VISPĀRĒJĀ MIKROBILOĢIJA
I nodaļa. Mikroskops un mikroskopijas tehnika
1. Gaismas optiskā mikroskopija
2. Tumšā lauka mikroskopija
3. Fāzes kontrasta mikroskopija
4. Luminiscējošā (fluorescējošā) mikroskopija
II nodaļa. Vispārējie priekšstati par audzēšanu, sēšanas tehniku ​​un nepieciešamo aprīkojumu darbam ar mikroorganismiem
III nodaļa. Mikroorganismu preparātu sagatavošanas metodes
IV nodaļa. mikrobu šūnu izpēte
1. Mikroorganismu šūnu formas
2. Mikroorganismu šūnu struktūra (citoķīmiskās izpētes metodes)
3. Mikroorganismu šūnu iekrāsošana ar gramiem
4. Sporu iekrāsošanās baktērijās
5. Kapsulas krāsošana
6. flagellas krāsošana
7. Baktēriju kodolvielas iekrāsošanās
8. Mikroorganismu šūnu ieslēgumu krāsošana
V nodaļa. Mikroorganismu uzturs
1. Atsevišķu uzturvielu nozīme
2. Barotnes sagatavošana
3. Sterilizācijas metodes
VI nodaļa. Baktēriju skaita uzskaite un tīrkultūras izolācija
1. Baktēriju skaita uzskaite augsnē
2. Baktēriju kvalitatīvā sastāva noteikšana
3. Mikroorganismu skaita uzskaite ūdenī un citos šķidrumos
4. Gaisā esošo baktēriju skaita uzskaite
5. Baktēriju tīrkultūru izolēšana
VII nodaļa. Baktēriju veida noteikšana
VIII nodaļa. Mikroorganismu pārveide par slāpekli nesaturošu organiskās vielas
Fermentācijas procesi
1. Alkoholiskā raudzēšana
2. Pienskābes fermentācija
3. Sviesta fermentācija
4. Pektīna vielu fermentācija
5. Celulozes fermentācija
6. Šķiedru oksidēšana
7. Tauku oksidēšana
8. Ogļūdeņražu oksidēšana
IX nodaļa. Organisko un minerālo slāpekļa savienojumu transformācija ar mikroorganismiem
1. Amonifikācija
2. Nitrifikācija
3. Denitrifikācija (nitrātu elpošana)
4. Atmosfēras slāpekļa bioloģiskā fiksācija
X nodaļa
1. Sēra savienojumu pārvēršana mikroorganismu ietekmē
2. Mikroorganismu līdzdalība dzelzs transformācijā
3. Fosfora savienojumu transformācija mikroorganismu ietekmē
LAUKSAIMNIECĪBAS MIKROBILOĢIJA
XI nodaļa. Augsnes vispārējā mikrobioloģiskā analīze
1. Pētījumu metodes
2. Mikroorganismu grupas, barotņu sastāvs un sagatavošana
3. Vidēja augsnes parauga ņemšana un parauga sagatavošana mikrobioloģiskajai analīzei
4. Augsnes suspensijas sagatavošana
5. Dažādu mikroorganismu grupu uzskaite
6. Kopējā mikroorganismu skaita noteikšana augsnē ar tiešo skaitīšanu mikroskopā.
XII nodaļa. Mikroorganismu cenožu izpēte
1. Stikla piesārņojuma metode saskaņā ar N. G. Holodniju
2. Mikrobu cenožu izpēte augsnē pēc Perfiļjeva un Gabes metodes
3. Aristovskajas modificēta Perfiļjeva kapilārā metode
4. Autohtonās grupas mikroorganismu identificēšana, kas iesaistīti humusvielu sadalīšanā, pēc Vinogradska metodes Tepera modifikācijā.
5. Humusvielu sadalīšanā iesaistīto mikroorganismu identificēšana pēc Tepper metodes
XIII nodaļa. Augsnes bioloģiskās aktivitātes noteikšana
1. Augsnes bioloģiskās aktivitātes noteikšana pēc audekla sadalīšanās intensitātes (Mišustina, Vostrova un Petrovas metode)
2. Augsnes kopējās mikrobioloģiskās aktivitātes noteikšana ar ekskrēciju oglekļa dioksīds
3. Augsnes amonizējošās aktivitātes noteikšana
4. Mikroorganismu amonifikējošās aktivitātes noteikšana
5. Augsnes nitrificējošās aktivitātes noteikšana
6. Augsnes denitrificējošās aktivitātes noteikšana
7. Mikroorganismu slāpekli piesaistošās aktivitātes noteikšana
XIV nodaļa. Baktēriju izpēte augu sakņu zonā un uz saknēm
1. Baktēriju uzskaite rizosfērā pēc Krasiļņikova metodes
2. Rizosfēras un sakņu mikrofloras uzskaite ar sakņu secīgas mazgāšanas metodi saskaņā ar E. 3. Tepper
3. Mezgliņu baktēriju tīrkultūru izdalīšana, kvantitatīvā uzskaite augsnē, to aktivitātes un virulences noteikšana.
XV nodaļa. Baktēriju preparātu analīze
XVI nodaļa. Barības mikrobioloģija
1. Graudu epifītiskā mikroflora un tās izmaiņas barības uzglabāšanas laikā
2. Tvertnes analīze
3. Barības raugšana
XVII nodaļa. Piena un piena produktu mikroflora
1. Piena bakterioloģiskā analīze
2. Metodes pienskābes baktēriju izdalīšanai tīrkultūrā
3. Iepazīšanās ar sviesta mikrofloru
Literatūras rādītājs

Vadlīnijas

praktisko darbu īstenošanai

profesijai:

19.01.17 Pavārs. Konditors

Izstrādātājs:

Veretennikova O.M. skolotājs

Valuiki, 2016. gads

Paskaidrojuma piezīme

Šīs vadlīnijas praktiskā darba īstenošanai disciplīnā "mikrobioloģijas, sanitārijas un higiēnas pamati pārtikas ražošanā » tika izstrādāti uz federālās zemes bāzes izglītības standarts(turpmāk - GEF) pēc profesijas:

19.01.17. Pavārs. Konditors

Vadlīnijas praktisko darbu īstenošanai paredzētas pirmā kursa studentiemPraktisko un laboratorijas darbu īstenošana ir vērsta uz sekojošouzdevumi:

palielināt informētību un zināšanu apguves spēku;

attīstīt spēju analizēt, salīdzināt pētāmos objektus, veikt pētījumus, sastādīt tabulas, diagrammas, klasterus, izdarīt secinājumus;

attīstīties skolēnos loģiskā domāšana, kognitīvās spējas, neatkarība;

iemācīties izmantot iegūtās zināšanas un prasmes dzīvē.

Pētot, fiksējot materiālu, tiek izmantoti šādi veidi patstāvīgs darbs:

Darbs ar mācību grāmatas tekstu.

Prezentācijas darbs.

Darbs ar pētāmo objektu.

Darbs ar galdu.

Darbs pie klastera, shēmas sastādīšanas.

Darbs ar sagatavotiem mikropreparātiem. Mikropreparātu sagatavošana.

Vadlīniju struktūra:

1. tēma
2. darba mērķis
3. aprīkojums darbam
4. darba gaita
5. darba izpildei nepieciešamo studentu zināšanu kontrole un papildināšana
6. darba apstākļi

Katrs praktiskais un laboratorijas darbs jānoformē piezīmju grāmatiņā praktiskajam darbam saskaņā ar ieteikumiem. (1.pielikums)

Veiktā darba rezultātu kontrole tiek veikta, pamatojoties uz rakstisku ziņojumu un studenta uzraudzības rezultātiem darba gaitā saskaņā arvērtēšanas kritēriji praktisko darbu īstenošanai.

Praktisko darbu saraksts

Praktiskais darbs Nr.1

Mikroskopa ierīce un noteikumi darbam ar to.

Praktiskais darbs Nr.2 Rauga un pelējuma morfoloģijas mikroskopiskā izmeklēšana

Praktiskais darbs Nr. 3 Baktēriju, rauga, sēnīšu šūnu uzbūves shēmas.

Praktiskais darbs Nr.4-5

Praktiskais darbs Nr.6Shēmas dezinfekcijas šķīdumu pagatavošanai un to uzglabāšanai

Praktisks uzdevums, kura mērķis ir pārbaudītstudentu prasme disciplīnas teorētiskās zināšanas pielietot praksē

Praktiskais darbs №1 MIKROSKOPA IERĪCE UN DARBĪBAS NOTEIKUMI AR TO.

Darba mērķis: Izpētīt gaismas bioloģiskā mikroskopa ierīci un apgūt noteikumus darbam ar to.

Aprīkojums, materiāli: Mikroskops; gatavie mikropreparāti

Mikroskops (no grieķu val.mikros- mazs unskopio- Es skatos) ir optiska ierīce, kas sastāv no trim galvenajām daļām: mehāniskās, optiskās un apgaismojuma.

Gaismas bioloģiskā mikroskopa diagramma ir parādīta att. 1.

Mehānisks vai statīvs sastāv no kājas, pamatnes, caurules turētāja, priekšmeta skatuves, monokulāra stiprinājuma (caurules), rotējošas ierīces, rupjā fokusēšanas roktura (makrometriskā skrūve), smalka fokusēšanas roktura (mikrometriskā skrūve).

Caurule ir mikroskopa teleskops. Caurules augšējā atverē brīvi tiek ievietots okulārs, caurules apakšējā galā ir ap savu asi rotējoša rotējoša ierīce (revolveris), kurā tiek ieskrūvētas lēcas. Pagriežot revolveri, jūs varat ātri nomainīt lēcas, strādājot ar mikroskopu, palaižot jebkuru objektīvu zem caurules. Objektīvam jābūt centrētam, t.i. uzstādīts uz mikroskopa optiskās ass. Lai to izdarītu, revolveris tiek pagriezts ap savu asi, līdz parādās klikšķis.

Objekta tabulu izmanto, lai uz tās novietotu pētāmās zāles. Zāles tiek fiksētas uz galda ar skavām (spailēm). Objekta skatuves centrā ir caurums gaismas staru pārejai un preparāta apgaismošanai. Dažos mikroskopa konstrukcijās skatuvi var pārvietot, izmantojot skrūves, kas atrodas ap skatuves perifēriju. Tas ļauj izpētīt narkotiku dažādos redzeslaukos.

1 – okulārs

2 – monokulāra galva

(caurule)

3 - revolveris

4 - objektīvs

5 - priekšmetu tabula

6 - kondensators

7 - Kolektora lēcu korpuss

8 - ligzda ar lampu

9 - eņģes

10 – rokturis kondensatora kronšteina pārvietošanai

11 - smalkā fokusa poga (mikrometra skrūve)

12 - rupjā fokusa poga (makrometra skrūve)

13 - caurules turētājs

14 - skrūve sprauslas stiprināšanai

Rīsi. 1Gaismas bioloģiskā mikroskopa ierīces shēma

Caurules pārvietošanai uz augšu un uz leju tiek izmantotas rupjas un smalkas fokusa pogas (makro un mikro skrūves), kas ļauj to iestatīt vajadzīgajā attālumā no preparāta. Pagriežot skrūves pulksteņrādītāja virzienā, caurule tiek nolaista, bet pagriežot pretēji pulksteņrādītāja virzienam, tā tiek pacelta. Griežot makrometrisko skrūvi, objektīvs ir aptuveni iestatīts uz fokusu, t.i. tādā attālumā no preparāta, kurā tas kļūst redzams. Makro skrūves pagrieziens ļauj pārvietot cauruli par 20 mm. Mikrometra skrūve tiek izmantota precīzai fokusēšanai. Pilns tā pagrieziens pārvieto cauruli par 0,1 mm. Ar mikroskrūvi jārīkojas ļoti uzmanīgi: mikroskrūvi drīkst pagriezt ne vairāk kā par 180 0 C vienā vai otrā veidā.

Optiskā daļa ir visvērtīgākā mikroskopa daļa. Tas sastāv no lēcām un okulāra.

Okulārs (no lat.oculus- acs) sastāv no divām plakaniski izliektām lēcām, kas ir ievietotas kopējā metāla rāmī. Augšējā lēca ir acs lēca (palielināma), apakšējā ir saplūstoša. Attālums starp lēcām ir puse no to fokusa attāluma summas. Liela palielinājuma okulāriem ir īsāks fokuss, tāpēc arī okulāra garums ir mazāks. Starp lēcām ir diafragma, kas ierobežo redzes lauku un aizkavē malu gaismas starus. Sadzīves mikroskopi ir aprīkoti ar trim maināmiem okulāriem, kuru palielinājums norādīts uz okulāra korpusa (x7; x10; x15).

Objektīvi ir ieskrūvēti rotējošās ierīces ligzdās un sastāv no lēcu sistēmas, kas ievietota metāla rāmī. Objektīva priekšējais (priekšējais) objektīvs ir mazākais un vienīgais, kas nodrošina palielinājumu. Lēcas atlikušās lēcas koriģē tikai iegūtā attēla nepilnības (sfēriskās un hromatiskās aberācijas parādības) un tiek sauktas par koriģējošām.

Rotējošās ierīces ligzdās ir ieskrūvētas četras lēcas, kuru palielinājums norādīts uz objektīva cilindra (x8; x20; x40; x90 vai 100). Katram objektīvam ir raksturīgs tā fokusa attālums (attālums starp stikla slaidu un priekšējo objektīvu): x8 objektīva fokusa attālums ir aptuveni 9 mm, x40 objektīvam ir 0,65 mm, un x90 objektīvam ir fokusa attālums. fokusa attālums 0,15 mm.

apgaismojuma daļa Mikroskops sastāv no divu lēcu kondensatora, varavīksnenes diafragmas un kasetnes ar zemsprieguma kvēlspuldzi, ko darbina ar pazeminošu transformatoru no 120 ... 220 V sprieguma tīkla.

Kondensators kalpo labākam preparāta apgaismojumam. Viņš savāc gaismas starus kūlī un virza tos caur skatuves atvērumu uz sagatavošanos. Kondensatora sviru var pārvietot uz augšu un uz leju, izmantojot rokturi, lai pārvietotu kondensatora sviru, kas maina staru konverģences leņķi un līdz ar to objekta apgaismojuma pakāpi. Jo augstāks ir kondensatora stāvoklis, jo labāk preparāts tiek apgaismots.

Varavīksnenes diafragma atrodas zem kondensatora un kalpo, lai regulētu gaismas plūsmu, kas nonāk kondensatorā. Tas sastāv no metāla pusmēness formas plāksnēm. Izmantojot īpašu sviru, varat paplašināt vai sašaurināt diafragmas atvērumu. Pagriežot pulksteņrādītāja virzienā, varavīksnenes diafragmas atvērums palielinās un līdz ar to palielinās objekta apgaismojuma pakāpe.

Strādājot ar iegremdējamām lēcām, preparāta apgaismojuma pakāpei jābūt maksimālai, tāpēc tiek atvērts varavīksnenes diafragmas aizvars un kondensators tiek pacelts augstākajā pozīcijā.

Strādājot ar sausām lēcām, parasti tiek ņemti vērā nekrāsoti objekti. Lai panāktu kontrastu, kondensators tiek nolaists uz leju un varavīksnenes diafragmas atvērums tiek samazināts.

Noteikumi darbam ar mikroskopu

Uz darbvirsmas mikroskopu novieto ar caurules turētāju pret sevi 3 ... 5 cm attālumā no galda malas;

Ieslēdziet mikroskopu un iestatiet pareizo apgaismojumu

Testa preparātu novieto uz objekta galda un nostiprina ar skavām;

Vēlamais objektīvs tiek novietots zem caurules un tiek iestatīts fokusa attālums, izmantojot makro un mikro skrūves. Tātad, strādājot ar iegremdējamām lēcām, preparātam vispirms tiek uzklāts piliens iegremdējamās eļļas un tūbiņas turētājs uzmanīgi tiek nolaists ar makroskrūvi, līdz tas saskaras ar stiklu. Pēc tam, uzmanīgi ieskatoties okulārā, tūbiņas turētājs ļoti lēni tiek pacelts, griežot to pretēji pulksteņrādītāja virzienam, līdz ir redzams attēls. Objektīva smalkā fokusēšana tiek veikta ar mikrometra skrūvi. Strādājot ar sausiem objektīviem, paraugu vispirms pārbauda ar x8 objektīvu. Paceļot caurules turētāju ar makro skrūvi un uzmanīgi ieskatoties okulārā, iestatiet fokusa attālumu (apmēram 9 mm) un panākiet attēla skaidrību, izmantojot mikrometra skrūvi. Tālāk, pārvietojot objekta galdu vai stikla priekšmetstikliņu, lauka centrā tiek iestatīts preparāta laukums, kurā vislabāk redzams pētāmais objekts. Pēc tam, pagriežot rotējošo ierīci ap savu asi, zem caurules ievieto x20 vai x40 lēcu. Šajā gadījumā x90 objektīvs nedrīkst nokrist zem caurules. Rotējošajā ierīcē lēcas ir sakārtotas tā, ka, ja tiek atrasts attēls ar x8 objektīvu, tad, izmeklējot paraugu ar lēcām ar lielāku palielinājumu, ir nepieciešams nedaudz pielāgot attēla skaidrību, izmantojot makro un mikrometru skrūves;

Mikroskopijas laikā nepieciešams turēt abas acis vaļā un lietot tās pārmaiņus;

Pēc darba pabeigšanas noņemiet preparātu no objektu galda, nolaidiet kondensatoru, novietojiet x8 objektīvu zem caurules, noņemiet imersijas eļļu no x90 objektīva priekšējās lēcas ar mīkstu drāniņu vai marli, kas samērcēta spirtā, ielieciet marles salveti. zem objektīva nolaidiet caurules turētāju.

Kas ir bioloģiskā mikroskopa ierīce?

No kādām daļām un mehānismiem sastāv mikroskopa mehāniskā daļa?

Kas ir mikroskopa optiskā sistēma?

Kas ir iekļauts mikroskopa apgaismojuma sistēmā?

Kā jāiestata apgaismojuma sistēma, strādājot ar iegremdējamo objektīvu?

Uzskaitiet pamatnoteikumus darbam ar mikroskopu.

Nosacījumi uzdevuma izpildei
1. Uzdevuma vieta (laiks).
Bioloģijas stunda

Praktiskais darbs №2 Rauga un pelējuma sēnīšu morfoloģijas mikroskopiskā izmeklēšana.

Darba mērķis : Iepazīstieties ar pārtikas ražošanā sastopamo sēņu un rauga sēnīšu morfoloģiskajām iezīmēm. Apgūt sēnīšu un rauga sēnīšu mikroskopiskās izmeklēšanas tehniku ​​“sasmalcināta piliena” preparātos.

Aprīkojums, materiāli: Mikroskops; Preparēšanas adatas, stikla priekšmetstikliņi un segstikliņi; filtrpapīrs; gara lampa; sēņu ģinšu kultūrasMucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; tīra rauga kultūraSaccharomycescerevisiae.

1. ĪSI TEORĒTISKIE NOTEIKUMI

1. 1. Mikroskopisko sēņu morfoloģija un kultūras iezīmes

Sēņu veģetatīvo ķermeni saucmicēlijs . Micēlijs sastāv no daudziem savstarpēji saistītiem pavedieniem, ko sauc par kanāliņiem.hifas . Hifu diametrs svārstās no 5 līdz 50 mikroniem. Atkarībā no micēlija struktūras sēnes iedala augstākajās un zemākajās. Augstākajās sēnēs hifus atdala starpsienas (starpsienas), kuru centrā ir liela pora. Tie aug un tajā pašā laikā notiek kodoldalīšanās, bet šūnu dalīšanās nenotiek. Tādējādi sēnītes veģetatīvā ķermenis ir viena liela daudzkodolu šūna. Visas mikroskopiskās sēnes var veģetatīvi vairoties ar micēlija gabalu.

Aseksuālās reprodukcijas laikā veidojas fikomicetisporangiofori , un Ascomyceteskonidiofori .

Mikroskopisko sēņu kultūras pazīmes

Mikroskopisko sēņu kolonijas ir daudzkārt lielākas nekā vienšūnu organismu (baktērijas, sēnītes) kolonijas un bieži vien aug pa visu virsmu. augšanas vide Petri trauciņos. Sēņu koloniju konsistence ir atšķirīga. Biežāk veidojas filcveida un ādainas kolonijas, retāk drupanas. Koloniju virsma var būt pūkaina, piemēram, vate, samtaina, miltaina, zirnekļtīklam līdzīga, pavedienu, ādaina vai gluda. Audzējot uz blīvām un šķidrām barotnēm, daļa hifu pāraug barības barotnē, veidojotiessubstrāts micēlijs, un veidojas otra hifu daļagaiss micēlijs pūkaina pārklājuma veidā, kas redzams ar neapbruņotu aci. Micēlijs var būt arī bezkrāsains (balts, pelēcīgs) vai krāsains (melns, brūns, zaļš, dzeltens utt.). Tikai augļainais micēlijs ir pigmentēts.

Mikroskopisko sēņu raksturojums dažādas nodarbības

Attēlā parādītas dažādu klašu sēņu morfoloģiskās pazīmes. 5.

ĢintsMucor . Tie var vairoties aseksuāli un seksuāli, veidojoties sporangioforiem (5. att.). Ārpus sporangijs ir pārklāts ar plānām kalcija oksalāta kristālu smailēm. Nobriedot, sporangijs pārplīst, sporanģiju sporas tiek atbrīvotas un pārvadātas ar gaisa straumēm. Uz sporangiofora pēc sporangija atbrīvošanas no sporām paliek kolonna, bet tās apakšējā daļā - apkakle. Gļotādas sēnīšu micēlija krāsa sākotnēji ir balta, pēc tam pelēcīgi olīvu, izskats ir jūtams.

A

b

V

G

Rīsi. 5Dažādu klašu sēņu morfoloģiskās pazīmes:

A - Mucor; b - Penicillium; V - Aspergillus; G - Alternaria

Mucor sēnes aug uz mitru graudu, iesala, sakņu kultūru virsmas, uz pārtikas produktiem, uz mitru telpu sienām pelēcīgi pūkaina pārklājuma veidā.Mucornigrikāņiir cukurbiešu puves izraisītājs. Daudzas gļotādas sēnītes rūpniecībā tiek izmantotas dažādu organisko skābju un spirta (sugu sēņu) ražošanaiMucorjavanicus, Mucorracemosus), fermentu preparāti, karotinoīdi, steroīdi.

Ģints pārstāvjiAspergillus Un Penicillium pieder pie Ascomycetes klases, kas apvieno augstākās mikroskopiskās perfektās sēnes. Ar bezdzimuma vairošanos, izmantojot sporas, šīs sēnes veido konidioforus (5. att.). Aspergillus un penicillium ir sēnes. Tas nozīmē, ka dzimumvairošanās laikā uz īpašiem augļķermeņiem veidojas asci (maisiņi), kuros atrodas 8 askosporas.

Uz ģintsPenicillium veido apmēram pusi no visiem pelējuma sēnītes. Tie ir plaši izplatīti augsnē, slikti vēdināmu vietu gaisā un izraisa dažādu izstrādājumu un materiālu bojāšanos. Šai sēnei ir zarots starpsienas micēlijs (hifa diametrs - 2 ... 3 mikroni) un starpsienu konidiofori (atgādina otas), kas beigās atzarojas procesu - sterigmu veidā. No tiem atkāpjas konidijas, kas sastāv no sporu ķēdēm. Atkarībā no konidiju veida tie var būt dažādās krāsās (balti, zaļi utt.). Daudzus penicilus izmanto rūpniecībā dažādu vērtīgu produktu iegūšanai. No šīs ģints izolētajiem celmiem 25% ir antibiotiska aktivitāte, un tādām sugām kāPenicilliumnotatum, Penicilliumkrizogēnstiek izmantoti kā penicilīna ražotāji. Daži peniciliju veidi tiek izmantoti kā enzīmu un lipīdu ražotāji. Cēlās veidnes tiek izmantotas mīksto Rokforas un Kamambēra sieru ražošanāPenicilliumroquefortiUnPenicilliumcamamberti.

