskor ezek a gombák konidioforokat képeznek (5. ábra). Az Aspergillus és a penicillium gombák. Ez azt jelenti, hogy az ivaros szaporodás során speciális termőtesteken aszkusok (zsákok) képződnek, amelyekben 8 aszkospóra található.

A nemzetséghezPenicillium az összesnek körülbelül a felét teszi ki penészgombák. Széles körben elterjedtek a talajban, a rosszul szellőző területek levegőjében, és különböző termékek és anyagok károsodását okozzák. Ez a gomba elágazó szeptátum micéliummal (hifák átmérője - 2 ... 3 mikron) és szeptátum konidioforokkal (kefékre emlékeztet) rendelkezik, amelyek a végén folyamatok - sterigmák - formájában ágaznak ki. A spóraláncokból álló konídiumok távoznak belőlük. A konídiumok típusától függően különböző színűek lehetnek (fehér, zöld stb.). Sok penicillit használnak az iparban különféle értékes termékek előállítására. E nemzetség izolált törzseinek 25%-a rendelkezik antibiotikus aktivitással, és olyan fajok, mint plPenicilliumnotatum, Penicilliumkrizogénpenicillin előállítóként használják. A penicillium bizonyos típusait enzim- és lipidtermelőként használják. A nemes formákat lágy Roquefort és Camembert sajtok előállításához használjákPenicilliumroquefortiÉsPenicilliumcamamberti.

A nemzetséghez tartozó gombákAspergillus több mint 200 faj létezik. Ezeknek a gombáknak jól fejlett elágazó micéliumuk van, számos válaszfallal. A konidioforok nem szeptátumok, felső végük körte alakú vagy gömb alakú, kis fej alakban kitágult. A fejen tű alakú sterigmák konídiumláncokkal, amelyek öntözőkannából kiömlő vízáramokhoz hasonlítanak. Innen a "szivárgó penész" elnevezés (aspergerelatinul - vizezni, permetezni). Az Aspergillus konídiumok éréskor eltérő színt kapnak, ami más jellemzőkkel együtt meghatározza faji hovatartozásukat.

Csakúgy, mint a penicillusok, a nemzetség képviselőiAspergillusA természetben széles körben elterjedtek, és fontos szerepet játszanak a szerves anyagok mineralizációjában. Sok élelmiszerben penészt okoznak. Ezek a gombák számos értékes anyagot termelnek, és széles körben használják az iparban. Így,AspergillusNiger, az iparban citromsav előállítására használják;Aspergillusterreus- itakonsavAspergillusflavusÉsAspergillusterricolaa proteolitikus enzimek legaktívabb komplexét alkotják;AspergillusoryzaeÉsAspergillusawamoriaz amilolitikus enzimek legjobb termelői.

A nemzetséghez tartozó gombákAlternaria a tökéletlen gombák osztályába tartoznak - deuteromycetes. Ezek a magasabb gombák. Szeptált micéliummal és rövid, nem szeptumú konidioforokkal rendelkeznek, amelyeken körte vagy citrom alakú többsejtű konídiumok találhatók (5. ábra). A gomba a fekete rothadás kórokozója - a gyökérnövények és gyümölcsök betegsége, valamint az élelmiszer-romlás kórokozója.

Az élesztő morfológiája és jellemzői

Élesztő magasabb egysejtű gombák. A legtöbb élesztő a gombák két osztályába tartozik - az ascomycetes és a deuteromycetes.

Az oxigén vonatkozásában az élesztőket fakultatív anaerobokra (aerob körülmények között lélegeznek és aktívan felhalmozzák a biomasszát, anaerob körülmények között alkoholos erjedést okoznak) és aerobokra.

Morfológiailag az élesztők változatosak. A sejtek méretében és alakjában különböznek egymástól. Az élesztősejtek mérete a fajtól függően a következő határokon belül változik; 2,5-10 µm átmérőjű és 4-20 µm hosszú. Az élesztőformák morfológiai sokféleségét az ábra mutatja. 6.

A

b

V

G

d

e

és

h

Rizs. 6Az élesztősejtek formái: a - ovális tojásdad;

b - hengeres; c - apikális; citrom alakú; g - söpört;

e - háromszög alakú; e - félhold; g - kúp alakú; h, i - miceloid

Az élesztősejtek alakja és mérete a típustól, életkortól, táptalajtól és tenyésztési módtól függ.

A fajtól függően az élesztő vegetatívan szaporodhat bimbózással (így szaporodik az ovális élesztő), bináris hasadással (jellemző a hengeres vagy rúd alakú élesztőre), vagy bimbós osztódással. A vegetatív szaporodás mellett az élesztőgombák - ascomycetes - ivarosan szaporodhatnak aszkospórák képződésével.

Az Ascomycetes osztályába tartozó élesztőből, nagyon fontos nemzetségbe tartozó élesztő-szacharomiceták vannakSaccharomyces , melyik széles körben használják az élelmiszeriparban. Ezeknek az élesztőknek a fő biokémiai jellemzője az, hogy cukrokat erjesztenek etil-alkohol és szén-dioxid képzésére. Az iparban használt élesztőt únkulturális élesztő. Tehát a sütőiparban és az alkoholgyártásban a nemzetséghez tartozó élesztőSaccharomycescerevisiae. ÉlesztőfajtákSaccharomyceskiskorúalkalmazásra talált a rozskenyér és a kvas gyártásában. A sörfőzéshez alulról származó élesztőt használnakSaccharomycescarlsbergensis. A szacharomyceta élesztőgombák ovális alakúak, vegetatívan, rügyezéssel szaporodnak, kedvezőtlen körülmények között ivarosan aszkospórák segítségével szaporodnak.

Egyes sporogén élesztők igenvad élesztő . Ezek az élesztők a kultúrnövényekhez hasonlóan alkoholos erjesztésre is képesek, de az alkoholon kívül számos mellékterméket (például aldehideket, magasabb szénatomszámú alkoholokat, észtereket stb.) képeznek, és emiatt rontják a termék érzékszervi tulajdonságait. Ezek az élesztők kártevők a különféle italok (sör, bor, üdítőitalok) gyártásában, valamint számos élelmiszerben romlást okoznak.

Élesztő - deuteromycetes csak vegetatívan szaporodhatnak. Néhány ilyen élesztő (például a nemhez tartozó élesztőkCandida) az iparban takarmányfehérje, szerves savak, vitaminok és egyéb mikrobiális szintézis termékek előállítására használják. ÉlesztőfajtákTorulopsiskefira szimbiotikus kovász - kefirgomba részei. Más tökéletlen (aszporogén) élesztők vad élesztők, és sok élelmiszerben romlást okoznak. A termelésben előforduló élesztőkártevők közé tartoznak az élesztő nemzetségekPichia, Hansenula, Candida, Rhodotorula,Torula, Torulopsis, Mycoderma, Trichosporonstb. Az aszporogén élesztők között vannakhamis élesztő , amelyek pszeudomicéliumot képeznek és folyékony szubsztrátumokon filmek formájában nőnek.

1. MUNKA ELJÁRÁS

Csővel vagy pipettával nagy csepp vizet csepegtetünk egy tárgylemezre;

Kis mennyiségű micéliumot veszünk ki kémcsőből vagy Petri-csészéből, betartva az aszepszis szabályait

A micéliumot óvatosan egy tárgylemezre helyezett cseppbe helyezzük, és két tű segítségével vízben kiegyenesítjük;

A készítményt fedőlemezzel letakarjuk és enyhén lenyomjuk. A felesleges vizet szűrőpapírral távolítjuk el.

A „zúzott csepp” készítményt először x8-as, majd elsötétített látómezőben x40-es mikroszkóppal (a kondenzátort leeresztve, az íriszzárat letakarva) mikroszkópozzuk.

A gombakészítmények kiválasztása és mikroszkópos vizsgálata során a következő ajánlásokat kell figyelembe venni:

a) gomba Mucor . Feketésszürke bolyhos légmicéliumot választunk ki. Mikroszkóp alatt figyelmet fordítanak a spórákkal teli sporangiumokkal rendelkező hifákra és a sporangium felszabadulásakor keletkező oszlopokra;

b) a nemzetség gombája Aspergillus . Egy kis bolyhos micéliumot színes konídiumokkal választunk ki, tűvel kissé mélyítve a tápközegbe. Ügyeljen az unsepted konidioforokra;

c) a nemzetséghez tartozó gomba Penicillium . Kiválasztáskor fiatal micéliumot próbálnak venni (a színes és fehér micélium határán), tűvel mélyítve a táptalajba. Ügyeljen a septate hifákra ecsettel.

d) a nemzetséghez tartozó gomba Alternaria . Fekete területeken veszik fel a micéliumot, tűkkel mélyülnek bele. Ügyeljen a szeptátum micéliumra, a gyengén fejlett konidioforokra és a nagy konídiumokra, amelyek úgy néznek ki, mint a "citrom-gránátalmára" emlékeztető, lekerekített vagy hegyes többsejtű képződmények.

Az élesztő tanulmányozásában élesztőszuszpenziót egy tárgylemezre viszünk, fedőlemezzel lefedjük, a felesleges vizet szűrőpapírral eltávolítjuk. A mintát x8-as és x40-es lencsével mikroszkóppal vizsgáljuk.

Kutatási eredmények nyilvántartása, elemzése

Röviden vázolja fel az elméleti anyagot! A vizsgált gomba- és élesztőkultúrákról mikroszkópos képeket készítenek, figyelembe véve az egyes mikroorganizmusok morfológiai jellemzőit. Az egyes ábrák alatt a latin név és a készítmény növelése van aláírva. Ismertesse a vizsgált gombák tenyésztési tulajdonságait!

Válasz Ellenőrző kérdések

Hogyan készülnek a mikroszkopikus gombákból és élesztőből készült készítmények?

Ismertesse a mikroszkopikus gombák morfológiai és tenyésztési tulajdonságait!

Milyen gombákat használnak az iparban szerves savak, enzimek, antibiotikumok és más értékes termékek előállítására?

Írd le morfológiai tulajdonságaiélesztő.

Mi az a kulturális élesztő? Az élelmiszeripar mely területein használják őket?

A feladat teljesítésének feltételei

Biológia óra

2. Maximális feladatvégzési idő: 90 perc

3. sz. gyakorlati munka: Baktériumok, élesztőgombák, gombák sejtjeinek szerkezeti vázlatai.

A munka célja: Tanulmányozza a sejt szerkezetétbaktériumok, élesztőgombák, gombák

Anyagi támogatás: oktatókártyák gyakorlati munkákhoz, tankönyv, ceruza

1. Feladat

Tanulmányozza a tankönyvben található anyagot. A tanulmány eredményei szerint:

Rajzolja le egy füzetbe a baktériumok, élesztőgombák és gombák sejtjének szerkezetét, és jelölje meg a megkülönböztető jellemzőket!

Válaszoljon írásban a következő kérdésekre:

1. Milyen alakúak a baktériumsejtek?

2. Milyen méretűek a baktériumok?

3. Hogyan történik a baktériumok szaporodása, szaporodási üteme?

4. Hogyan és milyen körülmények között történik a spóraképződés a baktériumokban?

5. Képesek-e a baktériumok önálló mozgásra?

Munkájának eredményei alapján vonjon le következtetést.

A feladat teljesítésének feltételei

1. A feladat helye (időpontja).

Biológia óra

2. Maximális feladatvégzési idő: 90 perc

Gyakorlati munka a 4. témában Szabályozási és műszaki dokumentációval való munka: SanPiN 2.3.6. 1079-01

A munka célja: Tanulmányozni a közétkeztetési egységek elrendezésének és fenntartásának egészségügyi követelményeit

Anyagi támogatás: oktatókártyák a gyakorlati munkához, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. Feladat

Tanulmányozza a tankönyvben található anyagot. SanPiN 2.3.6. 1079-01. A vizsgálat eredményei szerint:

1. Adja hozzá a következő mondatokat: A vendéglátó egység építési helyének kell lennie

A gyártási létesítmények a következők:

A raktárak az épület ____________________ részében vannak kialakítva.

Az ivóvíznek ugyanolyan minőségűnek kell lennie

A szellőztetést a levegő tisztítására használják

Típus.

Minden termelési területet meg kell világítani

Fény.

A havi takarítást hívják

2. Határozza meg a következő kifejezéseket:

A fertőtlenítés...

A deratizálás -

A rovartalanítás...

3. Az oktatási anyag felhasználásával töltse ki a táblázatot:

zöldséges bolt

hentesbolt

Hal bolt

Forró bolt

hűtőbolt

Cukrászda

Kiosztóanyag

A feladat teljesítésének feltételei

1. A feladat helye (időpontja).

Biológia óra

2. Maximális feladatvégzési idő: 90 perc

5. sz. gyakorlati munka Szabályozási és műszaki dokumentációval való munkavégzés: SanPiN 2.3.6. 1079-01

A munka célja : Berendezések, készletek, edények, tartályok egészségügyi követelményeinek tanulmányozása. Élelmiszerek szállítása és tárolása.

anyagi támogatás : gyakorlati munkához oktató kártyák, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. Feladat

Tanulmányozza a tankönyv anyagát, a SanPiN 2.3.6. 1079-01. A tanulmány eredményei szerint:

1. Válaszoljon írásban a következő kérdésekre:

Mi a helyzet a konyhai eszközökkel?

Miért címkézzük fel az ételeket?

Mi a helyzet az étkészlettel?

Milyen anyagok megengedettek a berendezések és készletek gyártásához

vendéglátó egységek számára?

Mi az alapvető különbség az étkészlet és az evőeszközök mosása között?

2. Sorolja fel a szabályokat és követelményeket:

2.1. A félkész termékek szállításának egészségügyi szabályai:

2.2. Az élelmiszerek tárolásának egészségügyi szabályai:

3. Adjon hozzá kifejezéseket:

A kiosztás előtt az elkészített ételek minőségét kell ellenőrizni

Tálaláskor az első fogásoknak és a forró italoknak melegnek kell lenniük

_______ °С, főételek és köretek hőmérséklete __________ °С, adagolt ételek

hőmérséklet ______ °С, hideg ételek és italok __________ °С.

A téli-tavaszi időszakban az egészségügyi, megelőző és gyermekintézményekben a zöldséges ételek hiánya miatt _______________________ egyes ételeket ezzel kell gazdagítani.

________________ felelős a késztermék minőségéért és a vendéglátóhelyeken történő kibocsátására vonatkozó szabályok betartásáért.

A feladat teljesítésének feltételei

1. A feladat helye (időpontja).

Biológia óra

2. Maximális feladatvégzési idő: 90 perc

Gyakorlati munka 6. sz. Fertőtlenítő oldatok készítésének sémája és tárolása

Cél: a fertőtlenítőszerek megnevezésének, a fertőtlenítő oldatok készítésének módjainak tanulmányozása a céltól függően. Adott koncentrációjú oldatot készítünk.

anyagi támogatás : gyakorlati munkához oktató kártyák, SanPiN 2.3.6. 1079-01, tankönyv

1. Feladat

Tanulmányozza az oktatási irodalom anyagát, a SanPiN 2.3.6. 1079-01. A tanulmány eredményei szerint:

1. Válaszoljon a kérdésekre:

Milyen megoldások a fertőtlenítőszerek?

Mi a célja a fertőtlenítőszereknek?

Milyen gyógyszereket használnak fertőtlenítőszerként?

Honnan lehet felismerni, hogy az edényeket fertőtlenítőszerrel kezelték?

2. A fertőtlenítőszerek elkészítési sémáinak és céljának tanulmányozása. Töltse ki a táblázatot.

3. Készítsen elő 1 liter 0,2%-os klóramin B oldatot.

4. A munka eredményei alapján vonjon le következtetést!

A feladat teljesítésének feltételei

1. A feladat helye (időpontja).

Biológia óra

2. Maximális feladatvégzési idő: 90 perc

A gyakorlati munka megvalósításának értékelési szempontjai:
5-ös pontszámot adunk, ha :
1. A helyes önállóan meghatározza ezen munkák célját; a munkát a szükséges végrehajtási sorrend betartásával maradéktalanul elvégzi.
2. Önállóan, racionálisan kiválasztja és előkészíti a munkavégzéshez szükséges eszközöket; ezeket a munkákat a legpontosabb eredményt biztosító körülmények között végzi.
3. Hozzáértően, logikusan írja le a munka előrehaladását, helyesen fogalmazza meg a következtetéseket; pontosan és pontosan végez minden nyilvántartást, táblázatot, rajzot, rajzot, grafikont, számítást.
4. Szervezési és munkaügyi készséget mutat: tiszta munkahelyet tart fenn, rendet az asztalon, takarékosan használja az anyagokat; a munkavégzés során betartja a biztonsági előírásokat.
4-es pontszámot adunk, ha :
1. Az eredmények "5-ös" értékelésénél a követelményeknek megfelelően végzi a laboratóriumi munkát, de két-három hiányosságot vagy egy kisebb és egy hiányosságot megenged a számításoknál, méréseknél.
2. A munka összeállításakor megengedi a pontatlanságokat a cselekvés menetének leírásában; általánosításkor hiányos következtetéseket von le.
3-as pontszámot adunk, ha :
1.1 Legalább 50%-ban megfelelően végzi el a munkát, azonban az elkészült rész térfogata olyan, hogy lehetővé teszi a megfelelő eredmények elérését és következtetések levonását a fő, alapvető fontos feladatokat munka.
2. Eszközt, anyagot választ ki, pedagógus segítségével megkezdi a munkát; vagy mérések, számítások, megfigyelések során hibázik, pontatlanul fogalmaz meg következtetéseket, általánosításokat.
3. Irracionális körülmények között végez munkát, amely nagy hibás eredményre vezet; vagy a jelentésben összesen legfeljebb két olyan hibát (számok rögzítésében, mérési eredményekben, számításokban, grafikonok, táblázatok, diagramok elkészítésében stb.) engedélyez, amelyek jelen munka szempontjából nem alapvető fontosságúak, de az eredményt befolyásolták. végrehajtás.
4. Súlyos hibát követ el a munkavégzés során: a magyarázatban, a tervezésben, a biztonsági szabályok betartásában, melyet a tanuló a pedagógus kérésére javít.
2-es pontszámot adunk, ha :
1. Nem határozza meg önállóan a munka célját, nem tudja tanári segítség nélkül elkészíteni a megfelelő felszerelést; hiányosan végzi a munkát, és az elkészült rész terjedelme nem teszi lehetővé a helyes következtetések levonását.
2. A munkavégzés során két vagy több durva hibát követ el, amely a pedagógus kérésére nem javítható; vagy hibásan végez méréseket, számításokat, megfigyeléseket.

ALKALMAZÁS.

1. számú melléklet

DIÁK EMLÉKEZTETŐ

A munkavégzés során a tanuló köteles:

Előzetesen ismerkedjen meg részletesen az elméleti anyaggal, és jól ismerje a gyakorlatban tanulmányozandó mikrobiológiai mintákat és folyamatokat.

Kísérlet végzésekor tartsa be az összes óvintézkedést, a műveletek sorrendjét, a szükséges megfigyeléseket.

Írja le a kísérlet eredményeit egy jegyzetfüzetbe a munkában javasolt séma szerint:

Munka végeztével takarodj munkahelyés adja át egy laboránsnak vagy tanárnak.

Szövetségi Oktatási Ügynökség

Állami oktatási intézmény

"Irkutszki Állami Egyetem"

MIKROBIOLÓGIAI KIS MŰHELY

Oktatási segédlet

Irkutszk 2009

UDC 579(076.5)

Megjelent az Irkutszki Állami Egyetem szerkesztői és kiadói tanácsának határozata alapján

Zhilkin workshop a mikrobiológiáról: Tankönyv-módszer. juttatás diákoknak. magasabb tankönyv intézmények a „mikrobiológia”, „biológia” és „élettan” szakokon.

6. A mikrobiális tömeg nem szennyezheti a kezet, az asztalt és a környező tárgyakat. A kiömlött mikrobaszuszpenziót fertőtlenítőszerrel semlegesítik.

