AUGSTĀKĀS IZGLĪTĪBAS IESTĀDES
V. N. KISĻENKO
DARBNĪCA
PAR VETERINĀRĀM
MIKROBILOĢIJA
UN IMUNLOĢIJA
Ministrijā apstiprināts Lauksaimniecība RF iekšā
kvalitāti mācību rokasgrāmata augstskolu studentiem
izglītības iestādēm specialitātes studenti
"Veterinārā"
MASKAVA "Koloss" 2005
UDC 619: 579 (075.8) BBK 48ya73 K44
Redaktors T.S. Mojaočajeva
Recenzenti: veterināro zinātņu doktors, profesors V. I. Plešakova(Veetes institūts
Omskas Valsts Agrārās universitātes rināra medicīna); veterināro zinātņu doktors, profesors IT. I. Ba
Rišņikovs(Altaja Valsts Agrārās universitātes Veterinārmedicīnas institūts)
Kislenko V.N.
K44 Seminārs par veterināro mikrobioloģiju un imunoloģiju. - M.: KolosS, 2005.- 232 lpp. l .: slim. - (Mācību grāmatas un mācību grāmatas augstskolu studentiem). ISBN 5-9532-0332-2
Darbnīca sastāv no divām sadaļām. Sadaļā "Vispārējā mikrobioloģija" ir informācija par darba noteikumiem bakterioloģiskajā laboratorijā, galveno mikrobioloģisko, ģenētisko un imunoloģisko metožu apraksts mikroorganismu pētīšanai. Sadaļā "Infekcijas slimību patogēni" ir uzskaitītas laboratoriskās diagnostikas metodes, patogēnu diferenciācija un izmantoto bioloģisko preparātu saraksts.
Dotas vadlīnijas praktisko nodarbību vadīšanai skolotājiem.
Pielikumā ir elektronisko datu nesēju (CD-disku) kontroldarbu komplekti vispārējai un konkrētai mikrobioloģijai, imunoloģijai, kā arī teorētiskajam kursam.
Augstskolu studentiem specialitātē "Veterinārs".
IEVADS
Veterinārās laboratorijas ir valsts veterinārā dienesta institūcijas, kuru darbība vērsta uz labturības nodrošināšanu lopkopībā, dzīvnieku slimību un nāves novēršanu un izskaušanu, kā arī iedzīvotāju aizsardzību no dzīvniekiem un cilvēkiem izplatītām slimībām. Pēc pieraksta veterinārās laboratorijas ir rajona, starprajonu (zonālās), reģionālās (teritoriālās) un republikas.Veterināro laboratoriju galvenais uzdevums ir noteikt precīzu lauksaimniecības dzīvnieku, tai skaitā putnu, kažokzvēru, zivju un bišu slimību diagnostiku, kā arī veikt gaļas, piena un citu dzīvnieku un augu izcelsmes pārtikas produktu izmeklējumus. . Laboratorijas arī veic zinātniskais darbs, veikt dažu biostimulantu, antibiotiku u.c. ražošanu.
Laboratorisko pētījumu materiāls ir asinis, urīns, krēpas, piens, fekālijas, dzīvnieka dzīves laikā iegūtais abscesu (strutu) saturs; parenhīmas orgānu vai citu audu gabali pēc to nāves, vides objektu paraugi (ūdens, gaiss, augsne, barība, augi, kopšanas priekšmetu mazgāšanas līdzekļi). Materiāls laboratorijā tiek izmeklēts ar bakterioloģiskām, seroloģiskām, histoloģiskām, bioķīmiskām, mikoloģiskām un toksikoloģiskām metodēm, kurām nepieciešamos nosacījumus(īpaši ierādītas telpas, aprīkojums, mikroklimats utt.).
Laboratorija atrodas atsevišķā ēkā, kas atrodas tālāk no ceļiem. Tam vajadzēja būt uzņemšanas nodaļa, patoanatomiskās, bakterioloģiskās, seroloģiskās, bioķīmiskās un virusoloģiskās nodaļas, kā arī speciālas telpas termostatiem, trauku mazgāšanai, autoklāviem. Trauku mazgāšanas telpā ir galdi, izlietnes, karstā un aukstā ūdens padeve, gāzes vai elektriskā plīts, plaukti mazgātiem traukiem, tvaika nosūcējs, emaljas vannas, izlietnes un citi trauki, skābes šķīdums stikla traukos pipešu dezinfekcijai, priekšmetstikliņi un citi trauki. Atsevišķa telpa ir atvēlēta bakterioloģiskajai virtuvei (vide-akmens), kurā tiek sagatavotas barotnes mikroorganismu audzēšanai un trauki sterilizācijai. Šeit skapjos viņi glabā sterilus traukus un labi iesaiņotus ķīmiskās vielas, Sastāvdaļas kultūras mediji.
Lai veiktu darbu aseptiskos apstākļos, ir aprīkotas īpašas izolētas telpas - kastes(angļu valodā box - box), kas sastāv no pašas kastes un priekškastes. Viņi izmanto arī galddatoru kastes, priekšmetus un gaisu, kuros dezinficē ar UV lampām, un laminārās plūsmas skapjus, kur tiek izmantota arī aktīvā gaisa noņemšana.
Laboratorijas dzīvniekus (baltās peles, jūrascūciņas, baltās žurkas, trušus u.c.) ievieto vivāriji. Parasti vivārijā ir arī veselas donora aitas, kuru asinis tiek izmantotas komplementa saistīšanas reakcijai (CFR) un barības vielu sagatavošanai. Inficētie laboratorijas dzīvnieki tiek turēti izolētā telpā.
Papildus ēkā ir telpas speciālistiem, apkalpojošajam personālam, vadītāja kabinets, bibliotēka, svēršanas telpa, ģērbtuve, noliktava u.c.
Lai uzturētu pareizu tīrību, telpās grīda ir klāta ar linoleju vai flīzēm. Sienas un griesti, kā likums, ir gludi (bez karnīzēm un līstes), ar noapaļotiem stūriem, krāsoti gaišās krāsās ar eļļas krāsu. Griesti var tikt balināti ar kaļķi. Vēlams sienas finierēt ar plastmasu vai flīzēm no grīdas līdz griestiem.
Laboratorijā jābūt karstam un aukstam ūdenim, kanalizācijai, ar kājām darbināmām atkritumu tvertnēm, kuras katru dienu tiek iztukšotas, mazgātas un dezinficētas, dvieļi, ziepes un dezinfekcijas šķīdums. Telpās ir tikai visnepieciešamākais aprīkojums: galdi, skapis neliela aprīkojuma glabāšanai, krāsas, reaģenti, trauki, instrumenti uc Galdus parasti uzstāda logu priekšā. Tiem jābūt stabiliem, ērtiem, 80 cm augstiem, ar apmali. Galdu virsma ir pārklāta ar plastmasu vai linoleju, stiklu vai baltu speciālu krāsu. Uz galda tiek novietots mikroskops, kā arī nepieciešamie priekšmeti bakterioloģiskajam darbam.
Bakterioloģiskās izpētes metode, kā likums, ietver mikroskopiju, patogēna tīrkultūras īpašību izpēti un laboratorijas dzīvnieku inficēšanu (bioloģisko paraugu). Par bakterioloģiskās analīzes rezultātiem, ko parakstījis katedras vadītājs vai laboratorijas direktors, ziņo tikai amatpersonām: veterinārārstam, zooinženierim, uzņēmuma vadītājam.
Mikrobioloģiskās laboratorijas iekārtas.
Lai strādātu laboratorijā, nepieciešami šādi instrumenti un aparatūra: bioloģiskās imersijas mikroskopi ar papildu ierīcēm (izgaismotājs, fāzes kontrasta ierīce, tumšā lauka kondensators u.c.), luminiscējošie mikroskopi, termostati, sterilizācijas iekārtas, pH mērītāji, ierīcesdestilēta ūdens iegūšana (destilētājs), centrifūgas, tehniskie un analītiskie svari, filtrēšanas iekārtas (Seitz filtrs u.c.), ūdens vannas, ledusskapji, aparāts vates marles aizbāžņu izgatavošanai, instrumentu komplekts (bakterioloģiskās cilpas, lāpstiņas, adatas, pincetes u.c.), laboratorijas stikla trauki (mēģenes, kolbas, Petri trauciņi, matrači, flakoni, ampulas, Pastēra un graduētas pipetes) u.c.
Laboratorijā ir speciāla vieta mikroskopisko preparātu krāsošanai, kur ir speciālo krāsvielu šķīdumi, spirts, skābes, filtrpapīrs u.c.. Katra darba vieta aprīkota ar gāzes degli vai spirta lampu, burciņu ar dezinfekcijas šķīdumu. Priekš ikdienas darbs laboratorijā jābūt nepieciešamajām uzturvielu barotnēm, ķīmiskajiem reaģentiem, diagnostikas preparātiem un citiem laboratorijas materiāliem. Lielajās laboratorijās ir termostatiskas telpas mikroorganismu masveida audzēšanai, seroloģisko testu iekārtošanai.
Šādas iekārtas ir paredzētas audzēšanai, kultūru uzglabāšanai, laboratorijas stikla trauku sterilizācijai un citiem mērķiem:
Termostats. Ierīce, kas uztur nemainīgu temperatūru. Daudzu mikroorganismu vairošanās optimālā temperatūra ir 37 "C. Termostati ir gaiss un ūdens.
Mikroanaerostats. Aparāts mikroorganismu audzēšanai anaerobos apstākļos.
Ledusskapji. Izmanto mikrobioloģiskajās laboratorijās, lai uzglabātu mikroorganismu kultūras, barotnes, asinis, serumus, vakcīnas un citus bioloģiskos preparātus aptuveni 4 °C temperatūrā. Preparātu uzglabāšanai zem 0°C ir paredzēti zemas temperatūras ledusskapji, kuros temperatūra tiek uzturēta -20°C un zemāka.
Centrifūgas. Izmanto mikroorganismu, eritrocītu un citu šūnu sedimentācijai, nehomogēnu šķidrumu (emulsiju, suspensiju) atdalīšanai. Laboratorijās tiek izmantotas centrifūgas ar dažādiem darbības režīmiem.
Žāvēšanas un sterilizācijas skapis (Pasteur krāsns). Paredzēts laboratorijas stikla trauku un citu materiālu sterilizācijai ar gaisu.
Tvaika sterilizators (autoklāvs). Paredzēts sterilizācijai ar tvaiku zem spiediena. Mikrobioloģiskajās laboratorijās tiek izmantoti dažādu modeļu autoklāvi (vertikālie, horizontālie, stacionārie, pārnēsājamie).
Darba noteikumi mikrobioloģiskajā laboratorijā.
Mikrobiologs galvenokārt nodarbojas ar mikroorganismu tīrkultūrām, kas ir vienas šūnas pēcnācēji. Tā kā laboratorijā gaisā un uz priekšmetu virsmām (uz galdiem, instrumentiem, instrumentiem, kā arī uz drēbēm, rokām utt.) vienmēr atrodas dažādi mikroorganismi, jums pastāvīgi jārūpējas par tīrības saglabāšanu. pētāmās kultūras. Tāpēc, strādājot mikrobioloģiskā laboratorija stingri jāievēro noteikti noteikumi, viens no tiem ir tīrības uzturēšana, tostarp visu telpu ikdienas higiēniskā uzkopšana.Ir dažādas dezinfekcijas metodes, lai iznīcinātu mikroorganismus gaisā un uz virsmām.
Gaiss laboratorijā tiek daļēji attīrīts ar ventilāciju. Ventilācija dramatiski samazina mikroorganismu skaitu gaisā, it īpaši, ja telpā ir būtiskas temperatūras atšķirības ārā un iekšpusē. Ventilācijas ilgums ir vismaz 30 ... 60 minūtes.
Efektīvāka un biežāk izmantotā gaisa dezinfekcijas metode ir ultravioletā starojuma (UVR) iedarbība, kam piemīt augsta pretmikrobu iedarbība un kas izraisa ne tikai veģetatīvo šūnu, bet arī mikroorganismu sporu nāvi. Vājas iespiešanās spējas dēļ ultravioletais starojums neiziet cauri parastajam stiklam un to viegli absorbē putekļu daļiņas. Tāpēc sterilizācijai ekspozīcijas laiks ir no 30 minūtēm līdz vairākām stundām atkarībā no gaisa piesārņojuma pakāpes.
Baktericīdās lampas (UFL) tiek izmantotas kā UV starojuma avots. Izstarotājs tajos ir elektriskā loka, kas rodas zemspiediena dzīvsudraba tvaikos un ultravioletajā reģionā izstaro lineāru spektru, kura enerģijas vairāk nekā 80% nokrīt pie viļņa garuma 2,5 nm.
Baktericīda lampa ir stikla caurule, kas uzstādīta starp diviem elektriskiem kontaktiem un savienota ar tīklu caur droseļvārstu. Caurule ir izgatavota no īpaša stikla, kas pārraida visus starus ar viļņa garumu 2,5 nm un aizkavē starojumu, kura viļņa garums ir mazāks par 2 nm. Jāatceras, ka UV starojums neilgi pēc apstarošanas izraisa akūtu acu radzenes iekaisumu ar raksturīgu asarošanu un fotofobiju. Tāpēc, lai novērstu tiešo vai atstaroto ultravioleto staru ietekmi uz acīm, tiek izmantotas aizsargbrilles. Nevar atrasties mazās telpās ar ieslēgtu baktericīdo lampu.
Mikrobioloģiskajā laboratorijā grīda, sienas un mēbeles tiek noslaucītas ar dažādu dezinfekcijas līdzekļu šķīdumiem. Ar putekļsūcēju no priekšmetiem tiek noņemti putekļi un ievērojama daļa mikrofloras. Kā dezinfekcijas šķīdumus visbiežāk izmanto 0,5 ... 3%. ūdens šķīdums hloramīns. Īpaši rūpīgi jādezinficē galda virsma, uz kuras tiek veikts darbs ar mikroorganismiem. Tas ir jānoslauka ar dezinfekcijas šķīdumu gan pirms, gan pēc darba. Papildu vienumi nav atļauti darbvirsmā. Visiem reaģentiem un šķīdumiem jābūt marķētiem un stingri noteiktās vietās. Laboratorijā nav atļauts ēst, dzert un smēķēt. Darbs jāveic peldmēteļos.
Laboratorijas apstākļos mikroorganismus audzē uz cietām un šķidrām barotnēm, kuras ielej mēģenēs, kolbās vai Petri trauciņos. Trauki un barotnes ir iepriekš sterilizētas. Mikroorganismu šūnu ievadīšanu sterilā vidē sauc par sēšanu vai inokulāciju. Mikroorganismu sēšanai (vai atkārtotai sēšanai) ir stingri jāievēro noteikti noteikumi, lai aizsargātu pētāmo kultūru no svešu mikroorganismu piesārņojuma.
Mikroorganismu inokulāciju sterilā vidē vislabāk var veikt īpašās telpās - kastēs. Bokss ir neliela izolēta telpa, kas sadalīta divās daļās ar starpsienu. Kastes galvenajā darba telpā tiek iekļūts caur vestibilu, kuram ir bīdāmās durvis, kas izslēdz strauju gaisa kustību un līdz ar to svešas mikrofloras ieplūšanu no ārpuses. Boksa aprīkojumā ietilpst galds ar viegli tīrāmu virsmu, krēsls, gāzes vai spirta degļi, baktericīda lampa, kas uzstādīta speciālā statīvā vai uzstādīta uz kastes griestiem. Ērti kastē ir saimniecības galds, uz kura tiks novietotas darba laikā nepieciešamās lietas. Visas kastes iekārtas, tās sienas, grīda un griesti tiek periodiski mazgāti un noslaukti ar dezinfekcijas šķīdumiem. Pirms darba kaste tiek apstarota ar baktericīdo lampu 40...60 minūtes.
Pēc sēšanas mēģenes vai citus traukus, kuros audzē mikroorganismus, ievieto termostatos, kur ar termostatu palīdzību tiek uzturēta nemainīga temperatūra. Trauki, kas satur mikrobu kultūras, kas jāiznīcina, tiek autoklāvāti, lai pirms mazgāšanas šūnas iznīcinātu. Traukos ar blīvu barotni ielej dezinfekcijas šķīdumu, ko pēc dienas noņem, un traukus nomazgā. Neuzmanīga rīcība ar mikroorganismu kultūrām noved pie baktēriju aerosola veidošanās, kas apdraud darbinieku veselību.