Ģints sēnesAspergillus ir vairāk nekā 200 sugu. Šīm sēnēm ir labi attīstīts zarojošs micēlijs ar daudzām starpsienām. Konidiofori nav starpsienas, to augšējie gali ir bumbierveida vai sfēriski paplašināti nelielas galviņas formā. Uz galvas ir tapas formas sterigmas ar konīdiju ķēdēm, kas atgādina ūdens straumes, kas izplūst no lejkannas. Līdz ar to nosaukums "noplūdes pelējums" (aspergerslatīņu valodā - ūdenim, smidzināt). Aspergillus konidijas nobriest iegūst dažādas krāsas, kas kopā ar citām pazīmēm nosaka to sugu piederību.

Kā arī penicilli, ģints pārstāvjiAspergillusir plaši izplatīti dabā un tiem ir svarīga loma organisko vielu mineralizācijā. Tie izraisa pelējumu daudzos pārtikas produktos. Šīs sēnes ir daudzu vērtīgu vielu ražotājas un tiek plaši izmantotas rūpniecībā. Tātad,AspergillusNigēra, ko izmanto rūpniecībā citronskābes ražošanai;Aspergillusterreus- itakonskābeAspergillusflavusUnAspergillusterricolaveido visaktīvāko proteolītisko enzīmu kompleksu;AspergillusoryzaeUnAspergillusawamoriir labākie amilolītisko enzīmu ražotāji.

Ģints sēnesAlternaria pieder nepilnīgo sēņu klasei - deuteromycetes. Tās ir augstākās sēnes. Tiem ir starpsienas micēlijs un īsi bezsienas konidiofori, uz kuriem atrodas bumbierveida vai citronveida daudzšūnu konidijas (5. att.). Sēne ir melnās puves - sakņu kultūru un augļu slimības, kā arī pārtikas bojāšanās izraisītāja.

Rauga morfoloģija un to īpašības

Raugs ir augstākas vienšūnu sēnes. Lielākā daļa raugu pieder pie divām sēņu klasēm - ascomycetes un deuteromycetes.

Attiecībā uz skābekli raugus iedala fakultatīvajos anaerobos (aerobos apstākļos tie elpo un aktīvi uzkrāj biomasu, bet anaerobos apstākļos izraisa alkoholisko fermentāciju) un aerobos.

Morfoloģiski raugi ir dažādi. Tie atšķiras viens no otra pēc šūnu izmēra un formas. Rauga šūnu izmēri atkarībā no sugas atšķiras šādās robežās; 2,5 līdz 10 µm diametrā un 4 līdz 20 µm garumā. Rauga formu morfoloģiskā daudzveidība parādīta attēlā. 6.

A

b

V

G

d

e

un

h

Rīsi. 6Rauga šūnu formas: a - ovāls olveida;

b - cilindrisks; c - apikāls; citrona formas; g - slaucīts;

e - trīsstūrveida; e - pusmēness; g - konusa formas; h, i - miceloīds

Rauga šūnu forma un izmērs ir atkarīgs no veida, vecuma, barotnes un kultivēšanas metodes.

Atkarībā no sugas raugs var vairoties veģetatīvi, veidojot pumpurus (šādā veidā vairojas ovālas formas raugs), bināro sadalīšanos (tipiski cilindriskam vai stieņa veida raugam) vai daloties ar pumpuriem. Papildus veģetatīvai pavairošanai raugs - ascomycetes var vairoties seksuāli, veidojot askosporas.

No rauga, kas pieder Ascomycetes klasei, liela nozīme ir ģints rauga-saharomicetiSaccharomyces , kas plaši izmanto pārtikas rūpniecībā. Šo raugu galvenā bioķīmiskā iezīme ir tā, ka tie fermentē cukurus, veidojot etilspirtu un oglekļa dioksīdu. Rūpniecībā izmantoto raugu sauckultūras raugs. Tātad, maizes rūpniecībā un alkohola ražošanā, ģints jāšanas raugsSaccharomycescerevisiae. Rauga sugasSaccharomycesnepilngadīgaisatrada pielietojumu rupjmaizes un kvasa ražošanā. Alus darīšanā izmanto zāles rauguSaccharomycesCarlsbergensis. Saccharomycete raugi ir ovālas formas, vairojas veģetatīvi, veidojot pumpurus, un nelabvēlīgos apstākļos vairojas seksuāli ar askosporām.

Daži sporogēnie raugi irmežonīgs raugs . Šie raugi, tāpat kā kultūras raugi, spēj spirtiski rūgt, taču papildus spirtam tie veido daudzus blakusproduktus (piemēram, aldehīdus, augstākos spirtus, esterus u.c.) un tādējādi pasliktina produkta organoleptiskās īpašības. Šie raugi ir kaitēkļi dažādu dzērienu (alus, vīna, bezalkoholisko dzērienu) ražošanā, kā arī daudzu pārtikas produktu bojājošās vielas.

Raugs - deuteromicetes var vairoties tikai veģetatīvi. Daži no šiem raugiem (piemēram, ģints raugiCandida) izmanto rūpniecībā, lai iegūtu barības olbaltumvielas, organiskās skābes, vitamīnus un citus mikrobu sintēzes produktus. Rauga sugasTorulopsiskefīrsir daļa no simbiotiskā skābuma – kefīra sēnītes. Citi nepilnīgi (asporogēnie) raugi ir savvaļas raugi un izraisa daudzu pārtikas produktu bojāšanos. Pie ražošanas rauga kaitēkļiem pieder rauga ģintisPichia, Hansenula, Candida, Rodotorula,Torula, Torulopsis, Mikoderma, Trichosporonuc Starp asporogēnajiem raugiem irviltus raugs , kas veido pseidomicēliju un aug uz šķidriem substrātiem plēvju veidā.

1. DARBA PROCEDŪRA

Ar mēģeni vai pipeti uz stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāts liels ūdens piliens;

Neliels daudzums micēlija tiek ņemts no mēģenes vai Petri trauciņa, ievērojot aseptikas noteikumus

Micēliju uzmanīgi ievieto uz stikla priekšmetstikliņa uzklātā pilē un ar divu adatu palīdzību iztaisno ūdenī;

Preparātu pārklāj ar pārklājumu un viegli nospiež. Lieko ūdeni noņem ar filtrpapīru.

Preparāts “sasmalcināts piliens” tiek mikroskopēts vispirms ar x8 objektīvu un pēc tam x40 aptumšotā redzes laukā (kondensators ir nolaists, varavīksnenes aizvars ir aizsegts).

Izvēloties un mikroskopējot sēnīšu preparātus, tiek ņemti vērā šādi ieteikumi:

a) sēne Mucor . Tiek atlasīts melnpelēks pūkains gaisa micēlijs. Mikroskopijā uzmanība tiek pievērsta hifām ar sporām piepildītām sporangijām un kolonnām, kas veidojas, sporānijam atbrīvojoties;

b) ģints sēne Aspergillus . Tiek izvēlēts nedaudz pūkains micēlijs ar krāsainiem konīdijiem, nedaudz padziļinot ar adatu barības vidē. Pievērsiet uzmanību unsepted konidioforiem;

c) ģints sēne Penicillium . Atlasot, viņi cenšas ņemt jaunu micēliju (uz krāsainā un baltā micēlija robežas), padziļinot ar adatu vidē. Pievērsiet uzmanību starpsienas hifām ar sukām.

d) ģints sēne Alternaria . Viņi uzņem micēliju melnās vietās, padziļinot tajā ar adatām. Pievērsiet uzmanību starpsienas micēlijai, vāji attīstītiem konidioforiem un lieliem konīdijām, kas izskatās kā noapaļoti vai smaili daudzšūnu veidojumi, kas atgādina "citronu granātābolus".

Rauga izpētē uz stikla priekšmetstikliņa uzklāj rauga suspensiju, pārklāj ar segstikliņu, lieko ūdeni noņem ar filtrpapīru. Paraugu mikroskopē ar x8 un x40 objektīvu.

Pētījumu rezultātu uzskaite un analīze

Īsi izklāstiet teorētisko materiālu. Tiek uzzīmēti pētāmo sēņu un rauga kultūru mikroskopiskie attēli, ņemot vērā katra mikroorganisma morfoloģiskās īpatnības. Zem katra skaitļa ir parakstīts latīņu nosaukums un preparāta palielinājums. Aprakstiet pētīto sēņu kultūras īpašības.

Atbilde Kontroles jautājumi

Kā tiek gatavoti mikroskopisko sēņu un rauga preparāti?

Aprakstiet mikroskopisko sēņu morfoloģiskās un kultūras īpašības.

Kādas sēnes izmanto rūpniecībā, lai iegūtu organiskās skābes, fermentus, antibiotikas un citus vērtīgus produktus?

Aprakstiet morfoloģiskās īpašības raugs.

Kas ir kultūras raugs? Kurās pārtikas rūpniecības jomās tos izmanto?

Nosacījumi uzdevuma izpildei

Bioloģijas stunda

2. Maksimālais uzdevuma izpildes laiks: 90 min

Praktiskais darbs Nr.3: Baktēriju, rauga, sēnīšu šūnu uzbūves shēmas.

Darba mērķis: Izpētiet šūnas struktūrubaktērijas, raugs, sēnītes

Materiāls atbalsts: instrukciju kartes praktiskajam darbam, mācību grāmata, zīmuļi

1. vingrinājums

Izpētiet mācību grāmatā esošo materiālu. Saskaņā ar pētījuma rezultātiem:

Uzzīmējiet piezīmju grāmatiņā baktēriju, rauga un sēnīšu šūnas struktūru un norādiet atšķirīgās pazīmes

Rakstiski atbildiet uz šādiem jautājumiem:

1. Kāda forma ir baktēriju šūnām?

2. Kādi ir baktēriju izmēri?

3. Kā notiek baktēriju vairošanās, vairošanās ātrums?

4. Kā un kādos apstākļos baktērijās notiek sporu veidošanās?

5. Vai baktērijas spēj patstāvīgi kustēties?

Pamatojoties uz sava darba rezultātiem, izdariet secinājumu.

Nosacījumi uzdevuma izpildei

1. Uzdevuma vieta (laiks).

Bioloģijas stunda

2. Maksimālais uzdevuma izpildes laiks: 90 min

Praktiskais darbs par tēmu Nr.4 Darbs ar normatīvo un tehnisko dokumentāciju: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Darba mērķis: Izpētīt sanitārās prasības sabiedriskās ēdināšanas iestāžu sakārtošanai un uzturēšanai

Materiāls atbalsts: instrukciju kartes praktiskajam darbam, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. vingrinājums

Izpētiet mācību grāmatā esošo materiālu. SanPiN 2.3.6. 1079-01. Saskaņā ar pētījuma rezultātiem:

1. Pievienojiet frāzes: Vietnei, kur tiek uzcelta ēdināšanas iestāde, jābūt

Ražošanas iekārtās ietilpst:

Ēkas ____________________ daļā projektētas noliktavas.

Dzeramajam ūdenim jābūt vienādas kvalitātes

Gaisa attīrīšanai tiek izmantota ventilācija

Tips.

Visām ražošanas zonām jābūt apgaismotām

Gaisma.

Ikmēneša uzkopšana tiek saukta

2. Definējiet šādus terminus:

Dezinfekcija ir...

Deratizācija ir -

Dezinsekcija ir...

3. Izmantojot izglītojošo materiālu, aizpildiet tabulu:

dārzeņu veikals

gaļas veikals

Zivju veikals

Karsts veikals

aukstumveikals

Konditorejas veikals

Izdales materiāls

Nosacījumi uzdevuma izpildei

1. Uzdevuma vieta (laiks).

Bioloģijas stunda

2. Maksimālais uzdevuma izpildes laiks: 90 min

Praktiskais darbs Nr.5 Darbs ar normatīvo un tehnisko dokumentāciju: SanPiN 2.3.6. 1079-01

Darba mērķis : Izpētīt sanitārās prasības iekārtām, inventāram, traukiem, konteineriem. Pārtikas produktu transportēšana un uzglabāšana.

materiālais atbalsts : praktisko darbu pamācības kartes, SanPiN 2.3.6. 1079-01

1. vingrinājums

Izpētīs mācību grāmatas materiālu, SanPiN 2.3.6. 1079-01. Saskaņā ar pētījuma rezultātiem:

1. Rakstiski atbildiet uz šādiem jautājumiem:

Kā ar virtuves piederumiem?

Kāpēc marķēt traukus?

Kā ar galda piederumiem?

Kādi materiāli ir atļauti iekārtu un inventāra ražošanai

ēdināšanas iestādēm?

Kāda ir būtiskā atšķirība starp trauku un galda piederumu mazgāšanu?

2. Uzskaitiet noteikumus un prasības:

2.1. Sanitārie noteikumi pusfabrikātu pārvadāšanai:

2.2. Sanitārie noteikumi pārtikas uzglabāšanai:

3. Pievienojiet frāzes:

Pirms izplatīšanas gatavo ēdienu kvalitātei jābūt

Pasniedzot pirmajiem ēdieniem un karstajiem dzērieniem jābūt temperatūrā

_______ °С, otro ēdienu un piedevu temperatūra __________ °С, porciju ēdieni

temperatūra ______ °С, aukstie ēdieni un dzērieni ______ °С.

Medicīnas un profilakses un bērnu iestādēs ziemas-pavasara periodā dārzeņu ēdienu trūkuma dēļ _______________________ ir nepieciešams ar to bagātināt dažus ēdienus.

________________ ir atbildīgs par gatavās produkcijas kvalitāti un tās izlaišanas noteikumu ievērošanu ēdināšanas uzņēmumos.

Nosacījumi uzdevuma izpildei

1. Uzdevuma vieta (laiks).

Bioloģijas stunda

2. Maksimālais uzdevuma izpildes laiks: 90 min

Praktiskais darbs Nr.6 Shēmas dezinfekcijas šķīdumu pagatavošanai un to uzglabāšanai

Mērķis: izpētīt dezinfekcijas līdzekļu nosaukumus, dezinfekcijas šķīdumu pagatavošanas metodes atkarībā no mērķa. Sagatavo noteiktas koncentrācijas šķīdumu.

materiālais atbalsts : praktisko darbu pamācības kartes, SanPiN 2.3.6. 1079-01, mācību grāmata

1. vingrinājums

Izpētīs mācību literatūras materiālu, SanPiN 2.3.6. 1079-01. Saskaņā ar pētījuma rezultātiem:

1. Atbildiet uz jautājumiem:

Kādi risinājumi ir dezinfekcijas līdzekļi?

Kāds ir dezinfekcijas līdzekļu mērķis?

Kādas zāles izmanto kā dezinfekcijas līdzekļus?

Kā atpazīt, ka trauki apstrādāti ar dezinfekcijas līdzekļiem?

2. Izpētīt dezinfekcijas līdzekļu sagatavošanas shēmas un mērķi. Aizpildiet tabulu.

3. Sagatavojiet 1 litru 0,2% hloramīna B šķīduma.

4. Pamatojoties uz darba rezultātiem, izdarīt secinājumu.

Nosacījumi uzdevuma izpildei

1. Uzdevuma vieta (laiks).

Bioloģijas stunda

2. Maksimālais uzdevuma izpildes laiks: 90 min

Praktiskā darba īstenošanas vērtēšanas kritēriji:
Vērtējums "5" tiek piešķirts, ja :
1. Pareizi patstāvīgi nosaka šo darbu mērķi; veic darbu pilnā apmērā, ievērojot nepieciešamo izpildes secību.
2. Patstāvīgi, racionāli izvēlas un sagatavo darbu veikšanai nepieciešamo aprīkojumu; veic šos darbus apstākļos, kas nodrošina visprecīzākos rezultātus.
3. Kompetenti, loģiski apraksta darba gaitu, pareizi formulē secinājumus; precīzi un precīzi veic visus ierakstus, tabulas, rasējumus, rasējumus, grafikus, aprēķinus.
4. Parāda organizatoriskās un darba prasmes: uztur tīru darba vietu, kārtību uz galda, ekonomiski izmanto materiālus; veicot darbu, ievēro drošības noteikumus.
Vērtējums "4" tiek piešķirts, ja :
1. Laboratorijas darbus veic pilnībā atbilstoši prasībām, vērtējot rezultātus ar "5", bet pieļauj divas līdz trīs nepilnības vai vienu nelielu kļūdu un vienu trūkumu aprēķinos, mērījumos.
2. Sastādot darbu, pieļauj neprecizitātes darbības gaitas aprakstā; vispārinot izdara nepilnīgus secinājumus.
Vērtējums "3" tiek piešķirts, ja :
1.1 Pareizi veic darbu vismaz par 50%, tomēr izpildītās daļas apjoms ir tāds, kas ļauj iegūt pareizos rezultātus un izdarīt secinājumus par galveno, fundamentālo svarīgus uzdevumus strādāt.
2. Izvēlas aprīkojumu, materiālu, uzsāk darbu ar skolotāja palīdzību; vai mērījumu, aprēķinu, novērojumu gaitā pieļauj kļūdas, neprecīzi formulē secinājumus, vispārinājumus.
3. Veic darbu neracionālos apstākļos, kas noved pie rezultātiem ar lielām kļūdām; vai pārskatā kopumā pieļauj ne vairāk kā divas kļūdas (skaitļu ierakstīšanā, mērījumu rezultātos, aprēķinos, grafiku, tabulu, diagrammu u.c. sastādīšanā), kurām nav fundamentālas nozīmes šim darbam, bet ietekmēja rezultātu izpildi.
4. Rupji kļūdās darba gaitā: skaidrojumā, noformējumā, drošības noteikumu ievērošanā, ko skolēns pēc skolotāja lūguma labo.
Vērtējums "2" tiek piešķirts, ja :
1. Patstāvīgi nenosaka darba mērķi, nevar sagatavot atbilstošu aprīkojumu bez skolotāja palīdzības; darbu veic nepilnīgi, un izpildītās daļas apjoms neļauj izdarīt pareizus secinājumus.
2. Darba gaitā pieļauj divas vai vairākas rupjas kļūdas, kuras pēc skolotāja lūguma nav iespējams labot; vai nepareizi veic mērījumus, aprēķinus, novērojumus.

PIETEIKUMS.

1.pielikums

STUDENTU ATGĀDINĀJUMS

Veicot darbu, studentam ir:

Iepriekš detalizēti iepazīstieties ar teorētisko materiālu un labi izprotiet praksē pētāmos mikrobioloģiskos modeļus un procesus.

Veicot eksperimentu, ievēro visus piesardzības pasākumus, darbību secību, veicot nepieciešamos novērojumus.

Ierakstiet eksperimenta rezultātus piezīmju grāmatiņā saskaņā ar darbā piedāvāto shēmu:

Sakārtot pēc darba pabeigšanas darba vieta un nodod to laborantam vai skolotājam.

Federālā izglītības aģentūra

Valsts izglītības iestāde

"Irkutskas Valsts universitāte"

MAZĀ DARBNĪCA PAR MIKROBILOĢIJU

Mācību līdzeklis

Irkutska 2009

UDC 579(076.5)

Publicēts ar Irkutskas Valsts universitātes redakcijas un izdevējdarbības padomes lēmumu

Žilkina darbnīca par mikrobioloģiju: mācību grāmata-metode. pabalsts studentiem. augstāks mācību grāmata iestādes specialitātēs "Mikrobioloģija", "Bioloģija" un "Fizioloģija".

6. Mikrobu masa nedrīkst piesārņot rokas, galdu un apkārtējos priekšmetus. Izlijušo mikrobu suspensiju neitralizē, izmantojot dezinfekcijas līdzekļus.

7. Pēc darba beigām kultūras tiek nodotas skolotājam, izsētas mēģenes un krūzes tiek ievietotas termostatā.

8. Bakterioloģiskās cilpas, adatas, pincetes un citus metāla priekšmetus pēc saskares ar mikroorganismiem sadedzina spirta lampas liesmā un ievieto speciālā statīvā.

9. Izlietotos priekšmetstikliņus un segstikliņus, pipetes, lāpstiņas u.c. ievieto 3–5% karbolskābes šķīdumā vai citos dezinfekcijas šķīdumos.

10. Mēģenēs, Petri trauciņos u.c. izlietotās kultūras dienas laikā neitralizē ar dezinfekcijas šķīdumiem, pēc tam traukus uzvāra un nomazgā.

11. Stingri jāievēro personīgā higiēna – pēc darba pabeigšanas rūpīgi nomazgājiet rokas ar ziepēm un ūdeni.

12. Strādājot ar elektroierīcēm un ķimikālijām, nepieciešams ievērot drošības pasākumus.

Maskavas pilsētas Izglītības departaments

28. Tehnoloģiskā koledža

Žukova L.A.

METODISKIE NORĀDĪJUMI

Uz laboratorijas darbi №№1-4

NVO studentiem

Maskava

2012

"Mikrobioloģijas, sanitārijas un higiēnas pamati"

METODISKIE NORĀDĪJUMI

uz laboratorijas darbiem №№1-4

NVO studentiem

34.17. Desu ražošanas procesu operators.

_______________________________________________________________

Rokasgrāmata paredzēta koledžas studentiem. Var izmantot priekš pašmācība apgūt sesijas un ārpusstundu patstāvīgo darbu.

Sastādīja: Žukova L.A. - speciālo disciplīnu skolotājs

Recenzents: Sukhanova N.V. - speciālo disciplīnu skolotājs

Redaktors: Malkova L.A. - direktora vietnieks izglītības un metodiskajā darbā

Rokraksts izskatīts un apspriests Tehnoloģisko disciplīnu Centrālās komitejas sēdē, protokols Nr.__ datēts ar 2012. gada __ _______.

SKAIDROJUMS

Vadlīnijas izstrādātas saskaņā ar Maskavas pilsētas Tehnoloģiskās koledžas Valsts autonomās vidējās izglītības iestādes Nr.28 pieņemto aktuālo mikrobioloģijas kursa programmu studentiem, kuri mācās specialitātē 260301 "Gaļas un gaļas produktu tehnoloģija".

Pašreizējā dabaszinātņu attīstības līmenī ir nepieciešamas dziļas zināšanas par mikrobioloģiskajiem procesiem, kas ir daudzu biotehnoloģijas nozaru pamatā un kalpo kā aizsardzības garantija. vidi no antropogēnas ietekmes.

Papildus teorētisko zināšanu apguvei mikrobioloģijā topošajiem speciālistiem nepieciešamas laboratorijas un praktiskās nodarbības, kas būtībā ir nelieli pētniecības projekti.

Laboratorijas darbu izpilde nodrošina studentu teorētisko zināšanu nostiprināšanu, mikrobioloģiskās kontroles prasmju attīstību un spēju izdarīt patstāvīgus secinājumus un vispārinājumus.

Šīs vadlīnijas laboratorijas darbu veikšanai liecina:

apvienot laboratorijas darbus par vienu un to pašu tēmu vai ar vienādu semantisko saturu, lai būtu ērti tos savlaicīgi organizēt, kā to prasa mikrobioloģisko analīžu specifika;

sadalīt nodarbības tā, lai pēdējās nodarbības slodze ļautu apspriest analīzes rezultātus, veikt veiktā darba pārbaudi;

koncentrēt svarīgāko mācību materiālu, ļaujot studentiem apgūt praktiskās iemaņas darbā mikrobioloģiskā laboratorija;

sniedz metodiku analīzes veikšanai, norādot metodes būtību, ieviešanas tehniku, rezultātu apstrādes noteikumus;

izmantojiet tās mikrobioloģiskās analīzes metodes, kuras nodrošina GOST.