7. A munka végeztével a tenyészeteket átadjuk a tanárnak, a kimagozott kémcsöveket, csészéket termosztátba helyezzük.

8. A bakteriológiai hurkokat, tűket, csipeszeket és egyéb fémtárgyakat a mikroorganizmusokkal való érintkezés után alkohollámpa lángjában elégetjük, és speciális állványba helyezzük.

9. A használt tárgylemezeket és fedőlemezeket, pipettákat, spatulákat stb. 3-5%-os karbolsavoldatba vagy más fertőtlenítő oldatba helyezzük.

10. A kémcsövekben, Petri-csészékben stb. kimerült tenyészeteket napközben fertőtlenítő oldatokkal semlegesítjük, majd az edényeket felforraljuk és mossuk.

11. Szigorúan be kell tartani a személyes higiéniát - a munka befejezése után alaposan mosson kezet szappannal és vízzel.

12. Az elektromos készülékekkel és vegyszerekkel végzett munka során be kell tartani a biztonsági óvintézkedéseket.

Moszkva város oktatási osztálya

Műszaki Főiskola 28. sz

Zhukova L.A.

MÓDSZERTANI UTASÍTÁSOK

Nak nek laboratóriumi munka №№1-4

NGO hallgatóknak

Moszkva

2012

"A mikrobiológia, a higiénia és a higiénia alapjai"

MÓDSZERTANI UTASÍTÁSOK

№№1-4 laboratóriumi munkákhoz

civil szervezetek hallgatói számára

34.17 Kolbászgyártási folyamatok üzemeltetője.

_______________________________________________________________

Az útmutató főiskolai hallgatóknak készült. Használható az önálló tanulás foglalkozásokra és tanórán kívüli önálló munkára.

Összeállította: Zhukova L.A. - speciális szakok tanára

Lektor: Sukhanova N.V. - speciális tudományágak tanára

Vágó: Malkova L.A. - oktató-módszertani munkáért felelős igazgatóhelyettes

A kézirat áttekintése és megvitatása a Technológiai Szakmai Központi Bizottság ülésén megtörtént, 2012. _________ __. számú jegyzőkönyv.

MAGYARÁZÓ JEGYZET

Az irányelveket a Moszkva Városi Műszaki Főiskola Állami Autonóm Középfokú Oktatási Intézménye által elfogadott mikrobiológiai kurzus jelenlegi programjával összhangban dolgozták ki a 260301 „Hús és húskészítmények technológiája” szakon tanuló hallgatók számára.

A természettudományok jelenlegi fejlettségi szintjén számos biotechnológiai ipar mögött meghúzódó, a védelem garanciáját jelentő mikrobiológiai folyamatok mélyreható ismerete szükséges. környezet antropogén hatástól.

A leendő szakembereknek a mikrobiológiai elméleti ismeretek elsajátítása mellett laboratóriumi és gyakorlati órákra is szükségük van, amelyek lényegében kis kutatási projektek.

A laboratóriumi munka megvalósítása biztosítja a hallgatók elméleti ismereteinek megszilárdítását, a mikrobiológiai kontrollkészség fejlesztését, valamint az önálló következtetések, általánosítások készítésének képességét.

A laboratóriumi munka elvégzésére vonatkozó irányelvek a következőket javasolják:

az azonos témájú vagy azonos szemantikai tartalmú laboratóriumi munkákat úgy kombinálja, hogy azokat a mikrobiológiai elemzések sajátosságainak megfelelően időben kényelmes legyen megszervezni;

osztja el az osztályokat úgy, hogy az utolsó óra leterheltsége lehetővé tegye az elemzés eredményeinek megbeszélését, az elvégzett munka tesztelését;

koncentrálni a legfontosabb oktatási anyagokat, lehetővé téve a hallgatóknak, hogy elsajátítsák a munkavégzés gyakorlati készségeit mikrobiológiai laboratórium;

adjon módszertant az elemzés lefolytatásához, megjelölve a módszer lényegét, a megvalósítás technikáját, az eredmények feldolgozásának szabályait;

használja a GOST által biztosított mikrobiológiai elemzési módszereket.

A munka témája és célja.

A laboratóriumi munkák anyagi támogatása.

Laboratóriumi munka végzésére vonatkozó ajánlások, feladat, a munka magyarázata, elemzési módszerek, jegyzőkönyv összeállítási űrlapok, laboratóriumi kérdésekhez ellenőrző kérdések és kiegészítő irodalom.

Egyes módszerek bonyolultsága és a mikroorganizmusok szaporodásának időtartama miatt egyes esetekben a laboratóriumi anyag egy részét a tanár előre elkészíti, de az elkészítési módot megadja.

A laboratóriumi órákon megszerzett ismeretek szükségesek a termelés mikrobiológiai ellenőrzéséhez, amelynek célja a termelés és a berendezések egészségügyi állapotának megsértésének időben történő azonosítása, a mikrobiális szennyeződés helyeinek és módjainak feltárása, a szükséges intézkedések megtétele e veszélyes gócok megszüntetésére. és magas kimeneti minőséget ér el.

MUNKAVÉGZÉS A MIKROBIOLÓGIAI LABORATÓRIUMBAN

A mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka speciális szabályok szigorú betartását igényli, amit két fő rendelkezés határoz meg.

Először is, a mikrobiológiai gyakorlatban főként tiszta mikroorganizmuskultúrákat használnak, azaz ugyanazon fajhoz tartozó mikroorganizmusok populációit, gyakran egy sejt utódait.

Mivel a levegőben, a körülöttünk lévő tárgyak felületén, ruhákon, kézen, hajon mindig nagy mennyiségű különféle mikroflóra található, a vizsgálatok sterilitásának biztosítása és a tenyészetek szennyeződésének elkerülése érdekében a munkavégzést az előírásoknak megfelelően kell végezni. az aszepszis szabályaival.

Másodszor, az azonosítatlan mikroorganizmusokkal végzett vizsgálatok során, amikor azokat környezeti objektumokból és technogén áramlásokból észlelik, izolálhatók a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok.

Ezenkívül mind a szaprofita, mind a patogén mikroorganizmusok sejtjei allergének lehetnek bizonyos egyének számára. Így a megbízható kutatási eredmények megszerzése, a személyes és mások biztonsága érdekében bizonyos szabályokat be kell tartani.

A mikroorganizmusok újravetésekor sterilitás érhető el annak a ténynek köszönhetően, hogy minden munkát elvégeznek a láng közelében égők. A mikroorganizmusok szilárd közegből történő átvitelére használt bakteriológiai hurkokat égő lángjában meggyújtják, az üvegedényeket és a tápközeget pedig szárítószekrényekben, illetve autoklávokban elősterilizálják.

Az asztal felületét munka előtt és után is fertőtlenítik, 3%-os klóramin-, lizolt- vagy 70%-os izopropil- vagy etil-alkohol-oldattal törölve. Ezen alkoholok oldatai kézfertőtlenítésre is használhatók.

A helyiségek előkészítése magában foglalja a nedves tisztítást és az alapos szellőztetést, majd a germicid lámpák ultraibolya fénnyel történő besugárzását. A légszennyezettség mértékétől függően 30 perctől több óráig tartó besugárzás szükséges a sterilizálásához. Az ultraibolya sugarak veszélyesek a szemre, ezért ha a baktériumölő lámpa ég, nem lehet a helyiségben tartózkodni.

A mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka során a hallgatóknak be kell tartaniuk a következő szabályokat:

1. Minden tanulónak állandó munkahelyen kell dolgoznia.
2. A munkahelynek mentesnek kell lennie idegen tárgyaktól (beleértve az aktatáskákat és táskákat). Az égővel végzett munka közben ne legyen az asztalon jegyzetfüzet, amelyre később szükség lesz a mikroszkópos és vázlatkészítési előkészületekhez.
3. Minden munkát tiszta pongyolában végeznek. A hosszú hajat fel kell kötni, nehogy egy melegítőpárna lángjába kerüljön.
4. A mikroorganizmusok tenyésztésére használt edényekre (kémcsövek, lombik, Petri-csésze, matrac) fel kell tüntetni a tenyészet általános és konkrét nevét, az oltás időpontját, a tanuló nevét és csoportszámát.
5. Az élő tenyészetekkel végzett munka során használt összes tárgyat fertőtleníteni kell vagy égő lángban történő elégetéssel, vagy fertőtlenítő oldatba merítve (tárgy- és fedőlemezek, pipetták, spatulák).
6. Minden beoltott kémcsövet, csészét vagy lombikot termosztátba helyeznek, vagy átadják egy laboránsnak.
7. A hulladékanyagokat bizonyos tartályokba helyezik a további fertőtlenítés céljából.
8. A laboratóriumban szigorúan tilos a dohányzás és az étkezés.
9. Az óra végén minden tanulónak rendet kell tennie a munkahelyén.

A kapott adatokat a laboratóriumi munka naplójába kell rögzíteni. A feljegyzéseknek tartalmazniuk kell: a munka számát és címét, kezdésének és befejezésének dátumát, a kutatási tárgyak megnevezését, a kísérletek elvégzésének feltételeit, az elemzési módszereket, valamint az ezekből kapott eredményeket és következtetéseket. A kultúrák morfológiájának tanulmányozása során a mikroszkóp bizonyos nagyításainál vázlatokat készítenek. (Színes ceruza, legalább piros és kék, legyen elérhető az osztályban.) A numerikus adatokat táblázatokban, grafikonokban vagy diagramokban foglaljuk össze.

1. LAB

Mikrobiológiai laboratórium megszervezése, felszerelése. Az optikai mikroszkóp készüléke és a vele való munkavégzés szabályai. A mikrobák mikroszkópos technikájának elsajátítása.

Az óra célja.

A hallgatók megismertetése a mikrobiológiai laboratórium szervezetével, felszereltségével. Az optikai mikroszkóp eszközének tanulmányozása. Ismerkedjen meg a baktériumok fő formáival.

Anyagi támogatás.

Oktató mikrobiológiai laboratórium termosztátokkal, sterilizátorokkal, hűtőkkel, vízfürdővel, lepárlóval, baktériumölő lámpákkal, munkaasztalokkal minden szükséges tartozékkal, mikroszkóppal.

Ez a labor jelentős mennyiségben tartalmaz oktatási anyag Ezért kívánatos demonstrációs módszerrel megismertetni a hallgatókkal a laboratórium felépítését és felszerelését.

A mikroszkóp eszköz tanulmányozásakor használjon plakátot, amely bemutatja annak minden részletét.

Feladatok.

1. Olvassa el a munkakör leírását:

1. Az oktatási mikrobiológiai laboratórium berendezése.
2. A gyártás felszerelése és szervezése

1. A mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka szabályai.
2. Az optikai mikroszkóp készüléke és gondozása.

Az MBR-1 mikroszkóppal való munkavégzés szabályai.

1. A baktériumok alapvető formái.

1. A kész készítmények mikroszkópos vizsgálata alapformákkal

baktériumok.

Magyarázat a munkához

1.1 Az oktatási mikrobiológiai laboratórium berendezése.

Az oktatási mikrobiológiai laboratórium helyiségei oktatási, technikai helyiségekből és tanári szobából álljanak.

Az oktatóteremben legyen a következő leltár: laboratóriumi asztalok, asztalok mikroszkópos vizsgálathoz, asztal a tanár számára, termosztátok, zsámolyok, polc titrált oldatokkal, mérleg, tábla, edényasztal, mosogató.

Az edzésekhez egy közönséges laboratóriumi asztal használható.

A mikroszkópos asztalt az ablak elé kell helyezni; magassága körülbelül 80 cm, szélessége körülbelül 40 cm A nagyobb stabilitás érdekében a mikroszkópos asztal tartókonzolokon van elrendezve.

Termosztátok. A mikrobákat olyan körülmények között kell szaporítani, hogy a környező levegő hőmérséklete talán a legkisebb ingadozásnak legyen kitéve. Ehhez termosztátokat használnak, amelyek olyan szekrények, amelyekben állandó hőmérsékletet tartanak fenn.

Vannak levegő és víz termosztátok.

A légtermosztátokat meleg levegő fűti, általában fűtött Áramütés.

A dupla falak közötti víztermosztátokban elektromos árammal, gázzal vagy más hőforrással melegített víz található. A hőmérséklet ingadozása ezekben a termosztátokban kisebb, mint a levegőben.

A laboratóriumban legalább három termosztátnak kell lennie: az egyik hőmérséklete 30 °C, a második 37 °C és a harmadik 43 °C. A 20°C-on jól szaporodó mikrobák szobahőmérsékleten is szaporíthatók.

A termosztátok állandó hőmérsékletét speciális eszközök - termosztátok - tartják fenn. A pontos hőmérséklet-szabályozóval ellátott termosztátban a hőmérséklet-ingadozás nem haladhatja meg a 2 °C-ot.

Autokláv vagy sterilizáló.Az autokláv egy dupla falú fémhenger, masszív fedéllel, amely csavaros bilincsekkel van lezárva.

A hengerre fém burkolatot helyeznek. Az autokláv gőzkivezető csővel, manométerrel, biztonsági szeleppel és vízmérő üveggel van felszerelve. Sterilizálja a tápközegeket, különféle folyadékokat és edényeket.

Sterilizálás előtt desztillált vagy forralt vizet öntünk az autoklávba a vízmérő üvegének tölcséren keresztül (nyers víz használatakor gyorsan lerakódik a vízkő) az autokláv burkolatán jelzett vonalig. Ezt követően az autoklávot megtöltjük a sterilizálandó anyaggal (ez utóbbit felülről le kell fedni papírral), szorosan rácsavarjuk a fedelet, kinyitjuk a gőzcső szelepét és megkezdődik a melegítés.

A fűtés elektromos árammal, gőzzel (ebben az esetben a vizet nem öntik az autoklávba) vagy több gázégővel történik. Ahogy az autokláv felmelegszik, először a levegő kezd kiszökni, majd a gőz, amely a henger felső részén lévő lyukakon keresztül jut be az autoklávba. Amikor a gőz folyamatos áramlásban kezd kijönni, további 2-3 percig engedjük, hogy a levegőt kiszorítsuk az autoklávból, majd a szelepet lezárjuk. Ennek eredményeként a gőz kilépése leáll, és az autoklávban a nyomás fokozatosan növekedni kezd (a nyomásmérő tűjének felemelése).

A kívánt nyomás beállítása után az autokláv fűtési foka lecsökken, így a nyomásmérő tűje egy bizonyos ideig ugyanazon a szinten marad. A sterilizálás kezdetét attól a pillanattól kell figyelembe venni, amikor a nyíl eléri a megfelelő nyomást.

A nyomásmérő leolvasása egy bizonyos gőzhőmérsékletnek felel meg.

Manométer-leolvasás in a Gőz hőmérséklet ˚C-ban

0,5 112,0

1,0 121,4

1,5 128,8

2,0 135,1

A sterilizálás végén a melegítést leállítjuk, és a nyomásmérő tűjét hagyjuk nullára süllyedni. Csak ezt követően nyitjuk meg a gőzkivezető cső csapját, gőzt engedünk ki és levegőt engedünk be, majd a fedelet lecsavarjuk, felemeljük és az autoklávnak ebben a helyzetben történő lehűlése után eltávolítjuk a sterilizált anyagot.

Edények és készletek.

Petri csészék növények vetésére szolgálnak. 10 cm átmérőjű (1,5 cm magas) csészéket használjon. Az üvegnek vékonynak, átlátszónak kell lennie, légbuborékok nélkül.

Pipetták. Bakteriológiai munkához 1-5 és 10 ml-es pipettákat használnak. A leggyakrabban használt pipetták 1 ml-esek, körülbelül 28 cm hosszúak (hosszabbítás nélkül).

Kémcsövek. A víz 10 ml-be történő öntéséhez 18 x 2,0 cm-es kémcsöveket használunk; 18 x 1,5 cm-es kémcsöveket is használnak, táptalajokhoz pedig 15 x 1,8 cm-es kémcsöveket használnak.

Tűk és hurkok. Tűket és hurkokat használnak a vizsgálati anyag felvételéhez és az oltáshoz.

Laboratóriumi üvegedények mosásáhozmosogató asztal.

Ha mikroszkóppal dolgozik, használjatárgyi és integumentárisüveg . A szemüvegnek színtelennek, sima felületűnek, légbuborékok nélkül kell lennie. Speciális tanulmányokhoz,kutakkal ellátott üvegcsúszdák.

1.2 A termelési munka felszerelése és megszervezése

Mikrobiológiai (bakteriológiai) laboratórium.

Az élelmiszer-alapanyagok és az abból származó termékek bakteriológiai vizsgálatát egy speciális laboratóriumban végzik, amely engedéllyel rendelkezik a III-IV patogenitási csoportba tartozó mikroorganizmusokkal való munkavégzésre. A mikrobiológiai (bakteriológiai) laboratórium (vagy a húsfeldolgozó vállalat termelő laboratóriumának részeként a bakteriológiai osztály) a nyersanyagok, késztermékek, segédanyagok, a technológiai berendezések egészségügyi és higiéniai állapotának, a készletek egészségügyi és bakteriológiai ellenőrzésére szolgál. , konténerek, ruházati és személyzeti kezek.

Laboratóriumi helyiségek.A laboratórium általános elhelyezkedésének és infrastruktúrájának meg kell felelnie a GOST R 51446-99 (ISO 7218-96) követelményeinek. A laboratórium a következő külön helyiségeket vagy elkülönített munkaterületeket biztosítja:

minták fogadására, tárolására, előkészítésére és feldolgozására;

elsődleges vetéshez, újravetéshez, hígítások elkészítéséhez és egyéb, aszeptikus körülmények között végzett munkákhoz;

tápközegek előkészítésére, sterilizálására, palackozására és tárolására, laboratóriumi üvegedények és berendezések elkészítésére;

berendezések, elhasznált tápközegek és mikroflórával szennyezett anyagok fertőtlenítésére, tisztítására.

A termosztátok, hűtők, fagyasztók külön helyiségekben helyezhetők el.

A helyiségeket úgy kell elhelyezni, hogy biztosítsák a külső tényezők (emelkedett hőmérséklet, páratartalom, por, zaj, vibráció) hatásától való védelmét, meg kell szervezni a tiszta és szennyezett anyagok áramlását.

A hús kórokozó mikroflórával szennyeződhet, ami komoly veszélyt jelent az emberi egészségre, ezért a laboratórium helyiségeit el kell különíteni a többi részlegtől. Ha nem lehetséges külön helyiséget kialakítani, akkor megengedett egy asztal elhelyezése a közös helyiségben a minták kezdeti beoltásához. Az aszeptikus munkakörülmények biztosítása érdekében egy üvegezett dobozt célszerű elődobozzal felszerelni.

A laboratóriumi helyiségeknek világosnak (asztalfelület megvilágítása 500 luxon belül) és tágasaknak kell lenniük - minden elemző számára az ajánlott munkaterület körülbelül 20 m2. A falak, a mennyezet és a padló legyen sima, könnyen tisztítható, ellenáll a mosó- és fertőtlenítőszereknek. A könnyebb tisztítás és fertőtlenítés érdekében a laboratóriumi berendezések és bútorok felületét sima, vízhatlan anyaggal, például műanyaggal, a munkahelyet pedig tükörasztallal borítják.

Élelmiszeripari termékek, különösen kolbászok és füstölt húsok bakteriológiai vizsgálatához 1-2 doboz szükséges elődobozokkal. A dobozok szigetelt, porvédett üvegezett helyiségek; a 0,5 mikronnál nagyobb részecskék 1 m-ben megengedett maximális száma nem haladhatja meg a 4000-et.

A laboratórium helyiségeit rendszeresen takarítják és fertőtlenítik, melynek minőségét időszakonként mikrobiológiai módszerrel ellenőrzik.

Minden helyiségben legyen hideg-meleg vízellátás, kézmosáshoz fertőtlenítő oldattal ellátott palack.