Visi laboratoriju, kā arī mikrobioloģijas nodaļu darbinieki, maģistranti, studenti, kuri nāk uz nodarbībām un strādā zinātniskajās studentu aprindās, pirms darba uzsākšanas ar infekciozo materiālu (patogēno mikrobu kultūras, eksperimentāli inficētu dzīvnieku līķi, slimu dzīvnieku ekskrementi, asinis utt.) ) ir pienākums iepazīties un stingri ievērot šādus darba noteikumus un drošības pasākumus veterinārajās bakterioloģiskajās laboratorijās:
laboratorijas telpās ieiet tikai īpašā apģērbā: halātā, baltā cepurē vai šallē. Halātiņam jābūt cieši aizpogātam, matiem zem cepures;
Nenesiet laboratorijā nekādus priekšmetus vai pārtiku. Portfeļi un somas ir salocītas speciāli tam paredzētā vietā;
laboratorijā stingri aizliegts ēst, dzert un smēķēt;
katram darbiniekam (studentam) zem noteikta skaita tiek piešķirta darba vieta, mikroskops un citi piederumi;
darba vietā jābūt aprīkojumam tikai noteiktam uzdevumam. Parasti tas ir krāsu komplekts, kolba ar destilētu ūdeni, notekas krūze, burkas ar tīrām un lietotām glāzēm, bakterioloģiskā cilpa, statīvs, burka ar dezinfekcijas šķīdumu;
pirms darba uzsākšanas nepieciešams pārbaudīt ierīču, trauku, gāzes degļu (spirta spuldžu) u.c. pieejamību un izmantojamību. Par novērotajiem trūkumiem un darbības traucējumiem jāziņo atbildīgajai personai, bet klasē - skolotājam;
lai izvairītos no sprādziena, nav iespējams aizdedzināt vienu spirta lampu (vai gāzes degli) no citas; izmantot tikai sērkociņus;
neaiztieciet elektrotīkla vadus un kontaktdaļas ar metālu un citiem priekšmetiem;
skolēni bez skolotāja vai pavadoņu ziņas nedrīkst ieslēgt elektroierīces un iekārtas;
skolēni sāk pildīt uzdevumu tikai ar skolotāja atļauju; darba gaitai stingri jāatbilst pētāmajai metodei;
katrs: darbiniekam un skolēnam darbā jāievēro kārtīgums, jāuztur darba vieta un aprīkojums tīrs;
apmācībās izmantotais materiāls tiek uzskatīts par īpaši bīstamu;
izsaiņojot pētniecībai nosūtīto materiālu, jābūt uzmanīgiem: burku ārpusi noslauka ar dezinfekcijas šķīdumu un novieto tikai uz paplātēm vai kivetēm;
saņemtā materiāla izpētē un strādājot ar baktēriju kultūrām ievēro bakterioloģiskajā praksē vispārpieņemtās tehniskās metodes, kas izslēdz darba ņēmēja inficēšanās iespēju;
infekcijas slimību patogēnu izpētes procesā studentiem jāapgūst drošības noteikumu īpatnības, strādājot ar konkrētiem patogēniem;
eksperimentālo (laboratorijas) dzīvnieku līķu autopsija tiek veikta speciālā apģērbā uz aprīkota galda, izmantojot nepieciešamie instrumentišim nolūkam izmantojot kiveti, kas pildīta ar vasku (vai parafīnu). Pēc atvēršanas uz galda aizliegts likt instrumentus: tos liek glāzē ar dezinfekcijas šķīdumu vai sadedzina virs degļa liesmas;
strādājot ar šķidru inficētu materiālu, izmantojiet gumijas balonus, kas savienoti ar pipeti;
ja darba laikā patoloģiskais materiāls nejauši nokļūst uz galda, to nekavējoties noņem ar dezinfekcijas šķīdumā samitrinātu tamponu. Saskaroties ar inficēto materiālu uz ādas, konjunktīvas, mutes dobumā, tiek veikti ārkārtas pasākumi dezinfekcijai;
darba beigās tiek dezinficēts patoloģiskais materiāls, izmantotās mikroorganismu kultūras, instrumenti un galda virsma;
stundas beigās skolēniem jānodod skolotājam baktēriju kultūras un citi materiāli, jāsakārto darba vieta. Stingri aizliegts izņemt no laboratorijas mēģenes ar kultūrām, preparātiem (uztriepes) un citus priekšmetus;
tālākam darbam nepieciešamos patoloģiskos materiālus un baktēriju kultūras atstāj uzglabāšanai slēgtā ledusskapī vai seifā;
pirms iziešanas no laboratorijas, jums ir jānovelk halāts, rūpīgi jānomazgā rokas un jāapstrādā ar jodētu spirtu. Aizliegts iziet no laboratorijas halātos;
darba noteikumu un drošības pasākumu ievērošanu mikrobioloģijas apmācību nodarbībās kontrolē dežuranti. Ar drošības pasākumiem, strādājot Mikrobioloģijas katedrā, skolēni iepazīstas pirmajā nodarbībā, ko parakstās žurnālā.
Ievērojot augstāk minētos noteikumus, darbinieks laboratorijā nodrošina manipulāciju sterilitāti un novērš laboratorijas iekšpuses un ārpuslaboratorijas piesārņojumu.
Laboratorijas ierakstu uzturēšana. Piezīmju grāmatiņa priekš laboratorijas darbi kalpo kā dokuments, kas ļauj kontrolēt saņemto datu pareizību. Tajā jāiekļauj informācija, kas attiecas uz šī darba veikšanu. Ieraksts jāglabā kārtīgi, skaidri un noteiktā secībā, piemēram: 1) eksperimenta nosaukums, tā uzstādīšanas un pabeigšanas datums; 2) izpētes objekts; 3) eksperimenta veikšanas nosacījumi; 4) izmantotās analīzes metodes pamatprincips; 5) eksperimenta rezultāti.
Iegūtie rezultāti ir detalizēti aprakstīti, digitālais materiāls apkopots tabulās, ja nepieciešams, grafikos, diagrammās, zīmējumos. Katrs laboratorijas darbs jābeidz ar saviem novērojumiem un secinājumiem, kas ierakstīti darba burtnīcā.
Darba procesā studenti apgūst mikroskopijas tehniku un metodes, iepazīstas ar dažādu mikroorganismu grupu pārstāvju morfoloģiju, apgūst pieeju tīrkultūru izolēšanai un to identificēšanai, pēta vides apstākļu un faktoru ietekmi uz augšanu. un dažādu mikroorganismu atkritumproduktu veidošanos un iepazīties ar dažām baktēriju ģenētiskās izpētes metodēm.
VISPĀRĒJĀ MIKROBILOĢIJA
Federālā izglītības aģentūra
Valsts izglītības iestāde
"Irkutska Valsts universitāte»
MAZĀ DARBNĪCA PAR MIKROBILOĢIJU
Mācību līdzeklis
Irkutska 2009
UDC 579(076.5)
Publicēts ar Irkutskas Valsts universitātes redakcijas un izdevējdarbības padomes lēmumu
Žilkina darbnīca par mikrobioloģiju: mācību grāmata-metode. pabalsts studentiem. augstāks mācību grāmata iestādes specialitātēs "Mikrobioloģija", "Bioloģija" un "Fizioloģija".
6. Mikrobu masa nedrīkst piesārņot rokas, galdu un apkārtējos priekšmetus. Izlijušo mikrobu suspensiju neitralizē, izmantojot dezinfekcijas līdzekļus.
7. Pēc darba beigām kultūras tiek nodotas skolotājam, izsētas mēģenes un krūzes tiek ievietotas termostatā.
8. Bakterioloģiskās cilpas, adatas, pincetes un citus metāla priekšmetus pēc saskares ar mikroorganismiem sadedzina spirta lampas liesmā un ievieto speciālā statīvā.
9. Izlietotos priekšmetstikliņus un segstikliņus, pipetes, lāpstiņas u.c. ievieto 3–5% karbolskābes šķīdumā vai citos dezinfekcijas šķīdumos.
10. Mēģenēs, Petri trauciņos u.c. izlietotās kultūras dienas laikā neitralizē ar dezinfekcijas šķīdumiem, pēc tam traukus uzvāra un nomazgā.
11. Stingri jāievēro personīgā higiēna – pēc darba pabeigšanas rūpīgi nomazgājiet rokas ar ziepēm un ūdeni.
12. Strādājot ar elektroierīcēm un ķimikālijām, nepieciešams ievērot drošības pasākumus.
FEDERĀLĀ IZGLĪTĪBAS AĢENTŪRA
KARAČAJEVA-CIRKASIJAS VALSTS TEHNOLOĢISKĀ AKADĒMIJA
Dzīvnieku izcelsmes produktu ražošanas tehnoloģiju katedra
MIKROBILOĢIJA
METODISKIE NORĀDĪJUMI
laboratorijas un praktiskajām nodarbībām studentiem
lauksaimniecības institūts
Čerkeska - 2010
Sastādīts, pamatojoties uz priekšzīmīgu un darba programmas par kursu "Mikrobioloģija" saskaņā ar Valsts izglītības standarts augstākā profesionālā izglītība specialitātē 110305 "Lauksaimniecības produktu ražošanas un pārstrādes tehnoloģija" un 110201 "Agronomija" (2000).
Pārrunāts TPPZH departamenta sēdē (protokols, kas datēts ar 2009. gada 2. jūliju)
Apstiprināts Agrārā institūta metodiskajā komisijā (01.01.2001. protokols Nr. 6). Publicēts ar Karačajas-Čerkesas Valsts Tehnoloģiskās akadēmijas izglītības un metodiskās padomes lēmumu (protokols 01.01.2001.)
Sastādījis: Bioloģijas zinātņu kandidāts, asociētais profesors , Lauksaimniecības zinātņu kandidāts, asociētais profesors , palīgs
Recenzenti: – bioloģijas zinātņu kandidāts
Agronomijas katedras asociētais profesors
katedras "TPPZh" asociētais profesors
Redaktors: Ph.D. Zinātnes, asociētais profesors
Saturs
Ievads…………………………………………………………………………….. 6
1. Mikroskopija………………………………………………………………….. 7
1.1. Gaismas lauka mikroskopija…………………………………………. .7
1.1.1. Mikroskopa ierīce…………………………………………………… 7
2. Darbs ar mikroorganismiem ………………………………………………. 8
2.1.Preparātu sagatavošanas metodes……………………………………… 8
2.1.1. Kultūras ņemšanas paņēmiens preparātiem……………………………… 8
2.1.2. Mikroorganismu dzīvo šūnu izpēte ar metodi
sasmalcināts piliens…………………………………………………………
2.1.3. Fiksētie mikroorganismu preparāti………………………… 9
Apgaismojuma sistēma atrodas zem skatuves. Spogulis atstaro gaismu, kas uz tā krīt kondensatorā. Viena spoguļa puse ir plakana, otra ir ieliekta. Strādājot ar kondensatoru, ir nepieciešams izmantot plakanu spoguli. Ieliekts spogulis tiek izmantots, strādājot bez kondensatora ar zema palielinājuma objektīviem. Kondensators sastāv no 2-3 īsa fokusa lēcām, savāc no spoguļa nākošos starus un novirza tos uz objektu. Strādājot ar iegremdēšanas sistēmām, nepieciešams kondensators. Kondensatoram ir varavīksnenes (ziedlapu) diafragma, kas sastāv no pusmēness formas tērauda plāksnēm.
Krāsotie preparāti tiek uzskatīti ar gandrīz pilnībā atvērtu diafragmu, nekrāsoti - ar samazinātu diafragmas atvērumu.
Objektīvs- vairāku lēcu sistēma, kuras kvalitāte nosaka objekta attēlu. Ārējo objektīvu sauc par priekšējo objektīvu, tas nodrošina palielinājumu. Pārējās lēcas veic optisko nepilnību korekcijas funkcijas.
Lēcas ir sausas un iegremdētas (iegremdēšana). Strādājot ar sausām lēcām, starp objektīva priekšējo lēcu un pētāmo objektu ir gaiss. Strādājot ar iegremdējamo objektīvu V = 90x, starp vāka stiklu un objektīva lēcām ir ciedra eļļa, kuras laušanas koeficients ir tuvu stikla laušanas koeficientam attiecīgi 1,515 un 1,52. Objektīviem ir 8x, 40x un 90x palielinājums.
Okulārs kalpo kā tiešs cilvēka acs "lēcu" (lēcu) turpinājums.
Okulārs sastāv no divām lēcām - augšējās - acs un apakšējās - kolektīvās, kas ir iekļautas metāla rāmī. Okulāra mērķis ir palielināt attēlu, ko sniedz objektīvs. Uz tā rāmja ir iegravēts okulāra palielinājums. Okulāru darba palielinājums svārstās no 4x līdz 15x.
Okulāri ir dažādu veidu, un izvēle ir atkarīga no objektīva. Ilgstoši strādājot ar mikroskopu, tiek izmantots binokulārais stiprinājums, jo tas uzlabo objekta redzamību, samazina attēla spilgtumu un tādējādi saglabā redzi.
Darbs ar mikroorganismiem2.1. Sagatavošanas metodes
2.1.1. Sagatavošanas kultūras tehnika
Liesmā sadedzināta bakterioloģiskā adata no mēģenes paņem nelielu daudzumu mikrobu masas. Ja kultūra ir šķidra, tad labāk ir izmantot cilpu, citos gadījumos - adatu.
2.1.2. Mikroorganismu dzīvo šūnu izpēte ar sasmalcinātu pilienu metodi
Izpētiet mikroorganismu dzīvās šūnas ar sasmalcinātu pilienu metodi, iepriekš nokrāsojiet priekšmetu ar mūža krāsvielām - dzīvībai svarīga krāsošana(krāsvielas: metilēnzils, neitrāls sarkans koncentrācijā no 0,001 līdz 0,0001%).
Preparāti tiek mikroskopēti, nedaudz aptumšojot redzes lauku; kondensators ir nedaudz nolaists, gaismas plūsmu regulē ieliekts spogulis. Pirmkārt, tie izmanto mazu palielinājumu — 8x objektīvu, pēc tam, kad tie ir atklājuši piliena malu, uzstāda 40 x vai iegremdēšanas objektīvu (90 x).
Sasmalcinātā piliena metodes gadījumā uz tīra stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāts krāna ūdens piliens. Tam pievieno kultūru un sajauc ar ūdeni. Lieko ūdeni noņem ar filtrpapīru. Izmantojot iegremdējamo lēcu, uz stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāts piliens ciedra eļļas un mikroskopēts.
2.1.3. Fiksētie mikroorganismu preparāti
Fiksētie preparāti ietver tādu dzīvo šūnu apstrādi, kas ļauj ātri pārtraukt dzīvības procesu norisi objektā, vienlaikus saglabājot tā smalko struktūru. Fiksācijas rezultātā šūnas cieši piestiprinās pie stikla un labāk krāsojas. Fiksācija ir nepieciešama, strādājot ar patogēniem mikroorganismiem (drošības apsvērumu dēļ).
Uztriepes sagatavošana. Uz tīra, beztauku stikla priekšmetstikliņa uzklāj krāna ūdens pilienu. Stikla attaukošanai izmantojiet etilspirta un sērskābes ētera maisījumu attiecībā 1:1. Ar kalcinētu bakterioloģisko adatu no kultivēšanas mēģenes ņem nelielu daudzumu mikrobu masas un pievieno ūdens pilienam. Pilienu rūpīgi nosmērē ar cilpu uz stikla apmēram 4 cm2 platībā.
Ja suspensija ir bieza, to vispirms atšķaida ar ūdeni. Lai to izdarītu, ar kalcinētu cilpu ņem nedaudz suspensijas un pārnes uz ūdens pilienu uz cita stikla priekšmetstikliņa. Normāla blīvuma suspensiju uzsmērē ar plānu kārtu uz stikla, pēc tam uztriepi žāvē gaisā istabas temperatūrā vai ar zemu siltumu, preparātu turot augstu virs degļa liesmas. Spēcīga zāļu karsēšana žāvēšanas laikā nav ieteicama, lai izvairītos no olbaltumvielu koagulācijas, kas izkropļo šūnu struktūru un formu. Žāvētais preparāts ir fiksēts.
Uztriepes fiksācija. Viņa tiek iznēsāta virs degļa liesmas vai ar ķimikāliju palīdzībuvienotības. Pirmajā gadījumā zāles lēnām izvada trīs līdz četras reizes ar apakšējo pusi virs degļa liesmas, otrajā gadījumā tiek izmantoti hroma savienojumi: formalīns, osmīnskābe, acetons. Viena no izplatītākajām fiksācijas metodēm ir preparāta apstrāde ar 96% spirtu vai vienādu tilpumu etilspirta un ētera maisījumu (Ņikiforova šķidrums). Lai to izdarītu, preparātus 10-30 minūtes iegremdē fiksējošā šķidrumā.