Darba tēma un mērķis.

Laboratorijas darbu materiālais nodrošinājums.

Laboratorijas darbu veikšanas ieteikumi, uzdevums, darba skaidrojums, analīzes metodes, atskaites sastādīšanas veidlapas, laboratorijas jautājumu kontroljautājumi un papildliteratūra.

Dažu metožu sarežģītības un mikroorganismu audzēšanas ilguma dēļ atsevišķos gadījumos daļu no laboratorijas materiāla pasniedzējs sagatavo iepriekš, bet tiek dota tā sagatavošanas metode.

Laboratorijas nodarbībās apgūtās prasmes nepieciešamas ražošanas mikrobioloģiskās kontroles veikšanai, kuras mērķis ir savlaicīgi konstatēt ražošanas un iekārtu sanitārā stāvokļa pārkāpumus, atklāt mikrobu piesārņojuma vietas un veidus, veikt nepieciešamos pasākumus šo bīstamo perēkļu likvidēšanai. un sasniegt augstu produkcijas kvalitāti.

MIKROBIOLOĢIJAS LABORATORIJAS DARBA NOTEIKUMI

Strādājot mikrobioloģiskajā laboratorijā, ir stingri jāievēro īpaši noteikumi, ko nosaka divi galvenie noteikumi.

Pirmkārt, mikrobioloģiskajā praksē galvenokārt izmanto mikroorganismu tīrkultūras, t.i., vienas sugas mikroorganismu populācijas, bieži vien vienas šūnas pēcnācējus.

Tā kā gaisā, uz mums apkārt esošo priekšmetu virsmām, uz drēbēm, rokām, matiem vienmēr ir liels daudzums dažādas mikrofloras, lai nodrošinātu pētījumu sterilitāti un izvairītos no kultūru piesārņošanas, darbs jāveic atbilstoši prasībām. ievērojot aseptikas noteikumus.

Otrkārt, pētījumos ar neidentificētiem mikroorganismiem, tos konstatējot no vides objektiem un tehnogēnajām plūsmām, var izolēt patogēnos un nosacīti patogēnos mikroorganismus.

Turklāt gan saprofītu, gan patogēno mikroorganismu šūnas var būt alergēni noteiktiem indivīdiem. Tātad, lai iegūtu ticamus pētījumu rezultātus, nodrošinātu personīgo un apkārtējo drošību, ir jāievēro noteikti noteikumi.

Atkārtoti sējot mikroorganismus, tiek panākta sterilitāte, pateicoties tam, ka viss darbs tiek veikts liesmas tuvumā degļi. Bakterioloģiskās cilpas, ko izmanto mikroorganismu pārvietošanai no cietām barotnēm, aizdedzina degļa liesmā, un stikla traukus un uzturvielu barotnes attiecīgi iepriekš sterilizē žāvēšanas skapjos un autoklāvos.

Darbvirsmas virsmu dezinficē gan pirms, gan pēc darba, noslaukot ar 3% hloramīna, lizola vai 70% izopropila vai etilspirta šķīdumu. Šo spirtu šķīdumus var izmantot arī roku dezinfekcijai.

Telpu sagatavošana ietver mitro tīrīšanu un rūpīgu vēdināšanu, kam seko apstarošana ar ultravioleto gaismu no baktericīdām lampām. Atkarībā no gaisa piesārņojuma pakāpes tā sterilizācijai nepieciešama apstarošana no 30 minūtēm līdz vairākām stundām. Ultravioletie stari ir bīstami acīm, tādēļ, degot baktericīdajai lampai, telpā atrasties nav iespējams.

Strādājot mikrobioloģijas laboratorijā, studentiem jāievēro šādi noteikumi:

1. Katram studentam jāstrādā pastāvīgā vietā.
2. Darba vietai jābūt brīvai no svešķermeņiem (ieskaitot portfeļus un somas). Strādājot ar degli, uz galda nedrīkst atrasties arī piezīmju grāmatiņas, kas vēlāk būs nepieciešamas mikroskopijas un skicēšanas sagatavošanai.
3. Visi darbi tiek veikti tīrā halātā. Garie mati ir jāsasien, lai tos nenokļūtu sildīšanas paliktņa liesma.
4. Uz mikroorganismu kultivēšanai izmantotajām traukiem (mēģenēm, kolbām, Petri trauciņiem, matračiem) jābūt uzrakstītam kultūras vispārīgajam un konkrētajam nosaukumam, inokulācijas datumam, studenta vārdam un grupas numuram.
5. Visiem priekšmetiem, ko izmanto, strādājot ar dzīvām kultūrām, jābūt dekontaminētiem, sadedzinot degļa liesmā vai iegremdējot dezinfekcijas šķīdumā (priekšmets un segstikliņi, pipetes, lāpstiņas).
6. Visas inokulētās mēģenes, krūzītes vai kolbas ievieto termostatā vai nodod laboratorijas asistentam.
7. Atkritumu materiāli tiek ievietoti noteiktos konteineros to tālākai dezinfekcijai.
8. Smēķēšana un ēšana laboratorijā ir stingri aizliegta.
9. Nodarbības beigās katram skolēnam jāsakārto darba vieta.

Iegūtie dati jāieraksta laboratorijas darbu žurnālā. Ierakstos jāiekļauj: darba numurs un nosaukums, tā sākuma un beigu datums, izpētes objektu nosaukumi, eksperimentu veikšanas nosacījumi, analīzes metodes, kā arī iegūtie rezultāti un secinājumi no tiem. Pētot kultūru morfoloģiju, to skices tiek veidotas noteiktos mikroskopa palielinājumos. (Klasē jābūt pieejamiem krāsainiem zīmuļiem, vismaz sarkaniem un ziliem.) Skaitliskie dati tiek apkopoti tabulās, grafikos vai diagrammās.

LAB Nr. 1

Mikrobioloģiskās laboratorijas organizācija un aprīkojums. Optiskā mikroskopa ierīce un noteikumi darbam ar to. Mikrobu mikroskopijas tehnikas apgūšana.

Nodarbības mērķis.

Iepazīstināt studentus ar mikrobioloģiskās laboratorijas organizāciju un aprīkojumu. Pētīt optiskā mikroskopa ierīci. Iepazīstieties ar galvenajām baktēriju formām.

Materiāls atbalsts.

Izglītības mikrobioloģiskā laboratorija aprīkota ar termostatiem, sterilizatoriem, ledusskapjiem, ūdens vannu, destilatoru, baktericīdām lampām, darba galdiem ar visiem nepieciešamajiem piederumiem, mikroskopiem.

Šī laboratorija satur ievērojamu daudzumu izglītojošs materiāls Tāpēc ir vēlams iepazīstināt studentus ar laboratorijas organizāciju un aprīkojumu, izmantojot demonstrācijas metodi.

Pētot mikroskopa ierīci, izmantojiet plakātu, kurā parādītas visas tās detaļas.

Uzdevumi.

1. Izlasi darba aprakstu:

1. Izglītības mikrobioloģiskās laboratorijas aprīkojums.
2. Aprīkojums un ražošanas organizācija

1. Darba noteikumi mikrobioloģiskajā laboratorijā.
2. Optiskā mikroskopa ierīce un tās kopšana.

Noteikumi darbam ar MBR-1 mikroskopu.

1. Baktēriju pamatformas.

1. Veikt gatavo preparātu mikroskopiju ar pamatformām

baktērijas.

Paskaidrojums darbam

1.1. Izglītības mikrobioloģiskās laboratorijas aprīkojums.

Izglītības mikrobioloģiskās laboratorijas telpām jāsastāv no izglītības, tehniskajām telpām un skolotāju telpas.

Mācību telpā jābūt šādam inventāram: laboratorijas galdi, galdi mikroskopijai, galds skolotājam, termostati, taburetes, plaukts ar titrētiem šķīdumiem, svari, tāfele, galds traukiem, izlietne.

Apmācībām var izmantot parasto laboratorijas galdu.

Mikroskopijas galds jānovieto loga priekšā; tās augstumam jābūt apmēram 80 cm, platumam - apmēram 40 cm Lielākai stabilitātei mikroskopijas galds ir novietots uz kronšteiniem.

Termostati. Mikrobi jāaudzē tādos apstākļos, lai apkārtējā gaisa temperatūra būtu pakļauta varbūt vismazākajām svārstībām. Šim nolūkam tiek izmantoti termostati, kas ir skapji, kuros tiek uzturēta nemainīga temperatūra.

Ir gaisa un ūdens termostati.

Gaisa termostatus silda ar siltu gaisu, parasti apsildāmu elektrošoks.

Ūdens termostatos starp dubultsienām ir ūdens, ko silda ar elektrisko strāvu, gāzi vai citiem siltuma avotiem. Temperatūras svārstības šajos termostatos ir mazākas nekā gaisa termostatos.

Laboratorijā jābūt vismaz trim termostatiem: viena temperatūra ir 30°C, otrā ir 37°C un trešā ir 43°C. Mikrobus, kas labi aug 20°C temperatūrā, var audzēt istabas temperatūrā.

Pastāvīgu temperatūru termostatos uztur īpašas ierīces - termostati. Termostatā ar precīzu temperatūras regulatoru temperatūras svārstības nedrīkst pārsniegt 2 ° C.

Autoklāvs vai sterilizators.Autoklāvs ir metāla cilindrs ar dubultām sienām un masīvu vāku, kas aizvērts ar skrūvējamām skavām.

Uz cilindra ir uzlikts metāla apvalks. Autoklāvs ir aprīkots ar tvaika izplūdes cauruli, manometru, drošības vārstu un ūdens mērīšanas stiklu. Tas sterilizē uzturvielu barotnes, dažādus šķidrumus un traukus.

Pirms sterilizācijas caur ūdens mērītāja stikla piltuvi autoklāvā ielej destilētu vai vārītu ūdeni (izmantojot neapstrādātu ūdeni, ātri veidojas katlakmens) līdz līnijai, kas norādīta uz autoklāva korpusa. Pēc tam autoklāvā tiek iekrauts sterilizējamais materiāls (pēdējais no augšas jāpārklāj ar papīru), cieši pieskrūvē vāku, atver tvaika caurules vārstu un sākas sildīšana.

Apkure tiek veikta ar elektrību, tvaiku (šajā gadījumā autoklāvā netiek ieliets ūdens) vai vairākiem gāzes degļiem. Autoklāvam uzsilstot, vispirms sāk izplūst gaiss, bet pēc tam tvaiks, kas caur cilindra augšējās daļas atverēm nonāk autoklāvā. Kad tvaiks sāk izplūst nepārtrauktā plūsmā, tas tiek atbrīvots vēl 2-3 minūtes, lai izspiestu gaisu no autoklāva, un pēc tam vārsts tiek aizvērts. Rezultātā tvaika izplūde apstājas un pamazām sāk palielināties spiediens autoklāvā (manometra adatas pacelšana).

Pēc vajadzīgā spiediena noteikšanas autoklāva sildīšanas pakāpe tiek samazināta tā, lai manometra adata noteiktu laiku paliktu tajā pašā līmenī. Sterilizācijas sākums tiek uzskatīts no brīža, kad bultiņa sasniedz pareizo spiedienu.

Manometra rādījumi atbilst noteiktai tvaika temperatūrai.

Manometra rādījums in ati Tvaika temperatūra ˚C

0,5 112,0

1,0 121,4

1,5 128,8

2,0 135,1

Sterilizācijas beigās karsēšana tiek pārtraukta un manometra adatai ļauj nokrist līdz nullei. Tikai pēc tam atver tvaika izvadcaurules krānu, izlaiž tvaiku un ielaiž gaisu, pēc tam noskrūvē vāku, paceļ un, ļaujot autoklāvam atdzist šajā pozīcijā, izņem sterilizēto materiālu.

Trauki un inventārs.

Petri trauciņi kalpo kultūraugu sēšanai. Izmantojiet krūzes ar diametru 10 cm (augstums 1,5 cm). Stiklam jābūt plānam, caurspīdīgam, bez gaisa burbuļiem.

Pipetes. Bakterioloģiskajam darbam tiek izmantotas pipetes ar ietilpību 1-5 un 10 ml. Visbiežāk lietotās pipetes ir 1 ml, apmēram 28 cm garas (bez pagarinājuma).

Mēģenes. Ūdens ieliešanai 10 ml izmanto mēģenes ar izmēriem 18 x 2,0 cm; Izmanto arī 18 x 1,5 cm mēģenes, barotnēm izmanto 15 x 1,8 cm mēģenes.

Adatas un cilpas. Adatas un cilpas izmanto testa materiāla paņemšanai un inokulācijai.

Laboratorijas stikla trauku mazgāšanaiizlietnes galds.

Strādājot ar mikroskopu, izmantojietpriekšmets un saturs stikls . Brillēm jābūt bezkrāsainām ar gludu virsmu, bez gaisa burbuļiem. Īpašiem pētījumiem,stikla priekšmetstikliņi ar akām.

1.2 Aprīkojums un ražošanas darba organizācija

Mikrobioloģiskā (bakterioloģiskā) laboratorija.

Pārtikas izejvielu un no tās ražoto produktu bakterioloģiskā izmeklēšana tiek veikta speciālā laboratorijā, kurai ir atļauja strādāt ar III-IV patogenitātes grupas mikroorganismiem. Mikrobioloģiskā (bakterioloģiskā) laboratorija (vai bakterioloģiskā nodaļa kā daļa no gaļas pārstrādes uzņēmuma ražošanas laboratorijas) paredzēta izejvielu, gatavās produkcijas, palīgmateriālu, tehnoloģisko iekārtu sanitāri higiēniskā stāvokļa, inventāra sanitāri bakterioloģiskai kontrolei. , konteineri, apģērbs un personāla rokas.

Laboratorijas telpas.Laboratorijas vispārējai atrašanās vietai un tās infrastruktūrai jāatbilst GOST R 51446-99 (ISO 7218-96) prasībām. Laboratorija nodrošina šādas atsevišķas telpas vai izolētas darba zonas:

paraugu saņemšanai, uzglabāšanai, sagatavošanai un apstrādei;

pirmajai sējai, atkārtotai sēšanai, atšķaidījumu sagatavošanai un citiem darbiem aseptiskos apstākļos;

uzturvielu barotņu sagatavošanai, sterilizācijai, pildīšanai pudelēs un uzglabāšanai, laboratorijas stikla trauku un aprīkojuma sagatavošanai;

iekārtu, izlietoto barības vielu un ar mikrofloru piesārņotu materiālu dezinfekcijai un tīrīšanai.

Atsevišķās telpās var izvietot termostatus, ledusskapjus, saldētavas.

Telpas jānovieto tā, lai nodrošinātu to aizsardzību no ārējo faktoru ietekmes (paaugstināta temperatūra, mitrums, putekļainība, troksnis, vibrācija), organizētu tīru un piesārņotu materiālu plūsmu.

Gaļa var būt piesārņota ar patogēno mikrofloru, kas rada nopietnus draudus cilvēka veselībai, un laboratorijas telpas ir jānodala no citām nodaļām. Ja nav iespējams organizēt atsevišķu telpu, kopējā telpā ir atļauts uzstādīt galdu pirmajai paraugu inokulācijai. Stiklotu kasti vēlams aprīkot ar priekškasti, lai nodrošinātu aseptiskus darba apstākļus.

Laboratorijas telpām jābūt gaišām (galda virsmas apgaismojums 500 luksu robežās) un plašām - katram analītiķim ieteicamā darba platība ir aptuveni 20 m2. Sienām, griestiem un grīdai jābūt gludām, viegli tīrāmām, izturīgām pret mazgāšanas un dezinfekcijas līdzekļiem. Lai atvieglotu tīrīšanu un dezinfekciju, laboratorijas iekārtu un mēbeļu virsma ir pārklāta ar gludu necaurlaidīgu materiālu, piemēram, plastmasu, bet darba vieta ir pārklāta ar spoguļgaldiņu.

Pārtikas produktu, īpaši desu un kūpinātu gaļas, bakterioloģiskai analīzei nepieciešamas 1-2 kastes ar priekškastēm. Kastes ir izolētas, no putekļiem aizsargātas stiklotas telpas; maksimālais pieļaujamais daļiņu skaits, kas ir lielākas par 0,5 mikroniem 1 m, nedrīkst pārsniegt 4000.

Laboratorijas telpas regulāri tiek uzkoptas un dezinficētas, kuru kvalitāte periodiski tiek kontrolēta ar mikrobioloģisko metodi.

Katrā istabā jābūt aukstā un karstā ūdens padevei, pudelei ar dezinfekcijas šķīdumu roku mazgāšanai.

1.3 Noteikumi darbam mikrobioloģijā

laboratorijas

Tieša saskare ar mikroorganismiem un nepieciešamība ievērot sterilus apstākļus visu darbību laikā prasa zināšanas un stingru šādu noteikumu ievērošanu:

darbs peldmēteļos;

uzturēt tīrību un kārtību darba vietā;

nepieskarieties ar pirkstiem mikrobu nogulsnēm un kondensāta ūdenim mēģenēs un kultivēšanas trauciņos;

nemazgāt mikrobu nogulsnes no priekšmetstikliņiem un segstikliņiem un citiem priekšmetiem ar salvetēm, filtrpapīru, dezinficēt tos, ievietojot spirta vai karbolskābes šķīdumā;

darba procesā un pēc sēšanas iznīcina mikrobu nogulumu paliekas uz bakterioloģiskām adatām un cilpām, kalcinējot spirta lampas vai gāzes degļa liesmā;

neitralizēt izlietotos piesārņotos materiālus un izlietotās mikrobu kultūras, sterilizējot autoklāvā (šo darbu veic laboratorijas darbinieki);

neturiet gara spuldzes tuvu sejai, iededziet gara lampu tikai ar sērkociņu;

tīrīt un apstrādāt darba vietu darba beigās ar dezinfekcijas šķīdumu laboranta uzraudzībā; novietot mikroorganismu kultūras, kas nepieciešamas turpmākais darbs, ledusskapī vai seifā, kas ir aizvērts un aizzīmogots; termostatā ievieto mēģenes un Petri trauciņus, kas inokulēti ar mikrofloru;

pēc darba rūpīgi nomazgāt rokas, neēst laboratorijā.

1.4 Optiskā mikroskopa ierīce un tās kopšana.

Mikroskops ir sarežģīts optiskais instruments, kas palielina objektu 1000-1500 reizes. Mūsdienu mikroskops sastāv no divām galvenajām daļām - mehāniskās un optiskās.

Mehāniskā daļa sastāv no statīva, kas atšķir kāju, pamatni, caurules turētāju un priekšmetu galdu, kas piestiprināts pie statīva pamatnes. Caurules turētājs tiek pacelts un nolaists, izmantojot makrometriskās un mikrometriskas skrūves, kas paredzētas rupjai un smalkai objekta fokusēšanai.

Mikroskopa optiskā daļa sastāv no apgaismojuma un novērošanas ierīcēm.

Apgaismojuma aparāts atrodas zem objekta galda un sastāv no spoguļa, kondensatora un varavīksnenes diafragmas.

Spogulis atspoguļo gaismas starus un virza tos uz kondensatoru.

Kondensators ir lēcu sistēma, un tā kalpo, lai uzlabotu attiecīgā objekta apgaismojuma spilgtumu.

Novērošanas aparātā ietilpst lēcas un okulāri.

Objektīvi ir ieskrūvēti revolvera ligzdās un sastāv no lēcu sistēmas, kas ievietota metāla rāmī. Objektīva priekšējais vai priekšējais objektīvs ir mazākais un vienīgais, kas nodrošina palielinājumu. Pārējās objektīva lēcas ir koriģējošas.

Bioloģiskajiem mikroskopiem MBR-1 un MBI-1 parasti ir trīs vai četras lēcas ar digitālajiem apzīmējumiem x8, x20, x40, x90, kas parāda šo objektu faktisko palielinājumu.

Okulārs tiek ievietots caurules augšējā galā. Okulārs ir divu plakani izliektu lēcu sistēma, kas ir izliekta pret objektīvu. Lēcu, kas vērsta uz aci, sauc par oftalmoloģisko lēcu, un lēcu, kas vērsta pret preparātu, sauc par saplūstošo lēcu. Mājas mikroskopu okulāri ir marķēti ar cipariem, kas parāda to palielinājumu: x5, x7, x10, x15.

Mikroskopa palielinājums ir vienāds ar okulāra palielinājuma reizinājumu ar objektīva palielinājumu.

Mikroskopa kopšanas instrukcijas:

Mikroskops ir aizsargāts no putekļiem, mitruma un saules gaismas. Pēc darba ar to tas tiek ievietots futrālī vai pārklāts ar vāciņu, kas izgatavots no blīva auduma.

Objektīvus un okulārus noslauka ar zamšādu vai flaneli.

Neatstājiet mikroskopa cauruli atvērtu, t.i., bez okulāra, jo tas var izraisīt putekļu uzkrāšanos caurulē un objektīvu piesārņojumu.

Mikroskops sastāv no divām galvenajām daļām. Mikroskopa pamats ir statīvs. Tai ir piestiprināta caurule ar tajā ievietotu optisko daļu un priekšmetu galdiņu. Statīvs sastāv no pamatnes (vai pakavveida kājas) un caurules turētāja. Caurules turētājs ir savienots ar pamatni ar eņģes palīdzību, kas ļauj noliekt mikroskopa augšdaļu, lai atvieglotu lietošanu. Objektīvi un okulāri tiek ievietoti caurulē. Lēcas ir ieskrūvētas caurules apakšā, ko sauc par revolveri. Okulāri brīvi iekļaujas caurules augšpusē. Palielinājumu var mainīt, izmantojot dažādus objektīvus, kas tiek ieskrūvēti revolvera rotējošajā cilindrā.

Caurules turētājs tiek pacelts un nolaists, izmantojot makrometriskās un mikrometriskas skrūves, kas paredzētas rupjai un smalkai objekta fokusēšanai. Lai preparāts būtu skaidri redzams, caurule jāpārvieto tās optiskās ass virzienā, izmantojot rupjus vai mikrometriskus kustības mehānismus. Rupja kustība jāveic diezgan viegli, bet bez spontānas caurules nolaišanas. Precīzākam iestatījumam tiek izmantota mikrometra skrūve. Mikrometra skrūvei ir sarežģīta struktūra, ir viena no visvieglāk sabojājamām mikroskopa daļām. Negrieziet skrūvi vairāk par pusi apgriezienu vienā vai otrā virzienā (pēc mikroskopa rupjas uzstādīšanas). Objekta tabulu izmanto, lai novietotu pētāmās zāles.

Optiskā daļa sastāv no spoguļa, kondensatora ar diafragmu, objektīviem un okulāriem. Mikroskopa spogulis ir kustīgs. Mākslīgā apgaismojumā labāk izmantot ieliektu spoguli, izkliedētā gaismā - plakanu. Spogulis atspoguļo gaismas starus un virza tos uz kondensatoru. Kondensatoru izmanto, lai iegūtu spēcīgāku preparāta apgaismojumu. Diafragmu izmanto, lai regulētu preparāta apgaismojumu. Diafragma atrodas starp kondensatora apakšējo virsmu un spoguli.

Objektīvi ir vissvarīgākā mikroskopa daļa, kas nosaka tā optisko jaudu. Objektīvi ir ieskrūvēti revolvera ligzdās un sastāv no lēcu sistēmas, kas ievietota metāla rāmī. Objektīva priekšējais vai priekšējais objektīvs ir mazākais un vienīgais, kas nodrošina palielinājumu. Lēcas atlikušās lēcas ir koriģējošas. Okulāri palielina objektīva sniegto attēlu, bet neatklāj nekādas pētāmās zāles detaļas.

