TANKÖNYVEK ÉS TANÍTÁSI SEGÍTSÉGEK DIÁKOKNAK

FELSŐOKTATÁSI INTÉZMÉNYEK

V. N. KISLENKO

MŰHELY

ÁLLATORVÁSRÓL

MIKROBIOLÓGIA

ÉS IMMUNOLÓGIA

A minisztérium jóváhagyta Mezőgazdaság RF be

minőség tanulási útmutató egyetemisták számára

oktatási intézmények szakos hallgatók

"Állatgyógyászati"

Moszkva "kolosszus" 2005

UDC 619: 579 (075.8) BBK 48ya73 K44

Szerkesztő T.S. Moyaochaeva
Bírálók: az állatorvos-tudományok doktora, professzor V. I. Pleshakova(Veete Intézet

az Omszki Állami Agráregyetem orrgyógyászata); az állatorvostudományok doktora, professzor AZT. I. Ba

Risnyikov(Az Altáji Állami Agráregyetem Állatorvostudományi Intézete)

Kislenko V. N.

K44 Workshop az állatgyógyászati ​​mikrobiológiáról és immunológiáról. - M.: KolosS, 2005.- 232 p. l .: ill. - (Tankönyvek és tankönyvek felsőoktatási intézmények hallgatói számára). ISBN 5-9532-0332-2

A workshop két részből áll. Az "Általános mikrobiológia" szakasz információkat tartalmaz a bakteriológiai laboratóriumban végzett munka szabályairól, valamint a mikroorganizmusok tanulmányozásának fő mikrobiológiai, genetikai és immunológiai módszereiről. A "Fertőző betegségek kórokozói" részben a laboratóriumi diagnosztika módszerei, a kórokozók megkülönböztetése, valamint a felhasznált biológiai készítmények listája található.

Irányelvek a tanárok gyakorlati órák lebonyolításához.

Csatoltuk az elektronikus adathordozón (CD-lemezen) végzett tesztsorozatokat általános és speciális mikrobiológiához, immunológiához, valamint egy elméleti kurzushoz.

A felsőoktatási intézmények hallgatói számára az "Állatorvos" szakterületen.

BEVEZETÉS

Az állatorvosi laboratóriumok az állami állat-egészségügyi szolgálat intézményei, amelyek tevékenysége az állattenyésztés jólétének biztosítására, az állatok megbetegedésének és elhullásának megelőzésére és megszüntetésére, valamint a lakosság védelmére irányul az állatok és az emberek közös betegségeitől. Kinevezés szerint az állatorvosi laboratóriumok körzeti, járásközi (övezeti), regionális (területi) és köztársaságiak.

Az állatorvosi laboratóriumok fő feladata a haszonállatok, köztük a madarak, a prémes állatok, a halak és a méhek betegségeinek pontos diagnózisa, valamint a hús, tej és egyéb állati és növényi eredetű élelmiszerek vizsgálata. A laboratóriumok is végeznek tudományos munka, bizonyos biostimulánsok, antibiotikumok stb.

A laboratóriumi kutatás anyaga vér, vizelet, köpet, tej, széklet, az állat élete során nyert tályog (genny) tartalma; parenchymás szervek vagy egyéb szövetek darabjai haláluk után, környezeti tárgyak (víz, levegő, talaj, takarmány, növények, ápolószerek lemosása) mintái. A laboratóriumban lévő anyagot bakteriológiai, szerológiai, szövettani, biokémiai, mikológiai és toxikológiai módszerekkel vizsgálják, a szükséges feltételeket(speciálisan kijelölt helyiségek, berendezések, mikroklíma stb.).

A laboratórium külön épületben található, távol az utaktól. Kellett volna felvételi osztály, patoanatómiai, bakteriológiai, szerológiai, biokémiai és virológiai osztályok, valamint speciális helyiségek termosztátok, mosogatógépek, autokláv számára. A mosogatóban asztalok, mosogató, hideg-meleg vízellátás, gáz- vagy villanytűzhely, mosogatott edények állványai, páraelszívó, zománcozott fürdőkádak, mosdókagylók és egyéb edények, savoldat üvegedényekben pipetták, tárgylemezek és egyéb edények fertőtlenítésére. Külön helyiség van a bakteriológiai konyha (környezet-kőzet) számára, ahol a mikroorganizmusok tenyésztéséhez táptalajokat, valamint sterilizáláshoz szükséges edényeket készítenek. Itt a szekrényekben steril edényeket tárolnak és jól csomagolnak vegyi anyagok, Alkatrészek kulturális média.

Az aszeptikus körülmények között végzett munka elvégzéséhez speciális izolált helyiségek vannak felszerelve - dobozok(angolul box - box), amely magából a dobozból és az elődobozból áll. Asztali dobozokat, tárgyakat és levegőt is használnak, amelyeket UV lámpákkal fertőtlenítenek, valamint lamináris áramlású szekrényeket, ahol aktív levegőelvezetést is alkalmaznak.

A laboratóriumi állatokat (fehér egerek, tengerimalacok, fehér patkányok, nyulak stb.) viváriumok. A vivárium rendszerint egészséges donor juhokat is tartalmaz, amelyek vérét a komplementkötési reakcióhoz (CFR) és a táptalaj készítéséhez használják fel. A fertőzött laboratóriumi állatokat elkülönített helyiségben tartják.

Ezen kívül az épületben találhatók a szakemberek, kiszolgáló személyzet helyiségei, vezetői iroda, könyvtár, mérlegterem, öltöző, raktár stb.

A megfelelő tisztaság megőrzése érdekében a szobák padlóját linóleummal vagy csempével borítják. A falak és a mennyezetek általában simaak (párkányok és díszlécek nélkül), lekerekített sarkokkal, világos színekkel, olajfestékkel festve. A mennyezet mésszel meszelhető. Kívánatos a falakat műanyaggal vagy csempével burkolni a padlótól a mennyezetig.

A laboratóriumban legyen hideg-meleg víz, csatornázás, lábbal működtethető, naponta ürítendő, mosott és fertőtlenített szemetes, törölköző, szappan és fertőtlenítő oldat. A szobákban csak a legszükségesebb felszerelések találhatók: asztalok, kis felszerelések tárolására szolgáló szekrény, festékek, reagensek, edények, szerszámok stb. Az asztalok általában az ablakok elé kerülnek elhelyezésre. Legyenek stabilak, kényelmesek, 80 cm magasak, peremesek. Az asztalok felületét műanyag vagy linóleum, üveg vagy fehér speciális festék borítja. Az asztalra helyezzük a mikroszkópot, valamint a bakteriológiai munkához szükséges tárgyakat.

A bakteriológiai kutatási módszer általában magában foglalja a mikroszkópos vizsgálatot, a kórokozó tiszta tenyészetének és a laboratóriumi állatok fertőzésének (biológiai minta) tulajdonságainak izolálását és vizsgálatát. Az osztályvezető vagy a laboratórium igazgatója által aláírt bakteriológiai elemzés eredményeit csak tisztviselőknek kell jelenteni: állatorvosnak, állatorvosnak, vállalkozásvezetőnek.

Mikrobiológiai laboratóriumi berendezések.

A laboratóriumi munkához a következő műszerek és berendezések szükségesek: biológiai merülő mikroszkópok kiegészítő eszközökkel (világító, fáziskontraszt készülék, sötétmezős kondenzátor stb.), lumineszcens mikroszkópok, termosztátok, sterilizáló berendezések, pH-mérők, eszközök

desztillált víz kinyerése (desztillátor), centrifugák, műszaki és analitikai mérlegek, szűrőberendezések (zeittsee szűrő, stb.), vízfürdők, hűtőszekrények, vattadugó készítésére szolgáló készülékek, szerszámkészlet (bakteriológiai hurkok, spatulák, tűk, csipeszek, laboratóriumi edények (kémcsövek, palackok, matracok, matracok, tészta edények), és beosztásos pipetták) stb.

A laboratóriumban külön hely van a mikroszkopikus készítmények festésére, ahol speciális színezék oldatok, alkohol, savak, szűrőpapír stb. találhatók. Minden munkahely gázégővel vagy spirituális lámpával, fertőtlenítő oldattal ellátott tégellyel van felszerelve. Mert napi munka a laboratóriumnak rendelkeznie kell a szükséges tápközegekkel, kémiai reagensekkel, diagnosztikai készítményekkel és egyéb laboratóriumi anyagokkal. A nagy laboratóriumokban termosztatikus helyiségek vannak a mikroorganizmusok tömeges tenyésztésére, szerológiai vizsgálatok felállítására.

A következő berendezések tenyésztésére, tenyészetek tárolására, laboratóriumi üvegedények sterilizálására és egyéb célokra szolgálnak:

1. 
   Termosztát. Állandó hőmérsékletet fenntartó készülék. Számos mikroorganizmus szaporodásához az optimális hőmérséklet 37 "C. A termosztátok levegő és víz.
2. 
   Mikroanaerosztát. Berendezés mikroorganizmusok anaerob körülmények közötti tenyésztésére.
3. 
   Hűtőszekrények. Mikrobiológiai laboratóriumokban használják mikroorganizmus-kultúrák, táptalajok, vér, szérumok, vakcinák és egyéb biológiai készítmények körülbelül 4 °C hőmérsékleten történő tárolására. A készítmények 0°C alatti tárolására alacsony hőmérsékletű hűtőszekrényeket terveztek, amelyekben a hőmérsékletet -20°C és az alatt tartják.
4. 
   Centrifugák. Mikroorganizmusok, eritrociták és egyéb sejtek ülepedésére, inhomogén folyadékok (emulziók, szuszpenziók) elválasztására használják. A laboratóriumokban különböző üzemmódú centrifugákat használnak.
5. 
   Szárító és sterilizáló szekrény (Pasteur sütő). Laboratóriumi üvegedények és egyéb anyagok levegős sterilizálására tervezték.
6. 
   Gőzsterilizáló (autokláv). Nyomás alatti gőzsterilizálásra szolgál. A mikrobiológiai laboratóriumokban különféle típusú (függőleges, vízszintes, álló, hordozható) autoklávokat használnak.

A mikrobiológiai laboratóriumban végzett munka szabályai.

A mikrobiológus elsősorban tiszta mikroorganizmuskultúrákkal foglalkozik, amelyek egyetlen sejt utódai. Mivel a levegőben és a laboratóriumi tárgyak felületén (asztalokon, műszereken, műszereken, valamint ruhákon, kezeken stb.) mindig sokféle mikroorganizmus található, ezért folyamatosan ügyelni kell a vizsgált kultúrák tisztaságának megőrzésére. Ezért a munka során mikrobiológiai laboratórium bizonyos szabályokat szigorúan be kell tartani, ezek egyike a tisztaság fenntartása, beleértve az összes helyiség napi higiénikus takarítását.

Különféle fertőtlenítési módszerek léteznek a levegőben és a felületeken lévő mikroorganizmusok elpusztítására.

A laboratórium levegőjét részben szellőztetéssel tisztítják. A szellőztetés drámaian csökkenti a mikroorganizmusok számát a levegőben, különösen akkor, ha jelentős hőmérséklet-különbség van a helyiségen kívül és belül. A szellőztetés időtartama legalább 30 ... 60 perc.

A légfertőtlenítés hatékonyabb és leggyakrabban használt módszere az ultraibolya sugárzás (UVR), amely magas antimikrobiális hatással rendelkezik, és nemcsak a vegetatív sejtek, hanem a mikroorganizmusok spóráinak pusztulását is okozza. A gyenge áthatolóképesség miatt az ultraibolya sugárzás nem jut át ​​a közönséges üvegen, és könnyen elnyeli a porszemcséket. Ezért a sterilizáláshoz az expozíciós idő 30 perctől több óráig terjed, a levegőszennyezettség mértékétől függően.

A germicid lámpákat (UFL) UV-sugárzás forrásaként használják. Az emitter bennük egy elektromos ív, amely alacsony nyomású higanygőzben fordul elő, és az ultraibolya tartományban lineáris spektrumot bocsát ki, amelynek energiájának több mint 80%-a 2,5 nm-es hullámhosszon esik.

A baktériumölő lámpa egy üvegcső, amelyet két elektromos érintkező közé szerelnek, és egy fojtótekercsen keresztül csatlakoznak a hálózathoz. A cső speciális üvegből készül, amely minden 2,5 nm hullámhosszú sugarat továbbít, és késlelteti a 2 nm-nél rövidebb hullámhosszú sugárzást. Nem szabad elfelejteni, hogy az UV-sugárzás a szem szaruhártya akut gyulladását okozza, jellegzetes könnyezéssel és fényfóbiával, röviddel a besugárzás után. Ezért annak megakadályozása érdekében, hogy a közvetlen vagy visszavert ultraibolya sugarak a szemet befolyásolják, védőszemüveget kell használni. Lehetetlen kis szobákban lenni bekapcsolt baktériumölő lámpával.

A mikrobiológiai laboratóriumban a padlót, a falakat és a bútorokat különféle fertőtlenítő oldatokkal töröljük át. A porszívózás eltávolítja a port és a mikroflóra jelentős részét a tárgyakról. Fertőtlenítő oldatként leggyakrabban 0,5 ... 3%-ot használnak. vizes oldat klóramin. Különös gondot kell fordítani az asztal felületének fertőtlenítésére, amelyen mikroorganizmusokkal dolgoznak. Munkavégzés előtt és után is le kell törölni fertőtlenítő oldattal. Extra elemek nem helyezhetők el az asztalon. Minden reagenst és oldatot fel kell címkézni és szigorúan meghatározott helyeken kell elhelyezni. A laboratóriumban enni, inni és dohányozni tilos. A munkát fürdőköpenyben kell végezni.

Laboratóriumi körülmények között a mikroorganizmusokat szilárd és folyékony táptalajokon tenyésztik, amelyeket kémcsövekbe, lombikba vagy Petri-csészékbe öntenek. Az edényeket és a táptalajokat előzetesen sterilizálják. A mikroorganizmus-sejtek steril környezetbe történő bejuttatását oltásnak vagy oltásnak nevezik. A mikroorganizmusok vetése (vagy újravetése) bizonyos szabályok szigorú betartását követeli meg annak érdekében, hogy a vizsgált tenyészetet megóvják az idegen mikroorganizmusokkal való szennyeződéstől.

A mikroorganizmusok beoltása steril környezetben a legjobb speciális helyiségekben - dobozokban. A boksz egy kis, elszigetelt helyiség, amelyet válaszfallal két részre osztanak. A doboz fő dolgozószobájába az előszobán keresztül jutunk be, amelynek tolóajtója van, ami kizárja a levegő éles mozgását, és ennek következtében az idegen mikroflóra kívülről való bejutását. A boxfelszerelések közé tartozik a könnyen tisztítható felületű asztal, szék, gáz- vagy alkoholégők, speciális állványba szerelt vagy a box mennyezetére szerelt baktériumölő lámpa. Kényelmes, ha a dobozban van egy segédasztal, amelyre a munka során szükséges tárgyak kerülnek. A doboz összes berendezését, annak falait, padlóját és mennyezetét rendszeresen lemossák és fertőtlenítő oldattal letörlik. Munka előtt a dobozt baktericid lámpával 40...60 percig besugározzuk.

A vetés után a mikroorganizmusokat tenyésztő kémcsöveket vagy más edényeket termosztátokba helyezik, ahol termosztátok segítségével állandó hőmérsékletet tartanak fenn. Az ártalmatlanítandó mikrobiális tenyészeteket tartalmazó edényeket autoklávozzák, hogy a sejteket mosás előtt elpusztítsák. Sűrű közeggel ellátott edényekbe fertőtlenítő oldatot öntünk, amelyet egy nap múlva eltávolítunk, és az edényeket elmossuk. A mikroorganizmus-tenyészetek gondatlan kezelése bakteriális aeroszol képződéséhez vezet, amely veszélyt jelent az alkalmazottak egészségére.