Zāļu krāsošana. Uz uztriepes tiek uzklāti daži krāsvielas pilieni. Atkarībā no krāsvielas veida un pētījuma mērķa, krāsošanas ilgums svārstās no 1 līdz 5 minūtēm, dažos gadījumos līdz 30 minūtēm. Krāsošanas beigās preparātu mazgā ar ūdeni, ūdeni noņem ar filtrpapīru, žāvē gaisā un mikroskopē.
Ir vienkāršas un diferencētas krāsošanas metodes.
Plkst vienkārši krāsojot, izmantojot jebkuru krāsvielu (metilēnzilo, fuksīnu, genciānas violetu), visa šūna tiek iekrāsota.
Plkst diferencēts krāsošanu, atsevišķas šūnu struktūras tiek iekrāsotas ar dažādām krāsvielām (Grama traips, sporu traips).
Mikroorganismu morfoloģijas izpēte3.1. šūnas forma
3.1.1. baktērijas
Pēc formas visas baktērijas tiek iedalītas sfēriskās (kokos), stieņveida un vītņotās.
Sfēriskās baktērijas - koki.
1. Mikrokoki - vienas sfēriskas šūnas ( Mikrokoks agilis).
2. Diplokoki - sfēriski koki, kas savienoti pa pāriem. ( Azotobaktērijas hrookoks).
3. Tetracocci- sfēriski koki, savienoti ar četriem.
4.streptokoki- ķēdēs savienotas sfēriskas baktērijas (galvenokārt patogēnās, kā arī pienskābes baktērijas Laktokoks lactis).
5. Sarcins- sfēriskas baktērijas, kas sagrupētas 8 šūnās, rodas šūnu dalīšanās rezultātā trīs savstarpēji perpendikulārās plaknēs. Daži sarkīnu veidi veido lielus kubveida iepakojumus, kuros katrā pusē ir 4 sarkīnas. tipisks pārstāvis Sarcina flava(sarcina yellow) - visizplatītākais gaisa mikrofloras pārstāvis.
Visas sfēriskās baktērijas, izņemot Streptokoks lactis, apskatīts uz fiksētiem un fuksīna krāsas preparātiem.
stieņa formas baktērijas. Tie ietver formas, kas neveido sporas (ģintis Pseidomonas, Ahromobaktērija, Lactobacillus utt.) un sporas veidojošas (ģintis bacilis, Clostridium un utt.).
Sporas neveidojošs bacilis Pseidomonas stutzeri – tā citoplazma iekrāsojas vienmērīgi.
sporas veidojošie stieņi Bacillus mycoides Un Bacillus mesentericus. Zem mikroskopa tie izskatās nevienmērīgi krāsoti. Sporas nekrāsojas kā blīvākas struktūras. Šūnas bacilis mikoīdi sakārtoti ķēdēs, tie ir streptobacilli.
Stieņveida baktērijas tiek aplūkotas uz fiksētiem un krāsotiem preparātiem.
Saliektas formas
1. Vibrios – nedaudz izliektas šūnas.
2. Spirillai var būt viena kroka krievu burta C formā, divas cirtas latīņu burta S formā vai vairākas spirāles formā.
3. Spirochetes - garas un plānas šūnas ar lielu skaitu cirtas; šūnu garums pārsniedz to biezumu 5-200 reizes.
Vibrio un spirilla ir ērti apskatīt uz fiksēta un krāsota preparāta, kas sagatavots no vircas, kas iepriekš vairākas dienas inkubēts termostatā. No daudziem mikroorganismiem, kas atrodas uz šāda preparāta, bieži tiek atrastas savītas formas.
Ar spirohetām var iepazīties uz fiksēta krāsota zobu aplikuma preparāta, īpaši veiksmīgi ir preparāti skrāpēšanai no kariesa zoba. Zobu spirohetas ir ļoti plānas, matiem līdzīgas, īsas (tikai 2-3 spirāles).
3.1.2. aktinomicīti
Actinomycetes ir starojošas sēnes. Aktinomicītu micēlijs uz uzturvielu barotnēm ir diferencēts: viena tā daļa ir iegremdēta substrātā (substrāta micēlijs), otra atrodas virs substrāta (gaisa micēlijs).
Daudzi aktinomicītu pārstāvji ražo pigmentus, tāpēc to gaisa micēlijs un jo īpaši kolonijas ir zilā, zilā, purpursarkanā, rozā, brūnā, brūnā vai melnā krāsā. Aktinomicīti iekrāso uzturvielu barotni atbilstošās krāsās.
Aktinomicītu kolonijas gabals tiek novietots uz stikla priekšmetstikliņa kopā ar barotni. Ar otro stikla priekšmetstikliņu šo gabalu cieši piespiež pie stikla, sasmalcina un uzsmērē uz stikla. Zāles tiek žāvētas, fiksētas, iekrāsotas, aplūkotas mikroskopā, kur daļēji ir redzami micēlija vienšūnu pavedieni.
3.1.3. Raugs
Raugi ir dažādu formu vienšūnas mikroskopiskas sēnes: elipsoidālas, bumbierveida, apaļas, cilindriskas. Viņi vairojas veģetatīvi un seksuāli.
Maizes raugu izmanto laboratorijas pētījumiem. Nelielu rauga masas gabalu dažas stundas pirms nodarbības ievieto siltā cukurotā ūdenī un noliek siltā vietā. Veidojas bālgans duļķains šķidrums. Šā šķidruma pilienu uzklāj uz priekšmetstikliņa, pārklāj ar segstikliņu, pa virsu uzpilina pilienu ciedra eļļas un preparātu apskata ar iegremdēšanas sistēmu. Ir redzamas topošās un dalošās šūnas.
3.2. Ķīmiskās metodes pētījumiem
3.2.1. Mikroorganismu šūnu iekrāsošana ar gramiem
Šī mikrobu šūnu diferenciācijas metode balstās uz šūnu membrānu ķīmiskā sastāva atšķirībām. Dažu veidu mikroorganismu šūnās veidojas spirtā nešķīstošs joda savienojums ar galveno krāsvielu, savukārt citās sugās šis savienojums parādās īslaicīgi un izšķīst pēc apstrādes ar spirtu. Pirmās grupas mikroorganismus sauc grampozitīvs otrais - gramnegatīvs.
Grama traipu tehnika. Trīs plānas dažādu mikroorganismu kultūru uztriepes tiek uzklātas uz attaukota stikla priekšmetstikliņa (divi no tiem ir kontroles, ar zināmu saistību ar Grama traipu). Uztriepes žāvē gaisā, fiksē virs degļa liesmas un 1 min krāso ar genciānas violetas (vai kristālvioletas) fenola šķīdumu, turot priekšmetstikliņu nedaudz sasvērtā stāvoklī. Pēc tam krāsvielu notecina un, preparātu nemazgājot ar ūdeni, uz 1 min uzklāj Lugola šķīdumu (līdz uztriepe ir pilnībā nomelnējusi). Stikls tiek turēts slīpā stāvoklī. Zāles, nemazgājot ar ūdeni, tiek apstrādātas, nepārtraukti kratot, ar 96% spirtu 15-20 s. Ir svarīgi ievērot krāsas maiņas laiku, jo arī grampozitīvās šūnas maina krāsu, ja norādītais laiks tiek pārsniegts.
Pēc mazgāšanas ar ūdeni preparātu 1 min krāso ar Pfeifer fuchsin. Grampozitīvie mikroorganismi iegūst tumši purpursarkanu krāsu, un gramnegatīvie krāsojas ar papildu krāsu (purpursarkanu).
Gram krāsojuma rezultāti ir atkarīgi no kultūras vecuma: vecās kultūrās atmirušās šūnas vienmēr iekrāso gramnegatīvas. Tāpēc labāk ir izmantot jaunas vienas dienas kultūras.
Raugi ir labi mērķi mikrobu šūnu gramu krāsošanai. Bacillus mesentericus vai Bacillus subtilis(grampozitīvs) un Escherichia coli (gramnegatīvs).
Krāsvielas un reaģenti Grama krāsošanai.
1. Genciānas vijolītes fenola šķīdums: genciānas violets - 1 g, spirts 96% - 10 ml, kristāliskais fenols - 2 g, destilēts ūdens - 100 ml.
Dažos gadījumos piesakieties genciānas spirta šķīdumsviolets: genciānas violeta (vai kristālvioleta) - 1 g, spirts 96% (rektificēts) - 100 ml, glicerīns - 5 ml. Maisījumu 24 stundas ievieto termostatā, pēc tam filtrē.
2. Lugola risinājums(kālija jodīts - 2 g, kristāliskais jods - 1 g, destilēts ūdens - 300 ml). Vispirms 5 ml ūdens sagatavo koncentrētu kālija jodīta šķīdumu, tajā izšķīdina jodu, pēc tam pievieno ūdeni līdz 300 ml.
3. Alkohols 96%.
4. Fuksins Feifers(Zīla karboliskā fuksīna ūdens šķīdums): 1 ml Ziel karboliskā fuksīna un 9 ml destilēta ūdens. To pagatavo šādi: 1 g fuksīna, 5 g kristāliskā fenola, 96% spirta - 10 ml, daži pilieni glicerīna, 100 ml destilēta ūdens, fuksīnu izšķīdina etanolā, pievieno ūdenī izšķīdinātu fenolu. Šķīdumu maisa un atstāj vairākas dienas. Pirms lietošanas tas tiek filtrēts.
3.2.2. Baktēriju sporu krāsojums
Baktēriju sporas ir ļoti izturīgas pret nelabvēlīgiem vides apstākļiem, salīdzinot ar veģetatīvām šūnām. Tie ir apaļi, ovāli vai eliptiski veidojumi. Ja sporas diametrs nepārsniedz tās šūnas diametru, kurā veidojas spora, šūnu sauc bacilārs, ja pārsniedz, tad atkarībā no sporas atrašanās vietas šūnas centrā vai galā šo šūnu attiecīgi sauc klostridiāls vai plectridial . Bacilārajā šūnā spora var atrasties šūnas centrā - centrālais pozīcija beigās terminālis un tuvāk vienam no galiem - apakštermināls pozīciju.
Vērojot dzīvās sporas veidojošās baktērijas, to sporas var atšķirt pēc spēcīgākas gaismas staru laušanas. Sporas ir izturīgas pret skābēm, tāpēc tās ir grūti nokrāsot ar krāsvielām. Tas izskaidrojams ar lielo čaumalas blīvumu, zemo brīvā ūdens koncentrāciju tajā un lielo lipīdu saturu sporās. Preparātos iekrāso vienkāršus veidus vai saskaņā ar Gramu sporas paliek bezkrāsainas (negatīva krāsa).
Visas sporu krāsošanas metodes ir balstītas uz vienots princips: vispirms sporas tiek iegravētas ar dažādām vielām: hromu, sālsskābi, sērskābi, etiķskābi, amonjaku, kaustisko soda vai ūdeņraža peroksīdu, pēc tam karsējot tiek iekrāsota šūna ar sporu, un visbeidzot citoplazma tiek izmainīta un papildus iekrāsota ar kontrasta krāsviela.
Zīla-Nelsena metode, ko modificējis Mullers. Pirms baktēriju uztriepes nostiprināšanas uz liesmas preparātu sagatavo parastajā veidā. Pēc tam uz liesmas fiksētajām zālēm uzklāj 5% hromskābes šķīdumu un atdzesē. Pēc 5-10 minūtēm to nomazgā ar ūdeni. Preparātu pārklāj ar filtrpapīra sloksni un papīru bagātīgi samitrina ar Ziehl karbolfuksīnu. Zāles karsē uz liesmas, līdz parādās tvaiki (nevis līdz vārīšanās temperatūrai), tad to noņem malā un pievieno jaunu krāsvielas porciju. Šī procedūra tiek veikta 7 minūtes. Ir svarīgi, lai krāsviela iztvaikotu, bet papīrs neizžūtu. Pēc atdzesēšanas to noņem, preparātu mazgā ar ūdeni un rūpīgi noslauka ar filtrpapīru. Šīs apstrādes rezultātā šūnas ar sporām tiek vienmērīgi iekrāsotas.
Pēc tam šūnu citoplazma (bet ne sporas) tiek mainīta, apstrādājot ar 1% sālsskābes vai sērskābes šķīdumu 15-30 sekundes. Gatavojot sporu preparātu bacilis mikoīdi vai bacilis mesentericus citoplazmu ieteicams atkrāsot uz 16-18 sekundēm (izmērot skaļi skaitot no 21 līdz 37-40). Ja šis laiks tiek pārsniegts, sporas var arī mainīt krāsu. Pēc tam preparātu mazgā ar ūdeni un 2 minūtes krāso ar metilēnzilu.
Krāsa ir kontrastējoša, un spilgti sarkanas sporas skaidri izceļas uz citoplazmas zilā fona.
Peškova metode. Metilēnzilo Lefleru lej uz liesmā fiksētā preparāta, uzvāra un vāra 15-20 s, glāzi turot virs liesmas. Uztriepi mazgā ar ūdeni un iekrāso uz 30 ar 0,5% neitrālas sarkanas ūdens šķīdumu. Vēlreiz noskalojiet, nosusiniet un pēc tam pārbaudiet preparātu ar objektīva eļļas iegremdēšanu. Sporas ir iekrāsotas zilā vai zilā krāsā, citoplazma ir rozā.
Sporu izpētei var būt ērti objekti bacilis mesentericus vai bacilis mikoīdi 4 dienu vecumā.
Reaģenti baktēriju sporu krāsošanai. 1. Karbola fuksīnsCiļja(sk. 3.2.1.).
2. Metilēna zils Leffler(skat. 3. 2. .1).
3. Piesātināts metilēnzilā ūdens šķīdums. 2 g krāsvielas un 100 ml destilēta ūdens.
4. hromskābe, 5% šķīdums.
5. Sāls(vai sērskābe, 1% šķīdums.
4. Mikroorganismu audzēšana
4.1. Uzturvielu barotnes
4.1.1. Mediju sagatavošana
Gaļas-peptona buljons (MPB). Gaļas-peptona barotnes pagatavošanai izmanto gaļas buljons, ko iegūst šādi: 500 g smalki maltas svaigas gaļas ielej emaljētā pannā ar 1 litru krāna ūdens, kas uzkarsēts līdz 50 ° C, un atstāj ievilkties 12 stundas istabas temperatūrā vai 1 stundu 50-55 ° C temperatūrā. . Gaļu izspiež, ekstraktu filtrē caur marli ar vates kārtu, vāra 30 minūtes, lai sarecētu koloidālie proteīni un filtrē divas reizes (pirmo reizi caur marli ar vati, otro reizi caur papīra filtru). Filtrātu uzpilda ar ūdeni līdz 1 litram, ielej kolbās, aizver ar vates aizbāžņiem un sterilizē 120°C 20 minūtes (kolbu aizbāžņus no augšas aizver ar papīra vāciņiem).
Gaļas buljonu var izmantot jebkurā laikā, lai sagatavotu barotni. Ja tie tiek pagatavoti nekavējoties, gaļas buljona iepriekšēja sterilizācija nav nepieciešama.
Lai pagatavotu MPB, pievienojiet 5-10 g 1 litram gaļas buljona peptons(pirmais olbaltumvielu hidrolīzes produkts), lai palielinātu barotnes kaloriju saturu un 5 g galda sāls lai radītu osmotisko aktivitāti. Vidi karsē, līdz peptons izšķīst, nepārtraukti maisot.
Neitrālu vai viegli sārmainu barotnes reakciju nosaka, pievienojot 20% Na2C03 šķīdumu, līdz mitrais sarkanais lakmusa papīrs kļūst zils. Lai pārbaudītu barotnes pH, ir ērti izmantot indikatoru. bromtimolblau: 1-2 pilienus no tā sajauc porcelāna glāzē ar pilienu buljona. Bromothymolblau ir pudeles zaļš neitrālā vidē, dzeltens skābā vidē un zils sārmainā vidē.
Pēc pH noteikšanas barotni vēlreiz vāra 5-10 minūtes un olbaltumvielas, kas sarecējušas, mainoties barotnes reakcijai, filtrē caur papīra filtru, nedzidrinot buljonu vai dzidrinot ar proteīnu. Lai to izdarītu, svaigu olu baltumu saputo ar dubultu ūdens daudzumu un sajauc ar buljonu, kas atdzesēts līdz 50 ° C. Maisījumu vāra, maisot, uz lēnas uguns 10 minūtes, pēc tam filtrē. Caurspīdīgo gaļas-peptona buljonu ielej mēģenēs, aizver ar vates aizbāžņiem un sterilizē 120 °C 20 minūtes.