Lēcas, kuras darbības laikā jāiegremdē ciedra eļļā, sauc par iegremdējamām jeb iegremdējamām. Sausā lēca ir lēca, kurai starp preparātu un lēcu ir gaiss. Katrs mikroskops ir aprīkots ar sausiem un iegremdējamiem objektīviem. Objektīvi ar dabisko palielinājumu 8 un 40 ir sausi, objektīvs ar iekšējo palielinājumu 90 ir iegremdēšana.

Noteikumi darbam ar MBR-1 mikroskopu

1. Mikroskops tiek glabāts skapī, lai pasargātu to no putekļiem, mitruma un gaismas. Mikroskopu nēsā ar labo roku, turot statīva rokturi, ar kreiso atbalstu no apakšas.
2. Pirms darba ar mikroskopu noslaukiet okulāru, objektīvu un spoguli ar drānu.
3. Novietojiet mikroskopu ar statīvu pret sevi, objekta skatuvi prom no jums. Attiecībā uz sēdošo mikroskopu vajadzētu pārvietot tuvāk kreisajam plecam. Pa labi no mikroskopa ir albums, zīmuļi, krāsainie zīmuļi un dzēšgumija.
4. Novietojiet zemā palielinājuma objektīvu darba stāvoklī. Lai to izdarītu, pagrieziet revolveri, līdz vēlamais objektīvs atrodas vidējā pozīcijā (virs skatuves atveres). Objektīvam atrodoties vidējā pozīcijā, revolverī tiek iedarbināta speciāla ierīce - fiksators, savukārt atskan viegls klikšķis un revolveris tiek fiksēts. Atcerieties, ka jebkura objekta izpēte sākas ar nelielu pieaugumu.
5. Izmantojot makrometrisko skrūvi, paceliet objektīvu virs skatuves apmēram par 1 cm Atveriet diafragmu, paceliet kondensatoru līdz skatuves līmenim.
6. Skatoties caur okulāru ar kreiso aci, izmantojiet spoguli, lai virzītu gaismu tā, lai viss redzes lauks tiktu izgaismots spilgti un vienmērīgi.
7. Novietojiet sagatavoto paraugu uz skatuves ar pārklājumu uz augšu tā, lai priekšmets atrastos skatuves atveres centrā. Nolaidiet objektīvu virs preparāta par 0,2 cm, izmantojot makrometrisko skrūvi.
8. Ieskatieties okulārā, tajā pašā laikā lēnām pagrieziet statīvu pret sevi un uzmanīgi paceliet cauruli līdz (0,5 cm), līdz redzes laukā parādās objekta attēls; uzmanīgi pagriežot mikrometra skrūvi ne vairāk kā par ½ vai ¾ pilnu apgriezienu, iegūstiet skaidru skatu.
9. Pievēršoties objekta izskatīšanai lielā palielinājumā, nepieciešams centrēt preparātu, t.i. novietojiet interesējošā objekta daļu pašā redzes lauka centrā. Lai to izdarītu, pārvietojiet preparātu ar vecāku sagatavošanās palīdzību vai ar rokām, līdz objekts ieņem vēlamo pozīciju. Ja objekts nav centrēts, tad lielā palielinājumā tas paliks ārpus redzamības.
10. Pārslēdzoties no mazāka palielinājuma uz lielāku, pagrieziet revolveri, lai novietotu lielāka palielinājuma objektīvu pret caurules apakšējo atveri. Ieskatieties okulārā un, uzmanīgi pagriežot mikrometra skrūvi, iegūstiet skaidru attēlu.
11. Skicējot preparātu, skatieties okulārā ar kreiso aci un ar labo aci albumā.
12. Pēc darba, izmantojot mikroskopu ar revolveri, nomainiet liela palielinājuma lēcu pret mazu lēcu, noņemiet preparātu no galda un novietojiet to atpakaļ vietā.
13. Notīriet savu galdu; narkotikas un vadlīnijas uz skolotāja galda.

1.5 Baktēriju pamatformas.

Pēc formas baktērijas parasti iedala sfēriskās (koki), stieņveida (klostrīdijas, baciļi) un vītņotās (vibrio, spirilla, spirohetes).

Kokkoīdu formas pēc koku atrašanās vietas iedala mikrokokos - šūnās, kas atrodas atsevišķi; diplokoki - koki, kas savienoti ar diviem; tetracocci - koki, kas savienoti ar četriem; streptokoki - koki, kas sakārtoti garas vai īsas ķēdes formā; sarkīni - koki, kas sakārtoti iepakojumu veidā; stafilokoki - nejauša koku uzkrāšanās, bieži vien vīnogu veidā.

Stieņveida formas pēc stieņu atrašanās vietas iedala diplobaktērijās - stieņos, kas savienoti pa pāriem; streptobaktērijas - nūjas, kas sakārtotas ķēdē. Starp sporas veidojošajām baktērijām izšķir baciļus un klostridijas. Baciļiem sporas diametrs nepārsniedz veģetatīvās šūnas platumu, savukārt klostrīdijā sporas ir lielākas par šūnas platumu, tāpēc šūna iegūst vārpstas, tenisa raketes, stilbiņu formu.

Vītņotās formas ir iedalītas vibrionos, kam ir komata forma, spirilla, ar vairākām (līdz 5) cirtām, un spirohetās ar lielu skaitu mazu loku.

Izpildes kārtība

2. Gatavo preparātu mikroskopija ar galvenajām baktēriju formām.

Mikroskopijas tehnika.

Testa preparātu novieto uz objekta galda un nostiprina ar skavām.

Strādājot ar iegremdēšanas objektīvu 90, preparātam tiek uzklāts piliens imersijas eļļas un pēc tam, izmantojot makrometrisko skrūvi, caurule ar centrētu objektīvu 90 tiek rūpīgi nolaista, lai tās priekšējais lēca būtu iegremdēta eļļas pilē, un fokuss ir zem sagatavošanās. Pēc tam, skatoties okulārā, caurule tiek ļoti lēni pacelta ar to pašu skrūvi (par milimetra simtdaļām), līdz tiek redzēts mikrobu attēls. Precīza zāļu uzstādīšana objektīva fokusā tiek veikta, izmantojot mikrometra skrūvi.

Piezīme.

Iegremdēšanas sistēmas priekšrocība ir tāda, ka tad, kad objektīvs ir iegremdēts eļļā, gaismas stari, kas iet cauri stikla eļļas videi, gandrīz netiek lauzti, jo gaismas laušanas koeficients šiem materiāliem ir gandrīz vienāds. Tā rezultātā apgaismojums mikroskopijas laikā ar eļļu ir maksimāls.

Darba beigās iegremdēšanas eļļa tiek noņemta no objektīva 90 priekšējās lēcas ar mīksto audu drānu, pilnīgākai eļļas noņemšanai priekšējo lēcu noslauka ar drānu, kas samitrināta spirta un spirta maisījumā. ēteri proporcijā 1: 1, pēc tam objektīvu noslauka sausā veidā. Mikroskops tiek ievietots noliktavā.

Veicot mikroskopiju, pievērsiet uzmanību pētāmā mikroorganisma šūnu formai un izmēram, šūnu struktūras īpatnībām - sporu un kapsulu klātbūtnei baktērijās, pumpuru - raugā; veidņu sagatavošanā - dažādām šūnu formām: apaļas, ovālas, iegarenas, cilindriskas, sazarotas.

Mikroskopijas ziņojums.

Mikroskopijas rezultāti ir ierakstīti tabulā (1. veidlapa).

1. veidlapa

Kontroles jautājumi.

1. Kādas iekārtas jāaprīko ar mikrobioloģisko laboratoriju, tās mērķis?
2. Pamatnoteikumi darbam mikrobioloģiskajā laboratorijā.
3. Kas ir ierīce optiskā sistēma bioloģiskais mikroskops?
4. Kādi noteikumi jāievēro, lietojot un kopjot mikroskopu?
5. Kādas ir galvenās baktēriju formas?

LABORATORIJAS DARBS № 2.

Mikrobioloģisko preparātu sagatavošana dzīvo mikroorganismu izpētei ("sasmalcināts piliens" un "piekārts piliens"). Uztriepes sagatavošana no mikrobu kultūrām.

Jebkurš darbs pie mikroorganismu preparātu sagatavošanas, kā arī mikroorganismu pārvietošanas tiek veikts, ievērojot aseptikas noteikumus.

Laboratorijas galdu aprīkojums.

Lai strādātu ar mikroorganismiem, ir nepieciešams noteikts aprīkojums. Uz darba laboratorijas galda jābūt spirta lampai vai gāzes deglim, bakterioloģiskai cilpai, priekšmetstikliņiem un segstikliņiem, krāsu komplektam, mikroskopam, salvetei, ciedra eļļai, pincetei, kivetei ar tiltiņu, traukam ar ūdeni. , smilšu pulkstenis, zīmulis uz stikla, filtrpapīrs.

Nodarbības mērķis.

Iepazīstieties ar baktēriju kustības izpētes metodēm.

Materiāls atbalsts.

Jaunās mikroorganismu buljonu kultūras mēģenēs mobilitātes izpētei, stikla priekšmetstikliņi un segstikliņi, stikla priekšmetstikliņi ar caurumu, bakterioloģiskās cilpas, Pastēra pipetes, mikroskopi, sērkociņi, spirta vai gāzes degļi.

Skolotājam jādemonstrē mikroorganismu nekrāsotu preparātu sagatavošanas tehnika, mikroskopa sagatavošana darbam, redzes lauka apgaismojuma regulēšana, lupas uzstādīšana, preparātu mikroskopēšana.

Skolotājam skolēnu darba laikā pastāvīgi jāpārbauda redzes lauka apgaismojums katrā mikroskopā, ja nepieciešams, jāpalīdz to noregulēt un jāaplūko atrasto priekšmetu attēli. Jādod iespēja apskatīt nekrāsotu preparātu Īpaša uzmanība, jo studentiem šeit ir jāredz gan šūnu forma, gan to mobilitāte.

Uzdevumi.

1. Sagatavojiet "sasmalcinātu un nokarenu pilienu" preparātus, lai noteiktu baktēriju kustīgumu.
2. Sagatavojiet uztriepi no mikrobu kultūras.
3. Apgūstiet mikroskopijas tehniku ​​un apskatiet sagatavotos preparātus mikroskopā.
4. Sagatavojiet ziņojumu par mikroskopijas rezultātiem.
5. Nodarbības saturu ierakstiet darba burtnīcā.

Izpildes kārtība

1. Mikrobu mobilitātes pētījums preparātos "sasmalcināts un nokarens piliens".

Sasmalcināts piliens.

Ja organismi atrodas šķidrā vidē, uz attaukota stikla priekšmetstikliņa, izmantojot sterilu pipeti, uzpilina pilienu suspensijas. (Pēc lietošanas pipete uzreiz tiek ievietota porcelāna glāzē ar dezinfekcijas šķīdumu. Netīras pipetes novietošana uz darbvirsmas ir nepieņemama!). Ja kultūru audzē uz cietas barotnes, tad uz stikla vispirms uzpilina ūdens pilienu un pēc tam tajā ievieto mikroorganismu šūnas vai testa produkta testa paraugu ar bakterioloģisko cilpu, kas kalcinēta degļa liesmā, un kārtīgi izmaisa.

Šķidruma piliens ir pārklāts ar pārklājumu. Lai zem tā neveidotos gaisa burbuļi, vāku vispirms uzliek uz stikla priekšmetstikliņa ar vienu malu un pēc tam viegli nolaiž, nospiežot uz leju, lai “sasmalcinātu” pilienu. Vēlams izvairīties no liekā šķidruma, lai no seguma apakšas neizspiestos mikroorganismu suspensija. Ja tas notiek, lieko šķidrumu noņem ar filtrpapīru. Izlietotais papīrs nekavējoties jāievieto dezinfekcijas šķīdumā.

“Sasmalcinātā piliena” preparāta mikroskopijai tiek izmantoti tikai objektīvi ar sausu sistēmu, tas ir, bez iegremdēšanas. Šāda veida zāles ļauj noteikt šūnu formu, izmēru, sporulācijas metodi un, ja šūnas ir dzīvas, tad mobilitātes esamību vai neesamību.

Zāļu priekšrocība ir tāda, ka tiek iegūts plāns šķidruma slānis, kurā var redzēt dzīvos organismus.

Trūkums ir tas, ka tas ātri izžūst, un kustība apstājas, bieži nokļūst gaiss, kas pārkāpj mikroskopisko attēlu.

Lai pagatavotu zāles"karājās piliens" uz pārklājuma uzklāj nelielu pilienu mikroorganismu suspensijas, apgriež otrādi un novieto uz speciāla stikla priekšmetstikliņa ar padziļinājumu (caurumu) centrā. Pilienam vajadzētu brīvi karāties, nepieskaroties cauruma malām un apakšai. Ja nāk daudzu dienu novērošana, tad bedres malas nosmērē ar vazelīnu un pilienu hermētiski ievieto mitrā kamerā. Preparātu "karājās piliens" izmanto mikroorganismu mobilitātes noteikšanai, vairošanās metožu pētīšanai un sporu dīgtspējas uzraudzībai.

Ēdienu gatavošanai tamponu sagatavošana pētītā mikroba kultūra tiek rūpīgi sadalīta vienmērīgā plānā kārtā uz stikla priekšmetstikliņa. Sagatavojot kultūras, kas audzētas cietā barotnē, rīkojieties šādi. Uz tīra stikla priekšmetstikliņa ar sterilu pipeti vai bakterioloģisko cilpu uzklāj pilienu sterila krāna ūdens vai fizioloģiskā šķīduma.

a) Tiek ņemta kultivēšanas caurule, no kuras nepieciešams sagatavot uztriepi. Bakterioloģiskā cilpa tiek kalcinēta degļa liesmā, turot to vertikālā stāvoklī.

b) Turot korķi starp mazo pirkstiņu un labās rokas plaukstu, izņemiet to no mēģenes un turiet ar galu uz leju, izvairoties no saskares ar tās korķa daļas roku, kas atradās mēģenē.

c) Mēģenes atvērto galu sadedzinām uz liesmas.

d) Mēģenē ievietojam cilpu (kārtējo reizi izlaižam caur liesmu), atdzesējam, pieskaroties mēģenes sieniņai, un savācam nelielu daudzumu materiāla, viegli pieskaroties kultūrai un nesaskrāpējot barotni ar cilpu.

e) Mēs sadedzinām mēģenes malas un vates galu virs degļa liesmas.

f) Aizveriet cauruli ar kokvilnas aizbāzni.

g) Paņemto materiālu emulģē uz stikla priekšmetstikliņa esošā piliena un vienmērīgi sadala pa virsmu (1,5 x 2 cm) ar plānu cilpas kārtu.

h) Cilpu kalcinē un ievieto vietā.

Ja kultūru audzē šķidrā barotnē, tad šķidrumā nolaiž sterilu cilpu, notver pilienu un berzē uz stikla priekšmetstikliņa.

3. Mikroskopijas tehnika.

Mikroskops tiek novietots uz darbvirsmas no malas par 3-5 cm ar caurules turētāju pret jums.

Tiek izveidots labs vienmērīgs mikroskopa redzes lauka apgaismojums, kuram, skatoties okulārā, spogulis virza gaismas staru no avota uz objektīvu. Kondensatoram jābūt paceltam un diafragmai atvērtai. Mikroskopa redzamības laukam visos punktos jābūt labi un vienmērīgi apgaismotam.

Testa preparātu novieto uz objekta galda ar uztriepi vai pilienu uz augšu un nostiprina ar skavām.

Nekrāsotus preparātus mikroskopē ar x8 un x40 objektīviem, nolaižot kondensatoru par 1-0,5 cm līdz preparātam, panākot vislabāko nekrāsoto šūnu redzamību.

Mikroskopējot "dzīvus" mikrobus (nekrāsots preparāts), atzīmējiet mobilitāti.

4.Atskaite par mikroskopijas rezultātiem.

c) šūnu zīmēšana zem mikroskopa (norāda sporu, kapsulu, pumpuru klātbūtni, mobilitāti).

5. Nodarbības saturu pierakstiet darba burtnīcā.

Kontroles jautājumi

1. Kāda ir preparātu sagatavošanas tehnika "sasmalcināts un nokarens piliens"?
2. Kāda ir procedūra, lai sagatavotu uztriepi no baktēriju kultūras, kas audzēta uz cietas barotnes?
3. Kas ļauj instalēt zāles "sasmalcināts piliens"?
4. Kādiem pētījumiem tiek izmantots medikaments "karājās piliens"?

LABORATORIJAS DARBS №3.

Baktēriju krāsotu preparātu sagatavošana.

Nodarbības mērķis.

Uzziniet, kā sagatavot un krāsot baktēriju preparātus, izmantojot vienkāršo un grama metodi.

Materiāls atbalsts.

Gatavo krāsu šķīdumu komplekts pudelēs, sausu krāsu komplekts pudelēs vai mēģenēs ar gumijas vai korķa aizbāžņiem: bāziskais un skābais fuksīns, genciānas violets, metilēnzilais, safranīns, malahīts un briljantzaļais, mikrobu maisījums : grampozitīvo baktēriju (Bac. subtilis, Staph . saprophyticus), gramnegatīvo mikrobu (E. coli) kultūras, kas audzētas uz slīpa MPA, stikla priekšmetstikliņi, fuksīna ūdens šķīdums (Pfeiffer's magenta), bakterioloģiskās cilpas, filtrpapīrs, mikroskopi, spirta vai gāzes degļi.

Skolotājam jādemonstrē mikroorganismu iekrāsoto preparātu sagatavošanas tehnika, mikroskopa sagatavošana darbam, redzes lauka apgaismojuma regulēšana, lupas uzstādīšana, preparātu mikroskopēšana.

Skolēnu darba laikā skolotājam pastāvīgi jāpārbauda redzes lauka apgaismojums katrā mikroskopā, ja nepieciešams, jāpalīdz to noregulēt un jāaplūko atrasto priekšmetu attēli. Apskatot krāsainu preparātu, skolēnam jāredz sporu un kapsulu klātbūtne mikroorganismos.

Uzdevumi.

1. Sagatavojiet plāksnes uztriepi un traipu, izmantojot vienkāršu metodi.
2. Sagatavojiet uztriepi no stafilokoku un Escherichia coli maisījuma uz viena priekšmetstikliņa un iekrāsojiet ar gramu.
3. Apskatiet iekrāsotos uztriepes ar iegremdējamo objektīvu.
4. Nodarbības saturu ierakstiet darba burtnīcā.

Atbildiet uz drošības jautājumiem.

Paskaidrojums darbam

Lai pētītu mikrobu šūnas formu un dažas tās struktūras, tiek iekrāsots preparāts (uztriepe) no materiāla, kas satur pētāmo mikrobu.

Lielākā daļa mikrobu ātri un labi iekrāsojas ar anilīna krāsvielu šķīdumiem. Autors ķīmiskās īpašības tos parasti iedala bāziskajos un skābajos. Bāzes krāsvielām hromofors (jons, kas piešķir krāsu) ir katjons, skābām krāsvielām – anjons.

Galvenās krāsvielas ietver sarkano - neitrālu sarkano, bāzes fuksīnu, safranīnu, tionīnu, pironīnu, hematoksilīnu; zils - metilēnzils; violeta - kristālvioleta, metilēnvioleta; zaļš - malahīta zaļš, metilēnzaļš. Pamatkrāsvielas, kā likums, viegli saistās ar šūnu kodola (skābajām) sastāvdaļām.

Skābās krāsvielas ietver sarkano un rozā - skābo fuksīnu, eozīnu; dzeltens - pikrīnskābe, kongo, fluorescēna; melns - nigrosīns. Skābās krāsvielas intensīvāk iekrāso šūnu (pamata) komponentus.

Krāsu darba šķīdumu sagatavošana.Pirms mikrobu krāsošanai paredzēto krāsu darba šķīdumu sagatavošanas, bieži vien iepriekš no sausām krāsām, kas paredzētas mikrobu krāsošanai, piesātināto spirta šķīdumus bieži sagatavo iepriekš no sausām krāsām. Lai to izdarītu, krāsu ielej ar 96% spirtu proporcijā 1:10. Ar šo attiecību spirts ir piesātināts ar krāsu (krāsu neizšķīdinātā daļa nogulsnēs). Lai ietaupītu naudu, uz 100 cm³ spirta ieteicams ņemt metilēnzilo 7,0, genciānas violeto 4,8, bāzes fuksīnu 8,1.

Labākam piesātinājumam spirta šķīdumus ievieto termostatā un tur, līdz krāsas pilnībā izšķīst. Pēc nepieciešamības no piesātinātā spirta šķīdumiem sagatavo ūdens darba šķīdumus.

Visbiežāk izmantotie krāsvielu šķīdumi ir:

Tsil' fuksīna karbola šķīdums.100 ml 5% kristāliskās karbolskābes šķīduma pievieno 10 ml bāziskā fuksīna piesātināta spirta šķīduma. Piesātinātu fuksīna šķīdumu iegūst, sajaucot 8 g fuksīna kristālu 10 ml spirta. Krāsa ir sarkana.

Fuksins Feifersir Zīla fuksīna karbola šķīdums, kas atšķaidīts destilētā ūdenī 1:10. Sagatavots tieši pirms lietošanas. Krāsai ir piesātināta rozā krāsa.

Genciānas vijolītes karboliskais šķīdums.10 ml piesātināta krāsas spirta šķīduma pievieno 100 ml 2% karbolskābes ūdens šķīduma. Piesātinātu šķīdumu iegūst, izšķīdinot 1 g kristāliskas genciānas violetas 10 ml 96% spirta. Krāsai ir zili violeta krāsa.

Safranīns. Pagatavo tieši pirms lietošanas, pievienojot 1 g safranīna 100 ml karsta ūdens. Krāsa ir sarkanbrūna.

Metilēna zils (Leflera zils).Pagatavo, pievienojot 30 ml krāsas piesātināta spirta šķīduma un 1 ml 1% KOH vai NaOH ūdens šķīduma 100 ml destilēta ūdens. Šķīdumam ir tumši zila krāsa.

Malahīta zaļš.1 g krāsas izšķīdina 100 ml destilēta ūdens, filtrē. Šķīdumam ir zili zaļa krāsa.

Lugol šķīdums. Uz 300 ml destilēta ūdens ņem 1 g kristāliskā joda un 2 g kālija jodīda. Vispirms nelielā ūdens daudzumā izšķīdina kālija jodīdu un pēc tam pievieno joda kristālus. Pēc pilnīgas izšķīdināšanas pievieno pārējo destilēto ūdeni.

Sarežģītas krāsošanas metodesizmanto detalizētai šūnas struktūras izpētei, kā arī dažu mikroorganismu diferencēšanai no citiem. Sarežģītas krāsošanas metodes ir balstītas uz šūnas un tās daļu fizikāli ķīmiskās struktūras iezīmēm. Grama traipam ir vislielākās praktiskās zināšanas, kas ļauj diferencēt baktērijas pēc šūnas sieniņas ķīmiskā sastāva un struktūras.

Šo metodi 1885. gadā izstrādāja dāņu zinātnieks Kristians Grams. Krāsojot pēc Grama metodes, visas baktērijas tiek iedalītas divās grupās: grampozitīvās un gramnegatīvās.

Izpildes kārtība

Grama traipu tehnika.

1. Vienkārša krāsošanas metode.Plkst vienkārša metode krāsvielu, tiek izmantots kāds no dažiem krāsvielu šķīdumiem, visbiežāk Pfeiffer fuksīns vai metilēnzils.