A laboratóriumok, valamint a mikrobiológiai tanszékek minden dolgozójának, végzős hallgatónak, az órákra érkező és hallgatói kutatókörökben dolgozó hallgatóknak a fertőző anyagokkal (kórokozó mikrobák kultúrája, kísérletileg fertőzött állatok tetemei, beteg állatok ürülékei, vér stb.) történő munka megkezdése előtt meg kell ismerkedniük és szigorúan be kell tartaniuk az alábbi munka- és bakteriológiai laboratóriumi szabályokat az állatorvosi laboratóriumban:

A laboratórium területére csak speciális ruhában léphet be: pongyolában, fehér sapkában vagy sálban. A pongyola legyen szorosan begombolva, a haj sapka alá bújva;

Ne vigyen be semmilyen tárgyat vagy élelmiszert a laboratóriumba. Az aktatáskákat és táskákat külön erre a célra kialakított helyen hajtogatják;

a laboratóriumban enni, inni és dohányozni szigorúan tilos;

minden alkalmazott (hallgató) bizonyos létszám alatt munkahelyet, mikroszkópot és egyéb tartozékokat kap;

a munkahelyen csak egy meghatározott feladatra legyen felszerelés. Általában ez egy festékkészlet, egy lombik desztillált vízzel, egy leeresztő csésze, tiszta és használt pohárral ellátott üvegek, bakteriológiai hurok, állvány, egy edény fertőtlenítő oldattal;

a munka megkezdése előtt ellenőrizni kell a készülékek, edények, gázégők (alkohollámpák) stb. elérhetőségét és használhatóságát. A megfigyelt hiányosságokat és meghibásodásokat jelenteni kell a felelős személynek, az osztályteremben pedig a tanárnak;

a robbanás elkerülése érdekében nem lehet egy szellemlámpát (vagy gázégőt) meggyújtani egy másikból; csak gyufát használjon;

ne érintse meg az elektromos hálózat vezetékeit és érintkező részeit fémmel vagy más tárgyakkal;

a tanulók a tanár vagy a kísérők tudta nélkül ne kapcsolják be az elektromos készülékeket és berendezéseket;

a tanulók csak a tanár engedélyével kezdik meg a feladat elvégzését; a munka menetének szigorúan meg kell felelnie a vizsgált módszernek;

mindegyik: a munkavállalónak és a tanulónak ügyelnie kell a munkavégzés rendjére, tisztán kell tartania a munkahelyet és a berendezéseket;

az edzéseken használt anyagokat különösen veszélyesnek tekintik;

a kutatásra küldött anyag kicsomagolásakor ügyelni kell: az üvegek külsejét fertőtlenítő oldattal áttöröljük, és csak tálcákra, küvettákra helyezzük;

a kapott anyag tanulmányozása során és a baktériumtenyészetekkel végzett munka során betartják a bakteriológiai gyakorlatban általánosan elfogadott technikai módszereket, amelyek kizárják a dolgozó fertőzésének lehetőségét;

a fertőző betegségek kórokozóinak tanulmányozása során a hallgatóknak meg kell tanulniuk a biztonsági előírások jellemzőit, amikor meghatározott kórokozókkal dolgoznak;

a kísérleti (laboratóriumi) állatok tetemeinek boncolása speciális ruházatban, felszerelt asztalon történik szükséges eszközöket erre a célra viasszal (vagy paraffinnal) töltött küvetta használata. Felbontás után tilos szerszámokat az asztalra tenni: fertőtlenítő oldattal ellátott pohárba helyezik, vagy égő lángja fölött elégetik;

ha folyékony fertőzött anyaggal dolgozik, használjon pipettához csatlakoztatott gumiballonokat;

ha a munka során a kóros anyag véletlenül az asztalra kerül, fertőtlenítő oldattal megnedvesített törlőkendővel azonnal eltávolítjuk. A fertőzött anyaggal való érintkezés esetén a bőrön, a kötőhártyán, a szájüregben sürgősségi intézkedéseket kell tenni a fertőtlenítés érdekében;

a munka végén a kóros anyagot, a felhasznált mikroorganizmus-tenyészeteket, a műszereket és az asztal felületét fertőtlenítjük;

az óra végén a tanulóknak baktériumtenyészeteket és egyéb anyagokat kell átadniuk a tanárnak, rendbe kell tenniük a munkahelyet. A tenyészetet tartalmazó csöveket, készítményeket (keneteket) és egyéb tárgyakat a laboratóriumból kivinni szigorúan tilos;

a további munkához szükséges kóros anyagokat és baktériumkultúrákat zárt hűtőszekrényben vagy széfben tárolni kell;

Mielőtt elhagyná a laboratóriumot, le kell vennie a köpenyt, alaposan kezet kell mosnia és jódozott alkohollal kell kezelnie. A laboratóriumot köpenyben elhagyni tilos;

A mikrobiológiai oktatáson a munkavégzés és a biztonsági óvintézkedések betartását a kísérők ellenőrzik. A tanulók az első órán megismerkednek a Mikrobiológiai Tanszéken végzett munkavégzés biztonsági óvintézkedéseivel, amit a naplóba írnak alá.

A fenti szabályok betartásával a laboratóriumban dolgozó munkatárs biztosítja a manipulációk sterilitását és megakadályozza a laboratóriumon belüli és laboratóriumon kívüli szennyeződések előfordulását.

Laboratóriumi nyilvántartások vezetése. Notebook for laboratóriumi munka dokumentumként szolgál, amely lehetővé teszi a kapott adatok helyességének ellenőrzését. Tartalmaznia kell a munka elvégzésére vonatkozó információkat. A nyilvántartást gondosan, áttekinthetően és meghatározott sorrendben kell vezetni, például: 1) a kísérlet megnevezése, a beállítás és a befejezés dátuma; 2) a vizsgálat tárgya; 3) a kísérlet végrehajtásának feltételei; 4) az alkalmazott elemzési módszer alapelve; 5) a kísérlet eredményeit.

A kapott eredményeket részletesen ismertetjük, a digitális anyagot táblázatokban, szükség esetén grafikonokban, diagramokban, rajzokban összegezzük. Minden laboratóriumi munka a saját megfigyeléseivel és következtetéseivel záruljon, amelyeket a munkafüzetben rögzítenek.

A munka során a hallgatók elsajátítják a mikroszkópia technikáját és módszereit, megismerkednek a mikroorganizmusok különböző csoportjainak képviselőinek morfológiájával, elsajátítják a tiszta kultúrák elkülönítésének és azonosításának megközelítését, tanulmányozzák a környezeti feltételek és tényezők hatását a mikroorganizmusok különféle salakanyagainak növekedésére és képződésére, valamint megismerkednek a baktériumok genetikai kutatásának néhány módszerével.

ÁLTALÁNOS MIKROBIOLÓGIA

Szövetségi Oktatási Ügynökség

Állami oktatási intézmény

"Irkutszk Állami Egyetem»

MIKROBIOLÓGIAI KIS MŰHELY

Oktatási segédlet

Irkutszk 2009

UDC 579(076.5)

Megjelent az Irkutszki Állami Egyetem szerkesztői és kiadói tanácsának határozata alapján

Zhilkin workshop a mikrobiológiáról: Tankönyv-módszer. juttatás diákoknak. magasabb tankönyv intézmények a „mikrobiológia”, „biológia” és „élettan” szakokon.

6. A mikrobiális tömeg nem szennyezheti a kezet, az asztalt és a környező tárgyakat. A kiömlött mikrobaszuszpenziót fertőtlenítőszerrel semlegesítik.

7. A munka végeztével a tenyészeteket átadjuk a tanárnak, a kimagozott kémcsöveket, csészéket termosztátba helyezzük.

8. A bakteriológiai hurkokat, tűket, csipeszeket és egyéb fémtárgyakat a mikroorganizmusokkal való érintkezés után alkohollámpa lángjában elégetjük, és speciális állványba helyezzük.

9. A használt tárgylemezeket és fedőlemezeket, pipettákat, spatulákat stb. 3–5%-os karbolsavoldatba vagy más fertőtlenítő oldatba helyezzük.

10. A kémcsövekben, Petri-csészékben stb. kimerült tenyészeteket napközben fertőtlenítő oldatokkal semlegesítjük, majd az edényeket felforraljuk és mossuk.

11. Szigorúan be kell tartani a személyes higiéniát - a munka befejezése után alaposan mosson kezet szappannal és vízzel.

12. Az elektromos készülékekkel és vegyszerekkel végzett munka során be kell tartani a biztonsági óvintézkedéseket.

SZÖVETSÉGI OKTATÁSI ÜGYNÖKSÉG

KARACSAYEV-CIRCASSI ÁLLAMI TECHNOLÓGIAI AKADÉMIA

Állati Termékek Termelési Technológiai Tanszék

MIKROBIOLÓGIA

MÓDSZERTANI UTASÍTÁSOK

laboratóriumi és gyakorlati órákra hallgatóknak

mezőgazdasági intézet

Cserkeszk - 2010

alapján összeállított egy példaértékű ill működő programok a "Mikrobiológia" tanfolyamon az állammal összhangban oktatási színvonal felsőfokú szakmai végzettség a 110305 "Mezőgazdasági termékek előállításának és feldolgozásának technológiája" és a 110201 "Agronómia" szakon (2000).

A TPPZH Minisztériumának ülésén megtárgyalva (2009. július 2-i jegyzőkönyv)

A Mezőgazdasági Intézet módszertani bizottsága jóváhagyta (2001.01.01. 6. sz. jegyzőkönyv). Megjelent a Karachay-Cherkess Állami Technológiai Akadémia oktatási és módszertani tanácsának határozata alapján (2001.01.01-i jegyzőkönyv)

Összeállította: A biológiai tudományok kandidátusa, egyetemi docens , az agrártudományok kandidátusa, egyetemi docens , helyettes

Ellenőrzők: – a biológiai tudományok kandidátusa

Agronómiai Tanszék docense

A "TPPZh" tanszék docense

Szerkesztő: Ph.D. Tudományok, egyetemi docens
Tartalom

Bevezetés…………………………………………………………………………….. 6

1. Mikroszkópia…………………………………………………………………….. 7

1.1. Fénymezős mikroszkópia……………………………………………. .7

1.1.1. Mikroszkóp készülék……………………………………………………………………………………………………………………………

2. Munkavégzés mikroorganizmusokkal ………………………………………………. 8

2.1. A készítmények elkészítésének módjai………………………………………………………………………

2.1.1. A tenyészet készítményhez való felvételének technikája……………………………… 8

2.1.2. A mikroorganizmusok élő sejtjeinek vizsgálata módszerével

zúzott csepp………………………………………………………….. 8

2.1.3. Fix mikroorganizmus-készítmények………………………… 9

A világítási rendszer a színpad alatt található. A tükör visszaveri a rá eső fényt a kondenzátorba. A tükör egyik oldala lapos, a másik homorú. A kondenzátorral végzett munka során lapos tükröt kell használni. Konkáv tükröt használnak, ha kondenzátor nélkül dolgoznak alacsony nagyítású objektívekkel. A kondenzátor 2-3 rövidfókuszú lencséből áll, összegyűjti a tükörből érkező sugarakat és a tárgyra irányítja. A merülő rendszerekkel végzett munka során kondenzátorra van szükség. A kondenzátor írisz (szirom) membránnal rendelkezik, amely félhold alakú acéllemezekből áll.

A festett készítményeket szinte teljesen nyitott membránnal, festetlen - csökkentett rekesznyílással kell figyelembe venni.

Lencse- többlencsés rendszer, melynek minősége határozza meg a tárgy képét. A külső lencsét frontlencsének hívják, ez nagyítást biztosít. A többi lencse az optikai hibák kijavítását végzi.

A lencsék szárazak és merítettek (immerziós). Ha száraz lencsékkel dolgozik, levegő van az objektív elülső lencséje és a vizsgált tárgy között. V = 90x immerziós objektívvel végzett munka során a fedőüveg és az objektívlencsék között cédrusolaj található, amelynek törésmutatója közel van az üveg törésmutatójához 1,515, illetve 1,52. Az objektívek 8x, 40x és 90x nagyításúak.

Szemlencse az emberi szem "lencséinek" (lencséinek) közvetlen folytatásaként szolgál.

A szemlencse két lencséből áll - a felső - szem és az alsó - kollektív, fém keretbe zárva. A szemlencse célja a lencse által nyújtott kép felnagyítása. Az okulár nagyítása a keretére van gravírozva. Az okulárok működési nagyítása 4x-től 15x-ig terjed.

A szemlencsék sokféle típusban kaphatók, és a választás az objektívtől függ. Hosszú távú mikroszkóppal végzett munka során binokuláris rögzítést használnak, mivel ez javítja a tárgy láthatóságát, csökkenti a kép fényerejét és ezáltal megőrzi a látást.

Munka mikroorganizmusokkal

2.1. Elkészítési módszerek

2.1.1. Előkészítési kultúra technika

A lángban megégett bakteriológiai tű kis mennyiségű mikrobiális masszát vesz ki egy kémcsőből. Ha a kultúra folyékony, akkor jobb, ha ehhez hurkot használ, más esetekben - tűt.

2.1.2. Mikroorganizmusok élő sejtjeinek vizsgálata zúzott csepp módszerrel

Vizsgálja meg a mikroorganizmusok élő sejtjeit zúzott csepp módszerrel, előzetesen festse be a tárgyat élethosszig tartó festékekkel - létfontosságú színezés(festékek: metilénkék, semleges vörös 0,001-0,0001% koncentrációban).

A preparátumokat mikroszkóppal vizsgálják, kissé elsötétítve a látómezőt; a kondenzátor kissé le van engedve, a fényáramot homorú tükör szabályozza. Először is alacsony nagyítást használnak – 8x-os objektívet, majd miután észlelték a csepp szélét, szerelnek be 40x-es vagy merülőlencsét (90x).

A zúzott csepp módszernél egy csepp csapvizet csepegtetünk egy tiszta üveglemezre. Kultúrát adunk hozzá, és vízzel összekeverjük. A felesleges vizet szűrőpapírral távolítjuk el. Merülőlencse használatakor egy csepp cédrusolajat csepegtetünk egy tárgylemezre, és mikroszkóppal vizsgáljuk.

2.1.3. Fix készítmény mikroorganizmusokból

A fix készítmények az élő sejtek olyan feldolgozását jelentik, amely lehetővé teszi az objektum életfolyamatainak gyors megszakítását, miközben megőrzi annak finom szerkezetét. A rögzítés eredményeként a sejtek szilárdan tapadnak az üveghez, és jobban foltosodnak. Patogén mikroorganizmusokkal végzett munka során (biztonsági okokból) a rögzítés szükséges.

A kenet előkészítése. Egy csepp csapvizet csepegtetünk egy tiszta, zsírmentes tárgylemezre. Az üveg zsírtalanításához etil-alkohol és kénsav 1:1 arányú keverékét használja. Kalcinált bakteriológiai tűvel egy tenyészcsőből kis mennyiségű mikrobiális masszát veszünk, és egy csepp vízhez adjuk. A cseppet óvatosan egy hurokkal megkenjük az üvegen, körülbelül 4 cm2-es területen.

Ha a szuszpenzió sűrű, először vízzel hígítjuk. Ehhez egy kis szuszpenziót veszünk egy kalcinált hurokkal, és egy csepp vízre visszük át egy másik tárgylemezre. A normál sűrűségű szuszpenziót vékony réteggel az üvegre kenjük, majd a kenetet szobahőmérsékleten vagy alacsony hőfokon levegőn szárítjuk, a készítményt magasan az égő lángja fölé tartva. A szárítás során a gyógyszer erős melegítése nem ajánlott a fehérje koagulációjának elkerülése érdekében, amely torzítja a sejtek szerkezetét és alakját. A szárított készítményt rögzítjük.