Gaļas peptona agars (MPA). 1 litram MPB pievieno 15-20 g agara. Barotni karsē, līdz agars izšķīst (tā kušanas temperatūra ir 100°С, sacietēšanas temperatūra ir 40°С), barotni ar 20% Na2C03 šķīdumu iestata uz viegli sārmainu reakciju un caur piltuvi ielej mēģenēs ( apmēram 10 ml agara kolonnā, lai pēc tam ielej Petri trauciņos, un 5 ml katrā, lai iegūtu slīpus agara barus).
Izlejot agaru, mēģeņu malām jāpaliek sausām, pretējā gadījumā aizbāžņi pielīps pie stikla. Caurules ar barotni sterilizē autoklāvā 120°C 20 minūtes.
4.2. Sterilizācijas metodes
Sterilizācija - tā ir pilnīga mikroorganismu šūnu iznīcināšana uzturvielu barotnēs, traukos utt.
Ir zināmas vairākas sterilizācijas metodes. Biežāk tiek izmantota karstuma sterilizācija.
4.2.1. Uzliesmošana vai grauzdēšana
Aizdedzināt var tieši pirms lietošanas platīna cilpas, adatas, lāpstiņas, mazus metāla priekšmetus (šķēres, lancetes, pincetes), kā arī stikla stieņus, priekšmetstikliņus, aizsegu u.c.
4.2.2. Sausā karstuma sterilizācija
To izmanto trauku un sausu materiālu, piemēram, cietes, krīta, apstrādei. Tajā pašā laikā sterilizējamo priekšmetu 2 stundas (no vajadzīgās temperatūras noteikšanas) tur 170 °C temperatūrā elektriskajos žāvēšanas skapjos. Temperatūras paaugstināšana virs 170 ° C nav ieteicama: kokvilnas aizbāžņi un papīrs sāk sabrukt.
Pirms sterilizācijas stikla traukus aizver ar vates aizbāžņiem un iesaiņo papīrā. Krūzītes, mēģenes, pipetes, vate, marle tiek ietīta papīrā vai ievietota īpašos gadījumos un gadījumos, kuros pēc sterilizācijas var uzglabāt sterilus traukus.
Sterilizācijas beigās skapi atver tikai pēc tam, kad temperatūra nokrītas līdz istabas temperatūrai, pretējā gadījumā stikls var pārsprāgt.
4.2.3. Tvaika sterilizācija
Šķidrais tvaiks (100 ° C) tiek izmantots, lai apstrādātu objektus, kas sabojājas no sausa karstuma, un dažas barības vielas, kas nevar izturēt augstāku temperatūru (barotne ar ogļhidrātiem, NRM, piens). Sterilizāciju veic Koch katlā 30 minūtes 3 dienas katru dienu. Šo sterilizāciju sauc daļēja.
Vienreiz karsējot 100 ° C temperatūrā 30 minūtes, veģetatīvās šūnas mirst, bet daudzu mikroorganismu sporas paliek dzīvotspējīgas. Pēc šādas karsēšanas barotni uz 24 stundām ievieto termostatā 28–30°C temperatūrā. Pirmās karsēšanas laikā saglabātajām sporām šajā laikā ir laiks uzdīgt veģetatīvās formās, kuras mirst turpmākās karsēšanas laikā. Pēc tam šo darbību atkārto vēl 2 reizes.
4.2.4. Sterilizācija ar piesātinātu tvaiku zem spiediena
Šī ir ātrākā un uzticamākā sterilizācijas metode, kas iznīcina visizturīgākās sporas. Ar tās palīdzību lielākā daļa barotņu un trauku tiek sterilizēti.
Apstrādi ar piesātinātu tvaiku veic hermētiski noslēgtā biezsienu katlā - autoklāvs. Uz autoklāva vāka vai sānos ir vārsts tvaika izvadei, manometrs un drošības vārsts. Manometrs parāda, cik tvaika spiediens katla iekšpusē ir augstāks nekā parasti. Lai novērstu sprādzienu, kad tiek pārsniegta spiediena robeža, tiek aktivizēts drošības vārsts, kas nodrošina tvaika izplūdi.
Manometra indikators fiziskajās atmosfērās atbilst noteiktai temperatūrai.
Uzticama sterilizācija tiek panākta, karsējot 120 °C temperatūrā un 1 atm spiedienā 20 minūtes.
Sterilizācija tiek veikta šādi. Autoklāvā ielej ūdeni, tajā ievieto sterilizējamos priekšmetus, uzskrūvē autoklāva vāku un sāk sildīšanu. Jaucējkrānu atstāj atvērtu, līdz viss gaiss autoklāvā tiek izspiests ar ūdens tvaiku. Kad tvaiks sāk nākt ārā no krāna nepārtrauktā plūsmā, krāns tiek aizvērts, tvaika spiediens autoklāvā tiek samazināts līdz 1 atm un tiek uzturēts šajā līmenī 20-30 minūtes. Tad sildīšana tiek pārtraukta, viņi gaida, līdz manometra adata nokrīt līdz 0, uzmanīgi (lēnām) atver krānu un izlaiž tvaiku. Tikai pēc tam noskrūvējiet autoklāva vāku. Ja krāns tiek atvērts pirms spiediena pazemināšanās, šķidrums sterilizētajos traukos uzvārīsies un izspiedīs no tiem aizbāžņus.
Autoklāvu izmanto arī frakcionētai sterilizācijai ar plūstošu tvaiku. Šajā gadījumā vāks nav noskrūvēts, lai tvaiks varētu brīvi izplūst.
4.2.5. Pasterizācija
Pasterizācija ir nepilnīga vai daļēja sterilizācija, kas nozīmē karsēšanu 65-80°C attiecīgi 30-10 minūtes, kam seko ātra atdzesēšana līdz 10-11°C. Pasterizēt pienu, alu, vīnu un citus produktus.
Materiāli un aprīkojums
BCH, agars, lakmusa sarkanais, bromtimolblau, porcelāna šķīvji ar iedobēm vai trauciņiem, stikla stieņi, 20% Na2C03 šķīdums, mēģenes statīvās (agara ieliešanai), piltuves, vate, Petri trauciņi, 1 ml Mohr pipetes, papīrs krūzītei un pipetes iesaiņojumi, 250 ml kolbas, skarbi pavedieni.
5. Mikroorganismu tīrkultūras skaita un izolācijas uzskaite
5.1. Mikroorganismu skaita skaitīšanas metodes
5.1.1. Mikroorganismu skaita (KVV) uzskaite augsnē ar barības vielu plākšņu metodi kombinācijā ar secīgu atšķaidīšanas metodi
Augsne ir vislabvēlīgākā vide mikroorganismu attīstībai. Sakarā ar tā sastāva lielo neviendabīgumu, lai ņemtu vērā tajā esošo mikroorganismu skaitu no pētāmās teritorijas, jāņem vidū augsnes pārbaude.
Vispirms tiek sagatavotas suspensijas (ar atšķaidīšanas metodi), kas satur dažādas augsnes koncentrācijas 1 ml ūdens. Lai to izdarītu, ar sterilu porcelāna lāpstiņu vai alumīnija tējkaroti no burkas vai maisiņa ņem 1 g augsnes paraugu uz sterila pulksteņa stikla. Sverot augsni, pulksteņa stikls tiek pārklāts ar citu sterilu pulksteņa stiklu.
Augsnes paraugu, ievērojot aseptiskus apstākļus, pārvieto 250 ml kolbā ar 99 ml sterila ūdens. Maisījumu krata 5 minūtes, nesamitrinot aizbāzni. Ar sterilu pipeti ņem 1 ml suspensijas, kas satur 10-2 g augsnes, un pārnes mēģenē ar 9 ml sterila krāna ūdens. Pipeti atkārtoti mazgā ar ūdeni mēģenē, lai pēc iespējas vairāk izskalotu šūnas no tās sieniņām. Ar citu sterilu pipeti no kolbas paņem vēl 1 ml suspensijas un ievieto otrā kolbā, kurā arī ir 99 ml sterila krāna ūdens. Šo pipeti mazgā tāpat kā pirmajā gadījumā. Mēģeni un otro kolbu krata 1 min. Augsnes koncentrācija mēģenē būs 10-3 g, otrajā kolbā - 10-4 g Tādā pašā veidā ar jaunām sterilām pipetēm pārnes 1 ml suspensijas no otrās kolbas otrā mēģenē ar 9 ml un trešajā kolbā ar 99 ml sterila krāna ūdens un pagatavo jaunas suspensijas, kas satur attiecīgi 1 ml 10-5 un 10-6 g augsnes.
atšifrējums
1 Izglītības un zinātnes ministrija Krievijas Federācija Federālā izglītības aģentūra Maskavas Valsts Inženierekoloģijas universitāte Kustova N.A. MIKROBILOĢIJAS LABORATORIJAS DARBNĪCA Maskava 2005
2 Laboratorijas darbnīca mikrobioloģijā paredzēta 3207. un 3302. specialitātes studentiem disciplīnā "Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas pamati", kā arī "Vides un rūpnieciskās biotehnoloģijas" katedras studentiem disciplīnā "Vides un rūpnieciskā mikrobioloģija". Seminārs sastāv no trim sadaļām. Pirmā sadaļa ir veltīta vispārējās mikrobioloģijas jautājumiem. Šīs sadaļas darbos tiek pētīta dažādu mikroorganismu grupu morfoloģiskā uzbūve, mikroskopiskās izmeklēšanas metodes, mikrobioloģiskās sēšanas tehnika, sterilizācijas metodes, mikroorganismu kvantitatīvās uzskaites metodes. Otrajā sadaļā apkopoti darbi par mikrobu izmantošanu biotehnoloģijā dažādu organisko skābju, spirtu, antibiotiku un fermentu vielu iegūšanai. Trešās sadaļas darbos tiek pētīti ekoloģiskās mikrobioloģijas jautājumi. Daži darbi parāda mikroorganismu lomu globālajos bioģeoķīmiskajos ciklos, bet pārējie ir veltīti biotehnoloģiskās aizsardzības problēmām. vidi. Katra tēma satur teorētisko ievadu un praktisko daļu, kurā aprakstītas izmantotās metodes, darba kārtība, referāta saturs par darbu, kā arī kontroljautājumi. 2
3 PRIEKŠVĀRDS Mikrobioloģijas laboratorijas darbnīca paredzēta 3207. un 3302. specialitātes 3. kursa studentiem disciplīnā "Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas pamati", kā arī "Ekoloģiskās un rūpnieciskās biotehnoloģijas" katedras 4. kursa studentiem specialitātē " Biotehnoloģiskā vides aizsardzība" disciplīnā "Ekoloģiskā un rūpnieciskā mikrobioloģija. Laboratorijas darbnīca ir balstīta uz Laboratorijas darbu vadlīnijām, red. P.I.Nikolajevs, kas tiek izmantoti nodaļā "Mikrobioloģiskās ražošanas procesi un ierīces" kopš nodaļas izveidošanas. Vecākais pētnieks, Ph.D. Ņ.V. Pomorceva. Vadlīnijas viņas vadībā sagatavoja katedras pētnieki: M.A.Boruzdina, I.E.Lomova, N.A.Kustova, T.A.Mahotkina un K.A. Mainīt mācību programma atbilstoši jaunajai vides inženiera specialitātei bija nepieciešams paplašināt mikrobioloģijas kursu un papildināt to ar uzdevumiem par vides aizsardzības biotehnoloģiskām metodēm. Laboratorijas darbnīca sastāv no trim sekcijām. Pirmā sadaļa ir veltīta vispārējai mikrobioloģijai: mikroorganismu morfoloģijai, tās izpētes metodēm, mikrobioloģiskās inokulācijas tehnikai, mikroorganismu kvantitatīvās uzskaites metodēm. Otrajā sadaļā ir aplūkoti daži piemēri mikrobu izmantošanai rūpniecībā. Trešā sadaļa aptver mikroorganismu ekoloģijas jautājumus, to lomu globālajos elementu ciklos, kā arī vides aizsardzības biotehnoloģiskās metodēs. Šīs darbnīcas sagatavošanā piedalījās katedras aspirante N.V.Zjabreva un vecākā pētniece. E.S. Goršina. Autors izsaka dziļu pateicību asoc. kafejnīca mikrobioloģija, Maskavas Valsts universitāte N.N. Kolotilovai par vērtīgajiem komentāriem un padomiem, kā arī vecākajai pētniecei. P.P.Makejevam par palīdzību teksta un ilustratīvā materiāla sagatavošanā. 3
4 4 VISPĀRĪGIE DARBA NOTEIKUMI MIKROBIOLOĢISKĀ LABORATORIJĀ Darba un uzvedības noteikumi laboratorijā Darba un uzvedības noteikumiem mikrobioloģiskajā laboratorijā ir daudz kopīga ar ķīmisko laboratoriju darba noteikumiem, taču tiem ir sava specifika. Mikrobiologs vairumā gadījumu strādā ar mikroorganismu tīrkultūrām, t.i. ar jebkuras ģints, sugas un celma mikroorganismiem. Tā kā uz visiem apkārtējiem objektiem un gaisā atrodas sveši mikrobi, tiek izmantotas īpašas darba metodes, lai izvairītos no pētāmās mikroorganismu kultūras vai paša cilvēka inficēšanās. Lai to izdarītu, tiek sterilizētas barotnes, trauki, instrumenti, laboratorija un darba vietas tiek uzturētas tīras, tiek ievēroti noteikti noteikumi, strādājot ar mikrobiem. Laboratorijā nedrīkst atrasties nevajadzīgi priekšmeti. Regulāri jāveic mitrā tīrīšana. Periodiski tiek dezinficētas dažādas laboratorijas telpu virsmas. Dezinfekcija ir dezinfekcija, t.i. infekcijas slimību patogēnu iznīcināšana vides objektos. Lai to izdarītu, izmantojiet 0,5 3% hloramīna šķīdumu vai 3 5% fenola (karbolskābes) šķīdumu. Darba galds jādezinficē ar 70% etilspirta vai izopropilspirta šķīdumu. Gaisa dezinfekcija tiek panākta ar vienkāršu ventilāciju (vismaz min). Vairāk efektīva metode gaisa dezinfekcijas telpas apstarošana ar ultravioletajiem stariem, izmantojot baktericīdas lampas. Īpaši bieži kastes sterilizēšanai izmanto ultravioleto starojumu. Bokss ir īpaša maza telpa tīrkultūru atkārtotai sēšanai, mikroorganismu kvantitatīvai uzskaitei uz Petri trauciņiem un citiem darbiem, kam nepieciešami īpaši tīri apstākļi. Pirms darba kaste tiek apstarota min. Galds tiek noslaucīts ar spirtu, periodiski tiek mazgātas sienas un grīda. Boksa vietā laboratorijas var aprīkot ar laminārajiem skapjiem (1. att.), kurus arī sterilizē ar baktericīdām lampām. Plkst
5 darbi ietver ventilatoru, kas rada sterila gaisa lamināru plūsmu, kas tiek izlaista caur baktericīdiem filtriem. Mikrobioloģiskās laboratorijas pamataprīkojumā ietilpst: mikroskopi, termostati mikroorganismu audzēšanai, sterilizācijas iekārtas (autoklāvs un žāvēšanas skapis), centrifūgas, destilētājs, ledusskapis mikroorganismu muzeja kultūru uzglabāšanai, skapji stikla trauku un reaģentu novietošanai, nepieciešamās ierīces (fotoelektriskās). kolorimetri, pH-metri utt.). Katram skolēnam tiek ierādīta darba vieta, uz kuras viņš novieto: ar vāciņu pārklāts mikroskops, bakterioloģiskā cilpa, priekšmetstikliņi un segstikliņi, sterilas pipetes, spirta deglis, filtrpapīra strēmeles, stikla marķieris, trauks ar dezinfekcijas šķidrumu. Uz galda nedrīkst būt nekas, kas nav tieši saistīts ar veicamo darbu. Mikrobioloģijas laboratorijas nodarbībās jāievēro drošības noteikumi. 5
6 6 Īsa informācija par drošību laboratorijā Mikrobioloģiskajā praksē plaši izmanto ķīmiskos stikla traukus. Strādājot ar to, jums jābūt uzmanīgiem. Rūpīgi notīriet saplīsušos traukus. Analīzē bieži izmanto spēcīgus sārmu un skābju šķīdumus. Ar tiem jāstrādā ļoti uzmanīgi, jo šīs vielas kaitīgi ietekmē roku ādu un apģērbu. Ja skābe ir nejauši izlijusi, tā jāpārklāj ar lielu daudzumu sodas un pēc tam vairākas reizes jāizskalo ar ūdeni. Izlijušais sārms ir rūpīgi jānoslauka, un priekšmeti, uz kuriem tas ir nokritis, jāapstrādā ar vāju etiķskābes šķīdumu. Ja skābes vai sārmi nonāk saskarē ar cilvēka ādu, tās nekavējoties jānomazgā ar lielu daudzumu ūdens. Mikrobioloģiskajā laboratorijā viņi nodarbojas ar dzīviem mikroorganismiem. Galvenais darbs tiek veikts sterili, t.i. strādāt ar vienu mikroorganismu kultūru, kas nedrīkst būt inficēta ar svešiem mikrobiem. Lai novērstu kultūraugu inficēšanos, tiek izmantotas īpašas sterilizācijas metodes. Turklāt ir svarīgi uzturēt tīrību laboratorijā. Traukus ar mikroorganismu kultūrām nedrīkst atstāt atvērtus. Mikroorganismu biomasa, ja tā nav nepieciešama analīzei, tiek izmesta tikai pēc sterilizācijas autoklāvā. Mikroorganismu ražas veidojas netālu no gāzes vai spirta degļa liesmas, tāpēc jāuzmanās no apdegumiem un, galvenais, rūpīgi jāsavāc gari mati. Deglim vajadzētu degt tikai tad, kad tas ir nepieciešams. Ja sējas laikā nejauši aizdegas vates aizbāžnis, spirta lampa vai papīrs, uguns tiek dzēsts ar dvieli. Lielākiem ugunsgrēkiem tiek izmantoti ugunsdzēšamie aparāti. Lietotas pipetes, priekšmetstikliņi, segstikliņi, lāpstiņas utt. ievieto traukā ar dezinfekcijas šķidrumu. Studentiem pastāvīgi jāatceras, ka viņi saskaras ar mikroorganismiem, kas ne vienmēr var būt droši, īpaši darbā pie mikrobu izolēšanas no vides objektiem. Tāpēc nodarbības beigās skolēniem jāsakārto darba vieta un jānomazgā rokas ar ziepēm un ūdeni.