1.3 A mikrobiológiai munka szabályai

laboratóriumok

A mikroorganizmusokkal való közvetlen érintkezés és a steril körülmények betartása minden művelet során megköveteli az alábbi szabályok ismeretét és szigorú betartását:

munka fürdőköpenyben;

fenntartani a tisztaságot és rendet a munkahelyen;

ne érintse meg ujjaival a kémcsövekben és tenyészedényekben lévő mikrobiális lerakódásokat és kondenzvizet;

tárgylemezekről és fedőlemezekről és egyéb tárgyakról mikrobiális lerakódásokat ne mosson le szalvétával, szűrőpapírral, fertőtlenítse alkoholos vagy karbolsavoldatba helyezve;

a munka során és a vetés után alkohollámpa vagy gázégő lángjában égetéssel semmisítse meg a bakteriológiai tűkön és hurkon lévő mikrobiális lerakódások maradványait;

a használt szennyezett anyagok és az elhasznált mikrobakultúrák semlegesítése autoklávban történő sterilizálással (ezt a munkát a laboratóriumi személyzet végzi);

ne tartsa a szellemlámpát az archoz közel, a szellemlámpát csak gyufával gyújtsa meg;

a munka végén fertőtlenítő oldattal tisztítsa meg és dolgozza fel a munkahelyet laboráns felügyelete mellett; helyezzük el a szükséges mikroorganizmus-tenyészeteket további munka, hűtőszekrényben vagy széfben, amely le van zárva és le van zárva; helyezzen mikroflórával beoltott kémcsöveket és Petri-csészéket a termosztátba;

munka után alaposan moss kezet, ne egyél a laboratóriumban.

1.4 Az optikai mikroszkóp készüléke és gondozása.

A mikroszkóp egy összetett optikai műszer, amely egy tárgyat 1000-1500-szorosra nagyít. A modern mikroszkóp két fő részből áll - mechanikus és optikai.

A mechanikus rész egy állványból áll, amely megkülönbözteti a lábat, a talpat, a csőtartót és a háromlábú állványhoz rögzített tárgyasztalt. A csőtartó a tárgy durva és finom fókuszálására kialakított makro- és mikrometrikus csavarokkal emelhető és süllyeszthető.

A mikroszkóp optikai része világító és megfigyelő eszközökből áll.

A világítóberendezés a tárgyasztal alatt található, és egy tükörből, egy kondenzátorból és egy íriszmembránból áll.

A tükör visszaveri a fénysugarakat és a kondenzátor felé irányítja azokat.

A kondenzátor egy lencserendszer, és a kérdéses tárgy megvilágításának fényerejének növelésére szolgál.

A megfigyelő berendezés lencséket és szemlencséket tartalmaz.

Az objektívek a revolver foglalataiba vannak csavarozva, és egy fémkeretbe zárt lencserendszerből állnak. Az objektív elülső vagy elülső lencséje a legkisebb és az egyetlen, amely nagyítást ad. Az objektív többi lencséje korrekciós.

Az MBR-1 és MBI-1 biológiai mikroszkópok általában három-négy lencsével rendelkeznek, amelyek digitális jelölései x8, x20, x40, x90, ezek az objektumok tényleges nagyítását mutatják.

A szemlencse a cső felső végébe kerül. A szemlencse két sík-domború lencséből álló rendszer, amelyek domborúak az objektív felé. A szem felé néző lencsét szemlencsének, a készítmény felé eső lencsét pedig konvergáló lencsének nevezzük. A hazai mikroszkópok szemlencséit a saját nagyításukat mutató számok jelölik: x5, x7, x10, x15.

A mikroszkóp nagyítása megegyezik a szemlencse objektív nagyításának szorzatával.

A mikroszkóp kezelési útmutatója:

A mikroszkóp védve van a portól, nedvességtől és napfénytől. A vele végzett munka után tokba helyezzük, vagy sűrű anyagból készült sapkával lefedjük.

Az objektíveket és az okulárokat velúrral vagy flanellel töröljük át.

Ne hagyja nyitva a mikroszkóp csövét, azaz okulár nélkül, mert ez por felhalmozódásához vezet a tubusban és az objektívek szennyeződéséhez.

Mikroszkóp két fő részből áll. A mikroszkóp alapja egy állvány. Egy cső, amelybe egy optikai rész van zárva, és egy tárgyasztal van hozzáerősítve. Az állvány alapból (vagy patkó alakú lábból) és csőtartóból áll. A csőtartó csuklópánttal kapcsolódik az alaphoz, ami lehetővé teszi a mikroszkóp tetejének megdöntését a könnyebb használat érdekében. Az objektíveket és az okulárokat a csőbe helyezik. A lencséket a cső aljába csavarják, amelyet revolvernek neveznek. A szemlencsék szabadon illeszkednek a cső tetejére. A nagyítás a revolver forgó dobjába csavarozott különféle lencsék segítségével változtatható.

A csőtartó a tárgy durva és finom fókuszálására kialakított makro- és mikrometrikus csavarokkal emelhető és süllyeszthető. Ahhoz, hogy a készítmény jól látható legyen, a csövet az optikai tengelye irányába kell mozgatni durva vagy mikrometrikus mozgási mechanizmusokkal. A durva mozgást meglehetősen könnyen kell végrehajtani, de a cső spontán leengedése nélkül. A pontosabb beállítás érdekében mikrométeres csavart használnak. A mikrométeres csavar rendelkezik összetett szerkezet, a mikroszkóp egyik legkönnyebben sérülékeny része. Ne forgassa el a csavart fél fordulatnál többet egyik vagy másik irányba (a mikroszkóp durva beszerelése után). A tárgytáblázat a vizsgálati gyógyszer elhelyezésére szolgál.

Az optikai rész tükörből, membrános kondenzátorból, objektívekből és szemlencsékből áll. A mikroszkóp tükör mozgatható. Mesterséges fényben jobb homorú tükröt használni, szórt fényben laposat. A tükör visszaveri a fénysugarakat és a kondenzátor felé irányítja azokat. A kondenzátort a készítmény erősebb megvilágítására használják. A membrán a gyógyszer megvilágításának szabályozására szolgál. A membrán a kondenzátor alsó felülete és a tükör között található.

Az objektívek a mikroszkóp legfontosabb részei, amelyek meghatározzák annak optikai teljesítményét. Az objektívek a revolver foglalataiba vannak csavarozva, és egy fémkeretbe zárt lencserendszerből állnak. Az objektív elülső vagy elülső lencséje a legkisebb és az egyetlen, amely nagyítást ad. Az objektívben megmaradt lencsék korrekciós hatásúak. A szemlencsék felnagyítják a lencse által adott képet, de nem árulnak el semmilyen részletet a vizsgált gyógyszerről.

Azokat a lencséket, amelyeket működés közben cédrusolajba kell meríteni, immerziósnak vagy merülőnek nevezzük. A száraz lencse olyan lencse, amelynek levegője van a preparátum és a lencse között. Minden mikroszkóp száraz és immerziós objektívekkel van felszerelve. A 8-as és 40-es natív nagyítású objektívek szárazak, a 90-es belső nagyítású objektívek merülőek.

Az MBR-1 mikroszkóppal való munkavégzés szabályai

1. A mikroszkóp szekrényben van tárolva, hogy megóvja a portól, nedvességtől és fénytől. A mikroszkóp jobb kézzel, az állvány fogantyúját fogva, a bal oldali támasztékkal alulról hordja.
2. Mielőtt a mikroszkóppal dolgozik, törölje le a szemlencsét, az objektívet és a tükröt egy ruhával.
3. Helyezze a mikroszkópot úgy, hogy az állvány maga felé nézzen, a tárgy tárgyasztala távol legyen Öntől. Az ülőmikroszkóphoz képest közelebb kell tolni a bal vállhoz. A mikroszkóp jobb oldalán egy album, ceruzák, színes ceruzák és radír található.
4. Állítsa az alacsony nagyítású lencsét munkahelyzetbe. Ehhez forgassa el a revolvert, amíg a kívánt objektív középső helyzetbe nem kerül (a tárgyasztal nyílása fölött). Amikor a lencse középső helyzetben van, egy speciális eszköz aktiválódik a revolverben - egy retesz, miközben enyhe kattanás hallható, és a revolver rögzítve van. Ne feledje, hogy bármely tárgy tanulmányozása kis növekedéssel kezdődik.
5. Emelje fel a lencsét a tárgyasztal fölé kb. 1 cm-rel a makrometrikus csavar segítségével Nyissa ki a membránt, emelje fel a kondenzátort a tárgyasztal szintjére.
6. Ha bal szemével néz a szemlencsén keresztül, tükör segítségével irányítsa a fényt úgy, hogy a teljes látómező erősen és egyenletesen legyen megvilágítva.
7. Helyezze az előkészített mintát a színpadra fedőlemezzel felfelé úgy, hogy a tárgy a színpad nyílásának közepén legyen. Engedje le a lencsét a készítmény fölé 0,2 cm-rel a makrometrikus csavar segítségével.
8. Nézzen bele az okulárba, ugyanakkor lassan fordítsa maga felé az állványt, és óvatosan emelje fel a csövet (0,5 cm), amíg a tárgy képe meg nem jelenik a látómezőben; a mikrométeres csavart óvatosan forgatva legfeljebb ½ vagy ¾ teljes fordulattal, hogy tiszta képet kapjon.
9. Áttérve a tárgy nagy nagyításnál történő figyelembevételére, szükséges az előkészítés központosítása, i.e. helyezze az érdeklődési tárgy részét a látómező kellős közepébe. Ehhez mozgassa a készítményt a szülők előkészületei segítségével vagy kézzel, amíg a tárgy el nem veszi a kívánt pozíciót. Ha az objektum nincs középre állítva, akkor nagy nagyításnál a látómezőn kívül marad.
10. Ha kisebb nagyításról nagyobbra vált, fordítsa el a revolvert, hogy a nagyobb nagyítású lencsét a cső alsó nyílása elé helyezze. Nézzen bele az okulárba, és a mikrométeres csavar óvatos elfordításával készítsen tiszta képet.
11. A készítmény felvázolásakor nézzen a bal szemével az okulárba, jobb szemével pedig az albumba.
12. A revolveres mikroszkóppal végzett munka után cserélje ki a nagy nagyítású lencsét egy kis lencsére, vegye le a készítményt az asztalról és tegye vissza a helyére.
13. Tisztítsa meg az asztalát; drogok és irányelvek a tanári asztalon.

1.5 A baktériumok alapvető formái.

Alakjuk szerint a baktériumokat általában gömb alakúra (coccusok), pálcika alakúra (clostridiumok, bacillusok) és tekercsekre (vibrio, spirilla, spirocheták) osztják.

A coccus formákat a coccusok elhelyezkedése szerint mikrococcusokra osztják fel - különálló sejtekre; diplococcusok - kettővel összekapcsolt coccusok; tetracocci - kokccusok, amelyeket négy köt össze; streptococcusok - hosszú vagy rövid láncok formájában elhelyezett kókuszok; sarcins - cocci csomagok formájában; staphylococcusok - a coccusok véletlenszerű felhalmozódása, gyakran szőlő formájában.

A rúd alakú formákat a rudak elhelyezkedése szerint diplobaktériumokra osztják - párban összekapcsolt rudak; streptobaktériumok - láncba rendezett botok. A spóraképző baktériumok közül megkülönböztetik a bacillusokat és a clostridiumokat. A bacilusokban a spóra átmérője nem haladja meg a vegetatív sejt szélességét, a Clostridiumban pedig a spóra nagyobb, mint a sejt szélessége, így a sejt orsó, teniszütő, dobverő formát ölt.

A csavart formákat vibriókra osztják, amelyek vessző alakúak, spirilla, több (legfeljebb 5) fürttel és spirocheták, amelyekben nagyszámú kis fürt van.

Végrehajtási sorrend

2. Kész készítmények mikroszkópos vizsgálata a baktériumok fő formáival.

Mikroszkópos technika.

A tesztkészítményt a tárgyasztalra helyezzük és bilincsekkel rögzítjük.

A 90 immerziós objektívvel végzett munka során egy csepp immerziós olajat csepegtetünk a készítményre, majd egy makrometrikus csavar segítségével óvatosan leengedjük a 90 középpontú objektívvel ellátott csövet, hogy az elülső lencséje belemerüljön az olajcseppbe, és a hangsúly az előkészítés alatt van. Ezután a szemlencsébe nézve a csövet nagyon lassan (századmilliméterrel) felemeli ugyanazzal a csavarral, amíg a mikrobák képe meg nem jelenik. A gyógyszer pontos beszerelése a lencse fókuszába mikrometrikus csavar segítségével történik.

Jegyzet.

Az immerziós rendszer előnye, hogy amikor a lencsét olajba merítjük, az üveg-olaj közegen áthaladó fénysugarak szinte nem törnek meg, mivel ezeknek a közegeknek a fénytörési mutatója közel azonos. Ennek eredményeként az olajjal végzett mikroszkópos megvilágítás maximális.

A munka végén az immerziós olajat a 90-es objektív elülső lencséjéről puha törlőkendővel távolítják el, az olaj teljesebb eltávolítása érdekében az elülső lencsét egy alkohol keverékével megnedvesített ruhával töröljük le. éterrel 1:1 arányban, majd a lencsét szárazra töröljük. A mikroszkóp tárolásra kerül.

A mikroszkópos vizsgálat során ügyeljen a vizsgált mikroorganizmus sejtjeinek alakjára és méretére, a sejtek szerkezeti jellemzőire - spórák és kapszulák jelenlétére baktériumokban, rügyekben - élesztőben; a forma előkészítésben - különféle cellaformákhoz: kerek, ovális, hosszúkás, hengeres, elágazó.

Mikroszkópiás jelentés.

A mikroszkópos vizsgálat eredményeit a táblázatban rögzítjük (1. forma).

1. űrlap

Ellenőrző kérdések.

1. Milyen berendezéseket kell felszerelni mikrobiológiai laboratóriummal, annak célja?
2. A mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka alapszabályai.
3. Mi az a készülék optikai rendszer biológiai mikroszkóp?
4. Milyen szabályokat kell betartani a mikroszkóp használata és gondozása során?
5. Melyek a baktériumok fő formái?

2. számú LABORATÓRIUMI MUNKA.

Mikrobiológiai készítmények készítése élő mikroorganizmusok vizsgálatára ("zúzott csepp" és "függő csepp"). Mikrobatenyészetekből kenet készítése.

A mikroorganizmus-készítmények elkészítésével, valamint a mikroorganizmusok átvitelével kapcsolatos minden munkát az aszepszis szabályainak betartásával kell végezni.

Laboratóriumi asztalfelszerelés.

A mikroorganizmusokkal való munkavégzéshez bizonyos felszerelésekre van szükség. A dolgozó laboratóriumi asztalon legyen alkohollámpa vagy gázégő, bakteriológiai hurok, tárgylemezek és fedőlemezek, festékkészlet, mikroszkóp, szalvéta, cédrusolaj, csipesz, küvetta híddal, edény vízzel , homokóra, ceruza üvegen, szűrőpapír.

Az óra célja.

Ismerkedjen meg a baktériumok mozgékonyságának vizsgálatának módszereivel.

Anyagi támogatás.

Fiatal mikroorganizmus-leves tenyészetek kémcsövekben a mobilitás vizsgálatára, tárgylemezek és fedőlemezek, lyukas üveglemezek, bakteriológiai hurkok, Pasteur-pipetták, mikroszkópok, gyufák, alkohol- vagy gázégők.

A tanárnak be kell mutatnia a festetlen mikroorganizmus-preparátumok elkészítésének, a mikroszkóp munkára való felkészítésének, a látómező megvilágításának beállításának, a nagyító felszerelésének, a preparátumok mikroszkópiájának technikáját.

A tanulók munkája során a tanárnak folyamatosan ellenőriznie kell az egyes mikroszkópok látómezőjének megvilágítását, szükség esetén segítenie kell annak beállítását és meg kell néznie a talált tárgyak képeit. Meg kell nézni a festetlen készítményt Speciális figyelem, mivel itt a tanulóknak látniuk kell a sejtek alakját és mobilitásukat is.

Feladatok.

1. Készítsen "zúzott és függő csepp" készítményeket a baktériumok mozgékonyságának meghatározására.
2. Készítsen kenetet a mikrobatenyészetből.
3. Tanulja meg a mikroszkópos technikát, és nézze meg mikroszkóp alatt az elkészített készítményeket.
4. Készítsen jelentést a mikroszkópos vizsgálat eredményeiről.
5. Az óra tartalmát rögzítse munkafüzetben.

Végrehajtási sorrend

1. Mikrobák mobilitásának vizsgálata "zúzott és lógó csepp" készítményekben.

Zúzott csepp.

Ha az organizmusok folyékony közegben vannak, a szuszpenzióból egy cseppet zsírtalanított tárgylemezre csepegtetünk steril pipettával. (Használat után a pipettát azonnal porcelánpohárba tesszük fertőtlenítő oldattal. A piszkos pipetta asztalra helyezése elfogadhatatlan!). Ha a tenyészetet szilárd táptalajon tenyésztjük, akkor először egy csepp vizet csepegtetünk az üvegre, majd az égőlángban égetett bakteriológiai hurokkal mikroorganizmussejteket vagy a vizsgált termék vizsgálati mintáját helyezzük bele. és alaposan összekeverjük.

Egy csepp folyadékot fedőlemez borít. Hogy ne képződjenek alatta légbuborékok, a fedőlemezt először egyik élével ráhelyezzük az üveglemezre, majd óvatosan leeresztve, lenyomva a cseppet „összetörjük”. Kívánatos elkerülni a felesleges folyadékot, hogy a mikroorganizmusok szuszpenziója ne préseljön ki a fedőlemez alól. Ha ez megtörténik, a felesleges folyadékot szűrőpapírral távolítsa el. A használt papírt azonnal fertőtlenítő oldatba kell helyezni.

A „zúzott csepp” készítmény mikroszkópos vizsgálatához csak száraz rendszerű objektíveket használnak, azaz bemerítés nélkül. Ez a fajta gyógyszer lehetővé teszi a sejtek alakjának, méretének, a sporuláció módjának meghatározását, és ha a sejtek életben vannak, akkor a mobilitás meglétét vagy hiányát.

A gyógyszer előnye, hogy vékony folyadékréteget kapunk, ahol élő szervezetek láthatók.

Hátránya, hogy gyorsan szárad, és leáll a mozgás, gyakran bejut a levegő, ami sérti a mikroszkopikus képet.

A gyógyszer elkészítéséhez"függő csepp" egy kis csepp mikroorganizmus-szuszpenziót a fedőlemezre helyezünk, fejjel lefelé fordítjuk, és egy speciális üveglemezre helyezzük, amelynek közepén egy mélyedés (lyuk) van. A cseppnek szabadon kell lógnia anélkül, hogy megérintené a lyuk széleit és alját. Ha több napos megfigyelés következik, akkor a lyuk széleit bekenjük vazelinnel, és a cseppet hermetikusan zárjuk egy nedves kamrába. A "lógó csepp" készítményt a mikroorganizmusok mozgékonyságának kimutatására, a szaporodási módszerek tanulmányozására, a spórák csírázásának nyomon követésére használják.

Főzéshez tampon előkészítése a vizsgált mikrobatenyészetet óvatosan egyenletes vékony rétegben elosztjuk egy tárgylemezen. Szilárd táptalajon növesztett tenyészetek elkészítésekor a következők szerint járjon el. Steril pipettával vagy bakteriológiai hurokkal csepp steril csapvizet vagy sóoldatot csepegtetünk egy tiszta tárgylemezre.

a) Tenyészcsövet veszünk, amelyből kenetet kell készíteni. A bakteriológiai hurkot az égő lángjában kalcináljuk, függőleges helyzetben tartva.

b) A dugót a kisujj és a jobb kéz tenyere közé tartva vegyük ki a kémcsőből, és tartsuk lefelé a végével, kerüljük az érintkezést a parafa azon részének a kezével, amely a kémcsőben volt.

c) A kémcső nyitott végét lángon elégetjük.

d) A kémcsőbe hurkot vezetünk (még egyszer átengedjük a lángon), a kémcső falának megérintésével lehűtjük és kis mennyiségű anyagot gyűjtünk, enyhén megérintve a tenyészetet, és nem karcoljuk meg a táptalajt a hurokkal.

e) Az égő lángja fölött megégetjük a kémcső széleit és a vattadugó végét.

f) Zárja le a csövet pamutdugóval.

g) A kivett anyagot a tárgylemezen cseppekké emulgeáljuk, és vékony hurokréteggel egyenletesen elosztjuk a felületen (1,5 x 2 cm).

h) A hurkot kalcináljuk és a helyére tesszük.