Kenet rögzítés. Kihordják az égő lángja fölött vagy vegyszerek segítségévelegységeit. Az első esetben a gyógyszert lassan három-négy alkalommal hajtják végre úgy, hogy az alsó oldal az égő lángja fölé kerül, a második esetben krómvegyületeket használnak: formalint, ozminsavat, acetont. A rögzítés egyik általános módja a készítmény kezelése 96%-os alkohollal vagy azonos térfogatú etil-alkohol és éter keverékével (Nikiforov-féle folyadék). Ehhez a készítményeket 10-30 percre fixáló folyadékba merítjük.

A gyógyszer festése. Néhány csepp festéket alkalmazunk a kenetre. A festék típusától és a vizsgálat céljától függően a festés időtartama 1 és 5 perc között változik, egyes esetekben akár 30 percet is igénybe vehet. A festés végén a készítményt vízzel mossuk, a vizet szűrőpapírral eltávolítjuk, levegőn szárítjuk és mikroszkóppal átmérjük.

Vannak egyszerű és differenciált festési módszerek.

Nál nél egyszerű festés bármely festékkel (metilénkék, fukszin, enciánibolya), az egész sejt megfestődik.

Nál nél differenciált festéskor az egyes sejtstruktúrákat különböző festékekkel festjük (Gram-festés, spórafestés).

Mikroorganizmusok morfológiájának vizsgálata

3.1. sejt alakja

3.1.1. baktériumok

Alak szerint minden baktérium gömb alakúra (coccusra), rúd alakúra és tekercsre oszlik.

Gömb alakú baktériumok - coccusok.

1. Mikrococcusok - egyetlen gömb alakú sejtek ( Micrococcus agilis).

2. Diplococcusok - gömb alakú coccusok páronként kapcsolódnak össze. ( Azotobacter chroococcum).

3. Tetracoccusok- gömb alakú coccusok, amelyeket négy köt össze.

4.streptococcusok- láncba kapcsolt gömbbaktériumok (főleg patogén, valamint tejsavbaktériumok Lactococcus lactis).

5. Sarcins- a gömb alakú baktériumok, amelyek 8 sejtben csoportosulnak, a sejtosztódás eredményeként keletkeznek három egymásra merőleges síkban. Egyes típusú sarcinák nagy kocka alakú csomagokat alkotnak, amelyekben mindkét oldalon 4 sarcina található. tipikus képviselője Sarcina flava(sarcina sárga) - a levegő mikroflóra leggyakoribb képviselője.

Minden gömb alakú baktérium, kivéve Streptococcus lactis, fixált és bíborvörösre festett készítményekre nézve.

rúd alakú baktériumok. Ide tartoznak azok a formák, amelyek nem képeznek spórákat (nemzetségek Pseudomonas, Achromobacter, Lactobacillus stb.) és spóraképző (nemzetségek bacilus, Clostridium satöbbi.).

Nem spóraképző bacilus Pseudomonas stutzeri – citoplazmája egyenletesen festődik.

spóraképző rudak Bacillus mycoidesÉs Bacillus mesentericus. Mikroszkóp alatt egyenetlen színűnek tűnnek. A spórák nem festődnek úgy, mint a sűrűbb struktúrák. Sejtek bacilus mycoides láncokba rendeződnek, ezek streptobacillusok.

A rúd alakú baktériumokat a rögzített és festett készítményeken nézzük meg.

Tekervényes formák

1. Vibriók – enyhén ívelt sejtek.

2. A Spirillának lehet egy fürtje az orosz C betű formájában, két fürtje a latin S betű formájában, vagy több spirál formájában.

3. Spirochetes - hosszú és vékony sejtek nagyszámú fürtökkel; a sejtek hossza 5-200-szor haladja meg vastagságukat.

A vibriót és a spirillát kényelmesen meg lehet nézni egy fix és festett, hígtrágyából készült, előzőleg termosztátban több napig inkubált készítményen. Az ilyen készítményben található számos mikroorganizmus közül gyakran előfordulnak csavart formák.

A spirochetákkal fixen festett foglepedék preparátumon ismerkedhet meg, különösen sikeresek a szuvas fogból történő kaparási készítmények. A fogászati ​​spirocheták nagyon vékonyak, szőrszerűek, rövidek (csak 2-3 örvényűek).

3.1.2. aktinomycetes

Az Actinomycetes sugárzó gombák. A táptalajokon található aktinomyceták micéliuma differenciált: egyik része a szubsztrátba merül (szubsztrát micélium), a másik a szubsztrát felett (légmicélium).

Az aktinomyceták sok képviselője pigmenteket termel, ezért légmicéliumuk és különösen telepeik kék, kék, lila, rózsaszín, barna, barna vagy fekete színűek. Az aktinomikéták a táptalajt megfelelő színekre festik.

Egy aktinomyceta telep egy darabját a táptalajjal együtt egy tárgylemezre helyezzük. A második üveglappal ezt a darabot szorosan az üveghez nyomják, összetörik és az üvegre kenik. A gyógyszert szárítjuk, fixáljuk, festjük, mikroszkóp alatt nézzük, ahol a micélium egysejtű filamentumai részben láthatóak.

3.1.3. Élesztő

Az élesztőgombák különböző formájú egysejtű mikroszkopikus gombák: ellipszoid, körte alakú, kerek, hengeres. Vegetatívan és ivarosan szaporodnak.

A sütőélesztőt laboratóriumi vizsgálatokhoz használják. Egy kis darab élesztőmasszát néhány órával az óra előtt meleg cukros vízbe teszünk és meleg helyre tesszük. Fehéres zavaros folyadék képződik. Ebből a folyadékból egy cseppet egy tárgylemezre teszünk, fedőlemezzel lefedjük, a tetejére csepp cédrusolajat csepegtetünk, és a készítményt bemerítő rendszerrel nézzük meg. Rügyező és osztódó sejtek láthatók.

3.2. Kémiai módszerek kutatás

3.2.1. Mikroorganizmus-sejtek Gram-festése

A mikrobiális sejtek differenciálódásának ez a módszere a sejtmembránok kémiai összetételének különbségén alapul. Egyes mikroorganizmustípusok sejtjeiben alkoholban oldhatatlan jódvegyület képződik a főfestékkel, míg más fajoknál ez a vegyület átmenetileg megjelenik és alkoholos kezelés után feloldódik. Az első csoportba tartozó mikroorganizmusokat ún gram-pozitív második - gram-negatív.

Gram foltos technika. Különböző mikroorganizmus-tenyészetekből három vékony kenetet viszünk fel egy zsírtalanított üveglemezre (ebből kettő kontroll, ismert kapcsolat a Gram-festéssel). A keneteket levegőn szárítjuk, égő lángján rögzítjük, és 1 percig enciánibolya (vagy kristályibolya) fenolos oldatával festjük, a tárgylemezt kissé megdöntve tartva. Ezután a festéket lecsepegtetjük, és a készítmény vízzel történő mosása nélkül 1 percig Lugol-oldatot alkalmazunk (amíg a kenet teljesen megfeketedik). Az üveget ferde helyzetben tartják. A drogot vízzel történő mosás nélkül, folyamatosan rázatva, 96%-os alkohollal kezeljük 15-20 másodpercig. Fontos az elszíneződési idő betartása, mivel a Gram-pozitív sejtek is elszíneződnek a megadott idő túllépése esetén.

Vizes mosás után a készítményt Pfeifer fuchsinnal festjük 1 percig. A Gram-pozitív mikroorganizmusok sötétlila színt kapnak, a Gram-negatív mikroorganizmusok pedig további színnel (bíborvörös) festődnek.

A Gram-festés eredménye a tenyészet korától függ: a régi tenyészetekben az elhalt sejtek mindig Gram-negatívan festődnek. Ezért jobb, ha fiatal egynapos kultúrákat használunk.

Az élesztők jó célpontok a mikrobiális sejtek Gram-festésére. Bacillus mesentericus vagy Bacillus subtilis(gram-pozitív) és Escherichia coli (gram-negatív).

Festékek és reagensek Gram-festéshez.

1. Az enciánibolya fenolos oldata: enciánibolya - 1 g, alkohol 96% - 10 ml, kristályos fenol - 2 g, desztillált víz - 100 ml.

Bizonyos esetekben alkalmazza encián alkoholos oldatalila: enciánibolya (vagy kristályibolya) - 1 g, alkohol 96% (rektifikált) - 100 ml, glicerin - 5 ml. A keveréket 24 órára termosztátba helyezzük, majd szűrjük.

2. Lugol megoldása(kálium-jodid - 2 g, kristályos jód - 1 g, desztillált víz - 300 ml). Először 5 ml vízben tömény kálium-jodid oldatot készítünk, jódot oldunk benne, majd 300 ml-hez vizet adunk.

3. Alkohol 96%.

4. Fuchsin Pfeiffer(ziel-karbol-fukszin vizes oldata): 1 ml Ziel-karbol-fukszin és 9 ml desztillált víz. A következőképpen készítjük: 1 g fukszin, 5 g kristályos fenol, 96% alkohol - 10 ml, néhány csepp glicerin, 100 ml desztillált víz, a fukszint etanolban oldjuk, a vízben oldott fenolt adjuk hozzá. Az oldatot keverjük és néhány napig állni hagyjuk. Használat előtt leszűrjük.

3.2.2. Bakteriális spórák elszíneződése

A baktériumspórák a vegetatív sejtekhez képest rendkívül ellenállóak a kedvezőtlen környezeti feltételekkel szemben. Kerek, ovális vagy ellipszis alakú képződmények. Ha a spóra átmérője nem haladja meg annak a sejtnek az átmérőjét, amelyben a spóra kialakult, a sejt ún. baciláris, ha meghaladja, akkor a spóra elhelyezkedésétől függően a sejt közepén vagy végén ezt a sejtet ill. clostridium vagy plektridiális . A baciláris sejtben a spóra a sejt közepén helyezkedhet el - központi pozíció a végén terminálés közelebb az egyik végéhez - alterminál pozíció.

Az élő spóraképző baktériumok megfigyelésekor spóráikat a fénysugarak erősebb törése alapján lehet megkülönböztetni. A spórák savállóak, ezért festékkel nehezen festhetők meg. Ez a héj nagy sűrűségével, a benne lévő szabad víz alacsony koncentrációjával és a spórák magas lipidtartalmával magyarázható. A készítményekben festett egyszerű módokon vagy Gram szerint a spórák színtelenek maradnak (negatív szín).

Minden spórafestési módszer azon alapul egyetlen elv: először a spórákat különböző anyagokkal maratják: króm-, só-, kén-, ecetsav, ammónia, nátronlúg vagy hidrogén-peroxid, majd a spórát tartalmazó sejt hevítéskor megfestődik, végül a citoplazma elszíneződik, és kontrasztfestékkel megfestik.

Muller által módosított Ziehl-Neelsen módszer. Mielőtt a baktérium kenetet lángon rögzítené, a készítményt a szokásos módon készítjük el. Ezután 5%-os krómsavas oldatot viszünk fel a lángban rögzített gyógyszerre és lehűtjük. 5-10 perc múlva vízzel lemossuk. A készítményt szűrőpapírcsíkkal fedjük le, és a papírt Ziehl karbolfukszinnal bőségesen megnedvesítjük. A drogot lángon addig melegítjük, amíg gőzök nem jelennek meg (nem forr), majd félretesszük, és hozzáadunk egy új adag festéket. Ezt az eljárást 7 percig végezzük. Fontos, hogy a festék elpárologjon, de a papír ne száradjon ki. Lehűlés után eltávolítjuk, a készítményt vízzel mossuk és szűrőpapírral alaposan átitatjuk. A kezelés eredményeként a spórás sejtek egyenletesen festődnek.

Ezután a sejtek citoplazmáját (de nem a spórákat) 1%-os sósav- vagy kénsavoldattal 15-30 másodpercig tartó kezeléssel elszínezzük. A spórakészítmény elkészítésekor bacilus mycoides vagy bacilus mesentericus javasolt a citoplazma színtelenítése 16-18 másodpercig (mért hangosan számolva 21-től 37-40-ig). Ha ezt az időt túllépjük, a spórák is elszíneződhetnek. Ezután a készítményt vízzel mossuk és metilénkékkel festjük 2 percig.

A szín kontrasztos, és a citoplazma kék hátterén az élénkvörös spórák egyértelműen kiemelkednek.

Peshkov módszer. A metilénkék Lefflert a lángban rögzített készítményre öntjük, felforraljuk, és az üveget a láng fölött tartva 15-20 másodpercig forraljuk. A kenetet vízzel mossuk, és 30 percig festjük 0,5%-os vizes semleges vörös oldattal. Öblítse újra, szárítsa meg, majd vizsgálja meg a készítményt az objektív olajmerítésével. A spórák kékre vagy kékre festődnek, a citoplazma rózsaszín.

A spórák tanulmányozására alkalmas tárgyak lehetnek bacilus mesentericus vagy bacilus mycoides 4 napos korában.

Reagensek bakteriális spórák festésére. 1. Carbol fukszinTsilya(lásd 3.2.1).

2. Metilénkék Leffler(lásd 3. 2. .1).

3. Telített vizes metilénkék oldat. 2 g festék és 100 ml desztillált víz.

4. krómsav, 5%-os oldat.

5. Só(vagy kénsav, 1%-os oldat.

4. Mikroorganizmusok tenyésztése

4.1. Tápláló táptalajok

4.1.1. Média előkészítés

Hús-pepton húsleves (MPB). Hús-pepton táptalaj készítéséhez használható húsleves, amelyet a következőképpen állítunk elő: 500 g finomra darált friss húst zománcozott serpenyőbe öntünk 1 liter 50 °C-ra felmelegített csapvízzel, és 12 órán át szobahőmérsékleten vagy 1 órán át 50-55 °C-on állni hagyjuk. A húst kinyomkodjuk, a kivonatot vattaréteggel gézen átszűrjük, 30 percig forraljuk, hogy a kolloid fehérjék megalvadjanak, és kétszer szűrjük (első alkalommal vattával, másodszor papírszűrőn keresztül). A szűrletet 1 literre feltöltjük vízzel, lombikokba töltjük, vattadugóval lezárjuk és 120°C-on 20 percig sterilizáljuk (a lombikok dugóit felülről papírkupakokkal lezárjuk).

A húsleves bármikor felhasználható táptalaj elkészítéséhez. Ha azonnal megfőzik, akkor a húsleves előzetes sterilizálása nem szükséges.

Az MPB elkészítéséhez adjon 5-10 g-ot 1 liter húsleveshez pepton(a fehérje hidrolízis első terméke) a táptalaj kalóriatartalmának növelésére és 5 g asztali só ozmotikus aktivitás létrehozására. A közeget addig melegítjük, amíg a pepton fel nem oldódik, folyamatos keverés közben.

A közeg semleges vagy enyhén lúgos reakcióját 20%-os Na2C03-oldat hozzáadásával hozzuk létre, amíg a nedves vörös lakmuszpapír kékre nem válik. A tápközeg pH-értékének ellenőrzésére célszerű indikátort használni. bromtimolblau: 1-2 cseppet porcelánpohárban összekeverünk belőle egy csepp húslevessel. A Bromothymolblau semleges környezetben palackzöld, savas környezetben sárga, lúgos környezetben kék.

A pH beálltát követően a táptalajt ismét 5-10 percig forraljuk, és a reakcióelegy változásakor megdermedt fehérjéket papírszűrőn átszűrjük anélkül, hogy a levest derítené vagy fehérjével derítené. Ehhez a friss tojásfehérjét kétszeres mennyiségű vízzel felverjük, és összekeverjük az 50 °C-ra hűtött húslével. Az elegyet keverés közben lassú tűzön 10 percig forraljuk, majd leszűrjük. Az átlátszó hús-peptonlevest kémcsövekbe öntjük, vattadugóval lezárjuk és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk.