7 Elektrotīkla darbības traucējumu gadījumā izslēdziet elektroierīces un to centralizēto barošanu. 1. NODAĻA. VISPĀRĒJĀ MIKROBILOĢIJAS TĒMA 1. Mikroorganismu morfoloģija un tās izpētes metodes Mikrobioloģija pēta organismus, kuriem ir mikroskopiski izmēri, t.i. mēra mikrometros vai mikrometru daļās. Viens mikrometrs ir vienāds ar 10-6 metriem un tiek saīsināts kā mikrons. Mikroorganismiem ir raksturīga intensīva vielmaiņa un tie spēj veikt dažādas ķīmiskas pārvērtības. Dažādi mikroorganismi atšķiras gan pēc savas struktūras, gan pēc to veiktajiem bioķīmiskiem procesiem. To apvienošanu vienā grupā izraisa ne tikai to mazais izmērs, bet arī audzēšanas un izpētes metožu kopība. Pētīt mikroorganismu uzbūvi, izskatu, formu, izmēru, t.i. mikroorganismu morfoloģijas pētīšanai izmanto mikroskopu. Vismazākajām daļiņām, kuras var redzēt mūsdienu gaismas mikroskopos, ir vairāk nekā 1/3 no gaismas viļņa garuma, t.i. ne mazāks par 0,2 mikroniem, kas ir saistīts ar gaismas redzamās daļas izmantošanu ar viļņa garumu no 0,4 mikroniem līdz 0,7 mikroniem. Mikroskopa ierīce Attēlā. 2 parādīts izskats izplatīta pētījumos un izglītības prakse mikroskops MBI-3. Apskatāmais objekts, preparāts, tiek novietots uz objekta galda un no apakšas tiek apgaismots ar gaismas stariem, kas izplūst no apgaismotāja, nokrīt uz spoguļa, pēc tam iziet cauri kondensatoram un koncentrējas uz sagatavošanu. Galvenās mikroskopa daļas: okulāri, caurule, tornītis ar objektīviem, skatuve ar klipšiem sagatavošanai, kondensators, makro un mikro skrūves fokusēšanai un, visbeidzot, statīvs, kurā tas viss ir uzstādīts. 7
8 Pirms mikroskopijas pārbaudiet, vai apgaismojums ir uzstādīts pareizi (saskaņā ar Köhler). Lai to izdarītu, pārvietojot apgaismotāja kārtridžu ar spuldzi, tiek panākts skaidrs vītnes attēls 8
9 lampu kvēlspuldze uz pilnībā slēgtas kondensatora diafragmas, lai šis attēls pilnībā aizpildītu kondensatora atveri. Aizverot apgaismotāja diafragmu, tiek atvērta kondensatora diafragma un, pārvietojot kondensatoru, tiek panākts ass apgaismotāja diafragmas attēls mikroskopa redzamības laukā. Uz spilgta gaisma neapžilbināja acis, vispirms samaziniet lampas kvēldiega kvēlspuldzi. Un, visbeidzot, diafragmas atvēruma attēls tiek iestatīts redzes lauka centrā, un apgaismotāja apertūra tiek atvērta tā, lai tiktu izgaismots viss redzes lauks. Mikroskops ir optiska sistēma ar diviem palielinājuma posmiem: pirmo palielinājumu veic objektīvs, otro – okulārs. Objektīvs nodrošina palielinātu objekta reverso attēlu, kas tiek skatīts caur okulāru. Rezultātā novērotāja acs redz ļoti palielinātu objekta apgriezto attēlu. Tāpēc objekta kustību pa kreisi acs uztver kā kustību pa labi. Kopējais mikroskopa palielinājums, t.i. Palielinājums, kādā objekts tiek skatīts mikroskopā, tiek definēts kā objektīva un okulāra palielinājuma reizinājums. Lēcas nodrošina palielinājumu 10, 40, 60, 90 reizes, okulāri reizes. Ja tiek izmantots binokulārais stiprinājums, tas nodrošina papildu palielinājumu. Uz att. 3 parāda ķēdes shēmu optiskā sistēma mikroskopu. Lēca O Z plaknē veido objekta A reālu apgrieztu attēlu A. Lēcas sniegtais attēls tiek vēl vairāk palielināts, izmantojot okulāru E. Tā kā Z atrodas okulāra E fokusā, novērotājs redz palielinātu virtuālo attēlu. A X plaknē, kas parasti atrodas 25 cm no acs , t.i. tuvu redzamībai ērtā attālumā. Jāpatur prātā, ka šāda ideja par attēla veidošanās mehānismu ir ļoti vienkāršota, jo tā ignorē difrakcijas un vairāku citu faktoru ietekmi. Strādājot ar mikroskopu, studenti pēta mikrobu preparātus ar vairākkārtēju palielinājumu. Lielākais palielinājums, ko nodrošina optiskais mikroskops, ir 3000x. Mazākais daļiņu izmērs, ko var aplūkot šādā mikroskopā, ir 9
10 ir vienāds ar 0,2 mikroniem, kas ir saistīts ar redzamās spektra daļas viļņa garumu. Mikroorganismu morfoloģija Mikroorganismu pasaulē ir ļoti daudz dažādu formu, kas neveido vienu sistemātisku grupu. Mikrobioloģijas galvenie objekti ir baktērijas, bet bez tām mikrobiologi pēta arī raugu, sēnītes, mikroskopiskās aļģes, dažus vienšūņus. Uz att. 4 parāda galvenās mikroorganismu grupas (izņemot vienšūņus); tiek saglabātas to izmēru attiecības. Visiem dzīviem organismiem, izņemot vīrusus, ir šūnu struktūra. Atbilstoši to šūnu organizācijai tos iedala prokariotos un eikariotos. 10
11 Galvenā atšķirība starp eikariotiem un prokariotiem ir sekundāro dobumu klātbūtne, kas atdala kodolu un citas šūnu struktūras no citoplazmas. Tieši sekundāro dobumu parādīšanās ļāva veikt lēcienu visas dzīvās pasaules evolūcijā, palielinoties eikariotu membrānu iekšējai virsmai. Tas ļāva, palielinoties difūzijas ātrumam, vienlaikus veikt lielāku skaitu bioķīmisko reakciju, kas notiek uz membrānām. Prokarioti ir baktērijas, tostarp aktinomicīti un zilaļģes. Eikarioti ir visi augi, dzīvnieki, raugi, sēnes, vienšūņi. Starp prokariotiem pašlaik izšķir arhebaktēriju grupu, kurā ietilpst metanogēni, ekstrēmi halofili (dzīvo ļoti sāļā ūdenī), ārkārtīgi termofīlas baktērijas, kas oksidē un samazina molekulāro sēru, kā arī termoplazmas, kurām nav šūnu sienas. Pamatojoties uz salīdzinājumu, tika izveidots jauns dalījums nukleotīdu sekvences mazos ribosomu RNS segmentos. vienpadsmit
12 Arhebaktērijas atšķiras ar šūnu sieniņu sastāvu, lipīdiem un dažām citām fizioloģiskām un bioķīmiskām iezīmēm (piemēram, tām ir atšķirīgs CO 2 fiksācijas mehānisms). Tādējādi šūnu organizācijas struktūrā šobrīd izšķir 3 grupas: arhebaktērijas (pēc jaunās nomenklatūras Archaea, archaea), eibaktērijas (pēc jaunās nomenklatūras Baktērijas, baktērijas), un eikarioti (pēc jaunās nomenklatūras Eukarya) . Darbs 1. Baktēriju mikroskopiskā izpēte Baktēriju morfoloģija Teorētiskais ievads Šī mikroorganismu grupa ir daudzskaitlīgākā, dabā izplatītākā un tai ir liela rūpnieciska nozīme. Mikroorganismu nosaukšanai tiek izmantota binārā nomenklatūra, tāpat kā zooloģijā un botānikā. Saskaņā ar šo nomenklatūru katrai sugai ir nosaukums, kas sastāv no diviem Latīņu vārdi. Pirmais vārds nozīmē ģints, bet otrais veids. Vispārīgais nosaukums vienmēr ir ar lielo burtu, un konkrētais nosaukums vienmēr ir ar mazajiem burtiem. Lielākā daļa baktēriju ir vienšūnas organismi, kas ir sfēriski, stieņveida vai saritināti. Starp baktērijām ir neliels skaits pavedienu formu. Baktērijas ir ļoti mazas, sfērisku baktēriju šūnu diametrs ir 1 2 mikroni. Baktērijas vairojas dalīšanās ceļā (labvēlīgos apstākļos sadalīšanās notiek minūtēs). Dažas baktērijas ir kustīgas. Spēja pārvietoties ir saistīta ar īpašu flagellum organellu klātbūtni. Vienkāršākās formas ir sfēriskas baktērijas (koki). Tās ir vai nu atsevišķu bumbiņu veidā, vai bumbiņu veidā, kas ir savienotas kopā. Atbilstoši šūnu izkārtojumam pēc dalīšanās sfēriskās baktērijas iedala monokokos (atsevišķos kokos), tetrakokos (savienojumā ar 4), sarkīniem (kopā 8), stafilokokos (kopās), streptokokos (koku ķēdēs). 12
13 Stieņveida baktērijas ir vislielākā baktēriju grupa. Tās ir cilindriskas šūnas ar noapaļotiem vai smailiem galiem, un to garuma un platuma attiecība ir ļoti atšķirīga. Tās var atrasties atsevišķi vai veidot īsas vai garas ķēdes. Stieņi var būt dažāda garuma, parasti daži mikroni, un platums ir aptuveni 1 mikrons. Dažas stieņa formas baktērijas šūnas iekšpusē veido īpašus sporu ķermeņus. Katra šūna rada vienu sporu, kas kalpo, lai izturētu nelabvēlīgus apstākļus. Spora atbilstošos apstākļos (temperatūra, mitrums, barības vielas) uzdīgst, pārvēršoties par kociņu. Baktēriju sporu rezistence pārsniedz jebkuru dzīvo organismu pretestību. Piemēram, Bacillus subtilis siena bacillus sporas var izturēt 100 ° C temperatūru 3 stundas. Šāda sporu izturība apgrūtina cīņu pret infekcijām. Satīti mikroorganismi atšķiras pēc šūnu izliekuma pakāpes un spoļu skaita. Tos iedala vibrionos, spirilās un spirohetās. Ja baktērijai ir viena nepilnīga spirāles spole, tad to sauc par vibrio. Ja baktērijai ir vairākas spirālveida cirtas, tad to sauc par spirilu, bet mikrobus, kuriem ir savīta forma ar lielu skaitu mazu cirtiņu, sauc par spirohetām. Filamentveida baktērijas ir pavedieni, kas sastāv no cilindriskām vai diskveida šūnām. Dažu sugu pavedieni ir ietverti gļotādā, ko var piesūcināt ar dzelzs hidroksīdu vai mangāna sāļiem. Smago metālu uzkrāšanās process no šķīdumiem notiek dažu dzelzs baktēriju šūnās. Lielas pavedienveida baktērijas r. Beggiatoa savās šūnās nogulda sēru. Filamentveida baktērijas parasti dzīvo jūras un saldūdeņi, ir atrodami arī trūdošās organiskās atliekās, dzīvnieku zarnās. Cianobaktērijas ietver lielu organismu grupu, kas apvieno šūnas prokariotu struktūru ar spēju veikt fotosintēzi. Cianobaktēriju šūnu pigmenti papildus hlorofilam a (zaļajam) satur fikocianīna pigmentu 13
14 zils. Šī iemesla dēļ tās agrāk sauca par zilaļģēm. Lielākā daļa no tiem ir daudzšūnu organismi, kas ir gari, visbiežāk nesazaroti pavedieni (trichomes). Šūnas pavedienos apvieno kopēja ārējā siena. Dažreiz tie veido gļotādas uzkrāšanos "paklājus". Reproducēšana tiek veikta, sadalot pavedienu atsevišķās daļās. Dažas sugas pārvietojas slīdot (r. Spirulina). Aktinomicīti (zarojošās baktērijas, starojošās sēnītes) ir liela prokariotu mikroorganismu grupa, kas veido vairākus mm garus un 0,5-1,5 mikronus diametrā plānus zarojošus pavedienus. Tās ir savdabīga mikroorganismu grupa, kas morfoloģiski līdzīga pelējuma sēnēm (5. att.). Ievērojamai daļai šīs grupas pārstāvju šūnas spēj sazaroties, kas ir pazīme sēnes. Tomēr aktinomicītu zarojošo pavedienu garums sasniedz vairākus milimetrus, savukārt sēnīšu micēlija garums ir vairāki centimetri. Sēņu hifas parasti ir vairākas reizes biezākas nekā aktinomicītu pavedieni. Pēc morfoloģijas un attīstības aktinomicīti iedala augstākās un zemākās formās. Pie augstākajiem organismiem pieder organismi ar labu 14
15 attīstījās starpsienas vai bezsienas micēlijs un īpaši sporulācijas orgāni. Sporas veidojas ķēžu veidā uz īpašām gaisa micēlija hifām, kurās ir sporas. Sporulācijas orgānu struktūra dažādām sugām ir atšķirīga: gari vai īsi, taisni vai spirālveida (6. att.). Ar micēlija klātbūtni un sporulācijas orgānu struktūru augstākie aktinomicīti atgādina micēlija sēnītes. Dažiem aktinomicītiem micēlijs ir tikai jaunā kultūrā, kas ar vecumu sadalās, veidojot nūjiņas un koku šūnas. Aktinomicītu zemākajām formām nav īsta micēlija. Spēja veidot micēliju tajos izpaužas tikai ar šūnu tendenci sazaroties. Pie apakšējiem aktinomicītiem pieder, piemēram, Mycobacterium ģints sugas, kurām piemīt spēja mainīt šūnu formu līdz ar kultivēšanas vecumu (7. att.). Šo īpašību sauc par pleomorfismu. Augstāko aktinomicītu vidū Streptomyces ģints sugas ieņem vadošo vietu dabiskā vidē sastopamības ziņā. Aktinomicetiem ir svarīga loma 15 procesos
16 augsnes veidošanās un augsnes auglības veidošana. Aktinomicīti iznīcina sarežģītus organiskos savienojumus (celulozi, humusu, hitīnu, lignīnu u.c.), kas daudziem citiem mikroorganismiem nav pieejami. Gandrīz visas Streptomyces ģints sugas veido specifiskus atkritumu produktus ar antibiotiskām īpašībām. Dažas sugas ir augu, dzīvnieku un cilvēku patogēni. Papildus galvenajām baktēriju formām ir arī stiebru un pumpuru baktērijas, kas veic izaugumus, ko sauc par prostek. (8. att.) 16
17 Prostek funkcijas ir dažādas. Dažās baktērijās tās kalpo reprodukcijai, citās – šūnas piestiprināšanai pie substrāta. 17
18 18 Praktiskā daļa Darba mērķis ir pētīt baktēriju pārstāvju morfoloģiju Darba kārtība Veicot pirmo darbu, studenti apgūst mikroskopa lietošanu, aplūko gatavus baktēriju pārstāvju preparātus, pēc tam patstāvīgi. sagatavot dzīvu baktēriju preparātus un tos mikroskopēt. Vispirms skolēni mikroskopiski pārbauda gatavus fiksētos baktēriju preparātus. Fiksētie preparāti ir tajos suspendēti mikroorganismi ūdens videžāvē uz stikla priekšmetstikliņa un iekrāso ar anilīna krāsām. Dažu dzīvo mikroorganismu preparātus skolēni gatavo paši. Lai to izdarītu, uz tīra stikla priekšmetstikliņa tiek uzklāts neliels krāna ūdens piliens, kurā ar kalcinētu un atdzesētu bakterioloģisko cilpu ievada nelielu daudzumu pētāmo mikrobu, rūpīgi samaisa un pārklāj ar pārklājumu. Lieko ūdeni noņem ar filtrpapīru. Zāles novieto uz priekšmeta galda un nostiprina ar skavām. Pirmkārt, ieskatoties okulārā un pagriežot makro skrūvi, ar 10x objektīvu zemā palielinājumā tiek panākts ass objekta attēls. Pēc tam mikroskops tiek pārnests uz lielu palielinājumu ar 40x objektīvu. Skrūvju griešanās jāveic uzmanīgi, jo pārāk strauji nolaižot, lēca var saspiest objektīvu. Veicot mikroskopu, jāpatur prātā, ka mikroskops, it īpaši lielā palielinājumā, nefiksē visu objekta dziļumu, tāpēc, pamazām nolaižot cauruli ar mikroskrūvi, objekts ir redzams vispirms no augšas un pēc tam. optiskajā sadaļā. 1. Mikroorganismu fiksēto preparātu apskate. Lactococcus lactis ir pienskābes fermentācijas izraisītājs; šūnu forma ir sfēriska cocci; šūnas ir savienotas ķēdēs. To izmanto pienskābes produktu iegūšanai.