Ha a tenyészetet folyékony tápközegben növesztjük, akkor egy steril hurkot engedünk a folyadékba, egy cseppet felfogunk és egy tárgylemezre dörzsöljük.

3. Mikroszkópos technika.

A mikroszkópot a szélétől 3-5 cm-re helyezzük az asztalra úgy, hogy a csőtartó Ön felé nézzen.

A mikroszkóp látóterének jó egyenletes megvilágítása jön létre, amelyhez a szemlencsébe nézve egy tükör fénysugarat irányít a forrásból a lencsébe. A kondenzátornak felfelé kell állnia, és a membránnak nyitva kell lennie. A mikroszkóp látómezejének minden pontján jól és egyenletesen megvilágítottnak kell lennie.

A tesztkészítményt kenettel vagy cseppentéssel felfelé helyezzük a tárgyasztalra, és bilincsekkel rögzítjük.

A festetlen preparátumokat x8-as és x40-es objektívekkel mikroszkóppal vizsgálják, 1-0,5 cm-rel lesüllyesztve a kondenzátort a preparátumig, így biztosítva a festetlen sejtek legjobb láthatóságát.

Amikor mikroszkópos "élő" mikrobák (festetlen készítmény) vegye figyelembe a mobilitást.

4. Jelentés a mikroszkópos vizsgálat eredményeiről.

c) sejtek mikroszkóp alatti rajzolása (jelezze a spórák, kapszulák, rügyek jelenlétét, mobilitást).

5. Írja le a lecke tartalmát egy munkafüzetbe!

Ellenőrző kérdések

1. Mi a technikája a "zúzott és függő csepp" készítmények elkészítésének?
2. Hogyan kell kenetet készíteni szilárd táptalajon nevelt baktériumtenyészetből?
3. Mi teszi lehetővé a "zúzott csepp" gyógyszer telepítését?
4. Milyen kutatásokra használják a "függő csepp" gyógyszert?

LABORATÓRIUMI MUNKA №3.

Baktériumfestett készítmények készítése.

Az óra célja.

Ismerje meg, hogyan készítsen és festsen bakteriális készítményeket az egyszerű és Gram-módszerrel.

Anyagi támogatás.

Kész festékoldatok készlet palackban, száraz festékkészlet palackban vagy gumi- vagy parafadugós kémcsövekben: bázikus és savas fukszin, enciánibolya, metilénkék, szafranin, malachit és briliáns zöld, mikrobák keveréke : Gram-pozitív baktériumok (Bac. subtilis, Staph. saprophyticus), ferde MPA-n nevelt gram-negatív mikrobák (E. coli) tenyészetei, tárgylemezek, vizes fukszin oldat (Pfeiffer-féle magenta), bakteriológiai hurkok, szűrőpapír, mikroszkópok, alkoholos vagy gázégők.

A tanárnak be kell mutatnia a festett mikroorganizmus-preparátumok elkészítésének, a mikroszkóp munkára való felkészítésének, a látómező megvilágításának beállításának, a nagyító felszerelésének, a preparátumok mikroszkópiájának technikáját.

A tanulók munkája során a tanárnak folyamatosan ellenőriznie kell az egyes mikroszkópok látómezőjének megvilágítását, szükség esetén segítenie kell annak beállítását és meg kell néznie a talált tárgyak képeit. A színes készítmény megtekintésekor a tanulónak látnia kell a spórák és kapszulák jelenlétét a mikroorganizmusokban.

Feladatok.

1. Készítsen lepedékkenetet és foltozzon egy egyszerű módszerrel.
2. Készítsen kenetet Staphylococcus és Escherichia coli keverékéből egy tárgylemezre, és fesse meg Grammel.
3. Tekintse meg a foltos keneteket merülőlencsével.
4. Az óra tartalmát rögzítse munkafüzetben.

Válaszold meg a biztonsági kérdéseket.

Magyarázat a munkához

A mikrobasejt alakjának és egyes szerkezeteinek vizsgálatához a vizsgált mikrobát tartalmazó anyagból készült készítményt (kenetet) megfestenek.

A legtöbb mikroba gyorsan és jól festődik anilin festékoldatokkal. Által kémiai tulajdonságokáltalában bázikusra és savasra osztják. Bázikus színezékeknél a kromofor (a színt adó ion) kation, savas festékeknél anion.

A fő színezékek közé tartozik a vörös - semleges vörös, bíbor bázikus, szafranin, tionin, pironin, hematoxilin; kék - metilénkék; ibolya - kristályibolya, metilénibolya; zöld - malachit zöld, metilén zöld. Az alapszínezékek általában könnyen kötődnek a sejtek nukleáris (savas) komponenseihez.

A savas színezékek közé tartozik a vörös és rózsaszín - savas fukszin, eozin; sárga - pikrinsav, kongó, fluoreszcen; fekete - nigrosin. A savas festékek intenzívebben festik a sejtek (alap)komponenseit.

Festékek munkaoldatainak elkészítése.A mikrobák festésére szánt festékek munkaoldatainak elkészítése előtt, gyakran előre a mikrobák festésére szánt száraz festékekből, telített alkoholos oldatokat gyakran előzetesen készítenek száraz festékekből. Ehhez a festéket 96% alkohollal öntik 1:10 arányban. Ezzel az aránysal az alkohol festékkel telítődik (a festékek fel nem oldott része kicsapódik). A megtakarítás érdekében 100 cm³ alkoholhoz metilénkéket 7,0, enciánibolát 4,8, bázikus fukszint 8,1 ajánlott szedni.

A jobb telítettség érdekében az alkoholos oldatokat termosztátba helyezzük, és addig tartjuk, amíg a festékek teljesen fel nem oldódnak. A telített alkoholos oldatokból szükség szerint vizes munkaoldatokat készítünk.

A leggyakrabban használt festékoldatok a következők:

Tsil' fukszin karbololdat.100 ml 5%-os kristályos karbolsavoldathoz adjunk 10 ml bázikus fukszin telített alkoholos oldatát. Telített fukszin oldatot kapunk, ha 8 g fukszin kristályt elkeverünk 10 ml alkoholban. A festék piros.

Fuchsin Pfeiffera Ziel-féle fukszin karbolos oldata, desztillált vízzel 1:10 arányban hígítva. Közvetlenül használat előtt elkészítve. A festék gazdag rózsaszín színű.

Az enciánibolya karbolos oldata.10 ml telített alkoholos festékoldathoz adjunk 100 ml 2%-os vizes karbolsavoldatot. Telített oldatot kapunk, ha 1 g kristályos tárnicslilát 10 ml 96%-os alkoholban feloldunk. A festék kék-lila színű.

Szafranin. Közvetlenül felhasználás előtt készítse el úgy, hogy 1 g szafranint adjon 100 ml forró vízhez. A festék vörös-barna.

Metilénkék (Leffler-kék).Elkészítéséhez adjunk 30 ml telített alkoholos festékoldatot és 1 ml 1%-os vizes KOH- vagy NaOH-oldatot 100 ml desztillált vízhez. Az oldat sötétkék színű.

Malachit zöld.1 g festéket feloldunk 100 ml desztillált vízben, leszűrjük. Az oldat kék-zöld színű.

Lugol oldat. Vegyünk 1 g kristályos jódot és 2 g kálium-jodidot 300 ml desztillált vízhez. Először a kálium-jodidot feloldjuk kis mennyiségű vízben, majd jódkristályokat adunk hozzá. A teljes feloldódás után hozzáadjuk a maradék desztillált vizet.

Komplex színezési módszereka sejt szerkezetének részletes tanulmányozására, valamint egyes mikroorganizmusok másoktól való megkülönböztetésére használják. A kifinomult festési módszerek a sejt és részei fizikai-kémiai szerkezetének sajátosságain alapulnak. A Gram festés rendelkezik a legnagyobb gyakorlati tudással, amely lehetővé teszi a baktériumok megkülönböztetését a sejtfal kémiai összetétele és szerkezete szerint.

A módszert Christian Gram dán tudós dolgozta ki 1885-ben. Gram-módszerrel festve minden baktériumot két csoportra osztanak: Gram-pozitívra és Gram-negatívra.

Végrehajtási sorrend

Gram foltos technika.

1. Egyszerű színezési módszer.Nál nél egyszerű módszer színezékhez valamilyen színezőoldatot használnak, leggyakrabban Pfeiffer fukszint vagy metilénkéket.

Rögzített készítményre pipettával néhány csepp festékoldatot helyezünk úgy, hogy a kenet teljes felületét befedje: Pfeiffer fukszin 1-2 percig, metilénkék 3-5 percig. Ezután a festéket vízzel lemossuk, és a kenetet szűrőpapír lapok között vagy levegőn szárítjuk.

2. Kifinomult festési módszerekdiagnosztikára használják, a mikrobák jellegzetes szerkezetének azonosítására olyan esetekben, amikor az utóbbiak nem festődnek egyszerű módon.

A sejtfalak kémiai összetételében és szerkezetében eltérő mikrobiális sejtek megkülönböztetésére komplex festési módszert alkalmaznak - Gram-festést.

A Gram-festő baktériumokat két csoportra osztják: Gram-pozitív és Gram-negatív.

Gram-pozitív baktériumokban (G+) a sejtfal vastagsága 15-80 nm, több rétegben elhelyezkedő peptidoglikánból (60-90%), fehérjéből (kb. 1%) és lipidekből (kb. 1%) áll. A peptidoglikánhoz kovalensen kötődő, speciális típusú polimereket, a teichoin savakat találtak. A magas peptidoglikán tartalom biztosítja az alkohol-rezisztens komplex kialakulását enciánibolyával és jóddal Gram szerint festve, aminek következtében kékes-lila színűek.

A Gram-negatív baktériumok (G-) sejtfalának vastagsága 10-15 nm, de szerkezete jóval bonyolultabb, mint a Gram-pozitív baktériumoké. Orientált belső lipideken (10-20%) alapul, amelyek lipopoliszacharid réteget alkotnak a felszínen elhelyezkedő poliszacharidokkal. A fehérjék és poliszacharidok mozaikszerűen helyezkednek el a sejtfal felületén. A peptidoglikánt egyetlen réteg képviseli, amelynek vastagsága mindössze 2-3 nm (körülbelül 5-10%), a lipopoliszacharid réteg alatt fekszik, és szorosan lefedi a protoplasztot. A magas lipidtartalom miatt a Gram-negatív baktériumok sejtfala Gram szerint festve komplexet képez az enciánibolyával és a jóddal, amit az alkoholos kezelés elpusztít, aminek következtében a sejtek elszíneződnek.

A mikroorganizmusok Gram-festéssel szembeni egyenlőtlen hozzáállása a bakteriális sejtfal szerkezetének és kémiai összetételének különbségeivel függ össze.

A Gram-pozitív mikroorganizmusok közé tartoznak a coccusok, bacillusok (spóraképző rudak), aktinomyceták, mikobaktériumok, klostridiumbaktériumok.

Gram-negatív mikroorganizmusok közé tartoznak: baktériumok (nem spóraképző rudak), spirilla, szalmonella, E coli, Pseudomonas, Azotbacter, vibrios.

Vannak olyan Gram-változó mikroorganizmusok, amelyeknek a Gram-festéshez való hozzáállása életciklusuk bizonyos szakaszaiban megváltozik. Mivel a sejtek Gram szerinti festődési képessége életkoruktól függ, fiatal, gyakran egynapos tenyészet sejtjeit használják a Gram-festéshez. Összehasonlításképpen a meghatározandó tárggyal egyidejűleg célszerű megfesteni azon mikroorganizmusok sejtjeit, amelyeknek a Gram-festéssel való kapcsolata ismert (kontroll).

A Gram-festés a következőképpen történik:

1. A mikroorganizmusok tenyészetéből három kenetet készítünk egy üveglemezen: középen - a vizsgált kultúra kenetje, bal és jobb oldalon - a kontroll mikroorganizmusok kenetei.

A keneteknek vékonynak kell lenniük, hogy a sejtek egyenletesen oszlajanak el az üveg felületén, és ne képezzenek csomókat, mivel a festési eredmény a kenet vastagságától függhet. Szárítsa meg a keneteket levegőn, rögzítse az égő lángja fölé.

1. A foltokat karbolos enciánibolyával. A kenetekre megfelelő mennyiségű festéket viszünk fel, 1-2 percig tartjuk, a festéket lecsepegtetjük, és vízzel történő lemosás nélkül a keneteket Lugol-oldattal kezeljük, amíg megfeketednek (kb. 1-2 perc).
2. A Lugol-oldatot lecsepegtetjük, és a készítményt 0,5-1 percig (szigorúan) 96%-os etil-alkohollal kezeljük egy pohár alkoholba merítve vagy alkohollal a kenetekre (a teljes festés eredménye a kenet felvételének időpontjától függ). alkohollal kezelve: elégtelen feldolgozás esetén minden baktérium megtartja a festést, túlzottan - elszíneződés).
3. A készítményt azonnal vízzel mossuk, és 1-2 percig vizes bíborvörös színnel festjük. A festéket lecsepegtetjük, a készítményt vízzel mossuk, szűrőpapírral szárítjuk.
4. A készítményt immerziós rendszerrel mikroszkóppal vizsgálják. A Gram-pozitív baktériumok sötétlilára, a Gram-negatív baktériumok vörösre vagy bíbor rózsaszínre (a kiegészítő festék színére) festődnek.

Expressz módszer a mikroorganizmusok gramm-típusának meghatározására (Kregensen szerint).

A módszer a Gram-negatív baktériumok sejtjeinek elpusztításán alapul lúgos környezetés a szabad DNS meghatározása.

Egy csepp 3%-os KOH-oldatot csepegtetünk egy tárgylemezre, amelybe baktériumhurokkal hozzáadjuk a vizsgált baktériumokat (24 órás tenyészet ferde agarról), és kacskal jól összekeverjük.

5-10 s elteltével, amikor a hurok végighalad az üvegen, pozitív reakció esetén a Gram-negatív baktériumok vizsgálata eredményeként 1-2 cm hosszú nyálkás nyom képződik.Ha nem képződik nyálka, akkor a reakció negatív, akkor Gram-pozitív tenyészetet tesztelnek.

3. Jelentés a mikroszkópos vizsgálat eredményeiről.

a) mikroszkópos rendszer;

b) mikroszkópos tenyészet;

c) sejtrajzolás mikroszkóp alatt (jelezzen spórák, kapszulák jelenlétét).

4. Írja le a lecke tartalmát egy munkafüzetbe!

Ellenőrző kérdések

1. Milyen festékoldatokat használnak az egyszerű festési módszerben?
2. Ismertesse a baktériumok Gram-festésének eljárását.
3. Miért érzékelik másképp a baktériumok a Gram-foltokat?
4. Mely baktériumok Gram-pozitívak és melyek Gram-negatívak??

4. LAB

Tápközegek és elkészítésük technikái.

Az óra célja.

Sajátítsa el a táptalaj készítésének technikáját.

Anyagi támogatás.

Száraz tápközeg, használatra kész tápközeg, elektromos tűzhely, edények, indikátorpapír, 20% nátrium-hidroxid, 20% sósav, kémcsövek, pipetták, Petri-csészék.

A munka elvégzése előtt a tanulók átismétlik a mikroorganizmusok táplálkozását, tápközegeit, a táptalajok osztályozását, a tápközegekkel szemben támasztott alapvető követelményeket.

A laboratóriumi munkavégzés során a tanulók táptalajt készítenek.

Feladatok.

1. Olvassa el a munkakör leírását.
2. Készítsen táptalajt (tanár utasítására).
3. Az óra tartalmát rögzítse munkafüzetben.

Válaszold meg a biztonsági kérdéseket.

Magyarázat a munkához

A bakteriológiai laboratóriumok nem nélkülözhetik a táptalajt. A mikroorganizmus típusának meghatározására, a fertőző betegség kórokozójának kimutatására, azaz a betegség diagnózisának felállítására, speciális készítmények (oltóanyagok, szérumok) előállítására, fertőző betegségek kezelésére és megelőzésére, antibiotikumok beszerzésére, egészségügyi ellátásra. és a környezeti objektumok mikrobiológiai vizsgálata, a hús és húskészítmények bakteriológiai vizsgálata a mikroorganizmusok tápközegen történő mesterséges tenyésztését veszi igénybe.

A laboratóriumokban a mikroorganizmusokat in vitro tenyésztik, azaz. üveg kémcsövekben, lombikokban vagy más edényekben. Az in vitro tenyésztéshez olyan szubsztrátokra van szükség, amelyeket a mikroorganizmusok tápanyagként használnak.

A tápanyagigény szerint minden mikroorganizmust három csoportba lehet osztani:

első csoport - szerény, egyszerű táptalajokon növekszik (rothadó, legtöbb kókusz és egyéb mikroorganizmus);

második csoport - növekedésükhöz további tápanyagokra van szükség: teljes fehérje (csirke vagy tejsavó), vitaminok, bizonyos aminosavkészletek, nyomelemek (tuberculosis, tularemia bacillus, leptospira stb.);

harmadik csoport - nem növekszik mesterséges tápközegen, de csak élő sejtekben (vírusok, rickettsiák) képes szaporodni.

A táptalajra vonatkozó követelmények a következők:

1. Tartalmazniuk kell nitrogén- és szénforrást, szervetlen vegyületeket, nyomelemeket, valamint növekedési faktorokat, vitaminokat, főleg B csoportot.

A peptonokat univerzális nitrogénforrásként használják. A peptonok a hús vagy a kazein hidrolízisének termékei. Polipeptideket, aminosavakat és esszenciális ásványi anyagokat tartalmaznak.

Univerzális szénforrásként szénhidrátokat (cukrokat) adnak a tápközegekhez - glükóz, laktóz, szacharóz, szerves savak - tejsav, citromsav stb., többértékű alkoholok - mannit, glicerin, szorbit stb.

2. A tápközegnek rendelkeznie kell a táptalaj bizonyos reakciójával. Tehát a coccalis, rothadó és kórokozó mikroorganizmusok többsége számára az optimális pH 7,0 ... 7,4, a penészgombák, élesztőgombák, tejsav mikroorganizmusok pedig 6,0 pH-n fejlődnek jobban.

3. A tápközegnek sterilnek kell lennie, pl. nem tartalmaznak mikroorganizmusokat.

4. A tápközegnek nedvesnek kell lennie, mivel a mikroorganizmusok táplálkozása a diffúzió és az ozmózis törvényei szerint történik. Sok tápközegnek átlátszónak kell lennie ahhoz, hogy meg lehessen különböztetni a rajtuk lévő mikroorganizmusok szaporodását, és megfigyelhessük a létfontosságú tevékenységük következtében fellépő élettani változásokat.

Az állaga szerint a tápközegek folyékonyak, félfolyékonyak és sűrűek. Sűrű táptalaj készítéséhez 2...3%-os koncentrációjú agar-agart adunk a folyékony táptalajhoz, félfolyékonyhoz pedig 0,2...0,3%-os koncentrációjú agar-agart.

Eredetük szerint megkülönböztetünk természetes és mesterséges környezetet.

Természetes termesztőközegállati eredetű (vér, vérszérum, tej, epe...) vagy növényi eredetű (zöldség, gyümölcs, gabonafélék) termékek, amelyeket mikroorganizmusok tenyésztésére használnak különleges kezelés nélkül, természetes tulajdonságaik teljes megőrzésével.