Hús pepton agar (MPA). 1 liter MPB-hez adjunk 15-20 g agart. A táptalajt addig melegítjük, amíg az agar fel nem oldódik (olvadáspontja 100°C, megszilárdulási hőmérséklete 40°С), a táptalajt 20%-os Na2C03-oldattal enyhén lúgos reakcióba állítjuk, és tölcséren keresztül kémcsövekbe öntjük (kb. 10 ml agart egy oszlopban, majd minden egyes Petri-csészékbe öntjük, majd 5 ml agart kapunk).

Agar kiöntésekor a kémcsövek széleinek száraznak kell maradniuk, különben a dugók az üveghez tapadnak. A tápközeget tartalmazó csöveket autoklávban 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk.

4.2. Sterilizálási módszerek

Sterilizáció - ez a mikroorganizmus sejtek teljes elpusztítása tápközegben, edényben stb.

A sterilizálásnak számos módja ismert. A hősterilizálást gyakrabban alkalmazzák.

4.2.1. Lángolás, vagy pörkölés

Közvetlenül használat előtt meggyújthatja a platina hurkákat, tűket, spatulákat, kisebb fémtárgyakat (olló, lándzsa, csipesz), valamint üvegrudakat, tárgylemezeket, takarólemezeket stb.

4.2.2. Száraz hő sterilizálás

Edények és száraz anyagok, például keményítő, kréta feldolgozására használják. Ezzel egyidejűleg a sterilizálandó tárgyat 170 °C-on tartják 2 órán át (a kívánt hőmérséklet megállapításától számítva) elektromos szárítószekrényekben. A hőmérséklet 170 ° C fölé emelése nem ajánlott: a pamutdugó és a papír összeesik.

Sterilizálás előtt az üvegedényeket pamutdugóval zárják le, és papírba csomagolják. A csészéket, kémcsöveket, pipettákat, vattát, gézt papírba csomagoljuk, vagy speciális tokba, tokba helyezzük, amelyben sterilizálás után steril edények tárolhatók.

A sterilizálás végén a szekrényt csak a hőmérséklet szobahőmérsékletre süllyedése után nyitják ki, különben az üveg szétrepedhet.

4.2.3. Gőzsterilizálás

A folyékony gőzt (100 °C) olyan tárgyak feldolgozására használják, amelyek száraz hő miatt romlanak, és néhány tápközeg, amely nem bírja a magasabb hőmérsékletet (szénhidrátot, NRM-et, tejet tartalmazó közeg). A sterilizálást Koch kazánban végezzük 30 percig, naponta 3 napon keresztül. Ezt a sterilizálást ún töredékes.

Egyszeri, 100 ° C-on 30 percig tartó melegítéssel a vegetatív sejtek elpusztulnak, miközben számos mikroorganizmus spórája életképes marad. Ilyen melegítés után a közeget 24 órára termosztátba helyezzük 28-30°C-on. Az első melegítés során megőrzött spóráknak van idejük ez idő alatt vegetatív formákká csírázni, amelyek a későbbi melegítés során elpusztulnak. Ezután ezt a műveletet még 2 alkalommal megismételjük.

4.2.4. Sterilizálás telített gőzzel nyomás alatt

Ez a leggyorsabb és legmegbízhatóbb sterilizációs módszer, amely elpusztítja a legellenállóbb spórákat. Segítségével a legtöbb táptalaj és edény sterilizálva van.

A telített gőzzel történő feldolgozást hermetikusan lezárt vastagfalú kazánban végezzük - autokláv. Az autokláv fedelén vagy oldalán van egy szelep a gőzkivezetéshez, egy nyomásmérő és egy biztonsági szelep. A manométer azt mutatja, hogy a kazán belsejében mennyivel magasabb a gőznyomás a normálnál. A robbanás megelőzése érdekében a nyomáshatár túllépése esetén egy biztonsági szelep aktiválódik, amely a gőz kiáramlását biztosítja.

A manométer mutatója fizikai atmoszférában egy bizonyos hőmérsékletnek felel meg.

A megbízható sterilizálás 120 °C-on és 1 atm nyomáson 20 percig tartó melegítéssel érhető el.

A sterilizálást az alábbiak szerint végezzük. Az autoklávba vizet öntünk, belehelyezzük a sterilizálandó tárgyakat, rácsavarjuk az autokláv fedelét és elindítjuk a melegítést. A csapot nyitva kell hagyni, amíg az autoklávban lévő összes levegőt a vízgőz ki nem szorítja. Amikor a gőz folyamatos áramlásban kezd kijönni a csapból, a csapot elzárják, a gőznyomást az autoklávban 1 atm-re állítják, és ezen a szinten tartják 20-30 percig. Ezután a fűtést leállítják, megvárják, amíg a nyomásmérő tűje 0-ra süllyed, óvatosan (lassan) nyissa ki a csapot és engedje ki a gőzt. Csak ezután csavarja le az autokláv fedelét. Ha a csapot a nyomás csökkenése előtt kinyitják, a sterilizált edényekben lévő folyadék felforr, és kinyomja belőlük a dugókat.

Az autoklávot áramló gőzzel történő frakcionált sterilizálásra is használják. Ebben az esetben a fedél nincs lecsavarva, hogy a gőz szabadon távozhasson.

4.2.5. Pasztőrözés

A pasztőrözés egy nem teljes, vagy részleges sterilizálás, amely 30-10 percig 65-80°C-on történő melegítést, majd gyors 10-11°C-ra történő lehűtést jelent. Pasztőrözze a tejet, sört, bort és egyéb termékeket.

Anyagok és felszerelések

BCH, agar, lakmuszvörös, bromthymolblau, porcelán tányérok lyukakkal vagy edényekkel, üvegrudak, 20%-os Na2C03 oldat, kémcsövek állványban (agar kiöntéséhez), tölcsérek, vatta, Petri-csészék, 1 ml-es Mohr pipetta, papír poharak és pipetták csomagolásához, harsh szálas üvegek, 250 ml-es üvegek.

5. Egy tiszta mikroorganizmustenyészet számának és izolálásának elszámolása

5.1. A mikroorganizmusok számának számlálásának módszerei

5.1.1. A talajban lévő mikroorganizmusok számának (CFU) számbavétele táplemezes módszerrel kombinálva az egymást követő hígítások módszerével

A talaj a legkedvezőbb környezet a mikroorganizmusok fejlődéséhez. Összetételének nagy heterogenitása miatt a vizsgált területről származó mikroorganizmusok számának figyelembevételéhez vegyük középső talajvizsgálat.

Először szuszpenziókat készítenek (hígítási módszerrel), amelyek 1 ml vízben különböző koncentrációjú talajt tartalmaznak. Ehhez steril óraüvegen lévő tégelyből vagy zacskóból steril porcelán spatulával vagy alumínium teáskanállal 1 g talajmintát veszünk. A talaj lemérésekor az óraüveget egy másik steril óraüveg borítja.

Egy talajmintát aszeptikus körülmények között egy 250 ml-es lombikba töltünk 99 ml steril vízzel. A keveréket 5 percig rázatjuk anélkül, hogy a dugót nedvesítené. Steril pipettával 1 ml 10-2 g talajt tartalmazó szuszpenziót veszünk, és 9 ml steril csapvízzel egy kémcsőbe töltjük. A pipettát kémcsőben többször vízzel mossuk, hogy a sejteket a lehető legjobban lemossuk a faláról. Egy másik steril pipettával további 1 ml szuszpenziót veszünk ki a lombikból, és egy második lombikba helyezzük, amely szintén 99 ml steril csapvizet tartalmaz. Ezt a pipettát ugyanúgy mossuk, mint az első esetben. Rázza fel a kémcsövet és a második lombikot 1 percig. A talajkoncentráció a kémcsőben 10-3 g, a második lombikban - 10-4 g. Ugyanígy 1 ml szuszpenziót viszünk át a második lombikból a második kémcsőbe 9 ml-rel, és a harmadik lombikba 99 ml steril csapvízzel új steril pipettákkal, és új szuszpenziókat készítünk, amelyek 10-6 g, illetve 1 ml talajt tartalmaznak.

átirat

1 Oktatási és Tudományos Minisztérium Orosz Föderáció Szövetségi Oktatási Ügynökség Moszkvai Állami Mérnökökológiai Egyetem Kustova N.A. MIKROBIOLÓGIAI LABORATÓRIUMI MŰHELY, Moszkva 2005

2 A mikrobiológiai laboratóriumi műhely a „Mikrobiológia és biotechnológia alapjai” tudományág 3207. és 3302. szakos hallgatóinak, valamint a „Környezeti és Ipari Mikrobiológia” tudományág „Környezeti és Ipari Biotechnológia” Tanszékének hallgatói számára készült. A workshop három részből áll. Az első rész az általános mikrobiológia kérdéseivel foglalkozik. E rész munkáiban a mikroorganizmusok különböző csoportjainak morfológiai felépítését, a mikroszkópos vizsgálati módszereket, a mikrobiológiai oltás technikáját, a sterilizálási módszereket, valamint a mikroorganizmusok mennyiségi elszámolásának módszereit tanulmányozzák. A második rész a mikrobák biotechnológiai felhasználásával kapcsolatos munkákat tartalmazza szerves savak, alkoholok, antibiotikumok és enzimek különféle anyagainak előállítására. A harmadik rész munkáiban az ökológiai mikrobiológia kérdéseit vizsgálják. A művek egy része a mikroorganizmusok szerepét mutatja be a globális biogeokémiai körfolyamatokban, a többi a biotechnológiai védelem problémáival foglalkozik. környezet. Minden témakör tartalmaz egy elméleti bevezetőt és egy gyakorlati részt, amely ismerteti az alkalmazott módszereket, a munkarendet, a munkáról szóló beszámoló tartalmát, valamint ellenőrző kérdéseket. 2

3 ELŐSZÓ A mikrobiológiai laboratóriumi műhely a „Mikrobiológia és biotechnológia alapjai” tudományág 3207-es és 3302-es szakának 3. évfolyamos hallgatóinak, valamint az „Ökológiai és Ipari Biotechnológia” Tanszék „Ökológiai és Ipari Biotechnológia” szakirány 4. éves hallgatóinak szól. A laboratóriumi műhely a Laboratóriumi munkák Útmutatója, szerk. P.I. Nikolaev, amelyeket az osztály létrehozása óta a "Mikrobiológiai termelés folyamatai és eszközei" osztályon használnak. tudományos főmunkatárs, Ph.D. N. V. Pomorceva. Az útmutatót az ő irányításával készítették el a tanszék kutatói: M. A. Boruzdina, I. E. Lomova, N. A. Kustova, T. A. Makhotkina és K. A. változás tanterv Az új környezetvédelmi mérnök szaknak megfelelően szükséges volt a mikrobiológia szak bővítése, kiegészítése a környezetvédelem biotechnológiai módszereivel kapcsolatos feladatokkal. A laboratóriumi műhely három részből áll. Az első rész az általános mikrobiológiával foglalkozik: a mikroorganizmusok morfológiájával, vizsgálati módszereivel, a mikrobiológiai oltás technikájával, a mikroorganizmusok mennyiségi elszámolásának módszereivel. A második rész néhány példát mutat be a mikrobák ipari felhasználására. A harmadik rész a mikroorganizmusok ökológiai kérdéseivel, az elemek globális körforgásában betöltött szerepével, valamint a környezetvédelem biotechnológiai módszereivel foglalkozik. A műhely előkészítésében a tanszék posztgraduális hallgatója, N. V. Zyabreva és vezető kutató vett részt. E.S. Gorshina. A szerző mély köszönetét fejezi ki Assoc. kávézó mikrobiológia, Moszkvai Állami Egyetem N.N. Kolotilovának az értékes megjegyzésekért és tanácsokért, valamint vezető kutatónak. P.P. Makeev segítségért a szöveg és a szemléltető anyag elkészítésében. 3

4 4 ÁLTALÁNOS MUNKASZABÁLYOK A MIKROBIOLÓGIAI LABORATÓRIUMBAN Munka- és magatartási szabályok a laboratóriumban A mikrobiológiai laboratórium munka- és magatartási szabályai sok hasonlóságot mutatnak a kémiai laboratóriumi munkavégzés szabályaival, de megvannak a sajátosságai. A mikrobiológus a legtöbb esetben tiszta mikroorganizmuskultúrákkal dolgozik, pl. bármely nemzetséghez, fajhoz és törzshez tartozó mikroorganizmusokkal. Mivel minden környező tárgyon és a levegőben idegen mikrobák vannak, speciális munkamódszereket alkalmaznak a vizsgált mikroorganizmus-tenyészet vagy maga a személy szennyeződésének elkerülésére. Ehhez a táptalajokat, edényeket, eszközöket sterilizálják, a laboratóriumot és a munkahelyeket tisztán tartják, bizonyos szabályokat betartanak a mikrobákkal való munkavégzés során. A laboratóriumban ne legyenek felesleges tárgyak. A nedves tisztítást rendszeresen el kell végezni. A laboratóriumi helyiségek különböző felületeit időszakonként fertőtlenítik. A fertőtlenítés fertőtlenítés, azaz. a fertőző betegségek kórokozóinak elpusztítása a környezeti objektumokon. Ehhez használjunk 0,5 3%-os klóramin oldatot vagy 3 5%-os fenol (karbolsav) oldatot. A munkaasztalt 70%-os etil- vagy izopropil-alkohol oldattal kell fertőtleníteni. A levegő fertőtlenítése egyszerű szellőztetéssel történik (legalább min). Több hatékony módszer a helyiség levegőfertőtlenítése ultraibolya sugárzással baktericid lámpákkal. Különösen gyakran ultraibolya besugárzást használnak a doboz sterilizálására. A Boxing egy speciális kis helyiség a tiszta kultúrák újravetésére, a mikroorganizmusok Petri-csészéken történő mennyiségi kimutatására és néhány egyéb, különösen tiszta körülményeket igénylő munkára. Munka előtt a dobozt min. Az asztalt alkohollal töröljük le, a falakat és a padlót rendszeresen mossuk. A laboratóriumok boxolás helyett lamináris szekrényekkel is felszerelhetők (1. ábra), amelyeket szintén csíraölő lámpákkal sterilizálnak. Nál nél

5 munkája tartalmaz egy ventilátort, amely a baktericid szűrőkön áthaladó steril levegő lamináris áramlását hozza létre. A mikrobiológiai laboratórium fő felszerelései: mikroszkópok, mikroorganizmusok tenyésztésére szolgáló termosztátok, sterilizáló berendezések (autokláv és szárítószekrény), centrifugák, lepárló, hűtőszekrény múzeumi mikroorganizmus-kultúrák tárolására, üvegedények és reagensek elhelyezésére szolgáló szekrények, szükséges eszközök (fotoelektrokoloriméterek, pH-mérők, stb.). Minden tanulónak kijelölnek egy munkahelyet, amelyre helyezik: fedéllel letakart mikroszkóp, bakteriológiai hurok, tárgylemezek és fedőlemezek, steril pipetták, alkoholégő, szűrőpapír csíkok, üvegjelölő, edény fertőtlenítő folyadékkal. Semmi nem kerülhet az asztalra, ami nem kapcsolódik közvetlenül az elvégzett munkához. A mikrobiológiai laboratóriumi órákon be kell tartani a biztonsági szabályokat. 5

6 6 Rövid információ a laboratóriumi biztonságról A mikrobiológiai gyakorlatban széles körben alkalmazzák a vegyi üvegedényeket. Óvatosnak kell lennie, amikor dolgozik vele. A törött edényeket alaposan tisztítsa meg. Az elemzés során gyakran használnak lúgok és savak erős oldatait. Nagyon óvatosan kell velük dolgozni, mivel ezek az anyagok károsan hatnak a kéz és a ruházat bőrére. Ha a sav véletlenül kiömlött, le kell fedni nagy mennyiségű szódával, majd többször le kell öblíteni vízzel. A kiömlött lúgot alaposan le kell törölni, és azokat a tárgyakat, amelyekre leesett, gyenge ecetsavoldattal kell kezelni. Ha savak vagy lúgok emberi bőrrel érintkeznek, azonnal le kell mosni bő vízzel. Mikrobiológiai laboratóriumban élő mikroorganizmusokkal foglalkoznak. A fő munkát sterilen, azaz. egy mikroorganizmus-kultúrával dolgozzon, amelyet nem szabad idegen mikrobákkal megfertőzni. A növények fertőzésének megelőzése érdekében speciális sterilizálási módszereket alkalmaznak. Ezenkívül fontos a tisztaság fenntartása a laboratóriumban. A mikroorganizmusokat tartalmazó edényeket nem szabad nyitva hagyni. A mikroorganizmusok biomasszáját, ha az elemzéshez nincs szükség, csak autoklávban történő sterilizálás után dobjuk ki. A mikroorganizmusok termése gáz- vagy alkoholégő lángja közelében keletkezik, ezért óvakodni kell az égési sérülésektől, és mindenekelőtt óvatosan szedje fel a hosszú hajat. Az égő csak akkor égjen, ha szükséges. Ha vetés közben véletlenül kigyullad egy vattadugó, spirituszlámpa vagy papír, törülközővel eloltják a tüzet. Nagyobb tüzek esetén tűzoltó készülékeket használnak. Használt pipetták, tárgylemezek, fedőlemezek, spatulák stb. fertőtlenítő folyadékkal ellátott edénybe helyezzük. A tanulóknak folyamatosan emlékezniük kell arra, hogy mikroorganizmusokkal van dolguk, amelyek nem mindig biztonságosak, különösen a mikrobák környezeti tárgyaktól való izolálása során. Ezért az óra végén a tanulók tegyenek rendet a munkahelyen, és mossanak kezet szappannal és vízzel.