Dažus pilienus krāsvielu šķīduma uzpilina uz fiksēta preparāta ar pipeti tā, lai tas pārklātu visu uztriepes virsmu: Pfeiffer fuksīns 1-2 minūtes, metilēnzils 3-5 minūtes. Pēc tam krāsu nomazgā ar ūdeni un uztriepi nosusina starp filtrpapīra loksnēm vai gaisā.

2. Sarežģītas krāsošanas metodesizmanto diagnozes nolūkos, identificējot mikrobu raksturīgās struktūras gadījumos, kad pēdējie nav iekrāsoti vienkāršā veidā.

Lai diferencētu mikrobu šūnas, kas atšķiras pēc šūnu sieniņu ķīmiskā sastāva un struktūras, tiek izmantota sarežģīta krāsošanas metode - Grama krāsojums.

Gram-krāsojošās baktērijas iedala divās grupās: grampozitīvās un gramnegatīvās.

Grampozitīvām baktērijām (G+) šūnu sieniņu biezums ir 15-80 nm, tas sastāv no peptidoglikāna (no 60-90%), kas atrodas vairākos slāņos, proteīna (apmēram 1%) un lipīdiem (apmēram 1%). Ir atrasti īpaša tipa polimēri, teikhoīnskābes, kas kovalenti saistītas ar peptidoglikānu. Augstais peptidoglikāna saturs nodrošina spirtu izturīga kompleksa veidošanos ar genciānas violetu un jodu, krāsojot pēc Grama, kā rezultātā tie ir krāsoti zili violeti.

Gramnegatīvo baktēriju (G-) šūnu sienas biezums ir 10-15 nm, taču tās struktūra ir daudz sarežģītāka nekā grampozitīvām baktērijām. Tā pamatā ir orientēti iekšējie lipīdi (10-20%), kas veido lipopolisaharīdu slāni ar virspusēji izvietotiem polisaharīdiem. Proteīni un polisaharīdi ir mozaīkas veidā sakārtoti uz šūnas sienas virsmas. Peptidoglikānu attēlo viens slānis, kura biezums ir tikai 2–3 nm (apmēram 5–10%), atrodas zem lipopolisaharīda slāņa un cieši pārklāj protoplastu. Pateicoties augstajam lipīdu saturam, gramnegatīvo baktēriju šūnu siena, krāsojot pēc grama, veido kompleksu ar genciānas violetu un jodu, ko iznīcina alkohola apstrāde, kā rezultātā šūnas maina krāsu.

Mikroorganismu nevienlīdzīgā attieksme pret Grama krāsojumu ir saistīta ar baktēriju šūnu sienas struktūras un ķīmiskā sastāva atšķirībām.

Pie grampozitīviem mikroorganismiem pieder koki, baciļi (sporas veidojošie nūjiņas), aktinomicīti, mikobaktērijas, klostridiju baktērijas.

Pie gramnegatīvajiem mikroorganismiem pieder: baktērijas (sporas neveidojošas nūjiņas), spirilla, salmonella, E coli, Pseudomonas, Azotbacter, vibrios.

Ir Gram-mainīgi mikroorganismi, kuru attieksme pret Grama traipu mainās noteiktos to dzīves cikla posmos. Tā kā šūnu spēja krāsoties pēc grama ir atkarīga no to vecuma, Grama krāsošanai tiek izmantotas jaunas kultūras šūnas, bieži vien vienu dienu vecas. Salīdzinājumam vienlaikus ar nosakāmo objektu vēlams iekrāsot to mikroorganismu šūnas, kuru saistība ar Grama traipu ir zināma (kontrole).

Grama krāsošanu veic šādi:

1. Uz stikla priekšmetstikliņa sagatavo trīs mikroorganismu kultūras uztriepes: centrā - pētāmās kultūras uztriepes, pa kreisi un pa labi - kontroles mikroorganismu uztriepes.

Uztriepes ir jābūt plānām, lai šūnas vienmērīgi sadalītos pa stikla virsmu un neveidotu kopas, jo krāsošanas rezultāti var būt atkarīgi no uztriepes biezuma. Nosusiniet uztriepes gaisā, nostipriniet virs degļa liesmas.

1. Traipu uztriepes ar karbolisko genciānas vijolīti. Uztriepes uzklāj pietiekamu daudzumu krāsvielas, notur 1-2 minūtes, krāsvielu notecina un, nenomazgājot ar ūdeni, uztriepes apstrādā ar Lugola šķīdumu, līdz tās kļūst melnas (apmēram 1-2 minūtes).
2. Lugola šķīdumu notecina un preparātu apstrādā ar 0,5-1 min (stingri) 96% etilspirtu, iegremdējot glāzē spirta vai uzklājot uztriepes ar spirtu (visas krāsošanas rezultāts ir atkarīgs no uztriepes tapšanas laika). apstrādāts ar spirtu: ar nepietiekamu apstrādi visas baktērijas saglabā krāsojumu, ar pārmērīgu - maina krāsu).
3. Preparātu nekavējoties mazgā ar ūdeni un 1-2 minūtes krāso ar fuksīna krāsas ūdeni. Krāsvielu notecina, preparātu mazgā ar ūdeni, nosusina ar filtrpapīru.
4. Preparāts tiek mikroskopēts ar iegremdēšanas sistēmu. Grampozitīvās baktērijas iekrāso tumši purpursarkanā krāsā, gramnegatīvās baktērijas iekrāso sarkanā vai purpursarkanā krāsā (papildu krāsvielas krāsa).

Ekspress metode mikroorganismu gram-tipa noteikšanai (pēc Krēgensena).

Metodes pamatā ir gramnegatīvo baktēriju šūnu iznīcināšana sārmaina vide un brīvās DNS noteikšana.

Uz stikla priekšmetstikliņa uzpilina 3% KOH šķīduma pilienu, kurā ar baktēriju cilpu pievieno pētāmās baktērijas (24 stundu kultūra no slīpā agara) un labi samaisa ar cilpu.

Pēc 5-10 s, cilpai pārvietojoties pa stiklu, ar pozitīvu reakciju gramnegatīvo baktēriju pārbaudes rezultātā veidojas 1-2 cm gara gļotaina pēda.Ja neveidojas gļotas, tad reakcija ir negatīvs, tad tiek pārbaudīta grampozitīva kultūra.

3. Ziņojums par mikroskopijas rezultātiem.

a) mikroskopijas sistēma;

b) mikroskopiskā kultūra;

c) šūnu zīmēšana zem mikroskopa (norāda sporu, kapsulu klātbūtni).

4. Pierakstiet nodarbības saturu darba burtnīcā.

Kontroles jautājumi

1. Kādi krāsvielu šķīdumi tiek izmantoti vienkāršajā krāsošanas metodē?
2. Aprakstiet procedūru baktēriju krāsošanai ar gramiem.
3. Kāpēc baktērijas Grama traipus uztver atšķirīgi?
4. Kuras baktērijas ir grampozitīvas un kuras ir gramnegatīvas??

LAB Nr.4

Uzturvielu barotnes un to sagatavošanas metodes.

Nodarbības mērķis.

Apgūstiet uzturvielu barotnes sagatavošanas tehniku.

Materiāls atbalsts.

Sausās barotnes, lietošanai gatavas barotnes, elektriskā plīts, virtuves piederumi, indikatorpapīrs, 20% nātrija hidroksīds, 20% sālsskābe, mēģenes, pipetes, Petri trauciņi.

Pirms darba veikšanas studenti atkārto mikroorganismu barošanu, uzturvielu barotnes, barotņu klasifikāciju, pamatprasības uzturvielu barotnēm.

Veicot laboratorijas darbus, skolēni sagatavo uzturvielu barotni.

Uzdevumi.

1. Izlasi darba aprakstu.
2. Sagatavojiet barotni (pēc skolotāja norādījumiem).
3. Nodarbības saturu ierakstiet darba burtnīcā.

Atbildiet uz drošības jautājumiem.

Paskaidrojums darbam

Bakterioloģiskās laboratorijas nevar iztikt bez uzturvielu barotnēm. Noteikt mikroorganisma veidu, atklāt infekcijas slimības izraisītāju, t.i., noteikt slimības diagnozi, ražot specifiskus preparātus (vakcīnas, serumus), ārstēt un novērst infekcijas slimības, iegūt antibiotikas, veikt sanitāro darbību. un vides objektu mikrobioloģiskos pētījumos, lai bakterioloģiski pētītu gaļu un gaļas produktus, izmantot mākslīgo mikroorganismu kultivēšanu uz barības vielu barotnēm.

Laboratorijās mikroorganismus kultivē in vitro, t.i. stikla mēģenēs, kolbās vai citos traukos. In vitro audzēšanai nepieciešami substrāti, ko mikroorganismi izmanto kā barības vielas.

Pēc barības vielu nepieciešamības visus mikroorganismus var iedalīt trīs grupās:

pirmā grupa - nepretenciozs, aug uz vienkāršām barotnēm (pūšanas, lielākā daļa koku un citu mikroorganismu);

otrā grupa - to augšanai nepieciešamas papildu barības vielas: pilnvērtīgs proteīns (vistas vai sūkalas), vitamīni, noteikts aminoskābju komplekts, mikroelementi (tuberkuloze, tularēmijas bacilis, leptospira utt.);

trešā grupa - neaug uz mākslīgām barotnēm, bet spēj vairoties tikai dzīvās šūnās (vīrusi, riketsijas).

Prasības barības vielu barotnēm ir šādas:

1. Tajos jāsatur slāpekļa un oglekļa avoti, neorganiskie savienojumi, mikroelementi, kā arī augšanas faktori, vitamīni, galvenokārt B grupa.

Peptoni tiek izmantoti kā universāls slāpekļa avots. Peptoni ir gaļas vai kazeīna hidrolīzes sadalīšanās produkti. Tie satur polipeptīdus, aminoskābes un būtiskas minerālvielas.

Kā universāls oglekļa avots, ogļhidrāti (cukuri) tiek pievienoti uzturvielu barotnēm - glikozei, laktozei, saharozei, organiskajām skābēm - pienskābei, citronskābei u.c., daudzvērtīgajiem spirtiem - mannītam, glicerīnam, sorbītam utt.

2. Uzturvielu barotnei ir jābūt noteiktai barotnes reakcijai. Tātad lielākajai daļai koku, pūšanas un patogēno mikroorganismu optimālais pH ir 7,0 ... 7,4, un pelējuma sēnītes, raugs, pienskābes mikroorganismi labāk attīstās pie pH 6,0.

3. Barības barotnei jābūt sterilai, t.i. nesatur mikroorganismus.

4. Barības barotnei jābūt mitrai, jo mikroorganismu barošana notiek saskaņā ar difūzijas un osmozes likumiem. Daudzām barotnēm jābūt caurspīdīgām, lai varētu atšķirt mikroorganismu augšanu uz tiem un novērot fizioloģiskās izmaiņas, kas rodas to dzīvībai svarīgās darbības rezultātā.

Atbilstoši konsistencei uzturvielu barotnes ir šķidras, pusšķidras un blīvas. Lai sagatavotu blīvu barotni, šķidrajai barotnei pievieno agaru-agaru 2 ... 3% koncentrācijā, pusšķidrai - agaru-agaru ar koncentrāciju 0,2 ... 0,3%.

Pēc izcelsmes izšķir dabisko un mākslīgo vidi.

Dabiski augšanas substrātiir dzīvnieku izcelsmes (asinis, asins serums, piens, žults ...) vai augu izcelsmes (dārzeņi, augļi, graudaugi) produkti, kurus izmanto mikroorganismu audzēšanai bez īpašas apstrādes, pilnībā saglabājot to dabiskās īpašības.

Mākslīgās kultūras nesējisagatavots no augu pārstrādes produktiem, gaļas, piena, aknu utt., bieži pievienojot tiem ogļhidrātus, galda sāls, krāsas utt.

Starp mākslīgajām vidēm izšķir sintētiskās vides, t.i. vide ar precīzi zināmu ķīmisko sastāvu. Mākslīgās uzturvielu barotnes ir sadalītas vienkāršās vai parastajās un sarežģītajās.

Vienkāršas barotnes kalpo vairuma mikroorganismu audzēšanai. Visu barotņu olbaltumvielu bāze ir uzturvielu buljons. Parasti galvenās uzturvielu buljona pagatavošanai izmanto divas metodes: uz gaļas ūdens, pievienojot gatavu peptonu - gaļas-peptona buljonu, izejvielu hidrolīzes produktu šķelšanu, izmantojot fermentus (tripsīns - Hotingera buljons, pepsīns - Marten buljons) vai skābes, šādas barotnes ir bagātākas ar aminoskābēm.

Kopējā un aminoskābekļa saturs barotnē ir atkarīgs no slāpekļa sastāva gaļas-peptona vidē un no olbaltumvielu sadalīšanās pakāpes gaļā un citos hidrolizātos.

Lai vairums mikroorganismu labi augtu, 100 cm buljonā ir nepieciešams saturēt vismaz 250 ... 300 mg kopējā slāpekļa aminoskābju (aminoskābju) klātbūtnē šajā daudzumā, vidēji apmēram 25 ... 30%.

Visizplatītākās vienkāršās uzturvielu barotnes ir gaļas-peptona buljons (MPB), gaļas-peptona agars (MPA), gaļas-peptona želatīns (MPG).

Gaļas peptona agars (MPA) – izmanto, lai noteiktu kopējo mikroorganismu skaitu.

Visu trīs barotņu pamatā ir gaļas ūdens, ko gatavo no maltas liellopa gaļas, piepilda ar ūdeni un vāra 1,5 ... 2 stundas, filtrē un sterilizē 20 ... 30 minūtes 120 ° C temperatūrā.

Gaļas-peptona buljons.1% peptona un 0,5% vārāmā sāls pievieno 1 litram gaļas ūdens, sārmina ar 10% NaOH šķīdumu līdz pH 7,4, filtrē un sterilizē 15 ... 20 minūtes ar spiedienu 0,1 MPa.

Gaļas-peptona agars.Gaļas-peptona buljonam pievieno smalki sagrieztu agaru-agaru (2…3%), maisījumu karsē, līdz agars izkūst, nosaka pH uz 7,2…7,6, filtrē caur vates-marles filtru, ielej mēģenēs. un sterilizē kolbās 20…30 min 120˚С.

Ja nepieciešams, MPA karsē ūdens vannā līdz pilnīgai kušanai. Mēģenes ievieto speciālos statīvos 10˚ leņķī, un pēc sacietēšanas iegūst tā saukto slīpo agaru, ko izmanto mikrobu kultūrām. Petri trauciņos lej arī izkausētu gaļas-peptona agaru.

Gaļas-peptona želatīnu gatavo līdzīgi.

Izpildes kārtība

2. Barības barotnes sagatavošana no gatavas sausas barotnes.

Sausa uzturvielu barotne.Tiek ražotas vienkāršas, izvēles un diferenciāldiagnostikas sausās barotnes. Sausās barotnes ir higroskopiski pulveri, viegli šķīst ūdenī. Sausās barotnes ir pieejamas stikla burkās ar cieši aizskrūvējamiem vāciņiem.

Šādas barotnes sagatavo saskaņā ar instrukcijām, pulveri izšķīdinot norādītajā destilēta ūdens daudzumā, filtrē un sterilizē 120°C temperatūrā 20 minūtes.

Sausais barojošs agarspagatavo šādi: izšķīdinātajam sausajam agaram (5 g agara uz 100 ml) kā augšanas faktoru pievieno nelielu daudzumu rauga ekstrakta, gaļas ūdeni, filtrē caur vates-marles filtru, ielej mēģenēs vai flakonos un sterilizē. pie 0,1 MPa 20 minūtes.

3. Nodarbības saturu pierakstiet darba burtnīcā.

Kontroles jautājumi

1. Kādas ir pamatprasības uzturvielu barotnēm?
2. Kādas ir visbiežāk lietotās mikroorganismu audzēšanai paredzētās barības vielas, to mērķis?
3. Kādas ir vienkāršas uzturvielu barotnes sastāvdaļas?

Bibliogrāfija

1. Gradova N. B. Laboratorijas seminārs par vispārējo mikrobioloģiju - M .: DeLi print, 2010.
2. Marmuzova L.V. Mikrobioloģijas, sanitārijas un higiēnas pamati pārtikas rūpniecībā - M .: 2005.
3. Mudrecova-Viss K. A. Mikrobioloģija, sanitārija un higiēna - M .: DL, 2010.

"Mikrobioloģijas, sanitārijas un higiēnas pamati".

METODISKIE NORĀDĪJUMI

uz laboratorijas darbiem №№1-4

NVO studentiem

34.17. Desu ražošanas procesu operators.

__________________________________________________________________

Žukova Ļubova Anatoljevna, Maskavas pilsētas Valsts autonomās vidējās izglītības iestādes TK Nr.28 speciālo disciplīnu skolotāja

Valsts autonomā izglītības iestāde

vidū profesionālā izglītība Maskavas pilsēta

Tehnoloģiju koledža Nr.28

Adrese: Maskava, st. Augšējie lauki, 27

Iesniegts drukāšanai 07.02.2012.

Papīra izmērs 60x90/16

Tirāža 16 eks.

Iespiests tipogrāfijā:

Valsts autonomā izglītības iestāde

vidējā profesionālā izglītība Maskavā

AKTIVITĀTE #1

UZTURVITĀJU SAGATAVOŠANA UN TO STERILIZĀCIJAS METODES

MIKROORGANISMU AUDZĒŠANAS ĪPAŠĪBAS

Mērķis: Izpētīt darba noteikumus mikrobioloģiskajā laboratorijā, mikroorganismu kultivēšanas īpatnības, barotņu sagatavošanas metodes un to sterilizācijas metodes.

Uzdevumi

Iepazīstieties ar uzvedības noteikumiem, veicot mikrobioloģisko darbnīcu.

Izpētīt mikroorganismu audzēšanas īpatnības.

Apgūt barotnes sagatavošanas un ieliešanas metodes.

Apgūt stikla trauku un barotņu sterilizācijas metodes.

Sagatavojiet un ielejiet MPA barotni.

Iegūstiet siena un kartupeļu nūju bagātināšanas kultūru.

Literatūra

Anikejevs V.V., Lukomskaya K.A. Praktisko vingrinājumu ceļvedis mikrobioloģijā. M.: Apgaismība, - 1983.

Gusevs M.V. Mikrobioloģija: mācību grāmata universitātēm / M.V. Gusevs, L.A. Minejevs. - Maskava, 2004

Emcevs V.T. Mikrobioloģija: mācību grāmata universitātēm / V.T. Emcevs, E.N. Mišustins. – M.: Bustards, 2005.

Lukomskaya K.A. Mikrobioloģija ar virusoloģijas pamatiem. M.: Apgaismība, - 1983.

Mikrobioloģijas, virusoloģijas un imunoloģijas pamati. / Zem. Rediģēja Vorobjovs A.A. un Krivoshein Yu.S. - M.: Masterstvo, 2001.

Pimenova M.N. Praktisko vingrinājumu ceļvedis mikrobioloģijā. Maskava, 1971.

Seminārs par mikrobioloģiju. Ed. Ņetrusova A.I. - M .: akadēmija, - 2005.

Tepper E.Z. Seminārs par mikrobioloģiju. – M.: Bustards, 2004.

Materiāli un aprīkojums.Sterilie Petri trauciņi, arsterilas koniskās kolbas 100-150 ml,uzturvielu agars, peptons, siens, kartupeļu bumbuļi, krīts, flīzes, spirta lampas, kolbas, vate, marle, pipetes, svari, atsvari, termostats.

Pamatjēdzieni.Kultivēšana, kultūra, virsmas kultūra, dziļkultūra, partiju kultūra, nepārtrauktā kultūra, tīrkultūra, bagātināšanas kultūra, inokulācija, inkubācija, pasāža, izvēles barotne, bagātināšanas barotne, optimālā barotne, dabiskā barotne, sintētiskā barotne, daļēji sintētiskā barotne, agars, sterilizācija, uzliesmošana, tindalizācija, pasterizācija, autoklāvēšana, MPA.

Progress

Uzdevums numurs 1. Apgūstiet darba noteikumus, veicot mikrobioloģisko darbnīcu.

Uzdevums numurs 2. Izpētīt uzturvielu barotņu klasifikāciju, to sagatavošanas un iepildīšanas īpatnības, barotņu un stikla trauku sterilizācijas metodes.

Uzdevums numurs 3. Sagatavojiet un ielejiet MPA barotni sterilos Petri trauciņos.

Uzdevums numurs 4. Iegūstiet siena nūju bagātināšanas kultūru(Bacillus subtilis).

Sienu smalki sagriež un ievieto 500 ml kolbā, piepildot to līdz ceturtdaļai tilpuma, pievieno šķipsniņu krīta un vāra 15-20 minūtes, līdz barotne iegūst stipras tējas uzlējuma krāsu. Siena novārījumu lej sterilās 100-150 ml koniskajās kolbās ar 1,0-1,5 cm slāni, aizver ar vates aizbāžņiem un ievieto termostatā 22-25 °C temperatūrā.

Pēc divām dienām uz barotnes virsmas veidojas bālgana plēve. Tu. subtilis, kas, novecojot, 3-4 dienā kļūst pelēcīgi zaļgani. Citi mikroorganismi tajā pašā laikā aug reti un nelielos daudzumos.

Uzdevums numurs 5. Iegūstiet kartupeļu nūjas bagātināšanas kultūru(Vas. subtilis var. mesentericus).

Nomazgātus kartupeļu bumbuļus, bez mizošanas, sagriež šķēlēs. To virsmu noberzē ar krītu, lai neitralizētu barotni, un ievieto sterilos Petri trauciņos uz dubultā filtrpapīra, kas samitrināts ar destilētu ūdeni. Krūzes ar kartupeļu barotni 10 minūtes tur autoklāvā 0,5 atm un ievieto termostatā 27-30°C temperatūrā 3-4 dienas.

Kartupeļu šķēlīšu virsmā veidojas blīva krunkaina kartupeļu nūju kultūras plēve. Filmas krāsa var būt dažāda: bālganpelēka, sārta, dzeltenbrūna, melna, kas ir atkarīga no kultūras šķirnēm, kuras ir saņēmušas dominējošo attīstību.

Kontroles jautājumi

Barības vielu barotņu klasifikācija.

Laboratorijas stikla trauku un barotņu sterilizācijas metodes.

Atsevišķu barotņu sagatavošanas metodes (MPB, MPA, MPZH, SA, KA u.c.) Barības barotņu izliešana.

Mikroorganismu audzēšanas iezīmes (virszemes un dziļi, periodiski un nepārtraukti). bagātināšana un tīrkultūras.

Mikroorganismu dabisko un fiksēto preparātu sagatavošanas metodes.

Izpētīt mikrobioloģijas zinātnes attīstības galvenos posmus, Krievijas un ārvalstu zinātnieku ieguldījumu tās attīstībā. Aizpildiet tabulu Nr.1.

Tabulas numurs 1. Mikrobioloģijas attīstības vēsture

AKTIVITĀTE #2

MIKROORGANISMU DZĪVO UN FIKSU SAGATAVOŠANA UN IEPAZĪŠANĀS AR TO MORFOLOĢIJU

Mērķis: Izpētīt mikropreparātu sagatavošanas metodes un paņēmienus mikroorganismu izpētē un iepazīties ar to morfoloģiju.

Uzdevumi:

Izpētīt baktēriju šūnu morfoloģijas īpatnības.

Sagatavot intravitālos un fiksētos mikroorganismu mikropreparātus.