Mesterséges táptalajoknövényi feldolgozásból származó termékekből, húsból, tejből, májból stb. készülnek, gyakran szénhidrát hozzáadásával, asztali só, festékek stb.

A mesterséges környezetek közül megkülönböztetik a szintetikus környezeteket, azaz. pontosan ismert kémiai összetételű környezetekben. A mesterséges tápközegeket egyszerű vagy hagyományos és összetett anyagokra osztják.

Az egyszerű táptalajok a legtöbb mikroorganizmus tenyésztésére szolgálnak. Minden táptalaj fehérjebázisa a tápleves. Általában két módszert alkalmaznak a fő tápleves elkészítésére: húsvízen kész pepton hozzáadásával - hús-pepton leves, az alapanyag hidrolízis termékeinek enzimekkel történő emésztése (tripszin - Hottinger húsleves, pepszin - nyest húsleves) vagy savak, az ilyen táptalajok aminosavakban gazdagabbak.

A tápközeg össz- és amino-nitrogéntartalma a hús-pepton közeg nitrogén-összetételétől, valamint a hús és egyéb hidrolizátumok fehérjelebontásának mértékétől függ.

A legtöbb mikroorganizmus jó szaporodásához legalább 250...300 mg teljes nitrogént kell tartalmaznia 100 cm húslevesben amino-nitrogén (aminosavak) jelenlétében ebben a mennyiségben, átlagosan körülbelül 25 ... 30%.

A leggyakoribb egyszerű tápközeg a hús-pepton húsleves (MPB), hús-pepton agar (MPA), hús-pepton zselatin (MPG).

Hús pepton agar (MPA) – a mikroorganizmusok teljes számának meghatározására szolgál.

Mindhárom táptalaj alapja a húsvíz, amelyet darált marhahúsból készítenek, vízzel töltenek és 1,5 ... 2 órán át forralják, szűrik és 20 ... 30 percig sterilizálják 120 ° C-on.

Hús-pepton húsleves.1% peptont és 0,5% konyhasót adunk 1 liter húsvízhez, 10%-os NaOH-oldattal pH 7,4-re lúgosítjuk, leszűrjük és 15...20 percig 0,1 MPa nyomáson sterilizáljuk.

Hús-pepton agar.A hús-peptonleveshez finomra vágott agar-agart (2…3%) adunk, az elegyet addig melegítjük, amíg az agar fel nem olvad, a pH-t 7,2…7,6-ra állítjuk, pamut-gézszűrőn átszűrjük, kémcsövekbe öntjük. és lombikokban sterilizáljuk 20…30 percig 120˚С-on.

Szükség esetén az MPA-t vízfürdőben melegítjük a teljes megolvadásig. A kémcsöveket speciális állványokba helyezzük 10˚-os szögben, és megszilárdulás után ún. ferde agart kapunk, amelyet mikrobatenyészetekhez használunk. Petri-csészékbe olvasztott hús-pepton agart is öntünk.

A hús-pepton zselatint hasonlóan készítjük el.

Végrehajtási sorrend

2. Táptalaj készítése kész száraz táptalajból.

Száraz tápközeg.Egyszerű, elektív és differenciáldiagnosztikai száraz tápközeget állítanak elő. A száraz tápközeg higroszkópos por, vízben könnyen oldódik. A száraz táptalajok szoros csavaros kupakkal ellátott üvegedényekben kaphatók.

Az ilyen táptalajokat az utasítások szerint készítjük úgy, hogy a port a megadott mennyiségű desztillált vízben feloldjuk, szűrjük és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk.

Dry Nutrient Agara következőképpen készítjük el: az oldott száraz agarhoz (100 ml-ben 5 g agar) kis mennyiségű élesztőkivonatot, húsvizet adunk növekedési faktorként, vatta-gézszűrőn átszűrjük, kémcsövekbe vagy fiolákba öntjük és sterilizáljuk. 0,1 MPa nyomáson 20 percig.

3. Írja le a lecke tartalmát egy munkafüzetbe!

Ellenőrző kérdések

1. Mik az alapvető követelmények a táptalajokkal szemben?
2. Melyek a mikroorganizmusok tenyésztésére leggyakrabban használt táptalajok, ezek rendeltetése?
3. Melyek az egyszerű táptalajok összetevői?

Bibliográfia

1. Gradova N. B. Laboratóriumi műhely az általános mikrobiológiáról - M .: DeLi print, 2010.
2. Marmuzova L.V. A mikrobiológia, a higiénia és a higiénia alapjai az élelmiszeriparban - M .: 2005.
3. Mudretsova-Viss K. A. Mikrobiológia, higiénia és higiénia - M .: DL, 2010.

"A mikrobiológia, a higiénia és a higiénia alapjai".

MÓDSZERTANI UTASÍTÁSOK

№№1-4 laboratóriumi munkákhoz

civil szervezetek hallgatói számára

34.17 Kolbászgyártási folyamatok üzemeltetője.

__________________________________________________________________

Zsukova Ljubov Anatoljevna, Moszkva város Állami Autonóm Középfokú Oktatási Intézményének speciális szakok tanára TK 28. sz.

Állami autonóm oktatási intézmény

középső szakképzés Moszkva város

Műszaki Főiskola 28. sz

Cím: Moszkva, st. Felső mezők, 27

Nyomtatásra beküldve 2012.02.07.

Papírméret 60x90/16

Példányszám 16 példány.

Nyomdában nyomtatva:

Állami autonóm oktatási intézmény

középfokú szakképzés Moszkvában

1. TEVÉKENYSÉG

TÁPANYAG ELŐKÉSZÍTÉSE ÉS STERILIZÁLÁSÁNAK MÓDSZEREI

A MIKROORGANIZMUSOK TERMESZTÉSÉNEK JELLEMZŐI

Cél: Tanulmányozni a mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka szabályait, a mikroorganizmusok tenyésztésének sajátosságait, a táptalaj készítésének módszereit és sterilizálási módszereket.

Feladatok

Ismerkedjen meg a magatartási szabályokkal a mikrobiológiai workshop végzésekor.

A mikroorganizmusok tenyésztésének sajátosságainak tanulmányozása.

Ismerje meg a táptalaj elkészítésének és öntésének módszereit.

Az üvegedények és táptalajok sterilizálási módszereinek megismerése.

Készítse elő és öntse ki az MPA táptalajt.

Szerezzen be széna- és burgonyapálcák dúsító kultúráját.

Irodalom

Anikeev V.V., Lukomskaya K.A. Útmutató a mikrobiológiai gyakorlati gyakorlatokhoz. M.: Felvilágosodás, - 1983.

Gusev M.V. Mikrobiológia: tankönyv egyetemek számára / M.V. Gusev, L.A. Mineev. – Moszkva, 2004

Emtsev V.T. Mikrobiológia: tankönyv egyetemek számára / V.T. Emtsev, E.N. Mishustin. – M.: Túzok, 2005.

Lukomskaya K.A. Mikrobiológia a virológia alapjaival. M.: Felvilágosodás, - 1983.

Mikrobiológia, virológia és immunológia alapjai. / Alatt. Szerkesztette: Vorobyov A.A. és Krivoshein Yu.S. - M.: Masterstvo, 2001.

Pimenova M.N. Útmutató a mikrobiológiai gyakorlati gyakorlatokhoz. Moszkva, 1971.

Műhely a mikrobiológiáról. Szerk. Netrusova A.I. - M .: Akadémia, - 2005.

Tepper E.Z. Műhely a mikrobiológiáról. – M.: Túzok, 2004.

Anyagok és felszerelések.Steril Petri-csészék, asteril Erlenmeyer-lombik 100-150 ml,tápanyag-agar, pepton, széna, burgonyagumó, kréta, csempék, alkohollámpák, lombikok, vatta, géz, pipetták, mérlegek, súlyok, termosztát.

Alapfogalmak.Tenyésztés, tenyésztés, felszíni tenyésztés, mélytenyésztés, szakaszos tenyészet, folyamatos tenyésztés, tiszta tenyésztés, dúsító tenyészet, oltás, inkubáció, passzáltatás, elektív táptalaj, dúsító táptalaj, optimális táptalaj, természetes táptalaj, szintetikus táptalaj, félszintetikus táptalaj, agar, sterilizálás, lángolás, tyndalizálás, pasztőrözés, autoklávozás, MPA.

Előrehalad

1. számú feladat. Ismerje meg a munkavégzés szabályait a mikrobiológiai műhely végzése során.

2. számú feladat. Tanulmányozni a táptalajok osztályozását, elkészítésének és palackozásának jellemzőit, a táptalajok és üvegedények sterilizálási módszereit.

3. számú feladat. Készítse elő és öntse az MPA táptalajt steril Petri-csészékbe.

4. számú feladat. Szerezzen dúsító kultúrát a szénabálcákból(Bacillus subtilis).

A szénát apróra vágva 500 ml-es lombikba helyezzük, a térfogat negyedére töltjük, egy csipet krétát adunk hozzá, és 15-20 percig forraljuk, amíg a táptalaj elnyeri az erős tea forrázat színét. A szénafőzetet steril 100-150 ml-es Erlenmeyer-lombikokba öntjük, 1,0-1,5 cm-es réteggel, vattadugóval lezárjuk és 22-25 °C-os termosztátba helyezzük.

Két nap múlva fehéres filmréteg alakul ki a táptalaj felületén. Te. subtilis, amely az öregedés során a 3-4. napon szürkés-zöldes lesz. Más mikroorganizmusok ugyanakkor ritkán és kis mennyiségben szaporodnak.

5. számú feladat. Szerezzen dúsító tenyészetet a burgonyarúdból(Vas. subtilis var. mesentericus).

A megmosott burgonyagumókat hámozva, szeletekre vágva. Felületüket krétával bedörzsöljük, hogy semlegesítsük a táptalajt, és steril Petri-csészékbe helyezzük, desztillált vízzel megnedvesített dupla réteg szűrőpapírra. A burgonya táptalajt tartalmazó csészéket 0,5 atm-es autoklávban 10 percig tartjuk, majd 27-30 °C-os termosztátban 3-4 napig tartjuk.

A burgonyaszeletek felületén sűrű ráncos burgonyarúd-kultúra képződik. A film színe eltérő lehet: fehéres-szürke, rózsaszínes, sárgásbarna, fekete, ami az uralkodó fejlődésben részesült kultúrafajtáktól függ.

Ellenőrző kérdések

A tápközegek osztályozása.

Laboratóriumi üvegedények és táptalajok sterilizálási módszerei.

Egyedi táptalajok készítésének módszerei (MPB, MPA, MPZH, SA, KA stb.) Táptalaj öntése.

A mikroorganizmusok tenyésztésének jellemzői (felszíni és mély, periodikus és folyamatos). dúsítás és tiszta kultúrák.

Mikroorganizmusok natív és fix preparátumainak előállítására szolgáló módszerek.

Tanulmányozni a mikrobiológia tudományának fejlődésének fő szakaszait, az orosz és külföldi tudósok hozzájárulását a fejlődéshez. Töltse ki az 1-es számú táblázatot.

1. számú táblázat. A mikrobiológia fejlődéstörténete

2. TEVÉKENYSÉG

MIKROORGANIZMUSOK ÉLŐ ÉS RÖGZÍTETT KÉSZÍTMÉNYEK ELŐKÉSZÍTÉSE, ISMERKEDÉS MORFOLÓGIÁVAL

Cél: Tanulmányozni a mikropreparátumok előállításának módszereit és technikáit a mikroorganizmusok vizsgálatában, megismerni azok morfológiáját.

Feladatok:

A baktériumsejtek morfológiájának sajátosságainak tanulmányozása.

Készítsen intravitális és fix mikropreparátumokat mikroorganizmusokból.

Anyagok és felszerelések.Üveglemezek, bakteriológiai hurok, szellemlámpa, szűrőpapír, kristályosító híddal a készítményekhez, vizes mosópalack, színezékek vizes oldatai - fukszin, metilénkék, enciánibolya (a továbbiakban: mikrokészítmények készítésére szolgáló berendezés); immerziós olaj, mikroszkóp; húsvíz, élesztő, széna- és burgonyarudak kultúrája.

Előrehalad

1. számú feladat. Végezzen bakteriális sejtek élethosszig tartó vizsgálatát a következő módszerekkel, készítsen rajzokat:

zúzott csepp módszer.Az egyik folyadék cseppjét mikrobiológiai hurokkal egy tárgylemezre helyezzük. A fedőüveget a csepp szélén lévő szélére helyezzük, és fokozatosan leengedjük rá.

függő csepp módszer.A fedőüveg közepére egy kis csepp tesztfolyadékot csepegtetünk bakteriológiai hurokkal, és egy speciális üveglemez mélyedésébe borítjuk.

A gyógyszer "lenyomata".Az agar táptalajból, amelyen a mikroorganizmusok összefüggő gyepben vagy egyedi telepek formájában nőnek, egy kis kockát vágunk ki, és egy tárgylemezre visszük át úgy, hogy a mikroorganizmusokkal felfelé nézzen a felület. Ezután tiszta fedőlemezt kell felvinni a gyepre vagy a telepre, enyhén rá kell nyomni egy hurokkal vagy csipesszel, és azonnal eltávolítani, próbálva nem mozdulni. A kapott készítményt lenyomattal egy csepp vízbe vagy metilénkékbe (1:40) helyezzük egy tárgylemezre.

2. számú feladat. Készítsen fix készítménytTe. subtilis, Vas. subtilis var mesentericus, St. lactis, S. cerevisiae, E. coli(1., 2., 3., 4. számú alkalmazás),rajzokat készíteni.

Alkalmazás. Az üveglemezt alkohollámpa lángján szárítják. Az égő lángján sterilizált bakteriológiai hurkot helyezünk a tárgylemez közepére a vizsgálati anyag kenetével. Ha a mikroorganizmus tenyészetét sűrű táptalajon neveljük, először egy csepp vizet csepegtetünk az üvegre, bakteriológiai hurokkal kis mennyiségű anyagot juttatunk bele, és kenetet készítünk.

Szárítás és rögzítés. A gyógyszert levegőn szárítják, majd rögzítik. A hagyományos mikroorganizmus-keneteket termikusan rögzítjük úgy, hogy az üveget 2-3 alkalommal átengedjük az égő lángján a kenettel felfelé.A kenet rögzítése a mikroorganizmusok elpusztulásához, sűrűn tapadásához az üveg felületéhez és a mikrobák festékkel szembeni könnyebb érzékenységéhez vezet.

Színezés. Öntse a felületet bármilyen festék oldatával 2-3 percig (metilénkék, enciánibolya, bíbor). Megkülönböztetniegyszerű és differenciálismikroorganizmusok festése. Az első esetben a teljes cellát megfestik, így annak alakja és méretei jól láthatóvá válnak. A differenciális festés csak bizonyos sejtszerkezeteket és tárolóanyagokat tár fel.

Öblítés. Ezután a kenetből származó festéket vízzel lemossuk a mosópalackból, a készítmény alsó oldalát szűrőpapírcsíkkal letöröljük, a felső oldalt óvatosan megszárítjuk és mikroszkóppal lemossuk.

A mikroorganizmusok általános jellemzői. A prokarióták és eukarióták megkülönböztető jellemzői.

A baktériumsejtek alakja és mérete. A baktériumok morfológiai típusai.

A mikroorganizmusok szisztematikájának alapjai. A baktériumok helyzete az élőlények rendszerében és változékonyságuk. A fajok azonosításában használt baktériumok jellemzői.

rövid leírása rendje a Schizomycetales.

Az Actinomycetales rend rövid leírása. Nocardia. Mycobacteriumok.

A Myxobacteriales rend rövid leírása.

Gomba. A zygo-, asco- és deuteromyceták rövid leírása.

Töltse ki a 2-es számú táblázatot!

2. számú táblázat. Az eukarióták és a prokarióták közötti különbségek

Lineáris kromoszómák

Kérdések az önálló tanuláshoz

Az egyes baktériumcsoportok rövid leírása (a Bergey-féle baktériumdetermináns szerint).

Az algák morfológiai jellemzői és szisztematika.

A protozoonok morfológiai jellemzői és rendszertana.

3. TEVÉKENYSÉG

A TARTOZÉKOK, KAPSZULÁK ÉS ENDOSPÓRÁK SZÍNEZÉSE, GRAM festés

Cél: Ismerje meg a spórák, kapszulák és zárványok megfestését bakteriális sejt; citológiai tulajdonságainak tanulmányozására Gram-festés példaként.

Feladatok:

A lipidszemcsék kimutatása élesztősejtekben.

A glikogénszerű poliszacharidok kimutatása élesztősejtekben.

Határozza meg a baktériumsejt kapszuláját negatív kontraszt módszerével (pl. Azotobacter).

Végezze el a spórák és a citoplazma differenciális festését az Ozheshka módszer szerint.

Végezzen Gram-festést a baktériumokon.

Anyagok és felszerelések.Csúszda, bakteriológiai hurok, alkohollámpa, szűrőpapír, kristályosító híddal a készítményekhez, vizes mosópalack, mikroszkóp. Színezékek vizes oldatai - fukszin, metilénkék, enciánibolya, Tsilya karbolikus fukszin, Szudán III. Merítési olaj, kénsav 1%, tinta, sósav 0,5%, Lugol-oldat. kultúrákVas.subtilis, Vas.mycoides, S.cerevisiae, E.coli.

Alapfogalmak.Murein, volutin, nukleoid, glikogén, kapszulák, sejtfal, poliszacharidok, polifoszfátok, metakromatikus szemcsék, monotrichok, peritrichis, lofotrichok, baciláris forma, klostridiális forma, plectridiális forma, exin, intine, metakromózia.

Előrehalad

1. számú feladat. Polifoszfátok (volutin) zárványok észlelése élesztősejtekben.A gomba- és élesztősejtekben lévő Volutin vakuólumokban, baktériumokban és aktinomycetákban található a citoplazmában. Ez egy tartalék foszfor és nitrogén tartalmú anyag, származéka nukleinsavak. jellemző tulajdonság- metakromózis, vagyis az a képesség, hogy az azt színező anyagoktól eltérő színt kapjon.

A volutin színezése az Omelyansky módszer szerint.A mikroorganizmus tenyészetéből egy üveglemezen vékony kenetet készítünk, levegőn szárítjuk, lángon rögzítjük, 30-40 másodpercig karbolos fukszinnal festjük, majd vízzel mossuk. Megkülönböztetéséhez 20-30 másodpercre 1%-os kénsavoldattal ellátott lombikba merítjük, majd azonnal vízzel leöblítjük. Kénsav elszínezi a citoplazmát, és a volutin szemcsék bíbor színűek maradnak. A készítményt metilénkékkel (1:40) 20-30 másodpercig ellenfestjük, vízzel mossuk, levegőn szárítjuk és mikroszkóppal átfestjük. A készítményen a volutin szemcséit pirosra, a sejtek citoplazmáját kékre színezzük (1. sz. ábra, 2 melléklet).

2. számú feladat. A lipidszemcsék kimutatása élesztősejtekben. Az élesztőben és a fonalas gombákban a tartalék lipideket semleges zsírok képviselik; baktériumokban ezt a funkciót a hidroxivajsav látja el.

A zsíros zárványok színezése.Egy csepp Szudán III oldatot adunk egy csepp mikroorganizmus-szuszpenzióhoz egy üveglemezen, fedjük le fedőlemezzel, és VI-40 objektívvel mikroszkóppal vizsgáljuk. A Sudan III feloldódik a baktériumsejt zsíros zárványaiban, narancsvörösre festve azokat. A sejt citoplazmája színtelen marad.

3. számú feladat. A glikogénszerű poliszacharidok kimutatása élesztősejtekben. A szénhidrát természetű tartalék anyagok a baktériumsejtekben granulátum formájában halmozódnak fel. A granulóz keményítőszerű anyag, amely a Lugol-reagenssel kölcsönhatásba lépve kék színűvé válik; A glikogén egy poliszacharid, amely ugyanolyan körülmények között vörösesbarnára színeződik. A granulózis csak a prokarióta sejtekben található.