19 Lactobacillus acidophilum nūjiņveida baktērijas; pienskābes fermentācijas izraisītājs. To izmanto pienskābes produktu iegūšanai. Acetobacter aceti ir nūjiņas formas baktērijas, kas oksidē etanolu līdz etiķskābei. Izmanto pārtikas etiķa iegūšanai. Streptomyces griseus actinomycete, šūnu forma plānu sazarotu pavedienu veidā; antibiotikas streptomicīna ražotājs. Saccacharopolyspora erythrae actinomycete, šūnu forma plānu sazarotu pavedienu veidā; antibiotikas eritromicīna ražotājs. 2. Bacillus subtillis šūnu dzīvu preparātu apskate plānu kustīgu stieņu veidā; veido strīdus; fermentu preparātu ražotājs. Spirulina platensis zilaļģes; šūnu forma viena pavediena veidā, kas sastāv no cilindriskām šūnām, kas cieši blakus viena otrai; ir slīdoša kustība. Izmanto kā uztura bagātinātāju. Referāta saturs 1. Mikroorganisma nosaukums latīņu valodā. 2. Šūnu morfoloģija (uzrāda zīmējumu, kas norāda mikroskopa palielinājumu un saglabā šūnu izmēru attiecību). 3. Pētīto baktēriju izmantošana rūpniecībā. Testa jautājumi 1. Aprakstiet mikroskopa uzbūvi. 2. Kā noteikt mikroskopa palielinājumu? 3. Kāda ir baktēriju šūnu forma. 4. Nosauc aktinomicītu morfoloģijas pazīmes. 5. Kādus baktēriju pārstāvjus jūs zināt un kāda ir to praktiskā nozīme? Darbs 2. Eikariotu mikroorganismu morfoloģija Teorētiskais ievads 19
20 Eikariotu mikroorganismi, kurus pēta mikrobiologi, ir: sēnes, raugi, mikroaļģes un daži vienšūņi. Sēņu morfoloģija Sēnes ir hlorofilu nesaturoši mikroorganismi ar pavedienveida šūnām. To veidotos garos, sazarotos pavedienus sauc par hifām. Hifas kopā veido micēliju. Pēc izmēra sēnīšu hifas ir daudz lielākas nekā aktinomicīti. Vairāku veidņu micēlijs ir sadalīts ar starpsienām (starpsienas micēlijs), bet cita veida starpsienu nav. Biotehnoloģijā pelējuma sēnītes galvenokārt izmanto kā ražotājus. Ar nosaukumu "pelējuma sēnītes" tiek apvienoti daži fikomicetu, marsupials un nepilnīgo sēņu pārstāvji. Uz blīviem substrātiem pelējums veido noapaļotas pūkainas, zirnekļtīklam līdzīgas, kokvilnas vai pulverveida kolonijas ar zaļu, dzeltenīgu, melnu vai baltu krāsu. Pelējuma kolonijas sastāv no liela skaita hifu. Lielākā daļa hifu attīstās gaisā, bet daļa - substrāta biezumā. Uz hifām bieži veidojas konidiofori, uz kuriem veidojas sporas vai nu sporangija iekšpusē, vai arī ķēdēs sakārtotu eksosporu veidā. Konidiosporas jeb konidijas kalpo aseksuālai pavairošanai (10. att.). Konidijas, nonākot labvēlīgos apstākļos, dīgst micēlijā. Pelējuma sēnītes dabā ir ļoti izplatītas, un tām ir spēcīgs fermentatīvs aparāts. Tāpēc viņi ir galvenie iznīcinātāji organiskie savienojumi dabā. Arī veidnes plaši izmanto rūpniecībā organisko skābju, antibiotiku un fermentu ražošanai. 20
21 Rauga morfoloģija Raugi ir atsevišķa vienšūnu mikroskopisku sēņu grupa ar lielu praktisku nozīmi. Rauga šūnas ir lielas apaļas vai ovālas šūnas (11. att.). Daži raugi var veidot rudimentāru micēliju, ko sauc par "pseidomicēliju". Šūnu izmērs svārstās no 3 µm līdz 10 µm garumā un no 2 līdz 8 µm platumā. Lielākā daļa rauga sēnīšu vairojas, veidojot pumpurus. Tajā pašā laikā, 21
Uz šūnas virsmas parādās neliels nieres izspiedums (dažreiz ne viens, bet vairāki), kas pakāpeniski palielinās un, visbeidzot, atdalās no šūnas, kas to ražo. No mātes šūnas atdalītais pumpurs kļūst par jaunu rauga šūnu. Daži raugi vairojas dalīšanās ceļā. Dzīvā rauga (protoplazmas) smalkgraudainajā saturā ir skaidri redzami lieli vakuoli. Vakuoli ir dobumi protoplazmas iekšpusē, kas piepildīti ar šūnu sulu. Tas sastāv no ūdenī izšķīdinātiem elektrolītiem, olbaltumvielām, ogļhidrātiem un fermentiem. Jaunās rauga šūnās protoplazma ir viendabīga, un vēlākos attīstības posmos protoplazmā parādās vakuoli, kas piepildīti ar šūnu sulu ar vielmaiņas produktiem. Kad barības vide ir izsmelta, daudzos raugos notiek sporulācija. Dažos rauga veidos sporas ir noapaļotas un pārklātas ar gludu apvalku. Labvēlīgos apstākļos dīgst sporas. Raugi dabā ir plaši izplatīti. Tie atrodas uz vīnogām, uz citām ogām un augļiem, pienā, ūdenī un augsnē, kā arī uz cilvēka ādas. Daudzi raugi veic alkoholisko fermentāciju, un tos izmanto spirta ražošanai cepšanā, vīna darīšanā un alus darīšanā. 22 Vienšūņu morfoloģija Vienšūņi ir dzīvnieku valsts vienšūnas organismi. Starp mikroorganismiem tie ir vissarežģītākie, tiem ir primitīvi orgāni, kas raksturīgi daudzšūnu dzīvniekiem. Dažiem no tiem ir mute un tūpļa, saraušanās un gremošanas vakuoli. Vienšūņi vairojas aseksuāli (šūnu dalīšanās ceļā) un seksuāli. Vienšūņu klasifikācija balstās uz pārvietošanās metodēm. 1. Sarkods. Viņi pārvieto un uztver ēdienu ar pseidopodiju jeb viltus kāju palīdzību. Tipisks pārstāvis ir Amēba. Amēbu izmēri nepārsniedz mikronus.
23 2. Karogs. Viņiem ir blīva plazmas membrāna un tie pārvietojas ar flagellas palīdzību. Virsnes formas flagellas ir ļoti mazas (2-5 µm), savukārt ūdens formas ir lielas (līdz 20 µm). Tipisks pārstāvis ir Euglena. 3. Skropstas. Visvairāk organizētie vienšūņi. Šūnu izmēri svārstās no 20 līdz 80 µm. Tipisks pārstāvis ir Paramecium kurpju ciliāts, ko audzē kā barību zivju mazuļiem. 4. Sporozoans. fiksētas formas. Daudzi patogēni, piemēram, malārijas izraisītājs Plasmodium. Vienkāršākie ir plaši izplatīti dabā. Tie atrodas ūdenstilpēs, dūņās un augsnē. Vienšūņu vērtība dabā ir ļoti dažāda. Viņi dzīvo dažādu dzīvnieku kuņģa-zarnu traktā, piedalās gremošanu augu barība, piedalās organisko atlieku mineralizācijā augsnē, kā arī ir svarīga biocenozes sastāvdaļa notekūdeņu attīrīšanas iekārtās. Barojot ar baktērijām un suspendētām cietvielām, tās veicina ūdens dzidrināšanu. Vienkāršākie pilda rādītāju funkciju: pēc noteiktu formu izstrādes var spriest par notekūdeņu attīrīšanas kvalitāti. Tādējādi amēbu pārsvars un skropstu trūkums aktīvo dūņu sastāvā liecina par sliktu attīrīšanas iekārtu darbību. Tetrahymena ciliātu plaši izmanto primārās toksicitātes novērtēšanai. Attēlā parādīti dažādi vienšūņu veidi. 12. Aļģu morfoloģija Aļģes ir plaša augu organismu grupa. Visiem kopīgā hlorofila klātbūtne un no tā izrietošais fotoautotrofiskais uzturs, spēja sintezēt organiskās vielas, izmantojot saules gaismas un oglekļa dioksīda enerģiju. Daudzās aļģēs hlorofila zaļo krāsu maskē citi pigmenti. Starp tiem ir ļoti mazas vienšūnu un daudzšūnu formas, kas klasificētas kā mikroorganismi, kā arī 23
24 daudzšūnu organismi, kas dzīvo jūrās un okeānos un dažkārt sasniedz milzīgus izmērus .. Mikrobioloģijas izpētes objekti ir dažas mikroskopiska izmēra aļģes. Tiem ir dažādas formas un tie dzīvo gan uz sauszemes, gan ūdens vidē (13. att.). 24
25 Praktiskā daļa Darba mērķis ir izpētīt dažādu eikariotu grupu pārstāvju morfoloģiju. Darba izpildes kārtība Studenti patstāvīgi gatavo sēņu, rauga, aļģu un vienšūņu pārstāvju dzīvus preparātus; tie ir mikroskopēti ar x40 objektīvu un ieskicēti ar mikroskopa palielinājuma norādi. Pelējuma sēnītes Aspergillus niger veido šūnas micēlija veidā ar starpsienām; uz dažām hifām ir nesazaroti konidiofori ar sporām. Konidiofori ir vienšūnas, sfēriski pietūkuši, uz pietūkuma virsmas ir īsas tapas formas šūnas (sterigmas), no kurām katra atšņorējas no melnas krāsas konidiju ķēdes. To izmanto organisko skābju un fermentu iegūšanai. Penicillium chrysogenum hifas ir starpsienas; uz dažām hifām ir sazaroti konidiofori ar sporām. Konidijas veidojas sazarotu konidioforu galos. To izmanto antibiotikas penicilīna ražošanai. 25
26 Raugs Saccharomyces cerevisiae vientuļš raugs ar ovālām un noapaļotām šūnām; vairoties ar pumpuru veidošanos. Tos izmanto alus darīšanā, cepšanā, alkohola ražošanā. Dabā tie atrodas uz ogu un citu augļu virsmas. Saccharomyces vini šūnu forma ir ovāla un apaļa; vairoties ar pumpuru veidošanos; pēc pumpurošanas kādu laiku neatdalās, veidojot mazus "zarus". Izmanto vīna darīšanā. Rhodotorula glutinis šūnas forma ir eliptiska; vienšūnas; vairoties ar pumpuru veidošanos. Tie ir iekrāsoti oranžā krāsā, pateicoties karotinoīdu saturam šūnās. Var augt vidē, kurā kā oglekļa avots ir naftas ogļūdeņraži. Izmanto kā lopbarības raugu. Candida tropicalis raugs ar ovālām un ļoti iegarenām šūnām, kas veido "pseidomicēliju". Var augt minerālu vidē ar ogļūdeņražiem kā oglekļa avotu. Izmanto kā lopbarības raugu. Rūpnieciskā mērogā tos audzē uz spirta un papīra ražošanas atkritumiem. Aļģes Chlorella vulgaris ir mikroskopiskas zaļas aļģes ar noapaļotām šūnām (5-10 mikroni diametrā); vairoties ar autosporām, kas veidojas mātes šūnas iekšpusē apjomā no 4 līdz 32 un tiek atbrīvotas pēc tās membrānas plīsuma. Tos var izmantot masveida audzēšanai, lai iegūtu barības olbaltumvielas, kā arī gaisa reģenerācijai slēgtās sistēmās (zemūdenēs, kosmosa stacijas utt.). Scenedesmus sp. pieder pie zaļo aļģu grupas; ir ovāla šūnu forma; ārējām šūnām bieži ir smaili gali; šūnas ir savienotas kopā četrās. To izmanto pārtikas olbaltumvielu iegūšanai. 26
27 Vienšūņi Preparātu sagatavo no aerācijas tvertnes aktīvajām dūņām. Izpētīt atklāto vienšūņu pārstāvju morfoloģiju un uzzīmēt tos. Referāta saturs 4. Mikroorganisma nosaukums latīņu valodā. 5. Šūnu morfoloģija (uzrāda zīmējumu, kas norāda mikroskopa palielinājumu un saglabā šūnu izmēru attiecību). 6. Pētīto mikroorganismu izmantošana rūpniecībā. Kontroljautājumi 1. Aprakstiet sēņu pārstāvju šūnu formu un to praktisko pielietojumu. 2. Raksturojiet rauga šūnu formu; nosaukt pārstāvjus un pastāstīt par to praktisko pielietojumu. 3. Pastāstiet par mikroaļģu morfoloģiju un to praktisko pielietojumu. 4. Nosauc vienšūņu pārstāvjus un pastāsti par to pielietojumu biotehnoloģijā. 3. darbs. Mikroorganismu morfoloģijas izpētes metodes Baktēriju morfoloģijas pētīšanai visizplatītākā metode ir fiksēto preparātu mikroskopija, kas sagatavota no mikroorganismu tīrkultūrām vai no testa parauga. Mikroorganismu izpēte dzīvā stāvoklī tiek izmantota lielāku formu izpētē un šūnu kustīguma novērošanā. Fiksēto mikroorganismu preparātu sagatavošana Lai sagatavotu mikroorganismu fiksētos preparātus, vispirms sagatavo uztriepi, žāvē, fiksē un pēc tam iekrāso. Uztriepes tiek sagatavotas uz ideāli tīriem stikla priekšmetstikliņiem. Stiklu var attaukot ar etilspirtu, vienādu tilpumu spirta un ētera maisījumu un citiem.