Materiāli un aprīkojums.Stikla priekšmetstikliņi, bakterioloģiskā cilpa, spirta lampa, filtrpapīrs, kristalizators ar tiltiņu preparātiem, mazgāšanas pudele ar ūdeni, krāsvielu - fuksīna, metilēnzilā, genciānas vijolītes ūdens šķīdumi (turpmāk - mikropreparātu pagatavošanas iekārtas); imersijas eļļa, mikroskops; gaļas ūdens, raugs, siena kultūras un kartupeļu stieņi.

Progress

Uzdevums numurs 1. Veiciet baktēriju šūnu mūža izpēti ar šādām metodēm, izveidojiet rasējumus:

sasmalcināta piliena metode.Uz stikla priekšmetstikliņa ar mikrobioloģisko cilpu uzklāj pilienu kāda no šķidrumiem. Nosedzošais stikls tiek novietots uz malas pie piliena malas un pakāpeniski nolaižas uz tā.

pakarināmā piliena metode.Nosegstikla centrā ar bakterioloģisko cilpu uzpilina nelielu testa šķidruma pilienu un apgāž pāri speciāla stikla priekšmetstikliņa padziļinājumam.

Zāles "nospiedums".No agara barotnes, uz kuras mikroorganismi aug nepārtrauktā zālienā vai atsevišķu koloniju veidā, izgriež nelielu kubiņu un pārnes uz stikla priekšmetstikliņu tā, lai virsma ar mikroorganismiem būtu vērsta uz augšu. Pēc tam uz zāliena vai kolonijas uzklāj tīru segstikliņu, viegli uzspiež uz tā ar cilpu vai pinceti un nekavējoties noņem, cenšoties nekustēties. Iegūto preparātu uz stikla priekšmetstikliņa ievieto ar apdruku ūdens vai metilēnzilā pilē (1:40).

Uzdevums numurs 2. Sagatavojiet fiksētu preparātuTu. subtilis, Vas. subtilis var mesentericus, Sv. lactis, S. cerevisiae, E. coli(Att. Nr. 1, 2, 3, 4 pieteikumi),taisīt zīmējumus.

Pieteikums. Stikla priekšmetstikliņu žāvē uz spirta lampas liesmas. Stikla priekšmetstikliņa centrā ar testa materiāla uztriepi uzliek uz degļa liesmas sterilizētu bakterioloģisko cilpu. Ja mikroorganisma kultūru audzē uz blīvas barotnes, vispirms uz stikla uzpilina ūdens pilienu, tajā ar bakterioloģisko cilpu ievada nelielu daudzumu materiāla un izveido uztriepi.

Žāvēšana un nostiprināšana. Zāles žāvē gaisā un pēc tam fiksē. Tradicionālās mikroorganismu uztriepes tiek fiksētas termiski, 2-3 reizes izlaižot stiklu caur degļa liesmu ar uztriepi uz augšu.Uztriepes fiksācija izraisa mikroorganismu nāvi, to blīvu saķeri ar stikla virsmu un mikrobu vieglāku jutību pret krāsvielu.

Krāsošana. Ielejiet virsmu ar jebkuras krāsvielas šķīdumu 2-3 minūtes (metilēnzilais, genciānas violets, fuksīns). Atšķirtvienkāršs un atšķirīgsmikroorganismu krāsošana. Pirmajā gadījumā visa šūna tiek iekrāsota, lai tās forma un izmēri kļūst skaidri redzami. Diferenciālā krāsošana atklāj tikai noteiktas šūnu struktūras un uzglabāšanas vielas.

Pietvīkums. Pēc tam krāsvielu no uztriepes nomazgā ar ūdeni no mazgāšanas pudeles, preparāta apakšējo pusi noslauka ar filtrpapīra sloksni, augšējo rūpīgi nosusina un mikroskopē.

Mikroorganismu vispārīgās īpašības. Prokariotu un eikariotu atšķirīgās iezīmes.

Baktēriju šūnu forma un izmērs. Baktēriju morfoloģiskie veidi.

Mikroorganismu sistemātikas pamati. Baktēriju stāvoklis organismu sistēmā un to mainīgums. Sugu identificēšanā izmantoto baktēriju raksturojums.

īss apraksts par pasūtīt Schizomycetales.

Īss Actinomycetales kārtas apraksts. Nokardija. Mikobaktērijas.

Īss Myxobacteriales kārtas apraksts.

Sēnes. Īss zigo-, asko- un deuteromicetu apraksts.

Aizpildiet tabulu ar numuru 2.

Tabulas numurs 2. Atšķirības starp eikariotiem un prokariotiem

Lineārās hromosomas

Jautājumi pašmācībai

Atsevišķu baktēriju grupu īss apraksts (saskaņā ar Beržeja baktēriju noteicēju).

Aļģu morfoloģiskās īpašības un sistemātika.

Vienšūņu morfoloģiskās īpašības un sistemātika.

AKTIVITĀTE #3

IEKĻAUJUMU, KAPSULU UN ENDOSPORU KRĀSOŠANA, GRAM krāsojums

Mērķis: Uzziniet, kā iekrāsot sporas, kapsulas un ieslēgumus baktēriju šūna; izpētīt tā citoloģiskās īpašības, kā piemēru izmantojot Grama traipu.

Uzdevumi:

Atklājiet lipīdu granulas rauga šūnās.

Nosakiet glikogēnam līdzīgus polisaharīdus rauga šūnās.

Nosakiet baktēriju šūnas kapsulas ar negatīva kontrasta metodi (piemēram, Azotobaktērija).

Veiciet diferenciālo sporu un citoplazmas krāsošanu pēc Ožeškas metodes.

Veiciet Grama traipu baktērijām.

Materiāli un aprīkojums.Priekšmetstikliņi, bakterioloģiskā cilpa, spirta lampa, filtrpapīrs, kristalizators ar tiltiņu preparātiem, mazgāšanas pudele ar ūdeni, mikroskops. Krāsvielu ūdens šķīdumi - fuksīns, metilēnzilais, genciānas violets, Tsilya karboliskais fuksīns, Sudāna III. Iegremdēšanas eļļa, sērskābe 1%, tinte, sālsskābe 0,5%, Lugola šķīdums. kultūrāmVas.subtilis, Vas.mycoides, S.cerevisiae, E.coli.

Pamatjēdzieni.Mureīns, volutīns, nukleoīds, glikogēns, kapsulas, šūnu siena, polisaharīdi, polifosfāti, metahromatiskie graudi, monotrihs, peritrichis, lofotrihs, bacilārā forma, klostridiālā forma, plektridiālā forma, eksīns, intine, metahromoze.

Progress

Uzdevums numurs 1. Noteikt polifosfātu (volutīna) ieslēgumus rauga šūnās.Volutīns sēnīšu un rauga šūnās ir lokalizēts vakuolos, baktērijās un aktinomicetos citoplazmā. Tā ir rezerves fosforu un slāpekli saturoša viela, atvasinājums nukleīnskābes. raksturīga īpašība- metahromoze, t.i., spēja iegūt atšķirīgu krāsu nekā vielas, kas to krāso.

Volutīna krāsošana pēc Omeļjanska metodes.Uz stikla priekšmetstikliņa sagatavo plānu uztriepi no mikroorganisma kultūras, žāvē gaisā, fiksē uz liesmas, 30–40 s iekrāso ar karbolfuksīnu un mazgā ar ūdeni. Atšķirt, iegremdējot to kolbā ar 1% sērskābes šķīdumu uz 20-30 sekundēm un nekavējoties noskalojot ar ūdeni. Sērskābe maina citoplazmas krāsu, un volutīna graudi paliek krāsoti ar fuksīnu. Preparātu pretkrāso ar metilēnzilo (1:40) 20-30 s, mazgā ar ūdeni, žāvē gaisā un mikroskopē. Uz preparāta volutīna graudi ir iekrāsoti sarkanā krāsā, šūnu citoplazma - zilā krāsā (1. att., 2 pielikumi).

Uzdevums numurs 2. Atklājiet lipīdu granulas rauga šūnās. Rezerves lipīdus raugā un pavedienveida sēnēs attēlo neitrālie tauki; baktērijās šo funkciju veic hidroksisviestskābe.

Tauku ieslēgumu krāsošana.Pilienu Sudan III šķīduma pievieno mikroorganismu ūdens suspensijas pilienam uz stikla priekšmetstikliņa, pārklāj ar segstikliņu un mikroskopē, izmantojot VI-40 objektīvu. Sudāns III izšķīst baktēriju šūnas taukainajos ieslēgumos, iekrāsojot tos oranži sarkanā krāsā. Šūnas citoplazma paliek bezkrāsaina.

Uzdevums numurs 3. Nosakiet glikogēnam līdzīgus polisaharīdus rauga šūnās. Ogļhidrātu dabas rezerves vielas baktēriju šūnās uzkrājas granulu veidā. Granuloze ir cietei līdzīga viela, kas, mijiedarbojoties ar Lugola reaģentu, kļūst zila; glikogēns ir polisaharīds, kas tādos pašos apstākļos kļūst sarkanbrūns. Granuloze ir sastopama tikai prokariotu šūnās.

Glikogēna un granulozes traips.Pilienu vāja Lugola šķīduma pievieno mikroorganismu suspensijas pilienam uz stikla priekšmetstikliņa, pārklāj ar vāku un mikroskopē, izmantojot VI-40 objektīvu.

Uzdevums numurs 4. Nosakiet baktēriju šūnu kapsulas ar negatīvu kontrastu (in Azotobaktērija).

Kapsulu identificēšana uz negatīva intravitāla preparāta.Uz labi attaukota stikla priekšmetstikliņa ar mikrobioloģisko cilpu tiek uzklāts liels melnās tintes piliens, tajā tiek ievadīts pētāmās mikroorganismu kultūras piliens, sadalīts, izmantojot stikla priekšmetstikliņu, un žāvēts. Apstrādājiet ar iegremdēšanas sistēmu. Uz tumša liemeņa fona atklājas caurspīdīgas kapsulu zonas ap asi izteiktām šūnām (Att. Nr. 8. Pielikums).

Uzdevums numurs 5. Veiciet diferencētu sporu un citoplazmas krāsošanu (in Tu. mikoīdi).

Ožeškas metode. Žāvēto preparātu pārlej ar 0,5% sālsskābe un karsē 2 minūtes, līdz parādās tvaiki. Uztriepes mazgā ar ūdeni, pārklāj ar filtrpapīru un piepilda ar Ziela karbolisko fuksīnu. Krāsojiet 5 minūtes, karsējot, līdz parādās tvaiki. Mazgāts ar ūdeni un diferencēts 1% sērskābē 0,5-1 min (laiks noteikts empīriski). Nomazgāts ar ūdeni un nokrāsots uz 30 ar metilēnzilu. Vēlreiz noskalojiet, nosusiniet un mikroskopējiet. Sporas iekrāsotas rozā krāsā, citoplazma zila (pielikuma 2. att.).

Uzdevums numurs 6. Veiciet Grama traipu baktērijām. Baktēriju šūnu sieniņu ķīmiskā sastāva atšķirības ietekmē to spēju krāsoties atbilstoši gramam. Pamatojoties uz to, baktērijas tiek sadalītas grampozitīvās un gramnegatīvās (tabula Nr. 3). Grampozitīvās čaulas satur vairāk polisaharīdu, mureīna un teikoīnskābes; gramnegatīvo čaumalām ir daudzslāņu struktūra ar augstu lipīdu (lipoproteīnu un liposaharīdu) saturu. Grampozitīvie mikroorganismi, iekrāsojoties, ar bāzes krāsvielu veido spirtā nešķīstošu joda savienojumu, gramnegatīvos mikroorganismos šis savienojums šķīst spirtā.

Grama traips.Trīs uztriepes tiek uzklātas uz priekšmetstikliņa un pēc tam vienlaicīgi apstrādātas: no baktēriju kultūras, par kuru zināms, ka tā ir grampozitīva, no baktēriju kultūras, par kuru zināms, ka tā ir gramnegatīva, un starp tām uztriepes no pētāmā mikroorganisma kultūras. . Tiek izmantotas jaunas vienas dienas kultūras.

Uztriepes žāvē gaisā, fiksē uz degļa liesmas un 1 min krāso ar 1% genciānas vijolītes ūdens šķīdumu. Krāsvielu nomazgā ar Lugola šķīdumu un 1 minūti ielej uztriepes ar to pašu šķīdumu. Preparātu mazgā ar ūdeni un diferencē kolbā ar 95% etanolu (0,5-1,0 min). Pēc tam, kad uztriepe ir diferencēta, preparātu nekavējoties rūpīgi nomazgā ar ūdeni un 2-3 minūtes iekrāso ar papildu krāsvielu - 0,1% fuksīna ūdens šķīdumu. Preparātu visbeidzot mazgā ar ūdeni, žāvē gaisā un mikroskopē, iegremdējot eļļu. Uz preparāta grampozitīvās baktērijas iekrāsojas ceriņi violetā krāsā, gramnegatīvās - rozā-aveņu krāsā (pielikuma 2.att.).

Tabulas numurs 3. Baktēriju attiecība pret Grama traipu

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Streptokoks

Proteus vulgaris

Bacillus subtilis

Pseudomonas aeruginosa

Sacharomyces

Shigella sp.

Kontroles jautājumi un uzdevumi

Baktēriju šūnu sienas struktūra. Kapsulas veidošanās.

Baktēriju attiecība pret Grama traipu. Grampozitīvo un gramnegatīvo mikroorganismu atšķirīgās iezīmes.

Šūnu membrānas un intracelulāro membrānu struktūras.

Kodolaparāts, sastāvs, organizācija un replikācija.

Ribosomas, gāzu vakuoli un citas baktēriju organellas; to nozīme.

Baktēriju šūnu ieslēgumi (polisaharīdi, polifosfāti, lipīdi, sēra ieslēgumi).

Baktēriju pavairošanas veidi. Sporulācija baktērijās.

Flagella. baktēriju kustība. Taksometri.

Jautājumi pašmācībai

Mikroorganismu iedzimtie faktori.

Mehānismi, kas izraisa izmaiņas ģenētiskā informācija mikroorganismiem.

AKTIVITĀTE #4

GAISA UN ŪDENS MIKROFLORAS KVANTITATĪVĀ UZSKAITE

MIKROBIĀLĀ SKAITA NOTEIKŠANA

Mērķis: Veikt gaisa un ūdens mikroorganismu kvantitatīvo uzskaiti.

Uzdevumi

Izpētīt gaisa un ūdens mikrofloras kvantitatīvās uzskaites metodes.

Veikt gaisa mikrobioloģisko analīzi un ūdens sanitāri bakterioloģisko izpēti.

Materiāli un aprīkojums.Petri trauciņi ar sterilu MPA, sterilas 1 ml pipetes, ūdens vanna, elektriskā plīts, termometrs, krāna ūdens, ūdens no dīķa, gara lampa, sērkociņi.

Pamatjēdzieni.kopējais mikrobu skaits ūdenī,kopējais gaisa mikrobu skaits, ja-indekss, ja-titrs, sanitāri indikatīvie mikroorganismi, autohtona mikroflora, alohtona mikroflora, saprobitātes zonas.

Progress

Uzdevums numurs 1. Gūstiet pieredzi, lai noteiktu gaisa TMC (kopējo mikrobu skaitu).

Infekcijai Petri trauciņus atver testa telpā vai ārā uz 5 minūtēm. Petri trauciņai noņem vāku un novieto blakus, neapgriežot. Uz Petri trauciņa vāka norādiet eksperimenta variantu, sēšanas datumu. Inficētos Petri trauciņus ievieto termostatā 25-28°C temperatūrā.

Pēc 2-3 dienām tiek saskaitīts mikroorganismu koloniju skaits, kas izveidojušās uz Petri trauciņa agara plāksnes.Šajā gadījumā tiek ņemts vērā: pēc aptuvenām aplēsēm (Omeļjanskis) 100 cm platībā 2 5 minūšu laikā nosēžas tik daudz mikroorganismu un sporu, cik ir 10 litros gaisa. Mēs pieņemam, ka katra kolonija cēlusies no vienas šūnas vai sporas. EŠī metode dod tikai aptuvenus datus, taču ļauj diezgan precīzi noteikt relatīvo mikroorganismu skaitu dažādu telpu gaisā.Aizpildiet tabulu numur 4, izdariet secinājumus.

Piemēram: Petri trauciņā tika atrastas 5 kolonijas, šķīvja rādiuss ir 2 cm Laukums S=πr 2 =3,14*4=12,5. Tad 10 litri satur

Tabulas numurs 4. Kopējais mikrobu skaits (TMC) iekštelpu gaisā.

Sugas identificēšanai var izmantot mikroorganismu kolonijas, kas izolētas no gaisa uz MPA plāksnēm. Visbiežāk no gaisa tiek izolētas mikrokoku, sarkīnu, dažu baciļu un baktēriju kolonijas.

Uzdevums numurs 2. Izmantojiet pieredzi, lai noteiktu ūdens TMF.

Pētījumiem krāna ūdeni ņem sterilās kolbās. No kolbas ar sterilu pipeti paņem 1 ml ūdens un pievieno Petri trauciņā ar iztaisnotu barotni (MPA) (tā temperatūra nedrīkst būt augstāka par 45°C). Krūzi aizver un, viegli noliecot, baro barotni sajauc, ļauj plāksnei sacietēt un ievieto termostatā. Pēc 3-5 dienām saskaita Petri trauciņos izveidotās kolonijas un nosaka baktēriju skaitu 1 ml ūdens.

Pēc koloniju saskaitīšanas nosaka ūdens mikrobu skaitu - mikroorganismu skaitu uz 1 ml testa ūdens, ņemot vērā atšķaidījumu, ja tāds ir.

Dati noformēti tabulas Nr.5 veidā, izdarīti secinājumi.

Tabulas numurs 5. Kopējais mikrobu skaits (TMC) dzeramais ūdens

krāna ūdens

Kontroles jautājumi

Gaisa mikrofloras iezīmes. Mikroorganismu izplatīšanās gaisā.

Iekštelpu gaisa sanitārā stāvokļa standarti.

Gaisa sanitārā un mikrobioloģiskā izpēte.

Dzeramā ūdens mikroflora.

Dabisko ūdeņu mikroflora. Mikroorganismu izplatība ūdenī.

Dzeramā ūdens sanitārie rādītāji. Kopējais mikrobu skaits ūdenī. Ja-indekss, ja-titrs ūdens.

Ūdensobjektu piesārņojums un pašattīrīšanās. Mikroorganismu loma ūdenstilpju pašattīrīšanās procesos.

Dzeramo un notekūdeņu bioloģiskā attīrīšana.

Sanitāri bakterioloģiskā ūdens izpēte. TMC, ja-indeksa, ja-titra noteikšana.

Sanitārie gaisa, ūdens, augsnes mikroorganismi.

Prasības sanitāri indikatīvajiem mikroorganismiem.

Pārtikas produktu mikroflora (rūgušpiens, zivis, gaļa, desas, konservi).

Pārtikas izejvielu un pārtikas produktu nekaitīguma novērtējumā izmantoto mikroorganismu grupu raksturojums.

Sanitārie un bakterioloģiskie standarti dažādiem pārtikas produktiem.

Pārtikas produktu sanitāri bakterioloģiskās izpētes metodes.

Augsne kā mikroorganismu dzīvotne.

Augsnes mikroorganismu izplatības ekoloģiskie faktori.

Saistības starp augsnes mikroorganismiem.

Augsnes mikrofloras līdzdalība organisko vielu mineralizācijas un humusa veidošanās procesos.

Augsnes sanitārā un bakterioloģiskā izpēte.

AKTIVITĀTE #5

MIKROORGANISMU TĪRĀS KULTŪRAS IEGŪŠANA

KVANTITATĪVO MIKROORGANISMU NEHELOMETRISKĀ METODE

Mērķis: Veikt mikroorganismu tīrkultūru izolēšanu, apgūt nefelometrisko mikroorganismu skaita uzskaites metodi.

Uzdevumi

Veikt tīrkultūras izolāciju ar "noplicināšanas" insulta metodi.

Nosakiet mikroorganismu daudzumu ar nefelometrisko metodi

Materiāli un aprīkojums.Petri trauciņi ar sterilu MPA, FEK, Gorjajeva fotoaparāts, mikroskopi, mikrobioloģiskās cilpas, gara lampa, sērkociņi.

Pamatjēdzieni. Tīrkultūra, augšana, pavairošana, binārā dalīšanās, pumpuru veidošanās, šūnu cikls (monomorfs, dimorfs, polimorfs), ģenerācijas laiks, īpatnējais augšanas ātrums, biomasas raža, ekonomiskais faktors, stacionāra augšanas fāze, aizkavēšanās fāze, eksponenciālās vairošanās fāze, stacionārā fāze, mirst fāze, stagnācijas kultūra, plūsmas kultūra, sinhronā kultūra.

Progress

Uzdevums numurs 1. Mikroorganismu tīrkultūras iegūšana

Aerobu tīrkultūru izolēšana tiek veikta, sijājot bagātināšanas kultūru uz cietas barotnes virsmas. Sēšana tiek veikta ar izsmeļošu insulta metodi. Pēc koloniju pieauguma vizuāli un ar mikroskopiju pārbauda izolēto koloniju tīrību. Pēc 3-6 dienām tiek atlasīta un aprakstīta izolēta mikroorganismu kolonija (izmantojot pielikuma zīmējumus).Koloniju raksturo šādi:

Kolonijas izmērs: punktēts (D - mazāks par 1 mm), mazs (D - 1-2 mm), vidējs (D - 2-4 mm) un liels (D - 4-6 mm vai vairāk).

Kolonijas forma ir apaļa, amēboīda, rizoidāla.

Optiskās īpašības - caurspīdīga, matēta, fluorescējoša, caurspīdīga (caurspīdīga), necaurspīdīga, spīdīga.

Krāsa - atzīmējiet kolonijas krāsu un pigmenta izdalīšanos barotnē.

Virsma ir gluda, raupja, salocīta, bedraina.

Profils - plakans, izliekts, krāterveida, aug par agaru utt.

Kolonijas mala ir gluda, viļņota, daivaina, sakneņaina utt.

Kolonijas struktūra ir viendabīga, smalka vai rupji graudaina.

Konsistence - eļļaina, pastveida, viskoza, plēvīga.

Uzdevums numurs 2. Veikt mikroorganismu kvantitatīvo novērtēšanu ar nefelometrisko metodi.

a) Nefelometriskā metode.šūnu blīvums S.cerevisiae Šķidrā vidē nosaka nefelometriski (FEC), izmantojot kiveti ar optiskā ceļa garumu 0,5 cm un zaļās gaismas filtru (A = X 540 nm). Lai iegūtu ticamus rezultātus, šūnu blīvumam jābūt diapazonā no 0,1 līdz 0,6. Ja šūnu koncentrācija pārsniedz 0,6, notiek sekundāra gaismas izkliede, kā rezultātā rezultāti ir nepietiekami novērtēti. Tādēļ augsta blīvuma suspensijas pirms gaismas caurlaidības mērīšanas jāatšķaida ar ūdeni 2, 4, 6, 8 un 10 reizes. Katras suspensijas (ūdens kalpo kā kontrole) optiskā blīvuma mērījumu rezultāti fiksēti tabulā Nr.6.

b) Šūnu skaitīšana Gorjajeva-Toma kamerā.Lai pārslēgtos no fotoelektrokolorimetra (FEC) rādījumiem uz mikroorganismu šūnu skaitu barotnē, to skaits tiek skaitīts, izmantojot Goryaev-Toma skaitīšanas kameru un rauga suspensijas atšķaidījumus, kas tika izmantoti to blīvuma noteikšanai ar nefelometrisko metodi. Šūnas tiek skaitītas lielos režģa kvadrātos, izmantojot 8* objektīvu. Kopējais skaits saskaitītajām šūnām jābūt vismaz 600. Šūnu skaitu 1 ml atbilstošās suspensijas aprēķina pēc formulas M = 1000*a*n/h*S, kur M ir šūnu skaits 1 ml suspensijas; a ir vidējais šūnu skaits lielā režģa kvadrātā; h ir kameras dziļums (1/10 mm); S ir lielā režģa kvadrāta laukums (1/25 mm 2 ); n ir suspensijas atšķaidīšanas pakāpe; 1000 mm 3 - 1 ml. Iegūtie rezultāti, miljoni šūnu 1 ml, ir ierakstīti tabulā. Nr.6.