7 Az elektromos hálózat meghibásodása esetén kapcsolja ki az elektromos készülékeket és azok központi áramellátását. 1. SZAKASZ ÁLTALÁNOS MIKROBIOLÓGIAI TÉMA 1. Mikroorganizmusok morfológiája és vizsgálati módszerei A mikrobiológia olyan organizmusokat vizsgál, amelyek mikroszkopikus méretűek, pl. mikrométerben vagy a mikrométer törtrészében mérve. Egy mikrométer 10-6 méternek felel meg, és rövidítése mikron. A mikroorganizmusokat intenzív anyagcsere jellemzi, és képesek különféle kémiai átalakulások végrehajtására. A különböző mikroorganizmusok szerkezetükben és biokémiai folyamataikban is különböznek egymástól. Egy csoportba vonásukat nemcsak kis méretük, hanem a termesztési és kutatási módszerek közössége is okozza. A mikroorganizmusok szerkezetének, megjelenésének, alakjának, méretének, i.e. a mikroorganizmusok morfológiájának tanulmányozásához használjon mikroszkópot. A modern fénymikroszkópokban látható legkisebb részecskék nagysága meghaladja a fény hullámhosszának 1/3-át, azaz. legalább 0,2 mikron, ami a 0,4 mikron és 0,7 mikron közötti hullámhosszú fény látható részének használatához kapcsolódik. Mikroszkóp készülék Az ábrán. 2 látható kinézet gyakori a kutatásban és oktatási gyakorlat mikroszkóp MBI-3. A vizsgált tárgyat, a preparátumot a tárgyasztalra helyezzük, és alulról a megvilágítóból kilépő, a tükörre hulló, majd a kondenzátoron áthaladó fénysugarak világítanak meg, és az előkészítésre fókuszálnak. A mikroszkóp fő részei: szemlencsék, cső, torony objektívekkel, színpad klipekkel az előkészületekhez, kondenzátor, makro- és mikrocsavarok a fókuszáláshoz és végül egy állvány, amelybe mindez fel van szerelve. 7

8 A mikroszkópos vizsgálat előtt ellenőrizze a világítás megfelelő felszerelését (Köhler szerint). Ehhez a megvilágító patron izzóval történő mozgatásával tiszta képet kapunk a szálról 8

9 lámpa izzása egy teljesen zárt kondenzátor membránon, így ez a kép teljesen kitölti a kondenzátor lyukat. A megvilágító membrán lezárása után a kondenzátor membránja kinyílik, és a kondenzátor mozgatásával éles képet kapunk a megvilágító membránról a mikroszkóp látóterében. Nak nek erős fény nem vakította el a szemet, először csökkentse a lámpa izzószálának izzását. Végül pedig a membránnyílás képe a látómező közepére kerül, és a megvilágító rekesznyílása kinyílik, így a teljes látómező megvilágított. A mikroszkóp két nagyítási fokozatú optikai rendszer: az első nagyítást az objektív, a másodikat a szemlencse végzi. A lencse felnagyított fordított képet ad a szemlencsén keresztül látható tárgyról. Ennek eredményeként a megfigyelő szeme a tárgy erősen felnagyított inverz képét látja. Ezért egy tárgy balra történő mozgását a szem jobbra irányuló mozgásként érzékeli. A mikroszkóp teljes nagyítása, i.e. Azt a nagyítást, amellyel egy tárgyat mikroszkóp alatt néznek, az objektív és a szemlencse nagyításának szorzataként határozzák meg. A lencsék 10, 40, 60, 90-szeres nagyítást adnak, az okulárok pedig szoros nagyítást adnak. Ha binokuláris rögzítést használ, az további nagyítást biztosít. ábrán. A 3. ábra a kapcsolási rajzot mutatja optikai rendszer mikroszkóp. Az O lencse a Z síkban az A tárgy valódi fordított A képét képezi. A lencse által adott képet az E okulár segítségével tovább nagyítjuk. Mivel Z az E okulár fókuszában van, a megfigyelő egy kinagyított A virtuális képet lát az X síkban, amely általában a szemtől 25 cm-re helyezkedik el, i.e. közeli látás számára megfelelő távolságra. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a képalkotás mechanizmusának ilyen elképzelése nagyon leegyszerűsített, mivel figyelmen kívül hagyja a diffrakció és számos más tényező hatását. A mikroszkóppal végzett munka során a tanulók mikrobák preparátumait tanulmányozzák többszörös nagyítással. Az optikai mikroszkóp által adott legnagyobb nagyítás 3000x. Az ilyen mikroszkópban megtekinthető legkisebb részecskeméret 9

10 egyenlő 0,2 mikronnal, ami a spektrum látható részének hullámhosszának köszönhető. A mikroorganizmusok morfológiája A mikroorganizmusok világa nagyon sokféle formát foglal magában, amelyek nem alkotnak egyetlen szisztematikus csoportot. A mikrobiológia fő tárgyai a baktériumok, de rajtuk kívül élesztőt, gombákat, mikroszkopikus algákat és egyes protozoákat is vizsgálnak a mikrobiológusok. ábrán. A 4. ábra a mikroorganizmusok fő csoportjait mutatja (a protozoonok kivételével); méretük arányai megmaradnak. A vírusok kivételével minden élő szervezet rendelkezik sejtszerkezet. Sejtszervezetük szerint prokariótákra és eukariótákra oszthatók. 10

11 A fő különbség az eukarióták és a prokarióták között a másodlagos üregek jelenléte, amelyek elválasztják a sejtmagot és más sejtstruktúrákat a citoplazmától. A másodlagos üregek megjelenése tette lehetővé az eukarióta membránok belső felületének növekedése miatt az egész élővilág evolúciójában történő ugrást. Ez lehetővé tette, hogy a diffúziós sebesség növekedésével párhuzamosan a membránokon nagyobb számú biokémiai reakciót lehessen végrehajtani. A prokarióták baktériumok, beleértve az aktinomicétákat és a cianobaktériumokat. Az eukarióták minden növény, állat, élesztő, gomba, protozoa. A prokarióták közül jelenleg az archaebaktériumok egy csoportját különböztetik meg, amelybe metanogének, extrém halofilek (nagyon sós vízben élnek), rendkívül termofil baktériumok, amelyek oxidálják és redukálják a molekuláris ként, valamint a sejtfal nélküli termoplazmák. Az összehasonlítás alapján új felosztás készült nukleotid szekvenciák a riboszomális RNS kis szakaszaiban. tizenegy

12 Az archaebaktériumok különböznek a sejtfal összetételében, a lipidekben és néhány egyéb fiziológiai és biokémiai jellemzőben (például más a CO 2 rögzítési mechanizmusuk). Így a sejtszerveződés felépítésében jelenleg 3 csoportot különböztetnek meg: az archaebaktériumot (az új elnevezés szerint Archaea, archaea), az eubaktériumot (az új nómenklatúra szerint Baktériumok, baktériumok) és az eukarióták (az új nómenklatúra szerint az Eukarya). Munka 1. Baktériumok mikroszkópos vizsgálata A baktériumok morfológiája Elméleti bevezetés A mikroorganizmusok ezen csoportja a természetben a legnagyobb számban előforduló, legelterjedtebb és nagy ipari jelentőségű. A mikroorganizmusok megnevezésére bináris nómenklatúrát használnak, mint az állattanban és a botanikában. Ennek a nómenklatúrának megfelelően minden fajnak kettőből álló neve van Latin szavak. Az első szó nemzetséget jelent, a második típust. Az általános név mindig nagybetűs, a konkrét név pedig mindig kisbetűs. A legtöbb baktérium egysejtű szervezet, amely gömb alakú, rúd alakú vagy tekercselt. A baktériumok között kis számú fonalas forma található. A baktériumok nagyon kicsik, a gömb alakú baktériumok sejtátmérője 1 2 mikron. A baktériumok osztódással szaporodnak (kedvező körülmények között az osztódás percek alatt megtörténik). Egyes baktériumok mozgékonyak. A mozgás képessége speciális flagellum organellumok jelenlétéhez kapcsolódik. A legegyszerűbb formájúak a gömb alakú baktériumok (coccusok). Ezek vagy egyedi golyók, vagy egymáshoz kapcsolódó golyók formájában fordulnak elő. A sejtek osztódás utáni elrendezése szerint a gömb alakú baktériumokat monococcusokra (egyetlen coccusok), tetracoccusokra (4-gyel kombinálva), sarcinokra (8-mal kombinálva), staphylococcusokra (klaszterekre), streptococcusokra (coccusok láncaira) osztják. 12

13 A pálcika alakú baktériumok a baktériumok legnagyobb csoportja. Ezek hengeres cellák, lekerekített vagy hegyes végekkel, és a hosszúság és a szélesség aránya nagyon eltérő. Elhelyezkedhetnek egyenként, vagy rövid vagy hosszú láncokat alkothatnak. A rudak különböző hosszúságúak lehetnek, általában néhány mikron, és körülbelül 1 mikron szélesek. Egyes rúd alakú baktériumok speciális spóratesteket képeznek a sejt belsejében. Minden sejt egy spórát termel, amely a kedvezőtlen körülmények elviselésére szolgál. A spóra megfelelő körülmények között (hőmérséklet, páratartalom, tápanyagok) kicsírázik, pálcikává alakul. A baktériumspórák rezisztenciája meghaladja bármely élő szervezet rezisztenciáját. Például a Bacillus subtilis szénabacillus spórája 3 órán keresztül ellenáll a 100 ° C hőmérsékletnek. Az ilyen spóraellenállás megnehezíti a fertőzések elleni küzdelmet. A tekercselt mikroorganizmusok különböznek a sejtek görbületi fokában és a tekercsek számában. Vibriókra, spirillákra és spirochetákra oszthatók. Ha egy baktériumnak egy hiányos spiráltekercse van, akkor azt vibriónak nevezzük. Ha egy baktériumnak több spirális fürtje van, akkor azt spirillának nevezik, és azokat a mikrobákat, amelyeknek sok kis fürtje van, spirochetáknak nevezzük. A fonalas baktériumok hengeres vagy korong alakú sejtekből álló filamentumok. Egyes fajok szálait nyálkahártya zárja, amely vas-hidroxiddal vagy mangánsókkal impregnálható. A nehézfémek oldatokból történő felhalmozódása egyes vasbaktériumok sejtjeiben megy végbe. Nagy fonalas baktériumok r. Beggiatoa ként rakódik le sejtjeikben. A fonalas baktériumok általában a tengeri és édes vizek, a bomló szerves maradványokban is megtalálhatók, az állatok belében. A cianobaktériumok olyan organizmusok nagy csoportját foglalják magukban, amelyek egyesítik a sejt prokarióta szerkezetét a fotoszintézis végrehajtásának képességével. A cianobaktérium sejtek pigmentjei a klorofill a (zöld) mellett tartalmaznak fikocianin pigmentet 13

14 kék. Emiatt korábban kék-zöld algáknak nevezték őket. Legtöbbjük többsejtű organizmus, amelyek hosszú, legtöbbször el nem ágazó fonalak (trichomák). A filamentumokban lévő sejteket egy közös külső fal egyesíti. Néha nyálkahártya-felhalmozódást "szőnyeget" képeznek. A szaporítás a szál külön szakaszokra bontásával történik. Egyes fajok csúszva mozognak (r. Spirulina). Az aktinomyceták (elágazó baktériumok, sugárzó gombák) a prokarióta mikroorganizmusok nagy csoportja, amelyek vékony, több mm hosszú, 0,5-1,5 mikron átmérőjű elágazó szálakat alkotnak. A mikroorganizmusok egy sajátos csoportját alkotják, amely morfológiailag hasonlít a penészgombákhoz (5. ábra). E csoport képviselőinek jelentős részének sejtjei képesek elágazni, ami fémjel gombát. Az aktinomyceták elágazó filamentumainak hossza azonban eléri a több millimétert, míg a gomba micélium hossza néhány centiméter. A gombák hifái általában többszörösek, mint az aktinomyceták fonalai. A morfológia és fejlődés szerint az aktinomicétákat magasabb és alacsonyabb formákra osztják. A magasabb rendű organizmusok közé tartoznak a jó 14-es élőlények

15 kifejlődött szeptátum vagy nem szeptumú micélium és speciális spóraképző szervek. A spórák láncok formájában képződnek a légmicélium speciális spórát hordozó hifáin. A spóraképző szervek felépítése fajonként eltérő: hosszú vagy rövid, egyenes vagy spirális (6. ábra). A micélium jelenléte és a spóraképző szervek szerkezete miatt a magasabb aktinomyceták a micéliumgombákhoz hasonlítanak. Néhány aktinomicéta csak fiatal tenyészetben rendelkezik micéliummal, amely az életkor előrehaladtával bomlik, és rúd alakú és coccalis sejtek képződnek. Az aktinomyceták alacsonyabb formái nem rendelkeznek valódi micéliummal. A micéliumképző képesség csak a sejtek elágazási hajlamában fejeződik ki bennük. Az alsóbbrendű aktinomyceták közé tartoznak például a Mycobacterium nemzetség fajai, amelyek képesek megváltoztatni a sejtek alakját a tenyésztési kor előrehaladtával (7. ábra). Ezt a tulajdonságot pleomorfizmusnak nevezik. A magasabb rendű aktinomyceták közül a Streptomyces nemzetség fajai a természetes környezetben való előfordulás tekintetében a vezető helyet foglalják el. Az aktinomyceták fontos szerepet játszanak a 15