28 šķidrumi. Vienkāršākais un ērtākais veids, kā attaukot stiklu, ir noslaucīt to no abām pusēm ar veļas ziepju gabalu. Ziepes no stikla noņem ar sausas vates gabaliņu vai salveti. Ražojot uztriepi no baktēriju kolonijas, kas audzētas uz agara barotnes, vispirms uz attaukotas stikla tiek uzklāts ūdens vai fizioloģiskā šķīduma piliens. Pēc tam bakterioloģiskā cilpa tiek kalcinēta degļa liesmā. Pēc tam, pēc cilpas atdzesēšanas uz mēģenes iekšējās sienas, cilpa uztver daļu no kolonijas bez agara. Cilpu ar kultūru ievada ūdens vai fizioloģiskā šķīduma pilē uz stikla un veic 2 3 apļveida kustības. Dažas baktērijas ir suspendētas šķidrumā. Uz cilpas palikušās baktērijas tiek sadedzinātas degļa liesmā, uzkarsējot cilpu. Pēc tam pa stiklu ar atdzesētu cilpu uzklāj pilienu suspensijas. Uztriepes laukumam jābūt 1,5-2 cm diametrā Uztriepes jābūt plānai ar vienmērīgu materiāla sadalījumu. Ja no kultūras, kas audzēta uz šķidras barotnes, sagatavo uztriepi, tad, ievērojot tos pašus sterilitātes noteikumus, ar cilpu vai pipeti savāc kultūras pilienu un uzklāj uz beztauku glāzes vidus. Pipeti ar pārējo kultūru iegremdē traukā ar dezinfekcijas šķīdumu. Piliens vienmērīgi tiek sadalīts pa stiklu ar bakterioloģisko cilpu. Cilpu sadedzina degļa liesmā un ievieto stīvā vai glāzē. Uztriepes žāvē gaisā vai silta gaisa plūsmā, turot to aiz gareniskajām ribām augstu virs degļa liesmas. Uztriepes robežas ir iezīmētas ar vaska zīmuli ar otrā puse stikls, un uztriepes malā vienā stikla galā ielieciet zāļu numuru. Pēc šīm atzīmēm jūs varat viegli orientēties uz stikla uztriepes atrašanās vietu. Žāvēta uztriepe ir fiksēta. Fiksācijai ir šādi mērķi: 1) iznīcināt mikrobus, kas padara zāles drošu turpmākam darbam; 2) piestiprina mikrobus pie stikla, lai tie nenomazgātos krāsojot un mazgājot ar ūdeni; 3) uzlabot krāsu jutību. 28
29 Vienkāršākā, piemērota gandrīz visiem mikrobioloģiskajiem objektiem un praksē visizplatītākā metode ir fiksācija degļa liesmā. Lai to izdarītu, stikla priekšmetstikliņu 3-4 reizes izlaiž cauri degļa liesmas karstākajai augšējai daļai, izvairoties no pārmērīgas preparāta pārkaršanas, lai neizraisītu olbaltumvielu denaturāciju un neizjauktu baktēriju struktūru un morfoloģiju. Atšķirt vienkāršu un sarežģītu diferenciālās metodes krāsošana. Vienkāršā krāsošana tiek izmantota, lai atklātu mikrobus testa materiālā, noteiktu to skaitu, formu un atrašanās vietu. Vienkārša krāsošana sastāv no vienas anilīna krāsas uzklāšanas preparātam. Visbiežāk šiem nolūkiem tiek izmantota fuksīna sarkanā krāsa, kā arī metilēnzilā (Leffler blue) zilās krāsas sārmains šķīdums. Krāsošanas tehnika: labi nostiprinātu preparātu ar uztriepi uz augšu novieto uz stikla tiltiņa virs vannas. Viena no norādītajām krāsām tiek uzklāta uz uztriepes virsmas ar pipeti vai no pilinātāja. Fuksīns tiek turēts uz uztriepes 1 3 minūtes un zils 3 5 minūtes. Krāsu notecina no uztriepes, preparātu nomazgā ar ūdeni, žāvē gaisā vai viegli noslauka ar filtrpapīru. Uz izžāvētās uztriepes uzklāj pilienu imersijas eļļas, preparātu novieto uz mikroskopa skatuves un mikroskopē ar imersijas objektīvu (90) caurlaidīgā gaismā. Diferenciālās baktēriju krāsošanas metodes. Ir izsmalcinātas krāsošanas metodes liela nozīme definēšanā un diferencēšanā dažāda veida mikrobi. Tie ir balstīti uz mikrobu šūnas fizikāli ķīmiskās struktūras iezīmēm un tiek izmantoti detalizētai šūnu struktūras izpētei un identifikācijai. raksturīgās pazīmes dažām krāsvielām. Ar šīm metodēm uztriepi iekrāso ar vairākām krāsām un papildus apstrādā ar kodinātājiem vai balinātājiem, spirtu, skābi u.c. Šīs metodes ietver svarīgāko krāsošanas metodi baktēriju diferencēšanai Grama traipu. Šī metode atklāj 29
30 baktēriju spēja saglabāt krāsvielu vai mainīt krāsu spirtā, kas ir saistīta ar šūnas sienas ķīmisko struktūru. Visas baktērijas ir sadalītas divās grupās pēc šūnu sienas struktūras: 1) Gram-pozitīvās un 2) Gram-negatīvās, kas nav Gram-pozitīvās. Saistība ar Grama traipu ir tik svarīga baktēriju diferenciālā iezīme, ka tā noteikti ir minēta to raksturojumā un kalpo kā taksonomiska iezīme. 30 gramu traipu tehnika Filtrpapīra sloksni, kas iepriekš piesūcināta ar genciānas violetu, uzliek uz fiksētas uztriepes. Uz sloksnes uzklājiet 3-5 pilienus krāna ūdens. Pēc 1-2 minūtēm papīru noņem ar pinceti un uz preparāta ielej Lugola šķīdumu. Pēc 30 sekundēm 1 min Lugol šķīdumu notecina. Uzklājiet dažus pilienus 96 O spirta. Mainiet krāsu 1 minūti, līdz pazūd pelēcīgi violetās straumes. Zāles mazgā ar ūdeni. Fuksīnu lej uz uztriepes un patur 1-2 minūtes. Krāsu notecina, preparātu nomazgā ar ūdeni, nosusina ar filtrpapīru. Mikroskopiski ar iegremdēšanas sistēmu. Grampozitīvās baktērijas iekrāso violeti zilā krāsā (piemēram, sviestskābes fermentācijas bacilis Clostridium pasteurianum), bet gramnegatīvās baktērijas krāso rozā-sarkanu (Escherichia coli). Papildus šai tradicionālajai Grama traipu tehnikai ir arī ātra un vienkārša metode Gram diferenciācijai bez krāsošanas. Baktēriju šūnas (vēlams 1-2 dienas vecas) ievieto cilpā 3% KOH pilē uz stikla priekšmetstikliņa, maisa ar apļveida kustībām un pēc 5-8 sekundēm cilpu strauji paceļ. Gramnegatīvo baktēriju suspensija kļūst viskoza un stiepjas aiz cilpas, veidojot gļotādas joslas. Grampozitīvās baktērijas ir vienmērīgi sadalītas sārma pilē (kā ūdenī). Reakcija tiek uzskatīta par negatīvu, ja 60 s laikā netiek novērota gļotādu vadu veidošanās. Viskozitātes palielināšanos izraisa šķīdumā esošo gramnegatīvo baktēriju šūnu sieniņu līze
31 sārmu un DNS izdalīšanās. Baktēriju gramu diferenciācija bez krāsošanas jāizmanto tikai provizoriskai diagnostikai vai grampozitīvo un gramnegatīvo baktēriju koloniju aptuvenās attiecības aprēķināšanai. Dzīvo un atmirušo šūnu identificēšana, krāsojot ar metilēnzilo Dzīvo un atmirušo šūnu skaitu var noteikt, krāsojot ar metilēnzilā šķīdumu. Metodes pamatā ir dažādu mikroorganismu dzīvo un mirušo šūnu caurlaidība. Šūnu caurlaidība mirušajās šūnās ir traucēta, tāpēc krāsviela brīvi iziet cauri citoplazmas membrānai un tiek adsorbēta ar protoplazmu. Zem mikroskopa atmirušās šūnas izskatās zilas, dzīvās ir bezkrāsainas vai gaiši zilas. Krāsošanu veic šādi: uz stikla priekšmetstikliņa uzklāj pilienu 2% metilēnzilā šķīduma, pārklāj ar segstikliņu, lieko krāsu noņem ar filtrpapīra gabalu. Zāles tiek apskatītas mikroskopā, 10 redzes laukos tiek saskaitīts dzīvo un mirušo šūnu skaits; atmirušo šūnu skaits ir izteikts %. Piemērs: vidējais dzīvo šūnu skaits vienā redzes laukā ir 10, vidējais mirušo šūnu skaits vienā redzes laukā ir 5, kopējais skaitsšūnas vienā redzes laukā šūnas 100% 5 šūnas X X 33,3% 15 Tādējādi mirušo šūnu skaits pētītajā mikroorganismu suspensijā bija 33,3%. Šūnu izmēru noteikšana Lai noteiktu mikroorganismu šūnu izmērus, ir nepieciešams speciāls okulārs ar skalu (okulārais mikrometrs) un objekts-mikrometrs. Acu mikrometrs, pie 31
32 vienkāršākajā gadījumā tas ir stikla disks ar uzdrukātu lineāru skalu, kas tiek ievietots okulārā (14.a att.). Objekts-mikrometrs ir stikla priekšmetstikls, kura centrā ir iegravēta 1 mm gara lineāra skala ar dalījuma vērtību 10 µm. Pirms mērīšanas ir jānosaka acs mikrometra dalījuma vērtība katram mikroskopa palielinājumam. Lai to izdarītu, mikrometra objektu novieto uz mikroskopa skatuves un uzskata par preparātu; šajā gadījumā viens no objekta-mikrometra redzamajiem dalījumiem ir izlīdzināts ar acs mikrometra skalas nulles atzīmi, un abu skalu dalījumi sakrīt (15. att.). Saskaitiet, cik okulāro un objektīvo sadalījumu ietilpst šajā segmentā, un aprēķiniet acs mikrometra dalījumu vērtību. Ja pēc tam uz objektu galda, nevis priekšmets-mikrometru novieto mikroorganismu preparātu un to izmeklē 32
33 ar tādu pašu palielinājumu, ir iespējams izmērīt mikrobu šūnas izmēru, izmantojot acs mikrometra skalu kā lineālu. Precīziem mērījumiem tiek izmantots īpašs okulārais mikrometrs ar slīdošu nulles atzīmi, kas saistīts ar mērīšanas cilindru (14.b att.). Tas ļauj noteikt mikroorganismu lielumu ar precizitāti līdz mikrona desmitdaļām. Nulles atzīme ir dubultā vertikālā līnija, kuras vidus atbilst divu tievu līniju krustpunktam krusta formā. Pirms mērījumu veikšanas ir jānoskaidro mērtrumuļa skalas dalījuma vērtība. Atsauces objekts ir mikrometrs. Pagriežot mērīšanas cilindru, vairākas objekta-mikrometra skalas iedaļas tiek apvilktas ar nulles atzīmi. Divkāršā vertikālā līnija parāda mērīšanas cilindra pilno apgriezienu skaitu. Veicot mikroorganismu mērījumus, pārvietojiet nulles atzīmi gar objektu un nolasiet mērtrumuļa rādījumus. Praktiskā daļa Darba mērķis ir apgūt mikroorganismu morfoloģijas izpētes pamatmetodes. 33
34 Darba kārtība 1. Sagatavot fiksētos pienskābes baktēriju preparātus no biokefīra un acidofila. 2. Gram iekrāso Bacillus subtilis (gram+) un Escherichia coli (gram-) šūnas. 3. Nosakiet Saccharomyces cerevisiae rauga šūnu izmēru. 4. Noteikt dzīvo un mirušo Saccharomyces cerevisiae šūnu skaitu rauga suspensijā. 34 Referāta saturs 1. Pienskābes baktēriju šūnu morfoloģija (fiksēto pienskābes baktēriju preparātu rasējumi ar mikroskopa palielinājuma norādi). 2. Gramnegatīvo un grampozitīvo baktēriju fiksēto preparātu rasējumi. 3. Acs mikrometra mērtrumuļa dalījuma vērtības noteikšana. 4. Saccharomyces cerevisiae rauga šūnas izmēri. 5. Dzīvu un atmirušo šūnu skaits rauga suspensijā. Kontroljautājumi 1. Kā pagatavot fiksētu baktēriju preparātu? 2. Kāds ir iemesls atšķirībai starp baktērijām Grama traipā? 3. Kas ir Grama traipu metode? 4. Kā noteikt mikroorganismu lielumu? 5. Kā noteikt mikroorganismu dzīvo un atmirušo šūnu skaitu, krāsojot ar metilēnzilo? 2. tēma. Mikroorganismu audzēšana: barotņu sagatavošanas principi; sterilizācijas metodes; kultūraugu un mikroorganismu subkultūru metodes. Barības barotņu klasifikācija un sagatavošana Mikroorganismu kultivēšana nozīmē mākslīgu apstākļu radīšanu to augšanai. Audzēšanai
Laboratorijā vai rūpniecībā tiek izmantoti 35 mikroorganismi, kas satur visas mikroorganismu dzīvībai nepieciešamās vielas. No vides mikroorganisma šūnā nonāk barības vielas, un vielmaiņas produkti tiek izvadīti no šūnas vidē. Mikroorganismu dzīvībai svarīgai darbībai nepieciešams ūdens, ogleklis, skābeklis, slāpeklis, sērs, fosfors, kālijs, kalcijs, magnijs, dzelzs un mikroelementi. Visām šīm vielām jābūt barības vielu vidē. Pat bez viena no tiem izaugsmes vai nu nebūs vispār, vai arī tā būs niecīga. Ogleklis, ūdeņradis, slāpeklis, fosfors un sērs tiek saukti par biogēniem elementiem, jo tie veido aptuveni 90–95% no šūnu sausās masas. Kāliju, magniju, kalciju un nātriju sauc par makroelementiem vai pelnu elementiem. Tie veido līdz 5-10% no šūnu sausās masas. Dzelzs, mangāns, molibdēns, kobalts, varš, vanādijs, cinks, niķelis un daži citi smago metālu katjoni tiek saukti par mikroelementiem un veido procentuālās daļas no šūnu sausās masas. Ogleklim ir vislielākā nozīme jebkuram dzīvam organismam. Tas ir iekļauts visā organiskās molekulasšūnā un veido apmēram 50% no sausās biomasas. Saistībā ar oglekli visus organismus iedala autotrofos un heterotrofos. Autotrofi izmanto oglekļa dioksīdu kā oglekļa avotu. Heterotrofiem ir nepieciešami gatavi organiskie savienojumi. Par oglekļa avotu lielākajai daļai mikroorganismu var kalpot dažādas organiskas vielas: olbaltumvielas un to sabrukšanas produkti, ogļhidrāti, tauki, ogļūdeņraži. Slāpekļa uzturs savā vērtībā ir otrajā vietā aiz oglekļa. Slāpeklis ir daļa no aminoskābēm un citiem šūnu komponentiem, kas nodrošina organismu dzīvotspēju. Slāpeklis veido 14% no šūnu sausnas. Slāpekļa avots ir slāpekli saturoši organiskie vai minerālie savienojumi. Visizplatītākie minerālā slāpekļa avoti ir amonija sāļi un nitrāti. Kā organiskie slāpekļa avoti tiek izmantoti olbaltumvielas, aminoskābes, nukleotīdi. Daži prokarioti var izmantot atmosfēras slāpekli. 35