Glikogén és granulosa folt.Egy csepp gyenge Lugol-oldatot adunk egy csepp mikroorganizmus-szuszpenzióhoz egy üveglemezen, fedjük le fedőlemezzel, és VI-40 objektívvel mikroszkóppal vizsgáljuk.

4. számú feladat. A bakteriális sejtkapszulák kimutatása negatív kontraszttal (in Azotobacter).

Kapszulák azonosítása negatív intravitális készítményen.A jól zsírtalanított üveglemezre mikrobiológiai hurokkal egy nagy csepp fekete tintát visznek fel, amelybe a vizsgált mikroorganizmus tenyészet egy cseppjét juttatják, üveglap segítségével szétosztják és megszárítják. Kezelje merülő rendszerrel. A hasított test sötét hátterén élesen meghatározott sejtek körül átlátszó kapszulák láthatók (8. ábra. Függelék).

5. számú feladat. Végezze el a spórák és a citoplazma differenciális festését (in Te. mycoides).

Ozheshka módszer. A szárított készítményt 0,5% -os oldattal öntjük sósavés 2 percig melegítjük, amíg gőzök nem jelennek meg. A kenetet vízzel mossuk, szűrőpapírral lefedjük, és Ziel-féle karbolos fukszinnal megtöltjük. Fűtéssel festjük 5 percig, amíg gőzök nem jelennek meg. Vízzel mossuk és 1%-os kénsavban 0,5-1 percig differenciáljuk (az időt empirikusan határozzuk meg). Vízzel mossuk és 30 percig metilénkékkel festjük. Öblítse le újra, szárítsa meg és mikroszkóppal. A spórák rózsaszínre festettek, a citoplazma kék színű (melléklet 2. ábra).

6. számú feladat. Végezzen Gram-festést a baktériumokon. A baktériumok sejtfalának kémiai összetételének különbsége Gram szerint befolyásolja festődési képességüket. Ennek alapján a baktériumokat Gram-pozitívra és Gram-negatívra osztják (3. táblázat). A Gram-pozitív héjak több poliszacharidot, mureint és teichoinsavat tartalmaznak; A gram-negatív héjak többrétegű szerkezetűek, magas lipidtartalommal (lipoproteinek és liposzacharidok). A Gram-pozitív mikroorganizmusok festéskor alkoholban oldhatatlan jódvegyületet képeznek a főfestékkel, a Gram-negatív mikroorganizmusokban ez a vegyület alkoholban oldódik.

Gram-festés.Három kenetet viszünk fel egy tárgylemezre, majd egyszerre dolgozzuk fel: egy gram-pozitívnak ismert baktériumtenyészetből, egy gram-negatívnak ismert baktériumtenyészetből, és ezek között egy kenetet a vizsgált mikroorganizmus tenyészetéből. . Fiatal egynapos kultúrákat használnak.

A keneteket levegőn szárítjuk, égő lángján rögzítjük, és 1%-os vizes enciánibolya oldattal festjük 1 percig. A festéket Lugol-oldattal lemossuk, és a keneteket 1 percig ugyanazzal az oldattal öntjük. A készítményt vízzel mossuk és 95%-os etanollal lombikban differenciáljuk (0,5-1,0 perc). A kenet megkülönböztetése után a készítményt azonnal alaposan lemossuk vízzel, és további festékkel - 0,1% -os vizes fukszin oldattal festjük 2-3 percig. A készítményt végül vízzel mossuk, levegőn szárítjuk és olajmerítéssel mikroszkóppal vizsgáljuk. A készítményen a Gram-pozitív baktériumok lila-lila színű, Gram-negatív - rózsaszín-málna színűek (Függelék 2. ábra).

3. számú táblázat. A baktériumok aránya a Gram-festéshez

Staphyloccocus aureus

Escherichia coli

Streptococcus

Proteus vulgaris

Bacillus subtilis

Pseudomonas aeruginosa

Sacharomyces

Shigella sp.

Ellenőrző kérdések és feladatok

A bakteriális sejtfal szerkezete. Kapszula képződés.

A baktériumok aránya a Gram-festéshez. A gram-pozitív és gram-negatív mikroorganizmusok megkülönböztető jellemzői.

Sejtmembrán és intracelluláris membrán szerkezetek.

Nukleáris berendezés, összetétel, szervezés és replikáció.

Riboszómák, gázvakuolák és más bakteriális organellumok; jelentésük.

Bakteriális sejtzárványok (poliszacharidok, polifoszfátok, lipidek, kénzárványok).

A baktériumok szaporodásának módjai. Sporuláció a baktériumokban.

Flagella. baktériumok mozgása. Taxik.

Kérdések az önálló tanuláshoz

A mikroorganizmusok örökletes tényezői.

Változást okozó mechanizmusok genetikai információ mikroorganizmusok.

4. TEVÉKENYSÉG

A LEVEGŐ ÉS VÍZ MIKROFLÓRA MENNYISÉGI SZÁMVITELI

MIKROBISZÁM MEGHATÁROZÁS

Cél: A levegő és a víz mikroorganizmusainak mennyiségi kimutatása.

Feladatok

A levegő és a víz mikroflóra mennyiségi számviteli módszereinek tanulmányozása.

Végezze el a levegő mikrobiológiai és a víz egészségügyi-bakteriológiai vizsgálatát.

Anyagok és felszerelések.Petri-csészék steril MPA-val, steril 1 ml-es pipetták, vízfürdő, villanytűzhely, hőmérő, csapvíz, tóvíz, szellemlámpa, gyufa.

Alapfogalmak.a víz teljes mikrobaszáma,levegő összes mikrobaszáma, if-index, if-titer, egészségügyi indikatív mikroorganizmusok, autochton mikroflóra, allochton mikroflóra, szaprobitási zónák.

Előrehalad

1. számú feladat. A tapasztalatok alapján határozza meg a levegő TMC-jét (teljes mikrobaszám).

Fertőzés céljából a Petri-csészéket a vizsgálóhelyiségben vagy a szabadban 5 percre kinyitják. A Petri-csésze fedelét levesszük, és megfordítás nélkül egymás mellé helyezzük. A Petri-csésze fedelén tüntesse fel a kísérlet változatát, a vetés időpontját. A fertőzött Petri-csészéket 25-28°C hőmérsékletű termosztátba helyezzük.

2-3 nap elteltével megszámoljuk a mikroorganizmusok telepeinek számát, amelyek egy Petri-csésze agarlemezén fejlődtek ki.Ebben az esetben a következőket veszik figyelembe: durva becslések szerint (Omelyansky) 100 cm-es területen 2 5 percen belül annyi mikroorganizmus és spóra telepszik meg, ahány 10 liter levegőben van. Feltételezzük, hogy minden kolónia egyetlen sejtből vagy spórából származik. EEz a módszer csak hozzávetőleges adatokat ad, de lehetővé teszi a különböző helyiségek levegőjében lévő mikroorganizmusok relatív számának eléggé pontos kimutatását.Töltse ki a 4. számú táblázatot, vonjon le következtetéseket!

Például: 5 telepet találtunk egy Petri-csészében, a csésze sugara 2 cm. Területe S=πr 2 =3,14*4=12,5. Akkor 10 liter tartalmaz

4. számú táblázat. A beltéri levegő teljes mikrobaszáma (TMC).

A levegőből izolált mikroorganizmus-telepek MPA lemezeken felhasználhatók a fajok azonosítására. Leggyakrabban mikrococcusok, szarcinok, egyes bacillusok és baktériumok kolóniáit izolálják a levegőből.

2. számú feladat. A tapasztalatok alapján határozza meg a víz TMF-jét.

A kutatáshoz a csapvizet steril lombikba töltik. Steril pipettával 1 ml vizet veszünk ki a lombikból, és egy Petri-csészébe adagoljuk egyenesített tápközeggel (MPA) (a hőmérséklete nem lehet magasabb 45 °C-nál). A csészét lezárjuk, és óvatosan megdöntve a táptalajt összekeverjük, a tányért hagyjuk megkeményedni, és termosztátba helyezzük. 3-5 nap múlva megszámoljuk a Petri-csészékben fejlődő telepeket, és meghatározzuk a baktériumok számát 1 ml vízben.

A telepek megszámlálása után meghatározzuk a víz mikrobiális számát - a mikroorganizmusok számát 1 ml tesztvízben, figyelembe véve a hígítást, ha van ilyen.

Az adatokat az 5. számú táblázat formájában állítjuk össze, következtetéseket vonunk le.

5. számú táblázat. Teljes mikrobiális szám (TMC) vizet inni

csapvíz

Ellenőrző kérdések

A levegő mikroflóra jellemzői. Mikroorganizmusok terjedése a levegőben.

A beltéri levegő egészségügyi állapotára vonatkozó szabványok.

A levegő egészségügyi és mikrobiológiai vizsgálata.

Az ivóvíz mikroflórája.

Természetes vizek mikroflórája. A mikroorganizmusok eloszlása ​​a vízben.

Az ivóvíz egészségügyi mutatói. A víz teljes mikrobaszáma. Ha-index, ha-titer víz.

A víztestek szennyezése és öntisztulása. A mikroorganizmusok szerepe a víztestek öntisztulási folyamataiban.

Ivó- és szennyvizek biológiai kezelése.

A víz egészségügyi-bakteriológiai vizsgálata. TMC, if-index, if-titer meghatározása.

Levegő, víz, talaj egészségügyi indikatív mikroorganizmusai.

Az egészségügyi indikatív mikroorganizmusokkal szemben támasztott követelmények.

Élelmiszer-termékek mikroflórája (savanyú tej, hal, hús, kolbász, konzerv).

Az élelmiszer-alapanyagok és élelmiszertermékek biztonságosságának értékelése során alkalmazott mikroorganizmus-csoportok jellemzői.

Egészségügyi és bakteriológiai szabványok különböző élelmiszertermékekre.

Élelmiszeripari termékek egészségügyi-bakteriológiai kutatásának módszerei.

A talaj, mint a mikroorganizmusok élőhelye.

A talaj mikroorganizmusainak terjedésének ökológiai tényezői.

A talaj mikroorganizmusai közötti kapcsolatok.

A talaj mikroflórájának részvétele a szerves anyagok mineralizációs folyamataiban és a humuszképződésben.

A talaj egészségügyi és bakteriológiai vizsgálata.

5. TEVÉKENYSÉG

A MIKROORGANIZMUSOK TISZTA KULTÚRÁJÁNAK MEGSZERZÉSE

MENNYISÉGI MIKROORGANIZMUSOK NEPHELOMETRIAI MÓDSZERE

Cél: A mikroorganizmusok tiszta kultúráinak izolálása, a mikroorganizmusok számának elszámolásának nefelometriás módszerének elsajátítása.

Feladatok

Végezze el a tiszta kultúra izolálását "kimerítő" stroke módszerével.

A mikroorganizmusok mennyiségi meghatározása nefelometriás módszerrel

Anyagok és felszerelések.Petri-csészék steril MPA-val, FEK, Gorjajev kamerája, mikroszkópok, mikrobiológiai hurkok, szellemlámpa, gyufa.

Alapfogalmak. Tiszta kultúra, növekedés, szaporodás, bináris hasadás, bimbózás, sejtciklus (monomorf, dimorf, polimorf), generációs idő, fajlagos növekedési sebesség, biomassza hozam, gazdasági tényező, stacionárius növekedési fázis, késleltetési fázis, exponenciális szaporodási fázis, állófázis, haldoklás fázis, stagnáló kultúra, flow kultúra, szinkron kultúra.

Előrehalad

1. számú feladat. A mikroorganizmusok tiszta kultúrájának megszerzése

Az aerobok tiszta kultúráinak izolálása a dúsító tenyészet szilárd táptalaj felületén történő szitálásával történik. A vetés kimerítő löketmódszerrel történik. A telepek növekedése után az izolált telepek tisztaságát vizuálisan és mikroszkóppal ellenőrizzük. 3-6 nap elteltével izolált mikroorganizmus-kolóniát választunk ki és írunk le (a függelék rajzai segítségével).A kolónia leírása a következő:

A telep mérete: pontozott (D - kevesebb, mint 1 mm), kicsi (D - 1-2 mm), közepes (D - 2-4 mm) és nagy (D - 4-6 mm vagy több).

A telep alakja kerek, amőboid, rizoid.

Optikai tulajdonságok - átlátszó, matt, fluoreszkáló, áttetsző (áttetsző), átlátszatlan, fényes.

Szín - vegye figyelembe a telep színét és a pigment felszabadulását a táptalajba.

Felülete sima, érdes, gyűrött, göröngyös.

Profil - lapos, domború, kráterszerű, agarrá növő stb.

A telep széle sima, hullámos, karéjos, rhizoid stb.

A telep szerkezete homogén, finom vagy durva szemcsés.

Állaga - olajos, pépes, viszkózus, filmes.

2. számú feladat. Végezze el a mikroorganizmusok mennyiségi értékelését nefelometriás módszerrel.

a) Nefelometriás módszer.sejtsűrűség S.cerevisiae folyékony közegben nefelometrikusan (FEC) határozzuk meg egy 0,5 cm optikai úthosszú küvetta és egy zöld fényszűrő (A = X 540 nm) segítségével. A megbízható eredmények eléréséhez a sejtsűrűségnek 0,1-0,6 tartományban kell lennie. 0,6 feletti sejtkoncentráció esetén másodlagos fényszórás lép fel, ami alulbecsült eredményeket eredményez. Ezért a nagy sűrűségű szuszpenziókat 2, 4, 6, 8 és 10-szeres vízzel kell hígítani a fényáteresztés mérése előtt. Az egyes szuszpenziók optikai sűrűségének mérési eredményeit (a víz szolgál kontrollként) a 6. számú táblázat tartalmazza.

b) Sejtszámlálás a Gorjajev-Tom kamrában.A fotoelektrokoloriméter (FEC) leolvasásáról a tápközegben lévő mikroorganizmus sejtek számára történő átváltáshoz Goryaev-Toma számlálókamrával és élesztő szuszpenziós hígításokkal számoljuk meg a számukat, melyeket sűrűségük nefelometriás módszerrel határoztunk meg. A cellákat nagy rács négyzetekben számolja meg egy 8*-os objektív segítségével. Teljes szám a megszámlált sejtnek legalább 600-nak kell lennie. A megfelelő szuszpenzió 1 ml-ében lévő sejtek számát a következő képlettel számítjuk ki: M = 1000*a*n/h*S, ahol M a sejtek száma 1 ml szuszpenzióban; a a cellák átlagos száma egy nagy rácsnégyzetben; h a kamra mélysége (1/10 mm); S a nagy rácsnégyzet területe (1/25 mm 2 ); n a szuszpenzió hígítási foka; 1000 mm 3 - 1 ml. A kapott eredményeket, millió sejt 1 ml-ben a táblázatban rögzítjük. 6. sz.

6. számú táblázat. A szuszpenziókban lévő élesztősejtek száma a Goryaev-kamerával és a megfelelő FEC-értékekkel

FEK jelzések

A táblázat adatai alapján készítsen kalibrációs görbét. 6. sz., amely az élesztősejtek számát ábrázolja az abszcissza tengelyen, és a megfelelő szuszpenzió optikai sűrűségét az ordináta tengelyen. Egy kalibrációs görbét építenek fel, hogy gyorsan meghatározzák egy bizonyos típusú mikroorganizmus sejtszámát a FEC leolvasások alapján.

Ellenőrző kérdések és feladatok

Akkumulatív kultúrák és a választás elve. Tiszta kultúrák, előállítási módok és jelentősége.

A mikroorganizmusok szaporodása.

A baktériumok sejtciklusai. Egyedi mikroorganizmusok és populációk növekedése. Kiegyensúlyozott és kiegyensúlyozatlan növekedés.

Növénytermesztési paraméterek: generációs idő, fajlagos növekedési sebesség, biomassza hozam, gazdasági tényező.

Növekedési görbék, az egyes fázisok jellemzői. Mikroorganizmusok szaporodása folyamatos termesztés során. Szinkron kultúrák.

6. TEVÉKENYSÉG

ÉLELMISZERTERMÉKEK EGÉSZSÉGÜGYI-BAKTERIOLÓGIAI VIZSGÁLATA

Cél: Végezze el az élelmiszer állapotának egészségügyi-bakteriológiai értékelését.

Feladatok

1. Határozza meg bizonyos élelmiszerek teljes mikrobaszámát!

2. Határozza meg a BGKP (Escherichia coli baktériumok) jelenlétét.

Anyagok és felszerelések.Petri-csészék MPA-val, Petri-csészék Endo táptalajjal, 1 ml-es pipetták, mozsár mozsártörővel, szikék, kémcsövek 9 ml steril vízzel, kémcsövek Kessler táptalajjal, steril lombik 100 ml vízzel, mérleg.

Alapfogalmak.Élelmiszerek specifikus mikroflórája, élelmiszerek nem specifikus mikroflórája, BGKP, egészségügyi indikatív mikroorganizmusok.

Előrehalad

1. számú feladat. Határozza meg a BGKP jelenlétét és az élelmiszertermékek teljes szennyezettségét a következő lépések egymás utáni végrehajtásával:

1. Élelmiszeripari termékek előkészítése kutatási célokra.

Steril porcelán mozsárban őröljön meg 10 g mintát (különböző helyekről sterilen vett), fokozatosan adjon hozzá 90 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot, és hagyja szobahőmérsékleten néhány percig. Ezután széles orrú, steril pipettával felverjük az oltásra és hígításra szánt szuszpenziót (1 ml). Feltételezzük, hogy az elkészített szuszpenzió 1 ml-e 0,1 g kiindulási terméket tartalmaz (10-es hígítás).-1 ). A folyékony állagú termékeket előzetes előkészítés nélkül vetik és nemesítik a növények számára.

2. Élelmiszerhígítások készítése vetéshez.

Folyékony konzisztenciájú termékek esetében a hígításokat a következőképpen készítjük el: 1 ml terméket steril pipettával veszünk, és 9 ml steril izotóniás nátrium-klorid oldatot tartalmazó kémcsőbe adjuk, összekeverve. Az így kapott hígítás (10-2 ) ugyanilyen módon további hígításnak vetjük alá a szükséges számú alkalommal (10-szeres többszöröse).

1. sz. rajz. Hígítások készítése és talajszuszpenzió vetése szilárd táptalajra

3. A teljes szennyezettség meghatározása.

Az oltáshoz kiválasztott hígításokat 1 ml-rel steril, 45-50 °C-on megolvasztott Petri-csészékbe adjuk. 0 MPA, majd összekeverjük. A táptalajt hagyjuk megszilárdulni, a növényeket napközben 37°C-on neveljük, majd megszámoljuk a kifejlett telepek számát (CFU). Határozza meg a baktériumok teljes számát a termék 1 ml-ében vagy 1 g-jában.

4. BGKP jelenlétének meghatározása.

A vetéshez a termék mennyiségét használják fel, amelyben a megállapított normáknak megfelelően a CGB hiánya biztosított. A vizsgált termékminták kiválasztott hígításaiból 1 ml-t veszünk és Kessler táptalajjal kémcsövekbe oltjuk. A beoltott csöveket 37°C-on 24 órán át inkubáljuk, növekedési jelek hiányában (gázképződés vagy a táptalaj színváltozása) következtetést vonunk le a teszttermék szabványnak való megfelelőségéről. Ha a növekedés jelei mutatkoznak, Endo táptalajra vetik. A növényeket 18-20 órán át 37 °C-on inkubáljuk. A termések megtekintésekor a CGB-re gyanús vagy tipikus kolóniák figyelhetők meg (vörös, rózsaszín, halvány rózsaszín telepeket alkotnak fémes fényezéssel vagy anélkül). Élő és fixált sejtek készítésére használják, Gram-festéssel és mikroszkóppal. A Gram-negatív, nem spóraképző, lekerekített végű rudak kimutatása a CGB esetleges jelenlétét jelzi.