16 talajképzés és a talaj termékenységének megteremtése. Az aktinomyceták elpusztítják a sok más mikroorganizmus számára hozzáférhetetlen összetett szerves vegyületeket (cellulóz, humusz, kitin, lignin stb.). A Streptomyces nemzetség szinte minden faja specifikus, antibiotikus tulajdonságokkal rendelkező salakanyagokat képez. Egyes fajok növények, állatok és emberek kórokozói. A baktériumok fő formái mellett vannak száras és bimbózó baktériumok, amelyek prostek nevű kinövést hordoznak. (8. ábra) 16

17 A prostek funkciói eltérőek. Egyes baktériumokban a szaporodást, másokban a sejtnek a szubsztrátumhoz való rögzítését szolgálják. 17

18 18 Gyakorlati rész A munka célja a baktériumok képviselőinek morfológiájának tanulmányozása A munka sorrendje Az első munka elvégzése során a tanulók megtanulják a mikroszkóp használatát, megtekintik a baktériumok képviselőinek kész preparátumait, majd önállóan készítenek élő baktériumok preparátumait és mikroszkópozzák azokat. Először a hallgatók mikroszkóppal vizsgálják meg a kész, rögzített baktériumkészítményeket. A rögzített készítmények a bennük szuszpendált mikroorganizmusok vízi környezetüveglemezen szárítva és anilinfestékekkel megfestve. Egyes élő mikroorganizmusok készítményeit a tanulók önállóan készítik el. Ehhez egy kis csapvizet csepegtetünk egy tiszta üveglemezre, amelybe kalcinált és lehűtött bakteriológiai hurokkal kis mennyiségű vizsgált mikrobát juttatunk, alaposan összekeverjük és fedőlemezzel lefedjük. A felesleges vizet szűrőpapírral távolítjuk el. A gyógyszert a tárgyasztalra helyezzük és bilincsekkel rögzítjük. Először is, ha belenézünk a szemlencsébe és elforgatjuk a makrócsavart, 10x-es objektívvel kis nagyítás mellett éles képet kapunk a tárgyról. Ezután a mikroszkóp 40-szeres objektívvel nagy nagyításra kerül. A csavarok forgatását óvatosan kell végezni, mert túl élesen leeresztve a lencsét összetörheti a lencse. A mikroszkópos vizsgálatnál figyelembe kell venni, hogy a mikroszkóp, különösen nagy nagyításnál, nem rögzíti a tárgy teljes mélységét, ezért a cső mikrocsavarral történő fokozatos leengedésekor a tárgy először felülről, majd az optikai szakaszban látható. 1. Mikroorganizmusok fix preparátumainak megtekintése. A Lactococcus lactis a tejsavas fermentáció okozója; a sejtek alakja gömb alakú coccus; sejtek láncba kapcsolódnak. Tejsavtermékek előállítására használják.

19 Lactobacillus acidophilum pálcika alakú baktérium; a tejsavas erjedés kórokozója. Tejsavtermékek előállítására használják. Az acetobacter aceti pálcika alakú baktériumok, amelyek az etanolt ecetsavvá oxidálják. Élelmiszerecet előállítására használják. Streptomyces griseus actinomycete, sejtforma vékony elágazó szálak formájában; a sztreptomicin antibiotikum gyártója. Saccacharopolyspora erythrae actinomycete, sejtforma vékony elágazó szálak formájában; az eritromicin antibiotikum gyártója. 2. Bacillus subtillis sejtek élő preparátumainak megtekintése vékony mozgatható rudak formájában; vitákat formál; enzimkészítmények gyártója. Spirulina platensis cianobaktériumok; a cellák alakja egyetlen szál formájában, amely hengeres cellákból áll, szorosan egymás mellett; csúszó mozgással rendelkezik. Étrend-kiegészítőként használják. A jelentés tartalma 1. A mikroorganizmus latin neve. 2. Sejtmorfológia (adjon rajzot a mikroszkóp nagyításával és a sejtméretek arányának megtartásával). 3. A vizsgált baktériumok ipari felhasználása. Tesztkérdések 1. Ismertesse a mikroszkóp felépítését! 2. Hogyan határozható meg a mikroszkóp nagyítása? 3. Milyen alakúak a baktériumsejtek. 4. Nevezze meg az aktinomyceták morfológiájának jellemzőit! 5. Milyen baktériumok képviselőit ismeri, és mi a gyakorlati jelentőségük? 2. munka. Eukarióta mikroorganizmusok morfológiája Elméleti bevezetés 19

A mikrobiológusok által vizsgált 20 eukarióta mikroorganizmus a következők: gombák, élesztők, mikroalgák és néhány protozoa. A gombák morfológiája A gombák klorofillmentes mikroorganizmusok fonalas sejtekkel. Az általuk alkotott hosszú, elágazó szálakat hifáknak nevezzük. A hifák együtt alkotják a micéliumot. Méretét tekintve a gombás hifák sokkal nagyobbak, mint az aktinomyceták. Számos penészgomba micéliumát válaszfalak osztják (septate micélium), míg más típusú válaszfalak hiányoznak. A biotechnológiában elsősorban a penészgombákat használják termelőként. A "penészgombák" név alatt a phycomycetes, az erszényes állatok és a tökéletlen gombák néhány képviselője kombinálódik. Sűrű aljzatokon a penészgombák lekerekített pelyhes, pókhálószerű, pamutszerű vagy porszerű zöld, sárgás, fekete vagy fehér kolóniákat képeznek. A penésztelepek nagyszámú hifából állnak. A hifák nagy része a levegőben, néhány pedig az aljzat vastagságában fejlődik ki. A hifákon gyakran képződnek konidioforok, amelyeken vagy a sporangiumon belül, vagy láncokba rendeződő exospórák formájában képződnek spórák. A konidiospórák vagy konídiumok az ivartalan szaporodást szolgálják (10. ábra). A konídiumok kedvező körülmények közé kerülve micéliummá csíráznak. A penészgombák nagyon elterjedtek a természetben, és erős enzimatikus apparátussal rendelkeznek. Ezért ők a fő pusztítók szerves vegyületek a természetben. A penészgombákat az iparban is széles körben használják szerves savak, antibiotikumok és enzimek előállítására. 20

21 Az élesztő morfológiája Az élesztőgombák az egysejtű mikroszkopikus gombák külön csoportját alkotják, amelyek gyakorlati jelentőséggel bírnak. Az élesztősejtek nagy kerek vagy ovális sejtek (11. ábra). Egyes élesztőgombák kezdetleges micéliumot, úgynevezett "pseudomyceliumot" képezhetnek. A sejt mérete 3 µm és 10 µm között van, szélessége pedig 2 és 8 µm. A legtöbb élesztő bimbózás útján szaporodik. Ugyanekkor, 21-én

A sejt felszínén a vese kis dudora (néha nem is egy, hanem több) jelenik meg, amely fokozatosan növekszik, és végül elválik az azt termelő sejttől. Az anyasejttől leválasztott rügyből új élesztősejt lesz. Egyes élesztőgombák hasadással szaporodnak. Az élő élesztő (protoplazma) finomszemcsés tartalmában jól láthatóak a nagy vakuolák. A vakuolák a protoplazmán belüli üregek, amelyek sejtnedvvel vannak feltöltve. Vízben oldott elektrolitokból, fehérjékből, szénhidrátokból és enzimekből áll. Fiatal élesztősejtekben a protoplazma homogén, a fejlődés későbbi szakaszaiban a protoplazmában vakuolák jelennek meg, amelyek anyagcseretermékekkel feltöltött sejtnedvekkel. Amikor a tápközeg kimerül, sok élesztőben spóraképződés lép fel. Egyes élesztőfajtáknál a spórák lekerekítettek és sima héjjal borítják. Kedvező körülmények között a spórák kicsíráznak. Az élesztők széles körben elterjedtek a természetben. Megtalálhatók a szőlőben, más bogyókon és gyümölcsökön, a tejben, a vízben és a talajban, valamint az emberi bőrön. Sok élesztő alkoholos erjesztést végez, és alkohol előállítására használják sütés, borkészítés és sörfőzés során. 22 A protozoonok morfológiája A protozoonok az állatvilág egysejtű szervezetei. A mikroorganizmusok közül ezek a legösszetettebbek, és a többsejtű állatokra jellemző primitív szerveik vannak. Némelyiküknek szája és végbélnyílása, összehúzódási és emésztési vakuólumai vannak. A protozoonok ivartalanul (sejtosztódással) és ivarosan szaporodnak. A protozoonok osztályozása a mozgásmódokon alapul. 1. Sarcode. Pseudopodiák vagy hamis lábak segítségével mozgatják és rögzítik az ételt. Tipikus képviselője az Amoeba. Az amőbák mérete nem haladja meg a mikront.

23 2. Flagella. Sűrű plazmamembránjuk van, és flagella segítségével mozognak. A flagellák talajformái nagyon kicsik (2-5 µm), míg a vízformák nagyok (akár 20 µm). Tipikus képviselője Euglena. 3. Szempilla. A legjobban szervezett protozoonok. A sejtek mérete 20 és 80 µm között van. Jellemző képviselője a Paramecium cipőcsillós, amelyet halivadékok táplálékaként termesztenek. 4. Sporozoák. rögzített formák. Számos kórokozó, például a malária kórokozója, a Plasmodium. A legegyszerűbbek széles körben elterjedtek a természetben. Víztestekben, iszapban és talajban találhatók. A protozoonok értéke a természetben igen változatos. Különböző állatok gyomor-bélrendszerében élnek, részt vesznek az emésztésben növényi táplálék, részt vesznek a talaj szerves maradványainak mineralizációjában, és a szennyvíztisztító telepek biocenózisának is fontos részét képezik. Baktériumokkal és lebegőanyagokkal táplálkozva hozzájárulnak a víztisztításhoz. A legegyszerűbbek az indikátorok funkcióját látják el: bizonyos formák kidolgozásával lehet megítélni a szennyvíztisztítás minőségét. Így az amőbák túlsúlya és a csillók hiánya az eleveniszap összetételében a kezelő létesítmények gyenge teljesítményére utal. A Tetrahymena csillóst széles körben használják az elsődleges toxicitás értékelésére. ábrán a protozoák különböző típusai láthatók. 12. Az algák morfológiája Az algák a növényi szervezetek kiterjedt csoportját alkotják. Mindannyiukra közös klorofill jelenléte és az ebből fakadó fotoautotróf táplálkozás, a szerves anyagok szintézisének képessége a napfény és a szén-dioxid energia felhasználásával. Sok algában a klorofill zöld színét más pigmentek takarják el. Vannak köztük nagyon kicsi, mikroorganizmusnak minősített egy- és többsejtű formák, valamint 23

24 többsejtű élőlény, amelyek a tengerekben és óceánokban élnek, és néha elérik a gigantikus méretet .. A mikrobiológia vizsgálati tárgyai néhány mikroszkopikus méretű algák. Változatos formájúak, szárazföldön és vízi környezetben egyaránt élnek (13. ábra). 24

25 Gyakorlati rész A munka célja az eukarióta különböző csoportjainak morfológiájának tanulmányozása. A munkavégzés rendje A tanulók önállóan készítik el a gombák, élesztőgombák, algák és protozoonok képviselőinek élőkészítményeit; x40-es lencsével mikroszkóposak, és a mikroszkóp nagyításának jelzésével felvázolják őket. Az Aspergillus niger penészgombák micélium formájú sejteket képeznek válaszfalakkal; egyes hifákon elágazó, spórás konidiofórok találhatók. A konidioforok egysejtűek, gömbszerűen duzzadtak, a duzzanat felületén rövid tű alakú sejtek (sterigmák) találhatók, amelyek mindegyike fekete színű konídiumok láncolatát fűzi le. Szerves savak és enzimek előállítására használják. A Penicillium chrysogenum hifái elválasztottak; egyes hifákon elágazó, spórás konidiofórok találhatók. A konídiumok a gömbölyű elágazó konidioforok végén képződnek. A penicillin antibiotikum előállítására használják. 25

26 Élesztő Saccharomyces cerevisiae magányos élesztő ovális és lekerekített sejtekkel; bimbózással szaporodnak. Sörfőzéshez, sütéshez, alkoholgyártáshoz használják. A természetben a bogyók és más gyümölcsök felszínén találhatók. A Saccharomyces vini sejt alakja ovális és kerek; bimbózással szaporodnak; bimbózás után egy ideig nem válnak el, kis "ágakat" képeznek. A borkészítésben használják. A Rhodotorula glutinis sejtalakja elliptikus; egysejtű; bimbózással szaporodnak. Narancssárga színűek a sejtekben lévő karotinoidok miatt. Növekedhet olyan környezetben, ahol szénforrásként olajos szénhidrogének vannak. Takarmányélesztőként használják. Candida tropicalis élesztőgomba ovális és erősen megnyúlt sejtekkel, amelyek "pseudomyceliumot" alkotnak. Ásványi környezetben nőhet szénhidrogénekkel szénforrásként. Takarmányélesztőként használják. Ipari méretekben az alkohol- és papírgyártás hulladéktermékein termesztik. Alga A Chlorella vulgaris egy mikroszkopikus zöld alga lekerekített sejtekkel (5-10 mikron átmérőjű); autospórákkal szaporodnak, amelyek az anyasejt belsejében képződnek 4-32 mennyiségben, és membránjának felszakadása után szabadulnak fel. Használhatók tömeges termesztésre takarmányfehérje kinyerésére, valamint levegő regenerálására zárt rendszerekben (tengeralattjárók, űrállomások stb.). Scenedesmus sp. a zöld algák csoportjába tartozik; ovális sejtalakja van; a külső sejteknek gyakran hegyes végük van; a sejtek négyen kapcsolódnak egymáshoz. Élelmiszer-fehérje előállítására használják. 26

27 Protozoa A készítményt a levegőztető tartály eleveniszapjából készítjük. A protozoonok felfedezett képviselőinek morfológiájának tanulmányozása és lerajzolása. A jelentés tartalma 4. A mikroorganizmus latin neve. 5. Sejtmorfológia (adjon rajzot a mikroszkóp nagyításával és a sejtméretek arányának megtartásával). 6. A vizsgált mikroorganizmusok ipari felhasználása. Ellenőrző kérdések 1. Ismertesse a gombák képviselőinek sejtformáit és gyakorlati felhasználását! 2. Ismertesse az élesztősejtek alakját; nevezze meg a képviselőket, és meséljen gyakorlati használatukról. 3. Meséljen a mikroalgák morfológiájáról és gyakorlati felhasználásáról! 4. Nevezze meg a protozoonok képviselőit, és meséljen biotechnológiai alkalmazásukról! Munka 3. A mikroorganizmusok morfológiájának vizsgálati módszerei A baktériumok morfológiájának vizsgálatára legelterjedtebb módszer a mikroorganizmusok tiszta tenyészetéből vagy a vizsgált mintából előállított fix preparátumok mikroszkópos vizsgálata. Az élő állapotban lévő mikroorganizmusok vizsgálatát a nagyobb formák vizsgálatára és a sejtmozgás megfigyelésére használják. Fix mikroorganizmus-készítmények készítése Mikroorganizmusok fix preparátumainak elkészítéséhez először kenetet készítenek, szárítanak, rögzítenek, majd megfestenek. A keneteket tökéletesen tiszta üveglemezeken készítik el. Az üveg zsírtalanítható etil-alkohollal, azonos térfogatú alkohol és éter keverékével és másokkal.