36 Fosfors un sērs ir daļa no svarīgiem šūnu biopolimēriem. Fosfors (3% no šūnu sausnas) ir daļa no nukleotīdiem un ATP, un sērs (mazāk nekā 1%) ir daļa no dažām aminoskābēm. Kā fosfora avots parasti tiek izmantoti fosfāti, un sēri ir sulfāti. Fosforu un sēru var izmantot arī organisko savienojumu veidā. Mikroorganismu augšanai mazos daudzumos nepieciešami makroelementi: joni sārmu metāli(Na+, K+) un sārmzemju metāli(Mg 2+, Ca 2+), kas spēlē svarīga loma mikroorganismu darbībā. Makroelementi mikrobu šūnās ir nepieciešami, lai regulētu caurlaidību, osmotisko spiedienu un pH. Papildus šiem metāliem mikrobu augšanai ir nepieciešami vairāki mikroelementi (mikroelementi). Minerālu sastāvs uzturvielu barotne veido elektrisko lādiņu sadalījumu uz šūnas virsmas. Mainot šūnu elektrisko potenciālu, var mainīties to fizioloģiskā aktivitāte. Viena no mikroelementu galvenajām funkcijām ir līdzdalība fermentatīvā katalīzē. Šobrīd visu enzīmu ceturtās daļas darbība šūnā ir saistīta ar metāliem. Papildus galvenajām uzturvielu barotnes sastāvdaļām dažu mikrobu normālai attīstībai ir nepieciešamas arī papildu vielas, kuras sauc par "augšanas faktoriem". Izaugsmes faktori ir dažādu kombinētais nosaukums ķīmiskā daba savienojumiem. Tās galvenokārt ir organiskas vielas, kuru pievienošana ļoti mazos daudzumos stimulē mikroorganismu augšanu un vairošanos. Mikrobiem tie ir tādi paši kā vitamīni augstākajiem organismiem. Augšanas faktori galvenokārt ir B vitamīni, kas pilda mikrobu metabolisma regulatoru un stimulatoru lomu jeb aminoskābes. Kā augšanas faktori tiek izmantoti rauga autolizāts, rauga ekstrakts, dabīgie proteīni (asinis, serums) uc Mikroorganismu uztura prasības ir ļoti dažādas. Šī iemesla dēļ nav universāla 36
37 barotne, vienlīdz piemērota jebkura mikroorganisma audzēšanai. Atkarībā no audzēšanas mērķiem un konkrētā mikroorganisma vajadzībām barības barotnes atšķiras trīs veidos: pēc sastāva, fiziskais stāvoklis un tikšanās. Sastāva ziņā uzturvielu barotnes iedala divās grupās: 1) dabīgā (dabiskā); 2) mākslīgais (sintētiskais). Dabiskās vides ir tie, kuriem ir nenoteikts ķīmiskais sastāvs, jo tie ietver augu vai dzīvnieku izcelsmes produktus, dažādu nozaru atkritumus, kas satur organiskos savienojumus. Dabiskās barotnes nodrošina intensīvu dažādu mikroorganismu augšanu. Tie satur bagātīgu organisko un neorganisko savienojumu kopumu, ieskaitot visus nepieciešamos elementus un papildu vielas. Piemēram, laboratorijā visbiežāk izmanto šādas barotnes. 1. Gaļas-peptona buljona (MPB) ekstrakts no gaļas, satur nepilnīgu olbaltumvielu sadalīšanās produktus peptonus, kas satur organisko oglekli, organisko slāpekli, fosforu saturošas, sēru saturošas organiskās vielas. BCH satur arī visas mikroorganismiem nepieciešamās minerālvielas. MPB izmanto daudzu veidu baktēriju kultivēšanai. 2. Alus misas ekstrakts no diedzētiem miežu graudiem, satur cukuru (galvenokārt maltozi) kā oglekļa avotu, slāpekļa vielas, pelnu elementus, dažādus augšanas faktorus un B vitamīnus.Alus misa ir laba vide daudzu mikroorganismu, īpaši rauga, attīstībai , pelējuma sēnītes. Labi dabīgie barotnes ir piens, kartupeļi, augļu un dārzeņu novārījumi. Rūpniecībā parasti izmanto daļēji sintētiskos vai dabiskos materiālus. Ļoti bieži kā oglekļa avots tiek izmantoti mikrobioloģiskie vai pārtikas rūpniecības atkritumi: melase (cukura ražošanas atkritumi), 37
Krievijas Federācijas Lauksaimniecības ministrija FEDERĀLĀ ZVEJNIECĪBAS AĢENTŪRA KAMČATKAS VALSTS TEHNISKĀ UNIVERSITĀTE BIOLOĢIJAS UN ĶĪMIJAS katedra ĶĪMIJAS UN ŪDENS MIKROBILOĢIJAS SAGATAVOŠANA
Uzvārds Kods Nosaukums Darbavieta Rajona kods Kopā: XXXII Viskrievijas reģiona posma praktiskās kārtas uzdevumi. BIOĶĪMIJA. EKSTRAKTU IDENTIFIKĀCIJA Aprīkojums: Mēģenes (3 mēģenes ar ekstraktiem
Uzvārds Kods Nosaukums Novads/pilsēta Darbavietas Kods Kopā: Novada posma XXVIII praktiskās kārtas UZDEVUMI Viskrievijas olimpiāde studenti bioloģijā. 2011.-12.mācību gads gadā. 11. klase BIOĶĪMIJA. Aprīkojums,
MIKROBILOĢIJA PASKAIDROJUMA RAKSTS KURSA "Mikrobioloģija" 9. klase DARBA PROGRAMMAI, pamatojoties uz izvēles kursa "Mikrobioloģija" autorprogrammu Averčinkova O.E. Bioloģija. izvēles kursi. Medicīnas
UZDEVUMI MIKROBILOĢIJA (maks. 20 punkti) Darba mērķis: Sagatavot un analizēt preparātus no diviem zināmiem fermentētiem piena produktiem. Aprīkojums: mikroskopi, degļi vai spirta lampas, stikla priekšmetstikliņi,
KINGDOM OF PROKARYOTES SUBKINGDOM OF BACTERIA Baktērijas ir prokarioti. Tie ir vienkāršākie, mazākie un visizplatītākie organismi, kas pastāv uz zemes vairāk nekā 2 miljardus gadu, bet kopā
Sistēma ORGĀNISKĀS PASAULES Visi organismi, kas pastāv uz Zemes, ir sadalīti četrās valstībās: Drobyanki, Sēnes, Augi, Dzīvnieki. Bises pieder prokariotiem (pirmskodola organismiem), sēnēm, augiem,
Projekta tēma Maskavas Butovska meža stāvošajā ūdenskrātuvē dzīvojošo mikroorganismu izpēte Autors(-i): Diāna Kasajeva, Kristīna Kasajeva, Alisa Tkačenko Skola: GBOU SOSH 1945 Klase: 5. klase Darba vadītājs:
Laboratorijas darbs "Cepurīšu sēņu ķermeņu uzbūve" Mērķis: izpētīt cepurīšu sēņu ķermeņu uzbūvi Aprīkojums: cepurīšu sēnes (cūciņas, rušīnas, šampinjoni, baravikas, sviestsēnes, medus sēnes u.c.), gatavas
FEDERĀLĀS VALSTS AUGSTĀKĀS PROFESIONĀLĀS IZGLĪTĪBAS IESTĀDE "OMSKAS ŠTATA AGRĀRIJAS UNIVERSITĀTE, NOSAUKUMS P.A. STOLYPINA" VETERINĀRĀS MEDICĪNAS UN BIOTEHNOLOĢIJAS INSTITŪTS
Apstiprinu Krievijas Federācijas galvenā valsts sanitārā ārsta vietnieku - Krievijas Veselības ministrijas Valsts sanitārās un epidemioloģiskās uzraudzības federālā centra galveno ārstu E.N. BELYAEV 2004. gada 20. februāris N 24FTs / 900 Datums
Pētījumi Raugs: mazo sēņu aizraujošā dzīve Darba autors: GBOU ģimnāzijas 5 "B" klases skolnieks 1748 "Vertikāls" Kutaytsev Georgijs Valerievich Vadītājs: Nosova Jeļena Vladimirovna,
Rauga un pelējuma noteikšanas metode pārtikas produktos METODOLOĢISKIE IETEIKUMI Rauga un pelējuma noteikšanas metodes pārtikā Vadlīnijas.- M.: federālais centrs
4. tēma. Baktērijas. Sēnes. Ķērpji. A daļa. 1. Zilaļeņu klātbūtne ķērpjā nodrošina 1) atmosfēras un augsnes mitruma uzsūkšanos 2) gaismas izmantošanu barības vielu veidošanai.
BIOLOĢIJA DZĪVĀS DABAS ZINĀTNE Bioloģijas studijas: KAS BIOLOĢIJAS PĒTĪJUMI z dzīvo organismu uzbūvi un dzīvībai svarīgās funkcijas; z likumi individuālo un vēsturiskā attīstība organismiem. 3 ORGĀNISKĀS SISTĒMA
1. Nitrificējošās baktērijas tiek klasificētas kā 1) ķīmotrofi 2) fototrofi 3) saprotrofi 4) heterotrofi TĒMA "Fotosintēze" 2. Saules gaismas enerģija šūnās tiek pārvērsta ķīmiskajā enerģijā 1) fototrofi.
MIKROBILOĢIJA UN ĢENĒTIKA Uzdevums 1. Sagatavot un analizēt preparātus no diviem zināmiem fermentētiem piena produktiem. (maks. 10 punkti) Aprīkojums: Mikroskopi, degļi vai spirta lampas, stikla priekšmetstikliņi,
Kvalifikācijas testi specialitātē "Bakterioloģija" Pārbaudes priekšmetu banka, lai sagatavotos sertifikācijai Izvēlieties vienu vai vairākas pareizās atbildes
Uzdevumi 3. Vienšūnu un daudzšūnu organismi. Sēņu valstība 1. Ko satur melnās bumbiņas gļotādas sēnes garo zaru galos? 1) mikroskopiski augļi 2) barības vielas 3)
FEDERĀLĀS VALSTS BUDŽETA IZGLĪTĪBAS AUGSTĀKĀS IZGLĪTĪBAS IESTĀDE "ORENBURGAS VALSTS AGRĀRIJAS UNIVERSITĀTE" Studentu patstāvīgā darba vadlīnijas
Mikroorganismu morfoloģija 1. variants 1. Gracilicutes ir: A. plānsienu baktērijas B. biezsienu baktērijas C. baktērijas ar bojātu šūnu sieniņu. G. baktērijas ar smalku šūnu sieniņu. 2. K
Uzdevums skolēniem: nepieciešams izvēlēties pareizās atbildes (var būt no vienas līdz vairākām). Mikroorganismu morfoloģija 1. variants 1. Gracilicutes ir: A. plānsienu baktērijas B. biezsienu
Aļģes Aļģes zemākie augi Aļģes ir plaša un neviendabīga zemāko augu grupa. Aļģes ir daudzskaitlīgākie un viens no svarīgākajiem planētas fotosintēzes organismiem. Viņi satiekas
Pašvaldības budžeta izglītības iestāde Alar vidējā vispārizglītojošā skola"Izskatīts" Aizsardzības ministrijas vadītājs Protokols 0 g. "Saskaņots" Direktora vietnieks ūdens resursu apsaimniekošanas jautājumos MBOU 0 g "Es apstiprinu"
1 Pamatmetodes darbā ar mikroorganismiem 1. uzdevums. Ievads mikrobioloģijā Drošības pasākumi darbā ar mikroorganismiem Uzdevuma mērķis. Šis uzdevums iepazīstinās jūs ar droša darba noteikumiem
Uzdevumi 2. Organismu šūnu uzbūve 1. Kas ķīmiskais elements ir daļa no vitāli svarīgajiem šūnas organiskajiem savienojumiem? 1) fluors 2) ogleklis 3) varš 4) kālijs 2. Kā uzglabāšanas viela
Pelējuma sēnīšu fizikālo faktoru ietekme uz sēņu augšanu un attīstību. Logunov Stepan 7g Projekta vadītāja Buļičeva M.B. Pētījuma nozīme Sēnīšu sporas ir ļoti izturīgas pret nelabvēlīgiem faktoriem
5. ieskaite 1. variants. Tēma "Sēnes" Uzdevumi ar vienas pareizas atbildes izvēli. 1. Galvenā atšķirība starp sēnēm un augiem ir tā, ka tām ir šūnu struktūra, tās absorbē ūdeni un minerālsāļus no augsnes,
1. Paskaidrojums Programma paredzēta reflektantiem uz aspirantūru FGBOU VPO BSU specialitātē 03.02.03 - Mikrobioloģija Programma augsti kvalificētu speciālistu sagatavošanai virzienā.
VISPĀRĒJĀ MIKROBILOĢIJA
I nodaļa. Mikroskops un mikroskopijas tehnika
1. Gaismas optiskā mikroskopija
2. Tumšā lauka mikroskopija
3. Fāzes kontrasta mikroskopija
4. Luminiscējošā (fluorescējošā) mikroskopija
II nodaļa. Vispārēja izpratne par audzēšanu, sēšanas tehniku un nepieciešamo aprīkojumu darbam ar mikroorganismiem
III nodaļa. Mikroorganismu preparātu sagatavošanas metodes
IV nodaļa. mikrobu šūnu izpēte
1. Mikroorganismu šūnu formas
2. Mikroorganismu šūnu struktūra (citoķīmiskās izpētes metodes)
3. Mikroorganismu šūnu iekrāsošana ar gramiem
4. Sporu iekrāsošanās baktērijās
5. Kapsulas krāsošana
6. flagellas krāsošana
7. Baktēriju kodolvielas iekrāsošanās
8. Mikroorganismu šūnu ieslēgumu krāsošana
V nodaļa. Mikroorganismu uzturs
1. Atsevišķu uzturvielu nozīme
2. Barotnes sagatavošana
3. Sterilizācijas metodes
VI nodaļa. Baktēriju skaita uzskaite un tīrkultūras izolācija
1. Baktēriju skaita uzskaite augsnē
2. Baktēriju kvalitatīvā sastāva noteikšana
3. Mikroorganismu skaita uzskaite ūdenī un citos šķidrumos
4. Gaisā esošo baktēriju skaita uzskaite
5. Baktēriju tīrkultūru izolēšana
VII nodaļa. Baktēriju veida noteikšana
VIII nodaļa. Mikroorganismu pārveide par slāpekli nesaturošu organiskās vielas
Fermentācijas procesi
1. Alkoholiskā raudzēšana
2. Pienskābes fermentācija
3. Sviesta fermentācija
4. Pektīna vielu fermentācija
5. Celulozes fermentācija
6. Šķiedru oksidēšana
7. Tauku oksidēšana
8. Ogļūdeņražu oksidēšana
IX nodaļa. Organisko un minerālo slāpekļa savienojumu transformācija ar mikroorganismiem
1. Amonifikācija
2. Nitrifikācija
3. Denitrifikācija (nitrātu elpošana)
4. Atmosfēras slāpekļa bioloģiskā fiksācija
X nodaļa
1. Sēra savienojumu pārvēršana mikroorganismu ietekmē
2. Mikroorganismu līdzdalība dzelzs transformācijā
3. Fosfora savienojumu transformācija mikroorganismu ietekmē
LAUKSAIMNIECĪBAS MIKROBILOĢIJA
XI nodaļa. Augsnes vispārējā mikrobioloģiskā analīze
1. Pētījumu metodes
2. Mikroorganismu grupas, barotņu sastāvs un sagatavošana
3. Vidēja augsnes parauga ņemšana un parauga sagatavošana mikrobioloģiskajai analīzei
4. Augsnes suspensijas sagatavošana
5. Dažādu mikroorganismu grupu uzskaite
6. Kopējā mikroorganismu skaita noteikšana augsnē ar tiešo skaitīšanu mikroskopā.
XII nodaļa. Mikroorganismu cenožu izpēte
1. Stikla piesārņojuma metode saskaņā ar N. G. Holodniju
2. Mikrobu cenožu izpēte augsnē pēc Perfiļjeva un Gabes metodes
3. Aristovskajas modificēta Perfiļjeva kapilārā metode
4. Autohtonās grupas mikroorganismu identificēšana, kas iesaistīti humusvielu sadalīšanā, pēc Vinogradska metodes Tepera modifikācijā.
5. Humusvielu sadalīšanā iesaistīto mikroorganismu identificēšana pēc Tepper metodes
XIII nodaļa. Augsnes bioloģiskās aktivitātes noteikšana
1. Augsnes bioloģiskās aktivitātes noteikšana pēc audekla sadalīšanās intensitātes (Mišustina, Vostrova un Petrovas metode)
2. Augsnes kopējās mikrobioloģiskās aktivitātes noteikšana ar ekskrēciju oglekļa dioksīds
3. Augsnes amonizējošās aktivitātes noteikšana
4. Mikroorganismu amonifikējošās aktivitātes noteikšana
5. Augsnes nitrificējošās aktivitātes noteikšana
6. Augsnes denitrificējošās aktivitātes noteikšana
7. Mikroorganismu slāpekli piesaistošās aktivitātes noteikšana
XIV nodaļa. Baktēriju izpēte augu sakņu zonā un uz saknēm
1. Baktēriju uzskaite rizosfērā pēc Krasiļņikova metodes
2. Rizosfēras un sakņu mikrofloras uzskaite ar sakņu secīgas mazgāšanas metodi saskaņā ar E. 3. Tepper
3. Mezgliņu baktēriju tīrkultūru izdalīšana, kvantitatīvā uzskaite augsnē, to aktivitātes un virulences noteikšana.
XV nodaļa. Baktēriju preparātu analīze
XVI nodaļa. Barības mikrobioloģija
1. Graudu epifītiskā mikroflora un tās izmaiņas barības uzglabāšanas laikā
2. Tvertnes analīze
3. Barības raugšana
XVII nodaļa. Piena un piena produktu mikroflora
1. Piena bakterioloģiskā analīze
2. Metodes pienskābes baktēriju izdalīšanai tīrkultūrā
3. Iepazīšanās ar sviesta mikrofloru
Literatūras rādītājs