A teljes szennyezettségre és az Escherichia coli jelenlétére vonatkozó adatokat a táblázat tartalmazza. Az egészségügyi és mikrobiológiai szabványok (SanPiN 2.3.2.560-96) segítségével vonjon le következtetéseket a különféle élelmiszerek mikroflórájára vonatkozóan (7. táblázat).

7. számú táblázat. Néhány egészségügyi és bakteriológiai szabvány (SanPiN 2.3.2.560-96)

Sajt orosz

0,001

Jégkrém

1*10 5

0,01

Ellenőrző kérdések, lásd a 4. leckét.

7. TEVÉKENYSÉG

TALAJ MIKROBOCENÓZISOK

Cél: A talaj mikroorganizmusainak fajösszetételének és elterjedésének tanulmányozása.

Feladatok

1. Tanulmányozni a talaj mikroflóra jellegét és a domináns fajokat.

2. Készítsen mennyiségi és minőségi kimutatást a talaj mikroflórájáról!

Anyagok és felszerelések.Diák, steril Petri-csészék MPA-val,mérleg, súlyok, szike, mozsár, gumikesztyű, lombik steril desztillált vízzel 90 ml, steril lombik 250 ml, kémcsövek 9 ml steril vízzel, pipetta 10 ml és 1 ml, mikropipetta 0,1 ml, üveg spatulák.

Előrehalad

1. számú feladat. A talaj és a rizoszféra mikrobiocenózisok természetének tanulmányozása üvegszennyeződés módszerével (Kholodny szerint).

Lapos talajfelületen késsel vágunk, melynek mélysége a vizsgált horizonttól függ. A kimosott és zsírtalanított poharakat (egyszerre több poharat veszünk) szorosan a vágás függőleges falához nyomják, és talajjal borítják. A poharakat egy héttől több hónapig a talajban tartják.

Az expozíciós idő letelte után a poharak hátoldaláról eltávolítjuk a szennyeződést, a poharak kísérleti felületét levegőn szárítjuk és háromszor rögzítjük úgy, hogy a hátoldalt az égő lángján átvezetjük. Rögzítés után az üveget a kísérleti felülettel lefelé vízbe merítjük anélkül, hogy az aljára kerülne. Mosás után a készítményt karbolos eritrozin oldatba merítjük 30 perc és 24 óra közötti időtartamra, majd a megfestett preparátumokat mikroszkóp alatt, merítőrendszerrel vizsgáljuk. A mikroszkópos vizsgálat során megfigyelhető a mikroflóra jellege, az üvegek elszennyeződésének sűrűsége és a domináns formák.

2. számú feladat. A talaj TMC meghatározásának elvégzése.

Talajszuszpenzió készítése hígításos módszerrel.Figyelemmel a sterilitásra, mérjünk le 10 g talajt, és helyezzük át steril habarcsba. A 90 ml steril vizet tartalmazó első lombikból 2-3 ml víz hozzáadásával nedvesítsen be habarcsban pasztaszerű állapotba egy talajmintát, majd gumikesztyűben dörzsölje ujjal 5 percig. Az őrlés után a habarcs talaját vízzel átvisszük a második száraz lombikba, és az első hígítást kapjuk - 1/10. A lombikban lévő talajszuszpenziót 5 percig rázzuk, 30 másodpercig állni hagyjuk, majd a lombikból 1 ml talajszuszpenziót steril pipettával 9 ml steril desztillált vízzel átviszünk az 1. számú kémcsőbe. a második hígítást kapjuk - 1/100. Hasonlóképpen a talajszuszpenzióból egy sor egymást követő hígítást készítünk -1/1000, 1/10000, 1/100000 és még több arányban, a mikroorganizmusok várható számától függően (1. ábra, 6. lecke).

A baktériumok izolálásához és mennyiségi meghatározásához a talajszuszpenziót valamelyik táptalajra vetik (MPA, KAA, talaj-agar, Ashby táptalaj; KAA vagy Chapek táptalajt használnak az aktinomicéták számbavételére). A Petri-csészéken lévő baktériumtelepeket 3-5 nap múlva, a gombákat és az élesztőket 5-7, az aktinomicétákat 7-15 nap múlva számolják meg. 1 g talaj mikroorganizmus-tartalmát a következő képlet határozza meg: a \u003d b * c, ahol a - a mikroorganizmusok száma 1 g talajban, b a telepek átlagos száma, V - tenyésztés. Hasonlítsa össze a talaj-, víz- és levegőmikroflóra fajösszetételét, változatosságát, és vonjon le következtetést!

Ellenőrző kérdések és feladatok, lásd a 4. leckét.

8. TEVÉKENYSÉG

NITROGÉN VEGYÜLETEK ALAKULÁSA MIKROORGANIZMUSOK ÁLTAL

Cél: A mikroorganizmusok általi átalakulási folyamatok jellemzőinek tanulmányozása szerves vegyületek nitrogén.

Feladatok

A fehérje-ammonifikáció folyamataiban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozása.

A karbamid ammonifikációs folyamataiban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozása.

Anyagok és felszerelések:Környezet a fehérje és karbamid ammonifikációs folyamatának reprodukálásához, mikroszkópok, mikropreparátumok készítésére szolgáló berendezések.

Alapfogalmak.Ammonifikáció, proteázok, peptidázok, ureáz, dezaminálás, dekarboxilezés.

Előrehalad

1. számú feladat. A fehérjeammonifikációt végző mikroorganizmusok tanulmányozásához rajzoljon egy képet. A fehérjeanyagok ammonifikációjának tanulmányozásához a húsleves 3% pepton hozzáadásával tápközegként szolgálhat.30 ml táptalajt egy 100 ml-es lombikba öntünk és 1/3 teáskanál földet adunk hozzá. A lombikokat pamutdugóval zárják le. Két papírdarabot függesztenek fel a közepes - vörös lakmusz vagy univerzális indikátorpapír desztillált vízzel megnedvesítve a fejlődő ammónia és lúgos ólom-acetát-oldattal megnedvesített szűrőpapír - fölé, a hidrogén-szulfid és a merkaptán kimutatására. Rögzítse őket a parafa és a lombik nyakának falai közé. A papírok nem érinthetik a médiát. A 28-30 °C-on történő inkubálás 3–5. napján elemzik a lombik tartalmát. Meghatározzuk a fehérje-ammonifikációs folyamat kórokozóit és azok anyagcseretermékeit.

Mikroszkópia.A fehérjeanyagok rothadó bomlásának kórokozóinak kimutatására zúzott cseppben élő baktériumkészítményt, valamint rögzített és festett készítményt készítenek. Másoknál gyakrabban találhatók mobil sejtek a készítményen. Proteus vulgaris (Pályázat 4. sz. ábra)a fehérjebontás első szakaszában érvényesül. Ezek nem spóraképzők, egyenlőtlen hosszúságú rudak. Ezenkívül sok spóraképző sejt található a készítményen. Bacillus mycoides és Clostridium sp. (1. sz. ábra, 4 melléklet). Ez utóbbiban a spórák terminálisan helyezkednek el, és átmérőjük meghaladja a sejt szélességét. Te. mycoides aerob körülmények között a fehérjék ammonifikációját okozza, és C. putrificus - anaerobban, de aerob körülmények között is kialakulhat, ha a környezet oxigént felvevő aerob mikroorganizmusokat tartalmaz.

NH került a légkörbe 3, vörös lakmuszpapír felfüggesztett csíkját kékre fest. Az ólompapír hidrogén-szulfid hatására megfeketedik, ha ezüstös bevonat borítja, ami azt jelenti, hogy a H-val együtt 2 S-merkaptánok is felszabadulnak (például metil-merkaptán CH 3SH).

2. számú feladat. A karbamid ammonifikációs folyamatában részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához készítsen rajzot. A karbamid ammónifikációjának folyamatának nyomon követésére használhatja a következő összetételű tápközeget (g / l desztillált víz): kálium- vagy nátrium-tartarát (borkősav, almasavat sózhat) - 5,0; karbamid - 5,0; NAK NEK 2 NRO 4 - 0,5; MgS04 7H 2O - 0,2.

A táptalajt 100 ml-es, egyenként 30 ml-es lombikokba öntjük, beoltjuk talajjal, és 25–30 °C-os termosztátba helyezzük. Az ammónia kimutatására egy piros lakmuszpapír csíkot akasztanak egy vattadugó alá. 3-5 nap elteltével a tenyészetet elemzik. Állítsa be az ammónia felszabadulását a piros lakmuszpapír kékjén.

Mikroszkópia.A karbamid ammonifikációjának kórokozóinak tanulmányozására a táptalaj felületén alig észrevehető filmből készítményt készítenek, és fukszinnal megfestik. A sejtek leggyakrabban mikroszkóp alatt láthatók. Urobacillus pasteurii (you. probatus), ritkábban - Planosarcina ureae (Pályázat 5. sz. ábra).

Ellenőrző kérdések és feladatok

a nitrogén mineralizációja. A fehérje-ammonifikációban részt vevő baktériumok.

Nukleinsavak lebontása.

A karbamid, a húgysav és a hippursav bomlása.

Nitrifikációs folyamatok jellemzése. A talajban nitrátokat termelő mikroorganizmusok.

Nitrátok és nitritek visszanyerése a természetben.

Denitrifikáció (disszimilációs nitrát redukció).

Az asszimilációs nitrát csökkentése.

Nitrogénmegkötés szabadon élő mikroorganizmusok által.

Asszociatív nitrogénkötés.

Szimbiotikus nitrogén rögzítés. A csomóbaktériumok jellemzői.

Csomóbaktériumok kölcsönhatása gazdanövényekkel. Bakteroidok kialakulása.

Nem hüvelyes növények szimbiotikus nitrogén rögzítése.

A nitrogénkötési folyamatok kémiája.

14. Töltse ki a 8-as számú táblázatot!

8. számú táblázat. A nitrogénciklus-folyamatok és a nitrogénvegyületek átalakulásában részt vevő mikroorganizmusok jellemzői

A karbamid ammonifikálása

A nitrifikáció I. fázisa

Szimbiotikus nitrogén rögzítés

9. TEVÉKENYSÉG

NITROGÉN VEGYÜLETEK MIKROGANIZMUSOK ÁTALAKÍTÁSA

Cél: A nitrogén ásványi vegyületeinek mikroorganizmusok általi átalakulási folyamatainak jellemzőinek tanulmányozása.

Feladatok

1. Tanulmányozni a nitrifikációs folyamatok (I, II fázis) lefolyásának sajátosságait és az azokban részt vevő mikroorganizmusokat.

2. Tanulmányozni a denitrifikációs folyamatok sajátosságait és az azokban részt vevő mikroorganizmusokat.

3. Tanulmányozni a nitrogénkötési folyamatok sajátosságait és az azokban részt vevő mikroorganizmusokat.

Anyagok és felszerelések.Lombik folyékony Ashby táptalajjal nitrogénfixálók tenyésztéséhez, Winogradsky táptalaj nitrifikálók tenyésztéséhez, Giltai táptalaj denitrifikálók tenyésztéséhez, berendezés mikropreparátumok festéséhez, mikroszkópok.

Alapfogalmak.Nitrifikáció (I és II fázis), nitrogén immobilizálás, asszimilációs nitrát redukció, disszimilációs nitrát redukció (denitrifikáció), nitrogén rögzítés szabadon élő mikroorganizmusokkal, asszociatív nitrogén rögzítés, szimbiotikus nitrogén rögzítés, leghemoglobin, nitrogenáz, nitrát.

Előrehalad

1. számú feladat. A nitrifikációs folyamatokban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozása, kép rajzolása. A nitrifikáló baktériumok felhalmozódására S. N. Vinogradsky táptalajt használnak (g / l desztillált víz):

A táptalajt sterilizáljuk, 1,0–1,5 cm-es rétegű lombikba öntjük, és üvegházhatású talajcsomóval megfertőzzük. A lombikokat vattadugóval lezárjuk, és a 14-21. napon 25–28 °C-os termosztátba helyezzük.

Mikroszkópia.A nitrifikáló baktériumok vizsgálatához a folyadékból lombikban mikropreparátumokat készítenek. A mikroszkóp látóterében ovális vagy coccoid sejtcsoportok láthatók Nitrosomonas (első fázis) és rövid rúdsejtek Nitrobacter (második fázis). A nemzetség képviselői Nitrosomonas (Pályázat 6. sz. ábra)ovális alakúak, bizonyos esetekben közelednek a labdához, mozgékonyak és egy hosszú flagellummal vannak felszerelve. Különböző típusok Nitrosomonas nagyon elterjedtek a talajban, és különböznek egymástól a sejtek méretében vagy alakjában, valamint a környezet aktív reakciójához való viszonyukban. A legtöbb tanult Nitrosomonas europea. A sejtek coccoidok vagy oválisak, 0,5-1,5 µm méretűek, mozgékonyak, hosszú poláris flagellummal. Nitrobacter - kis lekerekített, tojásdad vagy körte alakú pálcikák, mozdulatlanok, egyenként vagy kis csoportokba kapcsolva, nyálkahártya-kapszulával körülvéve(Pályázat 7. sz. ábra). E nemzetség baktériumai között két típust szokás megkülönböztetni: Nitrobacter winogradskii és Nitrobacter agilis.

Az ammóniumformát nitritté is oxidálják Nitrosocystis és Nitrosospira , nitritből nitrátba Nitrospina.

2. számú feladat. A denitrifikációs folyamatokat végrehajtó mikroorganizmusok tanulmányozásához rajzoljon egy képet. A denitrifikáló baktériumok felhalmozódására a következő táptalajt használjuk (g/l): Rochelle só - 20; KNO 3-2,0; K 2 NRO 4 - 0,5; MgS04 7H 2O - 0,2; FeSO 4 7H 2 Ó, nyomok. A táptalajt magas rétegben színültig nagy kémcsövekbe öntik és sterilizálják. Alaposan keverje össze a talajjal, hogy eltávolítsa a légbuborékokat, és fedje le egy gumicsővel, amelybe egy 2 oldalról nyitott, középső részen kitágult üvegcső kerül. A parafa kiszorítja a folyadék egy részét az üvegcsőbe. A parafa alatt nem lehetnek légbuborékok. A vazelinolajat a tápközeg feletti csőbe öntjük kis rétegben, hogy anaerob körülményeket hozzunk létre, és termosztátba helyezzük 30-35 ° C hőmérsékleten 5-6 napig.

Mikroszkópia.A szubsztrát közepéről tiszta pipettával cseppet veszünk, majd fix és festett preparátumot készítünk, amelyet ezután mikroszkóp alatt, immerziós rendszerrel megvizsgálunk. A készítményben a nem spóraképző gömbsejtek vagy rövid rudak dominálnak Paracoccus denitrificans (Bacterium denitrificans ) (melléklet 7. sz. ábra). Rochelle-sós táptalajon gyakran alakul ki P. stutzeri (Achromobacter stutzeri - 2,0 - 4,0 mikron méretű rúd alakú cellák, mobil) (melléklet 7. sz. ábra). Ebben az esetben a kultúra zöldessárga fluoreszkáló pigmentet képez. A denitrifikátorok közé tartoznak még: Pseudomonas aeruginosa - kis rudak (1,0 - 1,5 mikron méretűek), egy vagy páros, mobil, 1 - 2 poláris flagellát hordoznak. Gyakran megfigyelhető a táptalaj zöldülése, különösen citromsav-szén használatakor, ami a fejlődést jelzi Pseudomonas fluorescens - kis rudak (1,0 - 2,0 mikron méretűek), mozgékonyak, 3 - 4 poláris flagellával rendelkeznek.

3. számú feladat. A légköri nitrogén rögzítésében részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozása, kép rajzolása. Az Ashby táptalajt szabadon élő nitrogénfixáló anyagok felhalmozására használják. A tápközeg összetétele (g/l desztillált víz):mannit, glükóz vagy szacharóz - 20,0; NAK NEK 2 NRO 4 - 0,2; MgS04 - 0,2; NaCl - 0,2; K 2SO 4 - 0,1; CaCO3 - 5,0.

A táptalajt sterilizálás nélkül 100–150 ml térfogatú, 1–1,5 cm rétegű lombikba öntik, és üvegházhatású talajjal (1/3 teáskanál) fertőzik. A lombikokat vattadugóval zárjuk le, és 28–30 °C-os termosztátba helyezzük.

5-7 nap múlva barnásbarna Azotobacter film képződik a táptalaj felületén. A lombikban lévő folyadék habzik és vajsavszagot áraszt, ami baktériumok fejlődését jelzi a környezetben. Cl. pasteurianum.

Mikroszkópia.A felületi filmből fix mikropreparátumot készítünk. Az Azotobacter két leggyakoribb típusa: Azotobacter chroococcum - fiatal tenyészetben rúd alakú sejtjei vannak, mozgékonyak, 3-7 mikron méretűek(Pályázat 8. sz. ábra). A régi tenyészetben a sejtek coccoid, páros és szarcinszerű csomagok, általában nyálkahártya-kapszulával körülvéve. A sejtekben sok fényes volutin szemcse található. A sűrű táptalajokon lévő telepek nyálkásak, szétterülő vagy domborúak, színtelenek vagy sötétbarnától feketéig terjedőek; Azotobacter vinelandii - fiatal tenyészetben a sejtek rúd alakúak, 2-3 mikron nagyságúak. A régi tenyészetben a sejtek alakja gömb alakú. Egy csepp folyadékból gyógyszert készítenek Clostridium pasteurianum - mozgó rúd alakú sejtek, 3-7 mikron méretűek, egyenként vagy párban és rövid láncban elhelyezve(Pályázat 1.10. sz. ábra). A spórák oválisak, excentrálisan alakulnak ki, a spórákat hordozó sejtek citrom alakúak. Sok granulosa halmozódik fel a sejtekben. A telepek fehéresek, simák, fényesek.

Ellenőrző kérdések, lásd a 8. leckét.

10. TEVÉKENYSÉG

Cél:

Feladatok:

Az alkoholos erjedés mechanizmusának és kórokozóinak morfológiájának tanulmányozása.

Tanulmányozni a tejsavas fermentáció lefolyásának és típusainak mechanizmusát, kórokozóinak morfológiáját.

Az alkohol ecetsavvá való átalakulásának sajátosságainak és az ecetsavbaktériumok morfológiájának tanulmányozása.

A vajsavas fermentáció mechanizmusának és kórokozóinak morfológiájának tanulmányozása.

Anyagok és felszerelések. Sólé, kefir, sütőélesztő, sör, vajsavbaktérium táptalaj, készítményfestő berendezés, mikroszkópok.

Alapfogalmak.Alkoholos erjesztés, Pasteur effektus, homofermentatív tejsavas erjesztés, heterofermentatív tejsavas erjesztés.

Előrehalad

1. számú feladat. Az alkoholos fermentációban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához rajzoljon egy képet. 50 ml 20%-os szacharózoldatot és körülbelül 1 g élesztőt 10 ml (20%-os) szacharózoldattal hígítunk egy 250 ml-es lombikba. Zárja le, és tartsa a hőmérsékletet 35-40°C körül több napig.

Mikroszkópia.A gyakorlatban használt kultúrélesztők többsége a nemzetségbe tartozik Saccharomyces (Saccharomyces cerevisiae, rizs. 1. szám, 2 pályázat) és Schizosaccharomyces. Ezek az élesztők abban különböznek a vadon élő élesztőktől, hogy képesek ellenállni a magas koncentrációjú cukornak (akár 70%) és az alkoholnak (akár 14%), 4-6 pH-értéken fejlődnek, és kevesebb fermentációs mellékterméket képeznek.

2. számú feladat. A tejsavas fermentációban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához rajzoljon egy képet!A tejsavas fermentáció (homofermentatív fermentáció) baktériumainak megismeréséhez használhatunk kész tejsavtermékeket (aludttej, acidophilus, kefir) és sóoldatot (heterofermentatív fermentáció). Ezeket a termékeket egy tárgylemezre hurkolják és vékony kenetet készítenek. 3-5 percig festjük metilénkék vizes oldatával.