Tabulas numurs 6. Rauga šūnu skaits suspensijā, kas noteikts, izmantojot Gorjajeva kameru, un attiecīgie FEC rādījumi

FEK indikācijas

Izveidojiet kalibrēšanas līkni, pamatojoties uz tabulā sniegtajiem datiem. Nr. 6, attēlojot rauga šūnu skaitu uz abscisu ass un atbilstošās suspensijas optisko blīvumu uz ordinātu ass. Kalibrēšanas līkne ir izveidota, lai ātri noteiktu noteikta veida mikroorganismu šūnu skaitu saskaņā ar FEC rādījumiem.

Kontroles jautājumi un uzdevumi

Uzkrājošās kultūras un izvēles princips. Tīrkultūras, sagatavošanas metodes un nozīme.

Mikroorganismu pavairošana.

Baktēriju šūnu cikli. Atsevišķu mikroorganismu un populāciju augšana. Līdzsvarota un nelīdzsvarota izaugsme.

Kultūraugu augšanas parametri: paaudzes laiks, īpatnējais augšanas ātrums, biomasas raža, ekonomiskais faktors.

Augšanas līknes, atsevišķu fāžu īpatnības. Mikroorganismu augšana nepārtrauktas audzēšanas laikā. Sinhronās kultūras.

AKTIVITĀTE #6

PĀRTIKAS PRODUKTU SANITĀRI BAKTERIOLOĢISKĀ PĒTĪJUMS

Mērķis: Veikt sanitāri bakterioloģisko pārtikas stāvokļa novērtējumu.

Uzdevumi

1. Nosakiet kopējo mikrobu skaitu noteiktos pārtikas produktos.

2. Noteikt BGKP (Escherichia coli grupas baktērijas) klātbūtni.

Materiāli un aprīkojums.Petri trauciņi ar MPA, Petri trauciņi ar Endo barotni, 1 ml pipetes, javas ar piestām, skalpeļi, mēģenes ar 9 ml sterila ūdens, mēģenes ar Keslera barotni, sterilas kolbas ar 100 ml ūdens, svari.

Pamatjēdzieni.Pārtikas produktu specifiskā mikroflora, pārtikas produktu nespecifiskā mikroflora, BGKP, sanitāri indikatīvie mikroorganismi.

Progress

Uzdevums numurs 1. Nosakiet BGKP klātbūtni un kopējo pārtikas produktu piesārņojumu, secīgi veicot šādas darbības:

1. Pārtikas produktu sagatavošana pētniecībai.

Sterilā porcelāna javā samaļ 10 g parauga (paņemts sterils no dažādām vietām), pakāpeniski pievienojot 90 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma un atstāj istabas temperatūrā vairākas minūtes. Pēc tam ar sterilu pipeti ar platu degunu saputo suspensiju inokulācijai un atšķaidīšanai (1 ml). Tiek pieņemts, ka 1 ml sagatavotās suspensijas satur 0,1 g sākotnējā produkta (atšķaidījums 10-1 ). Šķidras konsistences produktus sēj un audzē kultūrām bez iepriekšējas sagatavošanas.

2. Pārtikas atšķaidījumu sagatavošana sējai.

Šķidras konsistences produktiem atšķaidījumus sagatavo šādi: 1 ml produkta ņem ar sterilu pipeti un pievieno mēģenē, kurā ir 9 ml sterila izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, samaisa. Iegūtais atšķaidījums (10-2 ) tādā pašā veidā tiek tālāk atšķaidīts vajadzīgajā reižu skaitā (reizināts ar 10).

Zīmējums Nr.1. Atšķaidījumu sagatavošana un augsnes suspensijas sēšana uz cietām barotnēm

3. Kopējā piesārņojuma noteikšana.

Inokulācijai izvēlētos atšķaidījumus pievieno 1 ml sterilos Petri trauciņos ar kausētu 45-50 0 MPA, pēc kura tos sajauc. Barotnei ļauj sastingt, kultūraugus audzē dienas laikā 37°C temperatūrā, pēc tam saskaita izaudzēto koloniju skaitu (KVV). Nosaka kopējo baktēriju skaitu 1 ml vai 1 g produkta.

4. BGKP klātbūtnes noteikšana.

Sējai tiek izmantots produkta daudzums, kurā saskaņā ar noteiktajām normām tiek nodrošināta CGB neesamība. No atlasītajiem pētāmo produktu paraugu atšķaidījumiem paņem 1 ml un inokulē mēģenēs ar Keslera barotni. Inokulētās mēģenes 24 stundas inkubē 37° C. Ja nav augšanas pazīmju (gāzu veidošanās vai barotnes krāsas izmaiņas), tiek izdarīts slēdziens par testa produkta atbilstību standartam. Ja ir augšanas pazīmes, tās sēj uz Endo barotnes. Kultūraugus inkubē 18-20 stundas 37°C temperatūrā. Apskatot kultūraugus, tiek atzīmētas aizdomīgas vai CGB raksturīgas kolonijas (veido sarkanas, rozā, gaiši rozā kolonijas ar vai bez metāla spīduma). Tos izmanto dzīvu un fiksētu šūnu sagatavošanai, iekrāso ar gramu un mikroskopē. Gramnegatīvu, sporu neveidojošu stieņu ar noapaļotiem galiem noteikšana liecina par iespējamu CGB klātbūtni.

Dati par kopējo piesārņojumu un Escherichia coli klātbūtni ir ievadīti tabulā. Izdarīt secinājumus par dažādu pārtikas produktu mikrofloru, izmantojot sanitāros un mikrobioloģiskos standartus (SanPiN 2.3.2.560-96) (tabula Nr. 7).

Tabulas numurs 7. Daži sanitārie un bakterioloģiskie standarti (SanPiN 2.3.2.560-96)

Siers krievu

0,001

Saldējums

1*10 5

0,01

Kontroljautājumi, skatiet 4. nodarbību.

AKTIVITĀTE #7

AUGSNES MIKROBOCENOZES

Mērķis: Izpētīt augsnes mikroorganismu sugu sastāvu un izplatību.

Uzdevumi

1. Izpētīt augsnes mikrofloras raksturu un dominējošās sugas.

2. Veikt augsnes mikrofloras kvantitatīvo un kvalitatīvo uzskaiti.

Materiāli un aprīkojums.Priekšmetstikliņi, sterili Petri trauciņi ar MPA,svari, atsvari, skalpelis, java, gumijas cimds, kolba ar sterilu destilētu ūdeni 90 ml, sterila kolba 250 ml, mēģenes ar 9 ml sterila ūdens, pipetes 10 ml un 1 ml, mikropipetes 0,1 ml, stikla lāpstiņas.

Progress

Uzdevums numurs 1. Pētīt augsnes un rizosfēras mikrobiocenožu raksturu ar stikla piesārņojuma metodi (pēc Holodnija).

Uz līdzenas augsnes virsmas ar nazi tiek veikts griezums, kura dziļums ir atkarīgs no pētāmā horizonta. Izmazgātas un attaukotas glāzes (vienlaicīgi tiek ņemtas vairākas glāzes) cieši piespiež pie griezuma vertikālās sienas un pārklāj ar zemi. Glāzes tiek turētas augsnē no nedēļas līdz vairākiem mēnešiem.

Pēc ekspozīcijas laika beigām no glāžu aizmugures tiek noņemta netīrība, glāžu eksperimentālā virsma tiek žāvēta gaisā un trīs reizes fiksēta, aizmuguri laižot pāri degļa liesmai. Pēc nostiprināšanas stikls tiek iegremdēts ūdenī ar eksperimentālo virsmu uz leju, nenovedot to līdz apakšai. Pēc mazgāšanas preparātu iegremdē karboliskā eritrozīna šķīdumā uz laiku no 30 minūtēm līdz 24 stundām.Nokrāsotos preparātus izmeklē mikroskopā ar iegremdēšanas sistēmu. Veicot mikroskopiju, tiek atzīmēts mikrofloras raksturs, brilles piesārņojuma blīvums un dominējošās formas.

Uzdevums numurs 2. Veikt augsnes TMC noteikšanu.

Augsnes suspensijas sagatavošana ar atšķaidīšanas metodi.Ievērojot sterilitāti, nosver 10 g augsnes un pārnes to uz sterilu javu. Samitriniet augsnes paraugu javā līdz pastai, pievienojot 2-3 ml ūdens no pirmās kolbas, kurā ir 90 ml sterila ūdens, un berzē 5 minūtes ar pirkstu gumijas cimdā. Pēc slīpēšanas augsni no javas ar ūdeni pārnes uz otro sauso kolbu, iegūst pirmo atšķaidījumu - 1/10. Kolbā esošo augsnes suspensiju krata 5 minūtes, ļauj nostāvēties 30 s, un pēc tam 1 ml augsnes suspensijas pārnes no kolbas mēģenē Nr. 1 ar 9 ml sterila destilēta ūdens ar sterilu pipeti. iegūst otro atšķaidījumu - 1/100. Līdzīgi tiek sagatavota virkne sekojošu augsnes suspensijas atšķaidījumu -1/1000, 1/10000, 1/100000 un vairāk, atkarībā no paredzamā mikroorganismu skaita (Att. Nr. 1, nodarbība Nr. 6).

Lai izolētu un kvantitatīvi noteiktu baktērijas, augsnes suspensiju iesēj vienā no barības vielu barotnēm (MPA, KAA, augsnes agara, Ashby barotnes; KAA vai Čapek barotne tiek izmantota aktinomicītu uzskaitei). Baktēriju kolonijas uz Petri trauciņiem skaita pēc 3-5 dienām, sēnītes un rauga sēnītes - pēc 5-7, aktinomicītus - pēc 7-15. Mikroorganismu saturu 1 g augsnes nosaka pēc formulas: a \u003d b * c, kur a - mikroorganismu skaits 1 g augsnes, b ir vidējais koloniju skaits, V - audzēšana. Salīdzināt augsnes, ūdens un gaisa mikrofloras sugu sastāvu un daudzveidību un izdarīt secinājumu.

Kontroljautājumi un uzdevumi, skatiet 4. nodarbību.

AKTIVITĀTE #8

SLĀPEKĻA SAVIENOJUMU PĀRVĒRŠANA MIKROORGANISMIEM

Mērķis: Pētīt mikroorganismu transformācijas procesu īpatnības organiskie savienojumi slāpeklis.

Uzdevumi

Pētīt proteīnu amonifikācijas procesos iesaistītos mikroorganismus.

Pētīt urīnvielas amonifikācijas procesos iesaistītos mikroorganismus.

Materiāli un aprīkojums:Olbaltumvielu un urīnvielas amonifikācijas procesa reproducēšanas vide, mikroskopi, iekārtas mikropreparātu pagatavošanai.

Pamatjēdzieni.Amonifikācija, proteāzes, peptidāzes, ureāze, deaminēšana, dekarboksilēšana.

Progress

Uzdevums numurs 1. Lai izpētītu mikroorganismus, kas veic olbaltumvielu amonifikāciju, uzzīmējiet attēlu. Lai pētītu olbaltumvielu vielu amonifikāciju, gaļas buljons, pievienojot 3% peptona, var kalpot kā uzturvielu barotne.30 ml barotnes ielej 100 ml kolbā un pievieno 1/3 tējkarotes augsnes. Kolbas ir aizvērtas ar vates aizbāžņiem. Virs barotnes - sarkanā lakmusa jeb universālā indikatorpapīra, kas samitrināts ar destilētu ūdeni, tiek piekārti divi papīra gabali, lai noteiktu izdalīto amonjaku, un filtrpapīrs, kas samitrināts ar svina acetāta sārmainu šķīdumu, lai noteiktu sērūdeņradi un merkaptānu. Nostipriniet tos starp korķi un kolbas kakliņa sienām. Papīri nedrīkst pieskarties datu nesējam. 3.–5. inkubācijas dienā 28–30 °C temperatūrā analizē kolbas saturu. Tiek noteikti olbaltumvielu amonifikācijas procesa izraisītāji un to vielmaiņas produkti.

Mikroskopija.Lai atklātu proteīna vielu pūšanas izraisītājus, tiek sagatavots dzīvu baktēriju preparāts sasmalcinātā pilē, kā arī fiksēts un iekrāsots preparāts. Biežāk nekā citi uz preparāta ir atrodamas mobilās šūnas. Proteus vulgaris (Iesnieguma zīm. Nr. 4)dominē proteīna sadalīšanās pirmajos posmos. Tās ir sporas neveidojošas, nevienāda garuma nūjas. Turklāt preparātā ir daudz sporu veidojošo šūnu. Bacillus mycoides un Clostridium sp. (Att. Nr. 1, 4 pielikumi). Pēdējā sporas atrodas termināli un to diametrs pārsniedz šūnas platumu. Tu. mikoīdi izraisa olbaltumvielu amonifikāciju aerobos apstākļos, un C. putrificus - anaerobā, bet var attīstīties arī aerobos apstākļos, ja vidē ir aerobos mikroorganismus, kas absorbē skābekli.

NH izdalās atmosfērā 3, nokrāso piekārtu sarkanā lakmusa papīra sloksni zilā krāsā. Svina papīrs nomelnējas sērūdeņraža ietekmē, ja tas ir pārklāts ar sudrabainu pārklājumu, kas nozīmē, ka kopā ar H 2 Izdalās arī S merkaptāni (piemēram, metilmerkaptāns CH 3SH).

Uzdevums numurs 2. Lai izpētītu mikroorganismus, kas iesaistīti urīnvielas amonifikācijas procesos, izveidojiet zīmējumu. Lai uzraudzītu urīnvielas amonifikācijas procesu, var izmantot barotni ar šādu sastāvu (g/l destilēta ūdens): kālija vai nātrija tartrāts (vīnskābe, var sālīt ābolskābi) - 5,0; urīnviela - 5,0; UZ 2 NRO 4 - 0,5; MgSO 4 7H 2 O - 0,2.

Barotni ielej 100 ml kolbās, katrā pa 30 ml, apsēj ar augsni un ievieto termostatā 25–30 °C temperatūrā. Lai noteiktu amonjaku, zem vates aizbāžņa tiek pakārta sarkana lakmusa papīra sloksne. Pēc 3-5 dienām kultūru analizē. Nosakiet amonjaka izdalīšanos uz sarkanā lakmusa papīra zilās krāsas.

Mikroskopija.Lai izpētītu urīnvielas amonifikācijas izraisītājus, no tikko pamanāmas plēves uz barotnes virsmas sagatavo preparātu un iekrāso ar fuksīnu. Šūnas visbiežāk redzamas zem mikroskopa. Urobacillus pasteurii (jūs. probatus), retāk - Planosarcina ureae (Iesnieguma zīm. Nr. 5).

Kontroles jautājumi un uzdevumi

slāpekļa mineralizācija. Olbaltumvielu amonifikācijā iesaistītās baktērijas.

Nukleīnskābju degradācija.

Urīnvielas, urīnskābes un hipurskābes sadalīšanās.

Nitrifikācijas procesu raksturojums. Mikroorganismi, kas augsnē ražo nitrātus.

Nitrātu un nitrītu atgūšana dabā.

Denitrifikācija (disimilācijas nitrātu samazināšana).

Asimilācijas nitrātu samazināšana.

Slāpekļa fiksācija ar brīvi dzīvojošiem mikroorganismiem.

Asociatīvā slāpekļa fiksācija.

Simbiotiskā slāpekļa fiksācija. Mezglu baktēriju raksturojums.

Mezglu baktēriju mijiedarbība ar saimniekaugu. Bakteroīdu veidošanās.

Nepākšaugu augu simbiotiskā slāpekļa fiksācija.

Slāpekļa fiksācijas procesu ķīmija.

14. Aizpildiet tabulu ar numuru 8.

Tabulas numurs 8. Slāpekļa cikla procesu un slāpekļa savienojumu pārvēršanā iesaistīto mikroorganismu raksturojums

Urīnvielas amonifikācija

I nitrifikācijas fāze

Simbiotiskā slāpekļa fiksācija

AKTIVITĀTE #9

SLĀPEKĻA SAVIENOJUMU PĀRVĒRŠANA AR MIKROGANISMIEM

Mērķis: Pētīt slāpekļa minerālsavienojumu mikroorganismu pārveides procesu īpatnības.

Uzdevumi

1. Izpētīt nitrifikācijas procesu norises īpatnības (I, II fāze) un tajos iesaistītos mikroorganismus.

2. Izpētīt denitrifikācijas procesu īpatnības un tajos iesaistītos mikroorganismus.

3. Izpētīt slāpekļa saistīšanās procesu īpatnības un tajos iesaistītos mikroorganismus.

Materiāli un aprīkojums.Kolbas ar šķidro Ashby barotni slāpekļa fiksatoru kultivēšanai, Winogradsky barotni nitrifikatoru kultivēšanai, Giltai barotni denitrifikatoru kultivēšanai, iekārtas mikropreparātu krāsošanai, mikroskopi.

Pamatjēdzieni.Nitrifikācija (I un II fāze), slāpekļa imobilizācija, asimilācijas nitrātu reducēšana, disimilācijas nitrātu reducēšana (denitrifikācija), slāpekļa fiksācija ar brīvi dzīvojošiem mikroorganismiem, asociatīvā slāpekļa fiksācija, simbiotiskā slāpekļa fiksācija, leghemoglobīns, nitrogenāze, nitrāts.

Progress

Uzdevums numurs 1. Izpētīt nitrifikācijas procesos iesaistītos mikroorganismus, uzzīmēt attēlu. Nitrificējošu baktēriju uzkrāšanai tiek izmantota S. N. Vinogradska barotne (g / l destilēta ūdens):

Barotnes sterilizē un ielej kolbās ar 1,0–1,5 cm slāni un inficē ar siltumnīcas augsnes gabalu. Kolbas noslēdz ar vates aizbāžņiem un ievieto termostatā 25–28 °C temperatūrā 14.–21. dienā.

Mikroskopija.Lai pētītu nitrificējošās baktērijas, no šķidruma kolbās gatavo mikropreparātus. Mikroskopa redzes laukā ir redzamas ovālu vai kokosveida šūnu kopas Nitrosomonas (pirmā fāze) un īsās stieņa šūnas Nitrobaktērijas (otrā fāze). Ģints pārstāvji Nitrosomonas (Iesnieguma zīm. Nr. 6)ir ovālas formas, dažos gadījumos tuvojas bumbiņai, tām ir mobilitāte un tās ir aprīkotas ar vienu garu karogu. Dažādi veidi Nitrosomonas ir ļoti plaši izplatīti augsnē un atšķiras viens no otra pēc šūnu izmēra vai formas, kā arī pēc to attiecības ar vides aktīvo reakciju. Lielākā daļa pētīta Nitrosomonas eiropā. Šūnas ir kokosveida vai ovālas, 0,5–1,5 µm lielas, kustīgas, ar garu polāro kauliņu. Nitrobaktērija - mazi noapaļoti, olveida vai bumbierveida spieķi, nekustīgi, atsevišķi vai savienoti nelielās grupās, ko ieskauj gļotādas kapsula(Iesnieguma zīm. Nr. 7). Starp šīs ģints baktērijām ir ierasts atšķirt divus veidus: Nitrobacter winogradskii un Nitrobacter agilis.

Tiek veikta arī amonija formas oksidēšana līdz nitrīta formai Nitrosocystis un Nitrosospira , nitrīts uz nitrātu Nitrospina.

Uzdevums numurs 2. Lai izpētītu mikroorganismus, kas veic denitrifikācijas procesus, uzzīmējiet attēlu. Denitrificējošu baktēriju uzkrāšanai izmanto šādu barotni (g/l): Rochelle sāls - 20; KNO 3 - 2,0; K 2 NRO 4 - 0,5; MgSO 4 7H 2 O - 0,2; FeSO 4 7H 2 Ak, pēdas. Barotni augstā slānī ielej lielās mēģenēs līdz malām un sterilizē. Rūpīgi samaisiet ar augsni, lai noņemtu gaisa burbuļus un pārklājiet ar gumijas cauruli, kurā ievietota no 2 pusēm atvērta stikla caurule, kas izvērsta vidusdaļā. Korķis izspiež daļu šķidruma stikla caurulē. Zem korķa nedrīkst būt gaisa burbuļi. Vazelīna eļļu ielej mēģenē virs barotnes nelielā slānī, lai radītu anaerobos apstākļus, ievieto termostatā 30-35 ° C temperatūrā 5-6 dienas.

Mikroskopija.No substrāta vidus ar tīru pipeti paņem pilienu un sagatavo fiksētu un iekrāsotu preparātu, ko pēc tam izmeklē mikroskopā ar iegremdēšanas sistēmu. Preparātā dominē sporas neveidojošas sfēriskas šūnas vai īsi stieņi Paracoccus denitrificans (Bacterium denitrificans ) (pielikuma 7. att.). Uz barotnes ar Rochelle sāli bieži attīstās P. stutzeri (Achromobacter stutzeri - stieņveida šūnas ar izmēru 2,0 - 4,0 mikroni, mobilas) (pielikuma zīm. Nr. 7). Šajā gadījumā kultūra veido zaļgani dzeltenu fluorescējošu pigmentu. Arī denitrifikatori ietver: Pseudomonas aeruginosa - mazi stieņi (1,0 - 1,5 mikroni lieli), atsevišķi vai pārī, pārvietojami, pārnēsā 1 - 2 polāras flagellas. Bieži tiek novērota barotnes apzaļumošana, īpaši izmantojot citronskābes oglekli, kas liecina par attīstību Pseudomonas fluorescens - mazi stieņi (1,0 - 2,0 mikroni lieli), mobili, ir 3 - 4 polāri flagellas.

Uzdevums numurs 3. Izpētīt atmosfēras slāpekļa fiksācijā iesaistītos mikroorganismus, uzzīmēt attēlu. Ashby barotni izmanto, lai uzkrātu brīvi dzīvojošu slāpekļa fiksatoru. Barības barotnes sastāvs (g/l destilēta ūdens):mannīts, glikoze vai saharoze - 20,0; UZ 2 NRO 4 - 0,2; MgSO 4 - 0,2; NaCl - 0,2; K 2 SO 4 - 0,1; CaCO3 - 5,0.

Barības barotni bez sterilizācijas ielej kolbās ar tilpumu 100 - 150 ml, ar slāni 1 - 1,5 cm un inficē ar siltumnīcas augsni (1/3 tējkarotes). Kolbas aizver ar vates aizbāžņiem un ievieto termostatā 28–30 °C temperatūrā.

Pēc 5-7 dienām uz barotnes virsmas veidojas brūni brūna Azotobacter plēve. Šķidrums kolbā puto un izdala sviestskābes smaku, kas liecina par baktēriju attīstību vidē. Cl. pasteurianum.