28 folyadék. Az üveg zsírtalanításának legegyszerűbb és legkényelmesebb módja, ha mindkét oldalát áttöröljük egy darab mosószappannal. A szappant egy darab száraz vattával vagy szalvétával távolítják el az üvegből. Agar táptalajon tenyésztett baktériumkolóniából készült kenet gyártása során először egy csepp vizet vagy sóoldatot csepegtetünk egy zsírtalanított üvegre. Ezután a bakteriológiai hurkot az égő lángjában kalcináljuk. Ezt követően a kémcső belső falán lévő hurok lehűtése után a hurok befogja az agar nélküli telep egy részét. A tenyészetet tartalmazó hurkot egy csepp vízbe vagy sóoldatba helyezzük az üvegen, és 2 3 körkörös mozdulatot végzünk. A baktériumok egy része a folyadékban szuszpendálva van. A hurkon maradó felesleges baktériumokat egy égő lángjában égetik el, a hurkot vörösre melegítve. Ezután egy csepp szuszpenziót hűtött hurokkal az üvegre kenünk. A kenet felületének 1,5-2 cm átmérőjűnek kell lennie, a kenetnek vékonynak kell lennie, az anyag egyenletes eloszlásával. Ha folyékony tápközegen termesztett tenyészetből kenetet készítünk, akkor ugyanezen sterilitási szabályok betartásával hurokkal vagy pipettával összegyűjtünk egy csepp tenyészetet, és egy zsírmentes pohár közepére visszük. A pipettát a tenyészet többi részével fertőtlenítő oldattal ellátott edénybe merítjük. A csepp egyenletesen oszlik el az üvegen egy bakteriológiai hurok segítségével. A hurkot az égő lángjában elégetjük, és állványba vagy pohárba helyezzük. A kenetet levegőn vagy meleg levegőáramban szárítják, a hosszanti bordáknál fogva magasan az égő lángja fölött. A kenet határait viaszceruzával körvonalazzuk hátoldalüveget, és a kenet oldalára az üveg egyik végére tedd a gyógyszer számát. Ezekkel a jelekkel könnyedén navigálhat az üvegen lévő kenet helyén. A megszáradt kenet rögzítve van. A rögzítés célja a következő: 1) a mikrobák elpusztítása, ami biztonságossá teszi a gyógyszert a további munkához; 2) rögzítse a mikrobákat az üveghez, hogy ne mosódjanak le festéskor és vízzel történő mosáskor; 3) javítja a festékek érzékenységét. 28

29 A legegyszerűbb, szinte minden mikrobiológiai tárgyra alkalmas és a gyakorlatban a legelterjedtebb módszer az égőlángban történő rögzítés. Ehhez a tárgylemezt 3-4-szer átvezetjük az égő lángjának legforróbb felső részén, elkerülve a készítmény túlzott túlmelegedését, hogy ne okozzon fehérjedenaturációt és ne rontsa meg a baktériumok szerkezetét és morfológiáját. Tegyen különbséget egyszerű és összetett között differenciális módszerek színezés. Az egyszerű festést a vizsgált anyagban lévő mikrobák kimutatására, számuk, alakjuk és elhelyezkedésük meghatározására használják. Az egyszerű színezés abból áll, hogy bármely anilinfestéket felvisznek a készítményre. Leggyakrabban erre a célra a bíborvörös színt, valamint a metilénkék (Leffler-kék) kék szín lúgos oldatát használják. Festéstechnika: jól rögzített készítményt kenettel felfelé helyezünk a fürdő feletti üveghídra. A jelzett festékek egyikét pipettával vagy cseppentővel visszük fel a kenet felületére. A fukszint az 1-es keneten 3 percig, a kék 3-ason 5 percig tartjuk. A festéket a kenetről lecsepegtetjük, a készítményt vízzel mossuk, levegőn szárítjuk, vagy szűrőpapírral óvatosan átitatjuk. A szárított kenetre egy csepp immerziós olajat csepegtetünk, a készítményt a mikroszkóp tárgyasztalára helyezzük, és áteresztő fényben immerziós objektívvel (90) mikroszkóppal mikroszkópozzuk. A baktériumok festésének differenciális módszerei. Kifinomult festési módszerek vannak nagyon fontos meghatározásában és megkülönböztetésében különféle fajták mikrobák. A mikrobiális sejt fizikai-kémiai szerkezetének sajátosságain alapulnak, és a sejtszerkezet részletes tanulmányozására és azonosítására szolgálnak. fémjelek néhány színezékhez. Ezekkel a módszerekkel a kenetet többféle festékkel megfestik, és további maró- vagy fehérítőszerekkel, alkohollal, savval stb. kezelik. Ezek a módszerek közé tartozik a baktériumok megkülönböztetésének legfontosabb festési módszere, a Gram-festés. Ez a módszer feltárja a 29

30 a baktériumok azon képessége, hogy megőrizzék a festéket vagy elszíneződést az alkoholban, ami a sejtfal kémiai szerkezetével függ össze. Minden baktérium két csoportra osztható a sejtfal szerkezete szerint: 1) Gram-festő Gram-pozitív és 2) Gram-negatív, nem Gram-festődés. A Gram-festéssel való kapcsolat olyan fontos különbségi jellemzője a baktériumoknak, hogy szükségszerűen szerepel a jellemzésükben, és taxonómiai jellemzőként szolgál. 30 grammos festési technika Egy enciánibolyával előzőleg impregnált szűrőpapír csíkot helyezünk egy rögzített kenetre. Vigyen fel 3-5 csepp csapvizet a csíkra. 1-2 perc elteltével a papírt csipesszel eltávolítjuk, és a Lugol-oldatot a készítményre öntjük. 30 másodperc és 1 perc elteltével a Lugol-oldatot lecsepegtetjük. Alkalmazzon néhány csepp 96 O-os alkoholt. Színezd el 1 percig, amíg a szürkés-lila patakok eltűnnek. A gyógyszert vízzel mossuk. A fukszint a kenetre öntjük és 1-2 percig tartjuk. A festéket lecsepegtetjük, a készítményt vízzel mossuk, szűrőpapírral szárítjuk. Mikroszkóposan merülő rendszerrel. A Gram-pozitív baktériumok ibolya-kékre festik (például a vajsavas fermentációs bacillus Clostridium pasteurianum), a Gram-negatív baktériumok pedig rózsaszínes-vörösre (Escherichia coli). A hagyományos Gram-festési technika mellett van egy gyors és egyszerű módszer a Gram-differenciálásra festés nélkül. Baktériumsejteket (lehetőleg 1-2 naposak) egy tárgylemezre egy csepp 3%-os KOH-oldatban hurokba helyezzük, körkörös mozdulatokkal megkeverjük, majd 5-8 másodperc múlva a hurkot élesen megemeljük. A Gram-negatív baktériumok szuszpenziója viszkózussá válik, és a hurok mögé nyúlik, nyálkás sávokat képezve. A Gram-pozitív baktériumok egyenletesen oszlanak el egy csepp lúgban (mint a vízben). A reakció akkor tekinthető negatívnak, ha 60 másodpercen belül nem figyelhető meg a nyálkahártya képződése. A viszkozitás növekedését az oldatban lévő gram-negatív baktériumok sejtfalának lízise okozza

31 lúg és DNS felszabadulás. A baktériumok festés nélküli Gram-differenciálását csak az előzetes diagnózishoz, vagy a Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumtelepek hozzávetőleges arányának kiszámításához szabad használni. Élő és elhalt sejtek azonosítása metilénkékkel történő festéssel Az élő és elhalt sejtek száma metilénkék oldattal történő festéssel határozható meg. A módszer a mikroorganizmusok élő és elhalt sejtjeinek eltérő áteresztőképességén alapul. Az elhalt sejtekben a sejtpermeabilitás romlik, így a festék szabadon áthalad a citoplazma membránon, és a protoplazma adszorbeálja. Mikroszkóp alatt az elhalt sejtek kéknek, az élők színtelenek vagy halványkéknek tűnnek. A festést a következőképpen hajtjuk végre: egy csepp 2%-os metilénkék oldatot csepegtetünk egy tárgylemezre, fedjük le fedőlemezzel, a felesleges festéket szűrőpapírral húzzuk le. A gyógyszert mikroszkóp alatt nézzük, 10 látómezőben megszámoljuk az élő és elhalt sejtek számát; az elhalt sejtek számát százalékban fejezzük ki. Példa: az élő sejtek átlagos száma egy látómezőben 10, az elhalt sejtek átlagos száma egy látómezőben 5, teljes szám sejtek egy látómezőben sejtek 100% 5 sejt X X 33,3% 15 Így az elhalt sejtek száma a vizsgált mikroorganizmus-szuszpenzióban 33,3% volt. Sejtméretek meghatározása A mikroorganizmussejtek méretének meghatározásához speciális okulárra van szükség skálával (okuláris mikrométer) és tárgymikrométerrel. Szemmikrométer, 31

A 32. ábra a legegyszerűbb esetben egy üvegkorong, amelyre lineáris skálát nyomtattak, és amelyet az okulárba helyeznek (14a. ábra). A tárgymikrométer egy üveglemez, amelynek közepébe 1 mm hosszú lineáris skála van gravírozva, 10 µm osztásértékkel. Mérés előtt meg kell határozni az okuláris mikrométer osztásértékét a mikroszkóp minden nagyítására. Ehhez a mikrométer tárgyat a mikroszkóp tárgyasztalára helyezzük, és preparátumnak tekintjük; ebben az esetben a tárgymikrométer egyik látható osztása a szemmikrométer skálájának nullajeléhez igazodik, és mindkét skála osztása egybeesik (15. ábra). Számolja meg, hány okuláris és objektív osztás esik erre a szegmensre, és számítsa ki az okuláris mikrométer osztásainak értékét. Ha ezt követően tárgymikrométer helyett mikroorganizmus-készítményt helyezünk a tárgyasztalra és megvizsgáljuk 32

A 33. ábrán azonos nagyítás mellett lehetőség van egy mikrobiális sejt méretének mérésére egy szemmikrométer skáláját használva vonalzóként. A pontos mérésekhez speciális okuláris mikrométert használnak csúszó nulla jelzéssel, amely egy mérődobhoz van társítva (14b. ábra). Lehetővé teszi a mikroorganizmusok méretének meghatározását tized mikron pontossággal. A nulla jel egy dupla függőleges vonal, amelynek közepe két vékony vonal kereszt formájú metszéspontjának felel meg. A mérések előtt meg kell találni a mérődob skálaosztásának értékét. A referencia objektum egy mikrométer. A mérődob forgatásával a tárgy-mikrométer skála több osztását nulla jellel körbeírjuk. A dupla függőleges vonal a mérődob teljes fordulatszámát mutatja. A mikroorganizmusok mérése során mozgassa a nulla jelet a tárgy mentén, és olvassa le a mérődob leolvasását. Gyakorlati rész A munka célja a mikroorganizmusok morfológiájának vizsgálatának alapvető módszereinek elsajátítása. 33

34 Munkarend 1. Tejsavbaktérium fix preparátumok készítése biokefirből és acidophilusból. 2. Gram-festés Bacillus subtilis (gram+) és Escherichia coli (gram-) sejtek. 3. Határozza meg a Saccharomyces cerevisiae élesztősejtek méretét! 4. Határozza meg a Saccharomyces cerevisiae élő és elhalt sejtjeinek számát az élesztőszuszpenzióban. 34 A jelentés tartalma 1. Tejsavbaktérium-sejtek morfológiája (tejsavbaktériumok fix preparátumainak rajzai mikroszkópos nagyítással). 2. Gram-negatív és gram-pozitív baktériumok fix preparátumainak rajzai. 3. Az okuláris mikrométer mérődobjának osztásértékének meghatározása. 4. Saccharomyces cerevisiae élesztősejt méretei. 5. Élő és elhalt sejtek száma az élesztőszuszpenzióban. Ellenőrző kérdések 1. Hogyan készítsünk fix baktériumkészítményt? 2. Mi az oka a baktériumok közötti különbségnek a Gram-festésben? 3. Mi az a Gram-festési módszer? 4. Hogyan határozzuk meg a mikroorganizmusok méretét? 5. Hogyan határozható meg a mikroorganizmusok élő és elhalt sejtjeinek száma metilénkékkel történő festéssel? 2. témakör. Mikroorganizmusok tenyésztése: táptalaj készítésének elvei; sterilizációs módszerek; kultúrnövények és mikroorganizmusok szubkultúráinak módszerei. A táptalajok osztályozása és előkészítése A mikroorganizmusok tenyésztése a szaporodásukhoz szükséges feltételek mesterséges megteremtését jelenti. A termesztéshez

35 mikroorganizmus a laboratóriumban vagy az iparban, tápközegeket használnak, amelyek tartalmazzák a mikroorganizmusok létfontosságú tevékenységéhez szükséges összes anyagot. A környezetből a tápanyagok a mikroorganizmus sejtjébe jutnak, az anyagcseretermékek a sejtből a környezetbe távoznak. A mikroorganizmusok létfontosságú tevékenységéhez víz, szén, oxigén, nitrogén, kén, foszfor, kálium, kalcium, magnézium, vas és nyomelemek szükségesek. Mindezeket az anyagokat a táptalajnak tartalmaznia kell. Egyikük nélkül is vagy egyáltalán nem lesz növekedés, vagy elhanyagolható lesz. A szenet, hidrogént, nitrogént, foszfort és ként biogén elemeknek nevezzük, mivel a sejtek száraz tömegének körülbelül 90-95%-át teszik ki. A káliumot, magnéziumot, kalciumot és nátriumot makrotápanyagoknak vagy hamuelemeknek nevezzük. A sejtek száraz tömegének 5-10%-át teszik ki. A vas-, mangán-, molibdén-, kobalt-, réz-, vanádium-, cink-, nikkel- és néhány más nehézfém-kationt nyomelemeknek nevezzük, és a sejtek száraz tömegének egy százalékát teszik ki. A szén minden élő szervezet számára a legfontosabb. Mindenben benne van szerves molekulák a sejtben, és a száraz biomassza körülbelül 50%-át teszi ki. A szénnel kapcsolatban minden organizmus autotróf és heterotróf szervezetre oszlik. Az autotrófok szén-dioxidot használnak szénforrásként. A heterotrófoknak kész szerves vegyületekre van szükségük. Különféle szerves anyagok szolgálhatnak szénforrásként a legtöbb mikroorganizmus számára: fehérjék és bomlástermékeik, szénhidrátok, zsírok, szénhidrogének. A nitrogén táplálkozás értékét tekintve a második helyen áll a szén után. A nitrogén az aminosavak és más sejtkomponensek része, amelyek biztosítják az élőlények életképességét. A nitrogén a sejtek szárazanyagának 14%-át teszi ki. A nitrogénforrás nitrogéntartalmú szerves vagy ásványi vegyületek. Az ásványi nitrogén leggyakoribb forrásai az ammóniumsók és a nitrátok. A fehérjéket, aminosavakat, nukleotidokat szerves nitrogénforrásként használják. Egyes prokarióták használhatják a légköri nitrogént. 35

36 A foszfor és a kén fontos sejtbiopolimerek részét képezik. A foszfor (a sejt szárazanyagának 3%-a) a nukleotidok és az ATP, a kén (kevesebb, mint 1%) pedig egyes aminosavak része. Foszforforrásként általában foszfátokat használnak, a ként pedig szulfátok. A foszfor és a kén szerves vegyületek formájában is felhasználható. A mikroorganizmusok szaporodásához kis mennyiségben makrotápanyagokra van szükség: ionokra alkálifémek(Na+, K+) és alkáliföldfémek(Mg 2+, Ca 2+), amelyek játszanak fontos szerep a mikroorganizmusok tevékenységében. A mikrobiális sejtekben található makrotápanyagok szükségesek a permeabilitás, az ozmotikus nyomás és a pH szabályozásához. Ezeken a fémeken kívül számos nyomelem (nyomelem) szükséges a mikrobiális növekedéshez. Ásványi összetétel tápközeg képezi az elektromos töltések eloszlását a sejtfelszínen. A sejtek elektromos potenciáljának megváltoztatása megváltoztathatja fiziológiai aktivitásukat. A nyomelemek egyik fő funkciója az enzimatikus katalízisben való részvétel. Jelenleg a sejtben lévő összes enzim negyedik részének hatása fémekhez kapcsolódik. A tápközeg fő összetevői mellett egyes mikrobák normális fejlődéséhez további anyagokra is szükség van, amelyeket "növekedési faktoroknak" neveznek. A növekedési faktorok a különböző tényezők együttes neve kémiai természet kapcsolatokat. Ezek főként szerves anyagok, amelyek nagyon kis mennyiségben történő hozzáadása serkenti a mikroorganizmusok növekedését és szaporodását. Olyanok a mikrobák számára, mint a vitaminok a magasabb rendű organizmusoknak. A növekedési faktorok elsősorban a B-vitaminok, amelyek a mikrobiális anyagcsere szabályozói és serkentői, vagy aminosavak. Növekedési faktorként élesztő autolizátumot, élesztőkivonatot, natív fehérjéket (vér, szérum) stb. használnak.. A mikroorganizmusok táplálkozási igényei igen változatosak. Emiatt nincs univerzális 36