Mikroszkópia.A tejsavtermékekben leggyakrabban a homofermentatív fermentáció alábbi kórokozói találhatók: Streptococcus lactis A 0,5-1,0 mikron átmérőjű ovális coccusok (a függelék 9. sz. ábrája) a tenyészetben párban (diplococcusok) vagy rövid láncokban (streptococcusok) helyezkednek el, ritkábban egyetlen sejtben; Lactobacillus bulgaricus (A függelék 9. számú ábra) - egy nagy rúd (4-5 mikron hosszú), mozdulatlan, Gram-pozitív, egyedi sejtek és rövid láncok formájában helyezkedik el, az optimális fejlődési hőmérséklet 40-45 ° C; Lactobacillus acidophilus - morfológiájában közel áll a bolgárhoz, de eltérő a fejlődési hőmérsékleti optimuma - 37 °C.

A heterofermentatív fermentáció kórokozói között általábanLactobacillus brevis, Lactobacillus brassicae, Leuconostoc mesenteroidesés mások (sólé mikroflóra). A sóoldat vagy kefir felületén fehér vagy krémes bársonyos ráncos filmréteg jelzi a jelenlétet. Geotrichum candidum ( Oidium lactis) (melléklet 9. sz. ábra) - tejsavas erjedést mindig kísérő tejpenész.

3. számú feladat.Az alkohol ecetsavvá történő átalakulásában részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához rajzoljon egy képet.Erlenmeyer-lombikokba vékony réteg sört (0,5-1,0 cm3) öntünk. A lombikokat pamutdugóval zárjuk le, és 30°C-os termosztátba helyezzük. 5-7 nap elteltével leírják a képződött filmek természetét, a festett keneteket mikroszkóposan megvizsgálják.

Mikroszkópia.Az ecetsavbaktériumok a nemzetségben egyesülnekAcetobaktérium, típusú nézetAcetobacter aceti(Függelék 9. sz. ábra) gyengén mozgékony pálcika alakú 0,6-0,8 széles, 1,0-3,0 µm hosszú, egyesével, párban vagy láncban álló elliptikus sejtek képviselik. Gyakran involúciós formákat hoz létre duzzadt, elágazó vagy filiform formák formájában. Az ecetsavbaktériumok könnyen izolálhatók a sörből.

4. számú feladat.A vajsavas fermentációban részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozása. A hámozatlan burgonyát szeletekre vágjuk, térfogatának 1/3-ig megtöltjük vele a kémcsövet, csipetnyi krétát adunk hozzá, és színültig töltjük vízzel. A kémcsöveket 10-15 percre 80°C-os vízfürdőbe helyezzük. Ezután a kémcsöveket lezárjuk, és 25 °C hőmérsékletű termosztátba helyezzük0 C. 2-3 nap elteltével a folyadékban vajsavas fermentációjú baktériumok találhatók.

Mikroszkópia.A rögzített készítmények találhatókCl. pasteurianum, Cl. butiricum(Függelék 1., 10. sz. ábra) - lekerekített végű mozgatható botok, egyesek és párosítva. A régi tenyészetekben a sejt egyik végén spóra található.

Ellenőrző kérdések

Alkoholos erjesztés.

Élesztő. Forma, szerkezet, reprodukció és osztályozás.

Etil-alkohol oxidációja ecetsavvá.

A tejsavas fermentáció (homofermentatív típus) kémiája és kórokozói.

A tejsavas fermentáció kémiája és kórokozói (heterofermentatív típus).

Vajés acetobutil fermentáció.

Pektin anyagok vajtartalmú erjesztése.

A rostok anaerob lebomlása.

A rostok mikroorganizmusok általi oxidációja.

Töltse ki a 9. számú "Erjedési folyamatok jellemzői" táblázatot.

9. számú táblázat.A szénkonverziós folyamatok jellemzése (nitrogént nem tartalmazó vegyületek fermentációs és oxidációs folyamatai)

Kérdések az önálló tanuláshoz

Táplálkozási módszerek és tápanyagok bevitele a sejtbe.

A mikroorganizmusok táplálkozási igényei.

A mikroorganizmusok táplálkozásának típusai.

A mikroorganizmusok anyagcseréje. Erjedés, légzés, fotoszintézis.

11. TEVÉKENYSÉG

SZÉNVEGYÜLETEK ALAKULÁSA MIKROORGANIZMUSOK ÁLTAL

Cél:Fedezze fel a funkciókat különféle fajták erjedés és kórokozóik morfológiája.

Feladatok:

A pektin fermentáció mechanizmusának és kórokozóinak morfológiájának tanulmányozása.

Tanulmányozni a cellulóz aerob körülmények közötti átalakulásának sajátosságait és kórokozóinak morfológiáját.

Tanulmányozni az anaerob körülmények között zajló cellulóz fermentáció sajátosságait és kórokozóinak morfológiáját.

Anyagok és felszerelések. A pektin anyagok fermentációját, rostok lebontását végző mikroorganizmusok akkumulatív kultúrái, mikroszkópok, készítmények festésére szolgáló berendezések.

Alapfogalmak.Vajsav fermentáció, pektin, pektináz, cellulóz, celluláz.

Előrehalad

1. számú feladat.A pektin anyagok fermentációjában részt vevő mikroorganizmusok vizsgálata, kép rajzolása. A pektinpusztító baktériumok izolálására lenmag vagy csalán táptalajt használnak. A szárból 5-7 cm hosszú kévéket készítünk, kémcsövekbe helyezzük, csapvízzel felöntjük és 10-15 percig forraljuk. A forralással eltávolítják az extraktumokat, amelyek szénforrásként szolgálhatnak a kísérő vajsavbaktériumok számára. A vizet leeresztjük, a kémcsöveket új adag vízzel megtöltjük, a kémcsöveket pamutdugóval szorosan lezárjuk, és autoklávban 1 atm nyomáson 20 percig sterilizáljuk. Amikor a csövek lehűlnek, a táptalajt egy darab friss lenszalmával megfertőzzük. A fertőzött kémcsöveket 35°C-os termosztátba helyezzük. 3-5 nap múlva megkezdődik a pektin erjedési folyamata, a folyadék zavarossá válik és habzik.

Mikroszkópia.A pektin fermentációs baktériumok morfológiájának tanulmányozására élethosszig tartó készítményeket készítenek. A snopikot kivesszük a kémcsőből, egy csepp folyadékot egy tárgylemezre préselünk, fixet készítünk, és életre szóló készítményeket készítünk (Lugol oldatban). A sejtek láthatók a készítményenClostridium pectinovorumÉsClostridium felsineum, vegetatív és sporuláló, jóddal festett granulosa esetén sötétkék színben (melléklet 9. sz. ábra).

2. számú feladat.A rostok lebontásában részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához (anaerob körülmények) rajzoljon egy képet!Az anaerob formák akkumulációs kultúrájának elérésecellulózpusztító baktériumokhasználja az Imshenetsky környezetet. BAN BENkörülbelül 1-2 g szűrőpapírt vagy vattát adunk egy lapos fenekű kerek lombikba, és a tetejére töltjük a következő összetételű közeggel (g/l-ben): KNH4 HPO4 – 1,0; KN2 RO4 – 0,5; NAK NEK2 NRA4 – 0,5; CaCl2 – 0,03; pepton - 5; MgSO4 – 0,4; CaCO3 – 2,0; NaCl - 0,5; MnSO4 és FeSO4 lábnyomok;közepes pH 7,0-7,4. A környezetet kis mennyiségű szennyeződés fertőzi meg, a lombikot parafa dugóval lezárják, amelyen egy lyuk van a gázok kibocsátására, és 30-35 °C-os termosztátba helyezik. A választható körülményeket ebben az esetben a cellulóz jelenléte határozza meg, amely olyan szénforrás, amelyet csak a celluláz enzimmel rendelkező specifikus cellulózbontó baktériumok tudnak felvenni, valamint az anaerob körülmények. A táptalajba kis mennyiségben bevitt pepton erősen serkenti az erjedési folyamatot. 7-10 nap elteltével megkezdődik a cellulóz fermentációja, amely 2-3 hétig tart. A szűrőpapír erjedése közben enyhén nyálkás lesz, megsárgul és fokozatosan összeesik.

Mikroszkópia.Mikroszkóppal egy darab papírt. Anaerob körülmények között a cellulóz bomlási folyamatát a nemzetséghez tartozó baktériumok végzikClostridium. Cl. omelianskii(Függelék 9. sz. ábra) 8 mikronig terjedő hosszú, rúd alakú sejtek megjelenése, régi tenyészetekben körülbelül 10-15 mikron hosszúságú, egyesével vagy szálakba kapcsolva helyezkednek el. A spórák gömb alakúak, a sejt végén alakulnak ki, a sejt alsócomb alakú. Elszigetelődik a talajtól és a víztől. Az optimális növekedési hőmérséklet 30-35°C.

3. számú feladat.A rostok lebontásában részt vevő mikroorganizmusok tanulmányozásához (aerob körülmények) rajzoljon egy képet!Az aerob rostpusztító baktériumok izolálására Hutchinson táptalajt használnak. Közeg összetétel (g/l): K2 NRA4 – 1,0; NaCl - 0,1; CaCl2 – 0,1; FeCl3 – 0,01; MgSO4 – 0,3; NaNO3 - 2,5; közepes pH 7,2-7,3. Steril táptalajt 1,5-2,0 cm-es Erlenmeyer-lombikokba öntünk, a táptalajt talajcsomóval megfertőzzük, és egy redős szűrőt kúppal felfelé engedünk a táptalaj felületére. A lombikokat pamutdugóval lezárjuk, és 25-30°C-os termosztátba helyezzük 10-14 napra. A tápközeg és a levegő határán optimális feltételek jönnek létre a rostpusztító baktériumok táplálkozásához és aerob légzéséhez. Ebben a zónában a szűrőpapír megsemmisítésének legintenzívebb folyamata. 8-10 nap elteltével sárgás-narancssárga foltok jelennek meg a szűrőn a rostpusztító baktériumok telepei. A papír lebomlik, és a szűrő fokozatosan leülepszik az aljára.

Mikroszkópia.A megsemmisült rosttömegből egy mikrobiológiai hurokkal ellátott lombikban egy csepp folyadékban kenetet készítenek. Leggyakrabban a rendek képviselői megtalálhatók a készítményen.Légy baktériumokÉsCytophagalescsúszóbaktériumok csoportjai (melléklet 10. sz. ábra).NemzetségCytophagahosszú rúd alakú, hegyes végű, kissé ívelt (2-10 mikron) cellák képviselik. A telepek sárga, narancssárga, barna-barna, sima, nyálkás.

NemzetségСellvibrlokicsi, enyhén ívelt mozgatható rudak (2-4 mikron) képviselik. A telepek okkersárga nyálkahártyájúak. TekercsCellfalcicularövid, vastag ívelt rudak, hegyes végekkel (2,0 * 0,7 mikron).

Nemzetségszorániumfiatal tenyészetben vastag, enyhén ívelt rúd alakú sejteknek tűnik, lekerekített végekkel (2-5 mikron). A kultúra öregedésével termőtestek képződnek, amelyek mikrocisztákból állnak. A rúd alakú sejtek lerövidülnek, vastag membránnal borítják, szabálytalan körvonalakat kapva. Telepek élénk narancssárga, lila.

NemzetségPolyangiumszinte egyenes rúd alakú, lekerekített végű cellák képviselik (3,5-8 mikron). Az öregedéssel ovális mikrociszták képződnek, amelyek összefüggő és körte alakú termőtestek. A termőtestek sárga, narancssárga, közvetlenül az aljzaton ülnek.

A baktériumok mellett a penészgombák is részt vesznek a rostok aerob elpusztításában.Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Trichodermaés néhány aktinomycetes.

Ellenőrző kérdések, lásd a 10. leckét.

12. TEVÉKENYSÉG

A MIKROORGANIZMUSOK ÖKOLÓGIÁJA

Cél:A környezeti tényezők mikroorganizmusok növekedésére és fejlődésére gyakorolt ​​hatásának vizsgálata.

Alapfogalmak.Kötelező pszichrofilek, pszichrotróf mikroorganizmusok (fakultatív pszichrofilek), termofilek, ozmotoleráns mikroorganizmusok, gallofilek, liofilizálás, obligát aerobok és anaerobok, mikroaerofilek, aerotoleráns anaerobok, antiszeptikumok.

Ellenőrző kérdések

A hőmérséklet hatása a mikroorganizmusok növekedésére és fejlődésére. A baktériumok ökológiai csoportjai a hőmérséklet függvényében.

A páratartalom hatása a mikroorganizmusok növekedésére és fejlődésére.

A fény és a különböző sugárzások hatása a mikroorganizmusok növekedésére és fejlődésére. A mágneses tér hatása.

Az oxigénkoncentráció hatása a mikroorganizmusok növekedésére és fejlődésére.

A környezeti reakció hatásaa mikroorganizmusok növekedéséről és fejlődéséről. A baktériumokra mérgező vegyületek és ionok.

A mikroorganizmusok adaptív reakciói.

13. TEVÉKENYSÉG

A BAKTÉRIUMOK ANTIBIOTUMOKRA VALÓ ÉRZÉKENYSÉGÉNEK MEGHATÁROZÁSA

Cél:A mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása.

Feladatok:

1. Határozza meg a mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységét agarba történő diffúzióval papírkorongok segítségével

Anyagok és felszerelések.Petri-csészék MPA-val, steril, antibiotikus oldattal megnedvesített korongok, szaprofita baktériumok és penészgombák tiszta kultúrái, pipetták, spirituális lámpák, spatulák.

Alapfogalmak.Antibiotikumok, bakteriosztatikus és baktericid hatások, R-faktorok, rezisztencia.

Előrehalad

1. számú feladat.Határozza meg a mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységét papírkorongok segítségével agarba történő diffúzióval.

A mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározására szolgáló korongdiffúziós módszer a papírkorong körüli növekedésgátló zóna átmérőjének antibiotikummal történő rögzítésén alapul. A vizsgált mikrobákkal beoltott Petri-csészék tápagar felületére antibiotikummal impregnált papírkorongokat, ill.a csészéket 37 °C-on inkubáljuk. A körülötte lévő mikrobiális növekedést gátló zóna jelenlétekorongok jelzik a kórokozó gyógyszerrel szembeni érzékenységét, a növekedésgátló zóna hiánya rezisztenciát jelez.

Definíció haladás.A mikroorganizmusok tenyészetét steril Petri-csészékre visszük fel MPA-val. Napi húsleves tenyészetet használunk oltóanyagként - 0,2 ml baktériumszuszpenziót viszünk fel az MPA felületére, és a csésze rázásával egyenletesen elosztjuk, majd pipettával szívjuk le a felesleges folyadékot.

A csészéket 30-40 percig szobahőmérsékleten szárítjuk. Ezután különféle antibiotikumokkal impregnált korongokat helyeznek a kioltott táptalaj felületére csipesszel. A korongokat szorosan felvisszük a felületre, hogy szorosan érintkezzenek a közeggel. A korongokat egyenlő távolságra kell elhelyezni egymástól és körülbelül 2 cm-re a csésze szélétől. A csészéket fejjel lefelé helyezzük termosztátba, vagy tegyünk egy kör szűrőpapírt a pohár fedele alá, hogy elkerüljük a pázsit kondenzvíz általi erózióját, és 37°C-on 18 órán át inkubáljuk.

Az eredmények értékelése.Vonalzó segítségével határozza meg a mikrobiális növekedést gátló zónák átmérőjét a korongok körül, beleértve magának a korongnak az átmérőjét is. A növekedésgátlási zónán belüli egyedi telepeket vagy a mikroorganizmus növekedésének vékony filmrétegét nem veszik figyelembe. A mikrobiális növekedést gátló zónák hiánya a korongok körül azt jelzi, hogy a mikroba nem érzékeny erre az antibiotikumra. A legfeljebb 10 mm átmérőjű mikrobiális növekedést gátló zónával a törzs kissé érzékenynek tekinthető. A 10 mm-nél nagyobb mikrobiális növekedést gátló zóna a törzs érzékenységét jelzi. Hogyan több zóna növekedési retardáció, annál nagyobb a mikroorganizmusok érzékenysége az antibiotikumra. Az eredményeket rögzítse a 10. számú táblázatban.

10. számú táblázat.A mikroorganizmusok érzékenysége az antibiotikumokra.

A sztreptomicin antibiotikus tulajdonságai. A penicillin antibiotikus tulajdonságai. 14. TEVÉKENYSÉG AZ ORVOSI MIKROBIOLÓGIA ALAPJAI Cél:Mikroorganizmusok tanulmányozása - állatok és emberek kórokozói. Irodalom Lebedeva M.N. Mikrobiológia. - M .: "Orvostudomány", 1969. A mikrobiológia, virológia és immunológia alapjai / Szerk. Szerkesztette: Vorobyov A.A., Krivoshein Yu.S. – M.: Masterstvo, 2001. Megbeszélésre váró kérdések A kórokozó coccusok jellemzése a staphylococcusok példáján. A bőr gyulladásos-gennyes betegségei. Vérmérgezés. A kórokozó coccusok jellemzése a streptococcusok példáján. Lokalizált pyoinflammatorikus fertőzések, mandulagyulladás, skarlát. A kórokozó coccusok jellemzése a pneumococcus példáján. Tüdőgyulladás. A kórokozó coccusok jellemzése a meningococcus példáján. Agyhártyagyulladás. A kórokozó coccusok jellemzése a gonococcus példáján. Gonorrhoea, blenorrhoea. Gram-negatív, nem spóraképző baktériumok jellemzése a pestisbacilus példáján. Pestis. Gram-negatív, nem spóraképző baktériumok jellemzése a tularemia bacillus példáján. Tularemia. Gram-negatív, nem spóraképző baktériumok jellemzése Brucella példáján. Brucellózis. A bélbaktériumok családja az Escherichia coli példáján. A tífusz és paratífusz baktériumok csoportjának jellemzői. Tífusz és paratífusz. Az ételmérgezés kórokozói. Szalmonellózis. A vérhas kórokozóinak jellemzői. A vérhas típusai. A kolera vibrio jellemzői. A kapszulabaktériumok szerkezete a Klebsiella példáján. A lépfene bacilusok jellemzése. A lépfene formái. A hemofil baktériumok jellemzői a szamárköhögés példáján. Patogén anaerobok a gázgangréna kórokozói példáján. Patogén anaerobok a tetanus bacillus példáján. Patogén anaerobok a botulizmus kórokozóinak példáján. A diftéria bacillus jellemzői. Saválló baktériumok jellemzése a tubercle bacillus és a lepra bacillus példáján. Patogén gombák jellemzése az aktinomicéták példáján. Dermatomycosis. A patogén spirocheták jellemzése a halvány treponema példáján. Szifilisz. A kórokozó spirocheták jellemzői a visszaeső lázspirocheta példáján. Ez az útmutató röviden ismerteti elméleti alapja egészségügyi mikrobiológia, valamint néhány kísérlet a levegő, a víz és a talaj mikroflórájának különböző mutatóinak meghatározásához. Vegyes két részből áll - Általános Alkalmazott Orvosi Mikrobiológia és Klinikai Mikrobiológia. Az első rész a mikrobiológiai kutatás főbb módszereit, a fertőző betegségek specifikus terápiájának és megelőzésének módszereit, a második pedig a laboratóriumi... 1,32 MB hozzáadva 2011.06.11 Oktatóanyag. KemTIPP. - Kemerovo, 114 p. Mikrobiológia tantárgy és feladatai. A mikroorganizmusok alapvető tulajdonságai A mikrobiológia fejlődésének történeti vázlata. A modern mikrobiológia fejlődésének kilátásai és eredményei in nemzetgazdaság, Élelmiszeripar. A szisztematika alapelvei. Strukturális szervezés mikroorganizmus...