Mikroskopija.No virsmas plēves tiek sagatavots fiksēts mikropreparāts. Divi visizplatītākie Azotobacter veidi ir: Azotobacter chroococcum - jaunā kultūrā ir stieņa formas šūnas, mobilas, 3-7 mikroni lielas(Iesnieguma zīm. Nr. 8). Vecajā kultūrā šūnas ir kokosveida, sapārotas un sarkīnam līdzīgas paketes, kuras parasti ieskauj gļotādas kapsula. Šūnās ir daudz spīdīgu volutīna graudu. Kolonijas uz blīvām barotnēm ir gļotainas, izkliedētas vai izliektas, bezkrāsainas vai tumši brūnas līdz melnas; Azotobacter vinelandii - jaunā kultūrā šūnas ir nūjiņas formas, 2-3 mikronus lielas. Vecajā kultūrā šūnu forma ir sfēriska. No šķidruma piliena sagatavo zāles Clostridium pasteurianum - kustīgas stieņa formas šūnas, 3-7 mikronus lielas, atsevišķas vai sakārtotas pa pāriem un īsās ķēdēs(Iesnieguma 1.10. att.). Sporas ir ovālas, veidojas ekscentriski, sporas nesošās šūnas iegūst citrona formu. Šūnās uzkrājas daudz granulozes. Kolonijas bālganas, gludas, spīdīgas.

Kontroljautājumi, skatiet 8. nodarbību.

AKTIVITĀTE #10

Mērķis:

Uzdevumi:

Izpētīt spirta fermentācijas mehānismu un tās patogēnu morfoloģiju.

Izpētīt pienskābes fermentācijas norises mehānismu un veidus, tās patogēnu morfoloģiju.

Izpētīt spirta pārvēršanās etiķskābē īpatnības un etiķskābes baktēriju morfoloģiju.

Izpētīt sviestskābes fermentācijas mehānismu un tā patogēnu morfoloģiju.

Materiāli un aprīkojums. Sālījums, kefīrs, maizes raugs, alus, sviestskābes baktēriju barotne, preparātu krāsošanas iekārtas, mikroskopi.

Pamatjēdzieni.Alkoholiskā fermentācija, Pastera efekts, homofermentatīvā pienskābā fermentācija, heterofermentatīvā pienskābā fermentācija.

Progress

Uzdevums numurs 1. Lai izpētītu spirta fermentācijā iesaistītos mikroorganismus, uzzīmējiet attēlu. 250 ml kolbā ielej 50 ml 20% saharozes šķīduma un apmēram 1 g rauga, kas atšķaidīts 10 ml saharozes šķīduma (20%). Aizveriet un vairākas dienas uzturiet temperatūru ap 35-40°C.

Mikroskopija.Lielākā daļa praksē izmantoto kultivēto raugu pieder pie ģints Saccharomyces (Saccharomyces cerevisiae, rīsi. Nr.1, 2 pieteikumi) un Schizosaccharomyces. Šie raugi atšķiras no savvaļas ar to, ka spēj izturēt augstu cukura (līdz 70%) un alkohola (līdz 14%) koncentrāciju, attīstās pie pH 4-6 un veido mazāk fermentācijas blakusproduktu.

Uzdevums numurs 2. Lai izpētītu pienskābes fermentācijā iesaistītos mikroorganismus, uzzīmējiet attēlu.Lai iepazītos ar pienskābes fermentācijas baktērijām (homofermentatīvā fermentācija), var izmantot gatavus pienskābes produktus (rūgušpiens, acidofils, kefīrs) un sālījumu (heterofermentatīvā fermentācija). Šie izstrādājumi tiek uzlikti uz stikla priekšmetstikliņa un tiek izveidots plāns smērējums. Krāsojiet 3-5 minūtes ar metilēnzilā ūdens šķīdumu.

Mikroskopija.Pienskābes produktos visbiežāk sastopami šādi homofermentatīvās fermentācijas patogēni - Streptococcus lactis (pielikuma 9. att.), kam ir ovālu koku forma ar diametru 0,5-1,0 mikroni, kultūrā atrodas pa pāriem (diplokoki) vai īsās ķēdēs (streptokoki), retāk atsevišķās šūnās; Lactobacillus bulgaricus (Pielikuma att. Nr. 9) - liels stienis (4-5 mikronus garš), nekustīgs, grampozitīvs, atrodas atsevišķu šūnu un īsu ķēžu veidā, optimālā attīstības temperatūra ir 40-45 ° C; Lactobacillus acidophilus - morfoloģijā tas ir tuvu bulgāru valodai, bet tam ir atšķirīgs attīstības temperatūras optimāls - 37°C.

Starp heterofermentatīvās fermentācijas izraisītājiem parasti irLactobacillus brevis, Lactobacillus brassicae, Leuconostoc mesenteroidesun citi (sālījuma mikroflora). Balta vai krēmīga samtaina grumbaina plēve uz sālījuma vai kefīra virsmas norāda uz klātbūtni Geotrichum candidum ( Oidium lactis) (pielikuma 9. att.) - piena pelējums, kas vienmēr pavada pienskābes fermentāciju.

Uzdevums numurs 3.Lai izpētītu mikroorganismus, kas iesaistīti alkohola pārvēršanā etiķskābē, uzzīmējiet attēlu.Koniskajās kolbās ielej plānu kārtiņu alu (0,5-1,0 cm3). Kolbas aizver ar vates aizbāžņiem un ievieto termostatā 30°C temperatūrā. Pēc 5-7 dienām tiek aprakstīts izveidoto plēvju raksturs, mikroskopiski tiek pārbaudītas iekrāsotās uztriepes.

Mikroskopija.Etiķskābes baktērijas ir apvienotas ģintīAcetobaktērija, tipa skatsAcetobacter aceti(pielikuma 9. att.) attēlo vāji kustīgas stieņveida eliptiskas šūnas 0,6-0,8 platas, 1,0-3,0 µm garas, atsevišķas, pa pāriem vai ķēdēm. Bieži veido involucionālas formas pietūkušu, sazarotu vai filiformu veidojumu veidā. Etiķskābes baktērijas ir viegli izolētas no alus.

Uzdevums numurs 4.Izpētīt sviestskābes fermentācijā iesaistītos mikroorganismus. Nemizotos kartupeļus sagriež šķēlēs, piepilda ar tiem mēģenē par 1/3 tilpuma, pievieno šķipsniņu krīta un piepilda ar ūdeni līdz malām. Mēģenes ievieto ūdens vannā 80°C temperatūrā uz 10-15 minūtēm. Pēc tam mēģenes tiek aizbāztas un pārnestas uz termostatu ar temperatūru 25 °C0 C. Pēc 2-3 dienām šķidrumā tiek konstatētas sviesta fermentācijas baktērijas.

Mikroskopija.Uz fiksētiem preparātiem ir atrodamiCl. pasteurianum, Cl. butiricum(pielikuma 1., 10. att.) - kustīgas nūjas ar noapaļotiem galiem, viena un pārī. Vecās kultūrās spora ir atrodama vienā šūnas galā.

Kontroles jautājumi

Alkoholiskā fermentācija.

Raugs. Forma, struktūra, reprodukcija un klasifikācija.

Etilspirta oksidēšana līdz etiķskābei.

Ķīmija un pienskābes fermentācijas izraisītāji (homofermentatīvais tips).

Ķīmija un pienskābes fermentācijas izraisītāji (heterofermentatīvais tips).

Sviestvielaun acetobutilfermentācija.

Pektīna vielu sviesta fermentācija.

Šķiedru anaerobā sadalīšanās.

Šķiedru oksidēšana ar mikroorganismiem.

Aizpildiet tabulu Nr.9 "Rūgšanas procesu raksturojums."

Tabulas numurs 9.Oglekļa konversijas procesu raksturojums (slāpekli nesaturošu savienojumu fermentācijas un oksidācijas procesi)

Jautājumi pašmācībai

Uztura metodes un barības vielu uzņemšana šūnā.

Mikroorganismu vajadzības pēc uztura.

Mikroorganismu uztura veidi.

Mikroorganismu vielmaiņa. Fermentācija, elpošana, fotosintēze.

AKTIVITĀTE #11

OGLEKĻA SAVIENOJUMU PĀRVĒRŠANA MIKROORGANISMIEM

Mērķis:Izpētiet funkcijas dažāda veida fermentācija un to patogēnu morfoloģija.

Uzdevumi:

Izpētīt pektīna fermentācijas mehānismu un tā patogēnu morfoloģiju.

Izpētīt celulozes transformācijas īpatnības aerobos apstākļos un tās patogēnu morfoloģiju.

Izpētīt celulozes fermentācijas īpatnības anaerobos apstākļos un tās patogēnu morfoloģiju.

Materiāli un aprīkojums. Mikroorganismu akumulējošās kultūras, kas veic pektīnvielu fermentāciju, šķiedrvielu sadalīšanu, mikroskopi, preparātu krāsošanas iekārtas.

Pamatjēdzieni.Sviesta fermentācija, pektīns, pektināze, celuloze, celulāze.

Progress

Uzdevums numurs 1.Pētīt pektīna vielu fermentācijā iesaistītos mikroorganismus, uzzīmēt attēlu. Pektīnu iznīcinošo baktēriju izolēšanai izmanto linsēklu vai nātru barotni. No kātiem sagatavo 5-7 cm garus kūļus, ievieto mēģenēs, aplej ar krāna ūdeni un vāra 10-15 minūtes. Vārīšana noņem ekstraktvielas, kas var kalpot kā oglekļa avots pavadošajām sviestskābes baktērijām. Ūdens tiek notecināts, skrituļi tiek piepildīti ar jaunu ūdens porciju, mēģenes ir cieši noslēgtas ar vates aizbāžņiem un sterilizētas autoklāvā 1 atm 20 minūtes. Kad caurules ir atdzisušas, barotne tiek inficēta ar svaigu linu salmu gabalu. Inficētās mēģenes ievieto termostatā 35°C temperatūrā. Pēc 3-5 dienām sākas pektīna fermentācijas process, šķidrums kļūst duļķains un puto.

Mikroskopija.Pektīna fermentācijas baktēriju morfoloģijas izpētei tiek gatavoti mūža preparāti. Snopiku izņem no mēģenes, uz priekšmetstikliņa izspiež šķidruma pilienu, sagatavo fiksētus un mūža preparātus (Lugola šķīdumā). Uz preparāta ir redzamas šūnasClostridium pectinovorumUnClostridium felsineum, veģetatīvs un sporuļojošs, iekrāsots ar jodu granulozei tumši zilā krāsā (pielikuma 9. att.).

Uzdevums numurs 2.Lai izpētītu mikroorganismus, kas iesaistīti šķiedrvielu sadalīšanās procesā (anaerobos apstākļos), uzzīmējiet attēlu.Iegūt anaerobo formu akumulācijas kultūrucelulozi iznīcinošās baktērijasizmantojiet Imshenetsky vidi. INApmēram 1-2 g filtrpapīra vai vates pievieno apaļā plakandibena kolbā un līdz augšai piepilda ar barotni ar šādu sastāvu (g/l): KNH4 HPO4 – 1,0; KN2 RO4 – 0,5; UZ2 NRA4 – 0,5; CaCl2 – 0,03; peptons - 5; MgSO4 – 0,4; CaCO3 – 2,0; NaCl - 0,5; MnSO4 un FeSO4 pēdu nospiedumi;vidēja pH 7,0-7,4. Vide tiek inficēta ar nelielu daudzumu augsnes, kolbu aizver ar korķa aizbāzni ar atveri gāzu izdalīšanai un ievieto termostatā 30-35°C temperatūrā. Izvēlētos apstākļus šajā gadījumā nosaka celulozes klātbūtne, oglekļa avots, ko var patērēt tikai specifiskas celulozi sadalošās baktērijas, kurām ir celulāzes enzīms, kā arī anaerobos apstākļus. Peptons, kas ievadīts barotnē nelielā daudzumā, spēcīgi stimulē fermentācijas procesu. Pēc 7-10 dienām sākas celulozes fermentācija, kas ilgst 2-3 nedēļas. Filtrpapīrs, rūgstot, kļūst nedaudz gļotains, kļūst dzeltens un pakāpeniski sabrūk.

Mikroskopija.Mikroskopā papīrs. Anaerobos apstākļos celulozes sadalīšanās procesu veic ģints baktērijasClostridium. Cl. omelianskii(pielikuma 9. att.) ir garu stieņveida šūnu izskats līdz 8 mikroniem, vecās kultūrās garums ir aptuveni 10-15 mikroni, kas atrodas atsevišķi vai savienoti pavedienos. Sporas ir sfēriskas, veidojas šūnas galā, šūna iegūst stilbiņa formu. Tas ir izolēts no augsnes un ūdens. Optimālā augšanas temperatūra ir 30-35°C.

Uzdevums numurs 3.Lai izpētītu mikroorganismus, kas iesaistīti šķiedrvielu sadalīšanās procesā (aerobos apstākļos), uzzīmējiet attēlu.Aerobo šķiedru iznīcinošo baktēriju izolēšanai izmanto Hačinsona barotni. Vidēja sastāvs (g/l): K2 NRA4 – 1,0; NaCl - 0,1; CaCl2 – 0,1; FeCl3 – 0,01; MgSO4 – 0,3; NaNO3 - 2,5; vidēja pH 7,2-7,3. Sterilu uzturvielu barotni ielej koniskās kolbās ar 1,5–2,0 cm slāni, barotni inficē ar augsnes gabalu un uz barotnes virsmas ar konusu uz augšu nolaiž kroku filtru. Kolbas aizver ar vates aizbāžņiem un ievieto termostatā 25-30°C temperatūrā uz 10-14 dienām. Uz barības barotnes un gaisa robežas tiek radīti optimāli apstākļi šķiedrvielu iznīcināšanas baktēriju uzturam un aerobai elpošanai. Šajā zonā notiek intensīvākais filtrpapīra iznīcināšanas process. Pēc 8-10 dienām uz filtra parādās dzeltenīgi oranži plankumi ar šķiedru iznīcinošo baktēriju koloniju. Papīrs sadalās, un filtrs pamazām nosēžas apakšā.

Mikroskopija.No iznīcinātajām šķiedru masām kolbā ar mikrobioloģisko cilpu sagatavo uztriepi šķidruma pilē. Visbiežāk ordeņu pārstāvji tiek atrasti preparātā.Mušu baktērijasUnCitofāgislīdošo baktēriju grupas (pielikuma 10. att.).ĢintsCitofāgako attēlo garas stieņa formas šūnas ar smailiem galiem, nedaudz izliektas (2-10 mikroni). Kolonijas ir dzeltenas, oranžas, brūnbrūnas, gludas, gļotainas.

ĢintsСellvibrloko attēlo mazi, nedaudz izliekti kustīgi stieņi (2-4 mikroni). Kolonijas ir okera-dzeltenas gļotādas. RollCellfalciculair īsu, biezu izliektu nūju forma ar smailiem galiem (2,0 * 0,7 mikroni).

Ģintssorangijsjaunā kultūrā tas izskatās kā biezas, nedaudz izliektas stieņa formas šūnas ar noapaļotiem galiem (2-5 mikroni). Kultūrai novecojot, veidojas augļķermeņi, kas sastāv no mikrocistām. Stieņa formas šūnas ir saīsinātas, pārklātas ar biezu membrānu, iegūstot neregulāras kontūras. Kolonijas spilgti oranžas, purpursarkanas.

ĢintsPolyangiumko attēlo gandrīz taisnas stieņa formas šūnas ar noapaļotiem galiem (3,5-8 mikroni). Novecojot, veidojas ovālas mikrocistas, kas ir savienoti un bumbierveida augļķermeņi. Augļķermeņi ir dzelteni, oranži, atrodas tieši uz substrāta.

Papildus baktērijām šķiedrvielu aerobā iznīcināšanā ir iesaistītas arī pelējuma sēnītes.Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Cladosporium, Trichodermaun daži aktinomicīti.

Kontroljautājumi, skatiet 10. nodarbību.

AKTIVITĀTE #12

MIKROORGANISMU EKOLOĢIJA

Mērķis:Pētīt vides faktoru ietekmi uz mikroorganismu augšanu un attīstību.

Pamatjēdzieni.Obligātie psihrofili, psihotrofiskie mikroorganismi (fakultatīvie psihrofili), termofīli, osmotoleranti mikroorganismi, galofīli, liofilizācija, obligātie aerobi un anaerobi, mikroaerofīli, aerotolerantie anaerobi, antiseptiķi.

Kontroles jautājumi

Temperatūras ietekme uz mikroorganismu augšanu un attīstību. Baktēriju ekoloģiskās grupas saistībā ar temperatūru.

Mitruma ietekme uz mikroorganismu augšanu un attīstību.

Gaismas un dažādu starojumu ietekme uz mikroorganismu augšanu un attīstību. Magnētiskā lauka ietekme.

Skābekļa koncentrācijas ietekme uz mikroorganismu augšanu un attīstību.

Vides reakcijas ietekmepar mikroorganismu augšanu un attīstību. Baktērijām toksiski savienojumi un joni.

Mikroorganismu adaptīvās reakcijas.

AKTIVITĀTE #13

BAKTĒRIJU JŪTĪBAS NOTEIKŠANA PRET ANTIBIOTIKAS

Mērķis:Noteikt mikroorganismu jutību pret antibiotikām.

Uzdevumi:

1. Noteikt mikroorganismu jutību pret antibiotikām, difūzējot agarā, izmantojot papīra diskus.

Materiāli un aprīkojums.Petri trauciņi ar MPA, sterili ar antibiotiku šķīdumiem samitrināti diski, saprofītu baktēriju un pelējuma sēnīšu tīrkultūras, pipetes, spirta lampas, lāpstiņas.

Pamatjēdzieni.Antibiotikas, bakteriostatiskā un baktericīda iedarbība, R faktori, rezistence.

Progress

Uzdevums numurs 1.Noteikt mikroorganismu jutību pret antibiotikām, difūziju agarā, izmantojot papīra diskus.

Diska difūzijas metode mikroorganismu jutības noteikšanai pret antibiotikām ir balstīta uz augšanas kavēšanas zonas diametra reģistrēšanu ap papīra disku ar antibiotiku. Uz barojošā agara virsmas Petri trauciņos, kas inokulēti ar testa mikrobiem, tiek uzklāti ar antibiotikām piesūcināti papīra diski unkrūzes inkubē 37°C temperatūrā. Mikrobu augšanas kavēšanas zonas klātbūtne apkārtdiski norāda uz patogēna jutību pret zālēm, augšanas inhibīcijas zonas neesamība norāda uz rezistenci.

Definīcijas progress.Mikroorganismu kultūru uzklāj uz steriliem Petri trauciņiem ar MPA. Kā inokulācijas materiāls tiek izmantota ikdienas buljona kultūra - uz MPA virsmas uzklāj 0,2 ml baktēriju suspensijas un vienmērīgi sadala, kratot krūzi, pēc tam ar pipeti atsūc lieko šķidrumu.

Krūzes žāvē 30-40 minūtes istabas temperatūrā. Pēc tam uz iesētās barotnes virsmas ar pinceti uzliek diskus, kas piesūcināti ar dažādām antibiotikām. Diski tiek cieši uzklāti uz virsmas, lai nodrošinātu ciešu saskari ar barotni. Diski ir novietoti vienādā attālumā viens no otra un apmēram 2 cm no krūzes malas. Krūzes ievieto termostatā otrādi vai zem krūzes vāka ieliek filtrpapīra apli, lai izvairītos no zāliena erozijas ar kondensāta ūdeni, un inkubē 37°C 18 stundas.

Rezultātu izvērtēšana.Izmantojot lineālu, nosakiet mikrobu augšanas kavēšanas zonu diametru ap diskiem, ieskaitot paša diska diametru. Atsevišķas kolonijas vai plānas mikroorganismu augšanas plēves augšanas kavēšanas zonā netiek ņemtas vērā. Mikrobu augšanas inhibīcijas zonu trūkums ap diskiem norāda uz mikrobu jutīguma neesamību pret šo antibiotiku. Ar mikrobu augšanas kavēšanas zonu ar diametru līdz 10 mm celms tiek uzskatīts par nedaudz jutīgu. Mikrobu augšanas inhibīcijas zona, kas pārsniedz 10 mm, norāda uz celma jutīgumu. Kā vairāk zonas augšanas aizkavēšanās, jo augstāka ir mikroorganismu jutība pret antibiotiku. Ierakstiet rezultātus tabulā Nr.10.

Tabulas numurs 10.Mikroorganismu jutība pret antibiotikām.

Streptomicīna antibiotiskās īpašības. Penicilīna antibiotiskās īpašības. AKTIVITĀTE #14 MEDICĪNAS MIKROBILOĢIJAS PAMATI Mērķis:Pētīt mikroorganismus – dzīvnieku un cilvēku patogēnus. Literatūra Ļebedeva M.N. Mikrobioloģija. - M .: "Medicīna", 1969. Mikrobioloģijas, virusoloģijas un imunoloģijas pamati / Red. Rediģēja Vorobjovs A.A., Krivoshein Yu.S. – M.: Masterstvo, 2001. Jautājumi diskusijai Patogēno koku raksturojums uz stafilokoku piemēra. Iekaisīgas-strutojošas ādas slimības. Septicēmija. Patogēno koku raksturojums uz streptokoku piemēra. Lokalizētas pioiekaisuma infekcijas, tonsilīts, skarlatīns. Patogēno koku raksturojums pneimokoku piemērā. Pneimonija. Patogēno koku raksturojums meningokoku piemērā. Meningīts. Patogēno koku raksturojums gonokoku piemērā. Gonoreja, blenoreja. Gramnegatīvo sporas neveidojošo baktēriju raksturojums mēra baciļu piemērā. Mēris. Gramnegatīvu sporu neveidojošo baktēriju raksturojums uz tularēmijas bacillus piemēru. Tularēmija. Gramnegatīvo sporas neveidojošo baktēriju raksturojums, izmantojot Brucella piemēru. Bruceloze. Zarnu baktēriju ģimene, piemēram, Escherichia coli. Tīfa un paratīfa baktēriju grupas raksturojums. Vēdertīfs un paratīfs. Pārtikas saindēšanās izraisītāji. Salmoneloze. Dizentērijas izraisītāju raksturojums. Dizentērijas veidi. Holēras vibrio raksturojums. Kapsulāro baktēriju struktūra uz Klebsiella piemēra. Sibīrijas mēra baciļu raksturojums. Sibīrijas mēra formas. Hemofilo baktēriju raksturojums garā klepus piemērā. Patogēnie anaerobi gāzes gangrēnas izraisītāju piemērā. Patogēni anaerobi, piemēram, stingumkrampju bacillus. Patogēni anaerobi, piemēram, botulisma izraisītāji. Difterijas nūjiņas raksturojums. Skābes izturīgo baktēriju raksturojums tuberkulozes nūjiņas un spitālības nūjiņas piemērā. Patogēno sēņu raksturojums aktinomicītu piemērā. Dermatomikoze. Patogēno spirohetu raksturojums bālas treponēmas piemērā. Sifiliss. Patogēno spirohetu raksturojums recidivējošas drudža spirohetas piemērā.Šī rokasgrāmata īsumā sniedz teorētiskā bāze sanitārā mikrobioloģija, kā arī daži eksperimenti, kas saistīti ar dažādu gaisa, ūdens un augsnes mikrofloras rādītāju noteikšanu. Dažādi Sastāv no divām sadaļām - Vispārīgi lietišķā medicīniskā mikrobioloģija un Klīniskā mikrobioloģija. Pirmajā sadaļā ir izklāstītas galvenās mikrobioloģisko pētījumu metodes, specifiskās terapijas metodes un infekcijas slimību profilakse, otrajā - to laboratorijas... 1,32 MB pievienots 06/11/2011 Apmācība. KemTIPP. - Kemerova, 114 lpp. Mikrobioloģijas priekšmets un uzdevumi. Mikroorganismu pamatīpašības Mikrobioloģijas attīstības vēsturiskā skice. Mūsdienu mikrobioloģijas attīstības perspektīvas un sasniegumi g tautsaimniecība, Pārtikas rūpniecība. Sistemātikas principi. Strukturālā organizācija mikroorganisms...