37 táptalaj, bármely mikroorganizmus tenyésztésére egyaránt alkalmas. A tenyésztési céloktól és az adott mikroorganizmus igényeitől függően a tápközegek három szempontból különböznek egymástól: összetételükben, fizikai állapotés időpont egyeztetés. A tápközegek összetételét tekintve két csoportra oszthatók: 1) természetes (természetes); 2) mesterséges (szintetikus). A természetes közegek azok, amelyek kémiai összetétele meghatározatlan, mivel növényi vagy állati eredetű termékeket, különféle iparágakból származó szerves vegyületeket tartalmazó hulladékokat tartalmaznak. A természetes tápközegek sokféle mikroorganizmus intenzív növekedését biztosítják. Szerves és szervetlen vegyületek gazdag készletét tartalmazzák, beleértve az összes szükséges elemet és további anyagokat. Például a következő táptalajokat használják leggyakrabban a laboratóriumban. 1. Húsból készült hús-peptonleves (MPB) kivonat, nem teljes fehérjelebontó pepton termékeit tartalmazza, melyek szerves szenet, szerves nitrogént, foszfortartalmú, kéntartalmú szerves anyagokat tartalmaznak. A BCH a mikroorganizmusok számára szükséges összes ásványi anyagot is tartalmazza. Az MPB-t sokféle baktérium tenyésztésére használják. 2. Csíráztatott árpaszemekből kivont sörsörlé, cukrot (főleg malátacukrot), nitrogéntartalmú anyagokat, hamuelemeket, különféle növekedési faktorokat és szénforrásként B-vitamint tartalmaz A sörlé jó környezet számos mikroorganizmus, különösen élesztő, penészgombák fejlődéséhez. Jó természetes tápközeg a tej, a burgonya, a gyümölcs- és zöldségfőzetek. Az iparban általában félszintetikus vagy természetes anyagokat használnak. Nagyon gyakran mikrobiológiai vagy élelmiszeripari hulladékot használnak szénforrásként: melaszt (cukorgyártásból származó hulladék), 37

Az Orosz Föderáció Mezőgazdasági Minisztériuma KAMCSATKA ÁLLAMI MŰSZAKI EGYETEM BIOLÓGIAI ÉS KÉMIAI TANSZÉK KÉMIAI ÉS VÍZMIKROBIOLOGIAI ELŐKÉSZÍTÉS

Vezetéknév Kód Név Munkahely Körzeti kód Összesen: A XXXII Összoroszország regionális szakaszának gyakorlati fordulójának feladatai. BIOKÉMIA. A KIVONATOK AZONOSÍTÁSA Felszerelés: Kémcsövek (3 kémcső kivonattal

Vezetéknév Kód Név Kerület/város Munkahely Kód Összesen: A területi szakasz gyakorlati fordulójának FELADATAI XXVIII Össz-oroszországi olimpia biológiából tanuló diákok. 2011-12 tanév év. 11. évfolyam BIOKÉMIA. Felszerelés,

MIKROBIOLÓGIA MAGYARÁZÓ MEGJEGYZÉS A „Mikrobiológia”, 9. évfolyam” TANFOLYAM MUNKAPROGRAMJÁHOZ, a „Mikrobiológia” szabadon választható kurzus szerzői programja alapján Averchinkova O.E. Biology. választható kurzusok. Orvosi

FELADATOK MIKROBIOLÓGIA (max. 20 pont) A munka célja: Két ismert erjesztett tejtermékből preparátum készítése, elemzése. Felszerelés: Mikroszkópok, égők vagy spirituszlámpák, tárgylemezek,

KINGDOM OF PROKARYOTES SUBKINGDOM OF BACTERIA A baktériumok prokarióták. Ezek a legegyszerűbb, legkisebb és legelterjedtebb élőlények, amelyek több mint 2 milliárd éve léteznek a Földön, de együtt

Rendszer AZ ÖKOVILÁGÉRÓL A Földön létező összes élőlény négy birodalomra oszlik: Drobyanki, Gombák, Növények, Állatok. A sörétes puskák prokariótákhoz (nukleáris előtti szervezetekhez), gombákhoz, növényekhez,

A projekt témája A moszkvai Butovszkij erdő pangó víztározójában élő mikroorganizmusok vizsgálata Szerző(k): Diana Kasaeva, Kristina Kasaeva, Alisa Tkachenko Iskola: GBOU SOSH 1945 Évfolyam: 5. évfolyam Témavezető:

Laboratóriumi munka "Sapkás gomba testének felépítése" Cél: kalapgomba testének felépítésének vizsgálata Felszerelés: kalapgomba (vargánya, rusnya, csiperkegomba, vargánya, vajas, mézes galóca stb.), készen

SZÖVETSÉGI ÁLLAMI SZAKMAI FELSŐOKTATÁSI INTÉZMÉNY "OMSZKI ÁLLAMI AGRÁREGYETEM, P.A. STOLYPIN NEVEZETT" ÁLLATORVOSI ÉS BIOTECHNOLÓGIAI INTÉZET

Jóváhagyom az Orosz Föderáció Állami Egészségügyi Főorvos-helyettesét - Az Oroszországi Egészségügyi Minisztérium Állami Egészségügyi és Járványügyi Felügyeleti Központjának főorvosát E.N. BELYAEV 2004. február 20. N 24FTs / 900 Dátum

KutatásÉlesztő: a kis gombák izgalmas élete A mű szerzője: a GBOU Gimnázium 1748. évi "Függőleges" 5 "B" osztályának tanulója, Kutaytsev Georgij Valerievich Vezető: Nosova Elena Vladimirovna,

Módszer élesztőgombák és penészgombák kimutatására élelmiszerekben MÓDSZERTANI AJÁNLÁSOK Élesztőgombák és penészgombák kimutatására szolgáló módszerek élelmiszerekben Irányelvek.- M.: szövetségi központ

4. téma: Baktériumok. Gomba. Lichens. A. rész 1. A cianobaktériumok jelenléte a zuzmóban biztosítja 1) a légkör és a talaj nedvességének felszívódását 2) a fény felhasználását a tápanyagok képzésére

BIOLÓGIA AZ ÉLŐ TERMÉSZET TUDOMÁNYA Biológiai tanulmányok: MI BIOLÓGIAI TANULMÁNYOK z élő szervezetek szerkezete és életfunkciói; z törvényei egyéni és történelmi fejlődés szervezetek. 3 ORGANIKAI RENDSZER

1. A nitrifikáló baktériumok a következő csoportokba sorolhatók: 1) kemotrófok 2) fototrófok 3) szaprotrófok 4) heterotrófok. TÉMA "Fotoszintézis" 2. A napfény energiája a sejtekben kémiai energiává alakul át 1) fototrófok

MIKROBIOLÓGIA ÉS GENETIKA 1. Feladat. Készítsen és elemezzen preparátumokat két ismert fermentált tejtermékből! (max. 10 pont) Felszerelés: Mikroszkópok, égők vagy szellemlámpák, tárgylemezek,

Minősítő tesztek a "Bakteriológia" szakterületen Vizsgálati tételek bankja a minősítésre való felkészüléshez Válasszon ki egy vagy több helyes választ

Feladatok 3. Egy- és többsejtű élőlények. Gombabirodalom 1. Mit tartalmaznak a nyálkahártya gomba hosszú ágainak végén lévő fekete golyók? 1) mikroszkopikus gyümölcsök 2) tápanyagok 3)

SZÖVETSÉGI ÁLLAMI KÖLTSÉGVETÉSI FELSŐOKTATÁSI INTÉZMÉNY "ORENBURG ÁLLAMI AGRÁREGYETEM" Útmutató a hallgatók önálló munkájához

A mikroorganizmusok morfológiája 1. lehetőség 1. Gracilicuták a következők: A. vékony falú baktériumok B. vastag falú baktériumok C. hibás sejtfalú baktériumok. G. baktériumok finom sejtfallal. 2. K

Feladat tanulóknak: ki kell választani a helyes válaszokat (lehet egytől többig). A mikroorganizmusok morfológiája 1. lehetőség 1. Gracilicuták a következők: A. vékony falú baktériumok B. vastag falú

Alga Alga alsóbbrendű növények Az algák alacsonyabb rendű növények kiterjedt és heterogén csoportja. Az algák a bolygó legnagyobb számú és egyik legfontosabb fotoszintetikus organizmusa. Találkoznak

Önkormányzati költségvetési oktatási intézmény Alar középfokú általános iskola"Ellenőrzött" A Honvédelmi Minisztérium vezetője 0 éves jegyzőkönyv "Egyetértésben" Vízgazdálkodási igazgatóhelyettes MBOU 0 év "Jóváhagyom"

1 A mikroorganizmusokkal végzett munka alapvető módszerei 1. Feladat Bevezetés a mikrobiológiába Biztonsági óvintézkedések mikroorganizmusokkal végzett munka során A feladat célja. Ez a feladat bemutatja a biztonságos munkavégzés szabályait

Feladatok 2. Az élőlények sejtszerkezete 1. Milyen kémiai elem a sejt létfontosságú szerves vegyületeinek része? 1) fluor 2) szén 3) réz 4) kálium 2. Tárolóanyagként

A penészgombák fizikai tényezők hatása a gombák növekedésére és fejlődésére. Logunov Stepan 7g Projektmenedzser Bulycheva M.B. A vizsgálat relevanciája A gombaspórák rendkívül ellenállóak a káros hatásokkal szemben

5. teszt 1. lehetőség. "Gomba" téma Feladatok egy helyes válasz kiválasztásával. 1. A fő különbség a gombák és a növények között, hogy: sejtszerkezetűek, felszívják a talajból a vizet és az ásványi sókat,

1. Magyarázó megjegyzés A program az FGBOU VPO BSU posztgraduális tanulmányaira jelentkezők számára készült a 03.02.03 - Mikrobiológia szakirányon A program magasan képzett szakemberek képzésére az irányba

ÁLTALÁNOS MIKROBIOLÓGIA
I. fejezet Mikroszkóp és mikroszkópos technika
1. Fény-optikai mikroszkópia
2. Sötéttér-mikroszkópia
3. Fáziskontraszt mikroszkópia
4. Lumineszcens (fluoreszcens) mikroszkópia
fejezet II. A termesztés, a vetéstechnika és a mikroorganizmusokkal való munkavégzéshez szükséges eszközök általános ismerete
fejezet III. Módszerek mikroorganizmus-készítmények előállítására
fejezet IV. mikrobiális sejtkutatás
1. Mikroorganizmusok sejtjeinek formái
2. A mikroorganizmus sejtek szerkezete (citokémiai kutatási módszerek)
3. Mikroorganizmussejtek Gram-festése
4. A spórák színezése baktériumokban
5. Kapszula színező
6. A flagellák színezése
7. A baktériumok nukleáris anyagának színezése
8. Mikroorganizmus sejtzárványok festése
V. fejezet A mikroorganizmusok táplálkozása
1. Az egyes tápanyagok jelentősége
2. Tenyésztáptalaj készítése
3. Sterilizálási módszerek
fejezet VI. A baktériumok számának elszámolása és a tiszta kultúra izolálása
1. A talajban lévő baktériumok számának elszámolása
2. A baktériumok minőségi összetételének meghatározása
3. A mikroorganizmusok számának elszámolása vízben és egyéb folyadékokban
4. A levegőben lévő baktériumok számának elszámolása
5. Tiszta baktériumtenyészetek izolálása
fejezet VII. A baktériumok típusának meghatározása
fejezet VIII. A mikroorganizmusok nitrogénmentes átalakulása szerves anyag
Fermentációs folyamatok
1. Alkoholos erjesztés
2. Tejsavas erjesztés
3. Vajas erjesztés
4. Pektin anyagok fermentációja
5. Cellulóz fermentáció
6. Rostok oxidációja
7. Zsír oxidációja
8. Szénhidrogén oxidáció
fejezet IX. Szerves és ásványi nitrogénvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
1. Ammonifikáció
2. Nitrifikáció
3. Denitrifikáció (nitrát légzés)
4. A légköri nitrogén biológiai rögzítése
X. fejezet
1. Kénvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
2. Mikroorganizmusok részvétele a vas átalakulásában
3. Foszforvegyületek átalakítása mikroorganizmusok által
MEZŐGAZDASÁGI MIKROBIOLÓGIA
fejezet XI. A talaj általános mikrobiológiai vizsgálata
1. Kutatási módszerek
2. A mikroorganizmusok csoportjai, a táptalaj összetétele és elkészítése
3. Átlagos talajminta vétele és a minta előkészítése mikrobiológiai vizsgálatra
4. Talajszuszpenzió készítése
5. A mikroorganizmusok különböző csoportjainak számbavétele
6. A talajban található mikroorganizmusok összszámának meghatározása közvetlen mikroszkópos számlálással
fejezet XII. A mikroorganizmusok cenózisainak vizsgálata
1. Üvegszennyezési módszer N. G. Kholodny szerint
2. A talajban előforduló mikrobiális cenózisok vizsgálata Perfiliev és Gabe módszerével
3. Aristovskaya által módosított Perfiliev kapilláris módszer
4. A humuszanyagok lebontásában részt vevő őshonos csoportba tartozó mikroorganizmusok azonosítása Winogradsky módszere szerint a Tepper módosításában
5. A humuszanyagok lebontásában részt vevő mikroorganizmusok azonosítása Tepper-módszer szerint
fejezet XIII. A talaj biológiai aktivitásának meghatározása
1. A talaj biológiai aktivitásának meghatározása a vászon bomlási intenzitásával (Mishustin, Vosztrov és Petrova módszere)
2. A talaj teljes mikrobiológiai aktivitásának meghatározása ürítéssel szén-dioxid
3. A talaj ammonifikáló aktivitásának meghatározása
4. Mikroorganizmusok ammonifikáló aktivitásának meghatározása
5. A talaj nitrifikáló aktivitásának meghatározása
6. A talaj denitrifikáló aktivitásának meghatározása
7. Mikroorganizmusok nitrogénmegkötő aktivitásának meghatározása
fejezet XIV. Baktériumok vizsgálata a növények gyökérzónájában és a gyökereken
1. Baktériumok számbavétele a rizoszférában Krasilnikov módszerrel
2. A rizoszféra és a gyökér mikroflóra számbavétele a gyökerek egymást követő mosásának módszerével az E szerint. 3. Tepper
3. Göbbaktériumok tiszta tenyészeteinek izolálása, mennyiségi elszámolása a talajban, aktivitásuk és virulenciájuk meghatározása
fejezet XV. Bakteriális készítmények elemzése
fejezet XVI. Takarmánymikrobiológia
1. A szemek epifita mikroflórája és változása a takarmánytárolás során
2. Silóanalízis
3. Takarmányélesztő
fejezet XVII. A tej és tejtermékek mikroflórája
1. A tej bakteriológiai elemzése
2. Módszerek tejsavbaktériumok tiszta kultúrába történő izolálására
3. Ismerkedés a vaj mikroflórájával
Irodalmi index